胎儿与成人卵巢免疫原性的比较

目的 :比较胎儿卵巢、成人卵巢免疫原性的差异 ,并观察培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法 :对培养前后胎儿卵巢及成人卵巢的冰冻切片用人白细胞抗原 (HLA DR)单克隆抗体进行免疫组织化学染色 ,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果 :胎儿卵巢内HLA DR抗原含量显著少于成人卵巢 (P <0 .0 0 1) ,且培养后胎儿卵巢HLA DR抗原含量显著低于培养前 (P <0 .0 1) ,随培养天数的增加HLA DR抗原含量逐渐减少 (P <0 .0 1)。结论 :胎儿卵巢的免疫原性低于成人卵巢 ,且培养后进一步降低。以培养一段时间的胎儿卵巢作为移植供体 ,可能提高临床卵巢移植的成功率。     

胎儿与成人卵巢免疫原性的比较

目的：比较胎儿卵巢、成人卵巢免疫原性的差异,并观察培养前后胎儿卵巢免疫原性的变化。方法：对培养前后胎儿卵形态及分布并计数。结果：胎儿卵巢内（ＨＬＡ－ＤＲ）单克隆抗体进行免疫组织化学染色,观察其阳性细胞形态及分布并计数。结果：胎儿卵巢内ＨＬＡ＿ＤＲ抗原含量显著少于成人卵巢,且培养后胎儿卵巢ＨＬＡ－ＤＲ抗原含量显著低于培养前,随培养天数的增加ＨＬＡ＿ＤＲ的含量逐渐减少。结论：胎儿卵巢的免疫原性低于成人     

组织培养下胎儿卵巢雌二醇的分泌

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否分泌雌二醇 (E2 )及胎儿胰腺条件培养液对E2 分泌的影响。方法 :取 16例中晚期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,将其切成 1 2mm× 1 2mm× 1 2mm的碎块进行直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养。培养后测定培养液中E2 含量。结果 :胎儿卵巢在组织培养条件下能产生E2 ,随培养时间延长 ,E2 分泌量增加。加胎儿胰腺条件培养液组 ,E2 分泌量高于对照组 ,P <0 .0 5。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2 ,可作为卵巢移植的供体。     

原发性肝胆管结石患者外周静脉血及肝动脉血T细胞亚群和T细胞HLA-DR抗原、IL-2R表达的研究

该研究测定了 2 0例原发性肝胆管结石患者外周静脉血及肝动脉血和 19例正常人外周静脉血的T淋巴细胞亚群及T淋巴细胞HLA -DR抗原 和IL -2R 细胞百分率 ,结果显示 :原发性肝胆管结石组外周静脉血T淋巴细胞OKT 4 细胞百分率 (5 2 5 2± 8.0 1) %较正常对照组 (47 32± 6 1.10 ) %显著增高 (P <0 .0 5 ) ;T淋巴细胞HLA -DR抗原 表达率 (10 .5 2± 5 .35 ) %较正常对照组 (4 80± 1.5 5 ) %显著增高 (P <0 .0 1) ;IL -2R 细胞百分率 (3 2 7± 1 90 ) %较正常对照组 (1 47± 0 .73) %显著增高 (P <0 .0 5 ) ;原发性肝胆管结石组外周静脉血与肝动脉血各相应指标间比较无显著差异 (P >0 .1)。结果提示 :原发性肝胆管结石患者细胞免疫功能有显著变化 ,可能与胆管系统局部病理改变有关 ;采取外周静脉血与采取肝动脉血检测T淋巴细胞亚群及T细胞HLA -DR抗原和IL2 -R意义相同     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞免疫功能的研究

目的　研究慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞 (DC)表面分子HLA -DR、CD1a、CD80 、CD86表达水平及其与DC免疫功能的相关性。方法　临床确诊的慢性乙型肝炎轻度患者 1 0例 ,从其外周血中分离单个核细胞 ,体外培养扩增DC ,流式细胞仪检测DC表型HLA -DR、CD1a、CD80 、CD86。以健康成人 1 0例作为对照。结果　慢性乙型肝炎患者DC表面HLA -DR、CD1a、CD80 、CD86分别为 :48.63± 6.34,2 7.73±7.1 9,2 1 .0 5± 8.33,1 8.5 8± 5 .5 1 ,明显低于对照组 :83.1 1± 6.46,5 2 .80± 1 1 .70 ,36.1 1± 7.5 5 ,40 .83± 5 .48,两者相比差异显著 (P <0 .0 0 1 )。结论　慢性乙型肝炎患者外周血DC表面HLA -DR、CD1a、CD80 、CD86表达水平下降 ,并与DC免疫功能低下密切相关     

云南汉族与链珠菌感染有关银屑病患者HLA-DR易感基因研究(摘要)

