锰超氧化物歧化酶模拟化合物通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡

目的：探讨锰超氧化物歧化酶模拟化合物（mi mics of manganese superoxide dismutase,MnSODm）对人白血病K562细胞的凋亡诱导效应及作用机制。方法：应用MTT比色法、An-nexin V/PI双标记和细胞形态学法观察细胞凋亡;流式细胞术（FCM）测定Fas蛋白表达水平;RT-PCR检测Caspase-3mRNA的表达水平,比色法测定Caspase-3活性变化。结果：MnSODm作用后K562细胞的增殖受到抑制,Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变。同时,Fas蛋白表达水平显著增高,Caspase-3mRNA表达水平明显升高,活性显著增强。结论：MnSODm可能通过Fas途径诱导白血病K562细胞凋亡。     

辛伐他汀通过内质网应激途径诱导K562细胞凋亡

探讨内质网应激在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用。采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ｃa²⁺浓度，RT-PCR检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78，GRP78)、钙蛋白酶(calpain)基因mRNA表达水平，Western blotting检测GRP78、 calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白水平。结果显示，10、 20、 30 μmol·L^-1辛伐他汀(simvastatin，Sim)作用K562细胞72 h后，细胞出现典型的凋亡形态，凋亡率分别为12.41%、 19.08%和23.41%；细胞内Ca²⁺浓度增加，荧光强度分别为43、54和64；GRP78、calpain基因mRNA表达上调；calpain、 caspase-3， -6， -7， -9， -12蛋白剪切活化、GRP78蛋白表达增强。以上结果表明，内质网作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡。辛伐他汀将可能被用于临床治疗白血病。     

辛伐他汀诱导人红白血病K562细胞凋亡的实验研究

目的:探讨辛伐他汀诱导K562细胞凋亡及其机制。方法:取浓度为0(阴性对照组)、10、20、30μmol·L-1的辛伐他汀作用K562细胞72h后,双染色法检测细胞凋亡率;DNALadder实验检测细胞凋亡条带;用线粒体分离试剂分离出胞浆蛋白、微粒体蛋白、线粒体蛋白;逆转录-聚合酶链反应法检测GRP78、caspase-9、caspase-3、GADD153mRNA表达;Western blot法检测GRP78、caspase-12、caspase-9、caspase-3、GADD153、细胞色素C蛋白水平。结果:与阴性对照组比较,10、20、30μmol·L-1辛伐他汀作用K562细胞72h后出现典型的凋亡条带,凋亡率分别为12.41%、19.08%、23.41%(P<0.01),GRP78、caspase-9、caspase-3和GADD153 mRNA表达上调(P<0.05),caspase-12、caspase-9、caspase-3蛋白水平下降,caspase-12定位于内质网,细胞色素C从线粒体释放,GRP78、GADD153蛋白表达上调。结论:辛伐他汀可通过内质网和线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

维生素E琥珀酸酯诱导耐药白血病K562／ADM细胞凋亡

目的：研究维生素E琥珀酸酯(Vitamin E succinate，VES）对多药耐药白血病K562／ADM细胞的诱导凋亡作用及分子机制。方珐：以体外培养的K562／ADM细胞为研究对象，采用噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）比色法检测细胞增殖活性，Wright-Giemsa染色、DNA凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry，FCM）检测细胞凋亡；FCM测定细胞Fas，Bcl-2、P53蛋白表达水平。结果：VES可显著抑制K562／ADM细胞的生长及增殖；光镜下可见K562／ADM细胞呈典型凋亡的形态学改变；DNA凝胶电沫显示典型的凋亡DNA梯形条带，FCM细胞周期分析显示G1期阻滞，亚G1期细胞比例增高；Fas蛋白表达明显上调，Bcl-2蛋白表达下调，p53蛋白表达无明显变化。结论：VES可诱导K562／ADM细胞凋亡，作用机制可能与其上调Fas表达和下调Bcl-2表达有关。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的:观察硒酸酯多糖(Kappaselenocarrageenan,KSC)对K562ADM耐药细胞的诱导凋亡效应,并探讨其作用机制。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、WrightGiemsa染色、DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flowcytometry,FCM)观察K562ADM细胞凋亡;FCM测定K562ADM细胞Fas、P53和Bcl2蛋白表达水平;RTPCR检测Caspase3mRNA的表达。结果:50～500mg·L-1KSC抑制K562ADM细胞增殖,并诱导K562ADM细胞凋亡,细胞出现呈典型凋亡形态改变,DNA电泳可见DNA梯状条带(DNAladder);FCM分析出现亚G1期细胞群,S期细胞比例增高。Fas蛋白表达上调,Bcl2蛋白表达下调,Caspase3mRNA表达显著增强,但P53蛋白表达无明显改变。结论:KSC通过Fas依赖性Caspase3激活途径诱导K562ADM细胞凋亡。     

辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响

目的 探讨辣椒素通过调节GRP78触发内质网应激对人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的影响及机制.方法 CCK-8筛选辣椒素的最佳作用浓度;Wright-Giemsa染色观察HL-60细胞的形态;Western blot检测GRP78蛋白的表达量;Annexin V-FITC/PI双染法检测HL-60细胞的凋亡率.结果...     

锰超氧化物岐化酶模拟化合物诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的观察锰超氧化物岐化酶模拟化合物(mimics of manganese superoxide dismutase,MnSODm)对人白血病K562细胞凋亡诱导作用,并探讨其分子机制。方法以人白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝比色法(MTT法)测定细胞增殖活性;Annexin V/PI双标记和细胞形态学法检测细胞凋亡;RT-PCR检测bcl-2和bax基因mRNA的表达水平;流式细胞术(FCM)测定Bcl-2和Bax蛋白表达水平、线粒体跨膜电位(Δψm)、细胞色素C(Cyt C)释放和Caspase-3活性变化。结果0.5~10mg·mL-1MnSODm明显抑制K562细胞增殖(P<0.01),Annexin V/PI染色显示凋亡细胞明显增多,光学显微镜和透射电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;bcl-2基因mRNA和蛋白表达下调,bax基因mRNA和蛋白表达上调,线粒体Δψm降低,Cyt C释放增多,Caspase-3活性增强。结论MnSODm调控Bax/Bcl-2表达,通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡。     

2-脱氧葡萄糖通过降低有氧糖酵解增强白血病K562/ADM耐药细胞对阿霉素的敏感性

目的研究2-脱氧葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)通过抑制糖代谢增强白血病K562/ADM多药耐药细胞对阿霉素(adriamycin,ADM)敏感性的作用及机制。方法以白血病K562/ADM及其亲本K562细胞为靶细胞模型,MTT法检测细胞增殖活性,葡萄糖、乳酸、己糖激酶测试盒分析葡萄糖消耗量、乳酸生成量和己糖激酶(hexokinase,HK)活性。Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)表达和磷酸化(p-m TOR)以及葡萄糖转运体-4(glucose transporter-4,GLUT-4)的表达。结果与亲本K562细胞相比,白血病K562/ADM耐药细胞HK活性、GLUT-4表达水平和有氧糖酵解能力增强。2-DG能够明显抑制K562/ADM及K562细胞的HK活性、葡萄糖消耗量和乳酸生成量,呈时间-浓度依赖性地抑制白血病细胞的增殖活性。低剂量2-DG和ADM可诱导K562/ADM细胞mT OR高表达及磷酸化水平增高,但2-DG与ADM联合则可有效对抗ADM诱导的K562/ADM细胞mT OR高表达和磷酸化,并可降低GLUT-4的表达,提高K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性。结论 2-DG通过竞争性抑制HK活性和抵抗ADM诱发的代偿性mT OR活化,降低GLUT-4表达,有效阻断有氧糖酵解途径而降低K562/ADM耐药细胞的增殖活性、增强其对化疗药物的敏感性。     

自噬水平与白血病K562/ADM细胞耐药的关系研究

目的采用阿霉素(adriamycin,ADM)“逐步提高药物浓度+间歇性诱导”的方式体外诱导建立稳定耐受15μmol·L^-1 ADM的白血病K562/ADM细胞,观察该细胞对其它化疗药物的敏感性以及细胞自噬水平与耐药的关系。方法MTT法检测细胞对几种化疗药物的敏感性;用透射电镜、荧光显微镜观察细胞自噬形态学改变;Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测自噬和耐药相关蛋白的表达水平。结果K562/ADM细胞除了对ADM产生明显耐药外,还对多种化疗药物如:吡柔比星、柔红霉素、5-FU和长春新碱等有交叉耐药,但对三氧化二砷较敏感。K562/ADM细胞内自噬体数量、MDC荧光强度以及LC3Ⅰ/Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平均高于亲本细胞。用3-MA抑制自噬可明显增加K562/ADM细胞对ADM的敏感性,同时也能有效抑制K562/ADM细胞内耐药相关蛋白的表达。结论K562/ADM细胞出现多药耐药现象,且耐药性与细胞自噬水平有密切关系。     

三氧化二砷诱导K562/ADM耐药细胞凋亡中活性氧的作用

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）诱导K562／ADM细胞凋亡中活性氧（ROS）的作用和其与耐药基因radr1及其编码的P-糖蛋白（P—gP）表达的关系。方法：应用噻唑蓝（MTT）比色法检测K562／ADM细胞增殖活性；Annexin V／PI染色法检测细胞凋亡；RT-P（鼠检测mdr1基因mRNA的表达；流式细胞术测定P-gP表达、ROS活性和细胞内阿霉素（ADM）含量。结果：As2O3显著抑制K562／ADM细胞的增殖，Annexin V／PI双染检测显示凋亡细胞明显增加：ROS活性明显下降；mdr1 mRNA和P-gP表达明显降低，P-gP功能受抑，细胞内ADM含量显著增高。结论：As2O3抑制K562／ADM耐药细胞的增殖活性和促进其凋亡，其机制可能为通过降低细胞ROS水平、抑制radr1/P-gp的表达和功能，进而逆转mdr1/P-gP介导的多药耐药和凋亡抑制。     

α-干扰素增强耐药性白血病K562/ADM细胞及其白血病干细胞对阿霉素的敏感性

目的研究α-干扰素(interferon alpha,IFN-α)对白血病多药耐药K562/ADM群体细胞及其白血病干细胞(LSC)对细胞周期特异性药物阿霉素敏感性的影响。方法以K562/ADM耐药细胞为靶细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性;流式细胞术碘化丙啶(PI)染色和AnnexinV/PI双染色分别测定细胞周期分布和细胞凋亡;抗CD34、CD38和CD123抗体以及Annexin V共染色检测群体细胞中LSC的含量及凋亡率。结果 IFN-α作用后K562/ADM细胞周期分布发生改变,G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高。IFN-α与阿霉素联合作用,明显增强阿霉素对K562/ADM细胞的增殖抑制作用,细胞凋亡率增高。IFN-α可提高K562/ADM细胞群体中LSC的含量(比例),且增加LSC对阿霉素的敏感性,凋亡的LSC数量增高。结论 IFN-α促进K562/ADM群体细胞及其LSC进入细胞增殖周期而提高对细胞周期特异性抗癌药物阿霉素的敏感性。     

4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的比较4-[4″-(2″,2″,6″,6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果8~128mol.L-1GP-7处理48h或64μmol.L-1GP-7处理24~72h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol.L-1;64μmol.L-1GP-7作用48h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256μmol.L-1GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64μmol.L-1时作用则相反。结论GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素对K562/ADM细胞的抑制作用

目的 比较4-［4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基］-4′-去甲表鬼臼毒素（GP-7）对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞（K562/ADM细胞）的抑制作用是否优于依托泊苷。方法 以依托泊苷和K562细胞为对照，用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间，MTT比色法测定细胞增殖，流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率，普通光学显微镜观察细胞凋亡形态，琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果 8～128 mol·L^-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L^-1 GP-7处理24～72 h，GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性（r=0.947，P＜0.05)和时间依赖性(r=0.999，P＜0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC₅₀分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L^-1；64 μmol·L^-1 GP-7作用48 h可使G₂/M期细胞明显增多，相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡，但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异；GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解，但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞；128及256 μmol·L^-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h，GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷，但32和64 μmol·L^-1时作用则相反。结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。     

Anti-leukemia activities of Lup-28-al-20(29)-en-3-one,a lupane triterpene

The cytotoxicities of 11 lupane series triterpenes against 3 human leukemias, 2 melanomas, 2 neuroblastomas and normal fibroblast cells were examined. Lupane triterpenes with a carbonyl group at C-17 (7-11) showed inhibitory effects on leukemia, melanoma and neuroblastoma cell growth. Lup-28-al-20(29)-en-3-one (8) markedly inhibited the cell growth of 3 leukemias to a greater extent than the other human cancers and normal lung fibroblast cells. The cytotoxicity profiles of 8 against human cancer cells showed that its cytotoxic effect against 3 lung cancer cell lines was strong and the cytotoxic effects against osteosarcoma, breast cancer and urinary bladder cancer cells were very weak. The morphological observations of leukemia nuclei and the gel electrophoresis analysis of DNA extracted from 8-treated leukemia cells revealed that 8 induced leukemia cell apoptosis. Furthermore, we investigated the cytotoxic effects of 8 on adriamycin (ADM)- and vincristine (VCR)-resistant K562 (K562/ADM and K562/VCR) cells. K562/ADM and K562/VCR cells showed greater resistance toward ADM and VCR when compared to parent K562 cells. However, 8 inhibited the drug-resistant K562 cell growth to the same extent as K562 cells by the induction of apoptosis.     

Capsaicin mediates apoptosis in human nasopharyngeal carcinoma NPC-TW 039 cells through mitochondrial depolarization and endoplasmic reticulum stress

Capsaicin, a pungent compound found in hot chili peppers, has been reported to have antitumor activities in many human cancer cell lines, but the induction of precise apoptosis signaling pathway in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells is unclear. Here, we investigated the molecular mechanisms of capsaicin-induced apoptosis in human NPC, NPC-TW 039, cells. Effects of capsaicin involved endoplasmic reticulum (ER) stress, caspase-3 activation and mitochondrial depolarization. Capsaicin-induced cytotoxic effects (cell death) through G0/G1 phase arrest and induction of apoptosis of NPC-TW 039 cells in a dose-dependent manner. Capsaicin treatment triggered ER stress by promoting the production of reactive oxygen species (ROS), increasing levels of inositol-requiring 1 enzyme (IRE1), growth arrest and DNA-damage-inducible 153 (GADD153) and glucose-regulated protein 78 (GRP78). Other effects included an increase in cytosolic Ca(2+), loss of the mitochondrial transmembrane potential (ΔΨ(m)), releases of cytochrome c and apoptosis-inducing factor (AIF), and activation of caspase-9 and -3. Furthermore, capsaicin induced increases in the ratio of Bax/Bcl-2 and abundance of apoptosis-related protein levels. These results suggest that ER stress- and mitochondria-mediated cell death is involved in capsaicin-induced apoptosis in NPC-TW 039 cells.     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

抗多药耐药基因肽核酸与反义寡脱氧核苷酸增强K562／ADM细胞的敏感性和促进凋亡

AIM: To investigate the reversal effect and apoptosis enhancement of peptide nucleic acid (PNA) and antisenseoligodeoxyribonucleotide (ASODN) targeted to multidrug resistance gene (mdrl) on human multidrug resistantleukemia K562/ADM cells. METHODS: A 15-mer PNA and the same sequence of ASODN, complementary to the5' end of the AUG initiator codon-containing region of mdrl messenger RNA (MDR1-PNA, MDR1-ASODN), weredesigned and synthesized. Proliferation and sensitivity to adriamycin of K562/ADM cells treated with MDRI-PNAand MDR1-ASODN were analyzed with a MTT colorimetric assay. Apoptotic morphologies, P-glycoprotein (P-gp)expression, intracellular adriamycin accumulation, and cell cycle were measured. RESULTS: MDRI-PNA 1 to 10μmol/L and MDR1-ASODN 2 to 20 μmol/L alone had no inhibitory effects on the proliferation of K562/ADM cells,but significantly inhibited the growth of K562/ADM cells cultured in adriamycin-containing medium. After treatment with MDRI-PNA and MDRI-ASODN, intracellular adriamycin accumulation in K562/ADM cells increasedgreatly and P-gp synthesis was strikingly reduced. The resistance to adriamycin of the drug-resistant cells waspartly reversed and the cells were induced to apoptosis by adriamycin. The reversal efficacy of MDR1-PNA was3.1-fold higher than that of the same sequence of MDR-ASODN, but neither MDRI-PNA nor MDRI-ASODNcould completely block the mdrllP-gp expression. CONCLUSION: Sequence-special PNA targeted to mdr1 genemore effectively than the same sequence of MDR1-ASODN inhibited the expression of P-glycoprotein to overcomethe drug-resistance.