用多聚酶链反应技术及序列特异性引物 (PCR -SSP)对 36例咽部致病性链球菌培养阳性银屑病患者进行HLA-DR基因分型 ,并与 2 8例云南汉族正常人HLA -DR分型结果比较 .发现银屑病患者HLA -DR基因频率比正常人显著增高 (72 2 2 % ;7 14 % ,P <0 0 1,RR =33 80 ) ,HLA -DR 15基因频率也增高 (5 5 5 5 % ;14 2 8% ,P <0 0 1,RR =7 5 0 ) ;2 0例DR15阳性患者有 19例与DR7连锁 ,而正常组无 1例是DR 7与DR15连锁 .提示与链球菌感染有关云南汉族银屑病易感基因与HLA -DR 7及DR15关联 ,推测这两个位点的等位基因连锁以共同对链…     

组织培养下胎儿卵巢卵泡的发育

目的 :观察组织培养条件下胎儿卵巢能否发育以及胎儿胰腺条件培养液对其发育的影响。方法 :取 16例 2 0～ 2 8周和 11例 >2 8周中期妊娠水囊引产的胎儿卵巢 ,经直接培养及加胎儿胰腺条件培养液组织培养后 ,观察培养前后的组织学变化。结果 :胎儿卵巢经组织培养后 ,较成熟卵泡比例增加 ,P <0 .0 0 5 ;加胎儿胰腺条件培养液组与未加胎儿胰腺条件培养液组相比 ,较成熟卵泡比例增加更为明显 (P <0 .0 0 5 )。结论 :胎儿卵巢在组织培养条件下能继续发育 ,胎儿胰腺条件培养液有促进卵泡发育的作用。     

卵巢恶性肿瘤患者血清TSA、LSA检测的临床意义

目的 :探讨卵巢恶性肿瘤患者血清总唾液酸 (TSA)、脂质结合唾液酸 (LSA)检测的临床意义。方法 :检测卵巢恶性肿瘤患者血清TSA和LSA含量 ,并与健康女性及卵巢良性肿瘤患者比较。结果 :卵巢恶性肿瘤患者血清TSA、LSA含量明显高于良性肿瘤及健康对照者 (P <0 .0 1,P <0 .0 0 1) ,且血清TSA、LSA含量随卵巢恶性肿瘤临床分期的加重而升高 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1)。结论 :提示血清TSA、LSA含量的测定可用于卵巢良、恶性肿瘤鉴别及早期卵巢恶性肿瘤的诊断 ,并有助于了解卵巢恶性肿瘤患者术后病情变化、估计预后、观察疗效以指导临床治疗方案的及时更改     

免疫学

031276正常妊娠和原因不明习惯性流产者免疫治疗前后血清sHLA一I类抗原变化/裴斌…//生殖与避孕一2003,23(2)一1 14一1 15,122 用夹心ELISA法测定正常妊娠及原因不明习惯性流产(RSA)病人主动免疫治疗前后血清可溶性HLA一工类抗原的含量。结果:正常妊娠妇女孕早期(<3个月)血清可溶性HLA一I类抗原的含量显著高于正常水平(P<0 .01),孕末期(>鲈?显著低于正常水平(P<0 .01)。RSA病人主动免疫治疗前后血清可溶性HLA一工类抗原水平未发生显著变化。结论:血清可溶性HLA一I类抗原在正常妊娠中的动态变化反应了母体免疫系统受到的调节;主…     

胎儿卵巢内转化生长因子-α与表皮生长因子受体的表达

目的 :探讨转化生长因子 (TGF) α和表皮生长因子受体 (EGFR)在培养前后胎儿卵巢中的表达。方法 :收集 2 0例胎龄为 16～ 40周的水囊引产或各种原因死亡的胎儿卵巢标本 ,采用免疫组织化学方法 ,测定TGF α和EGFR蛋白在人胎儿卵巢组织中的表达。结果 :TGF α、EGFR在所有胎儿卵巢卵母细胞、部分卵泡细胞及基质细胞呈阳性表达 ,在卵母细胞的表达均强于卵泡细胞与基质细胞。胎龄与TGF α、EGFR的表达无相关关系 (P >0 .0 5 ) ,组织培养后卵母细胞TGF α、EGFR的表达强度均弱于培养前 (P <0 .0 5 )。结论 :胎儿卵巢存在局部调节因子。组织培养后胎儿卵巢TGF α与EGFR的表达与卵泡生长发育是一致的。TGF α与EGFR以自分泌旁 /分泌的方式协同参与胎儿卵母细胞的生长。     

转染SEA基因肝癌细胞中SEA和抗原呈递相关分子的表达

目的:检测转染SEA基因的BEL-7402肝癌细胞(SEA-肝癌细胞)中,SEA蛋白和抗原呈递相关分子的表达情况.方法:免疫组化检测SEA蛋白在SEA-肝癌细胞中的表达情况,流式细胞仪检测SEA-肝癌细胞HLA-ABC、HLA-DR、CD54、CD80和CD86的表达情况,并与BEL-7402肝癌细胞进行对照.结果:SEA-肝癌细胞经过多次冻存复苏和传代培养,可稳定表达SEA蛋白;BEL-7402肝癌细胞和SEA-肝癌细胞高表达HLA-ABC,部分表达CD54,基本不表达HLA-DR、CD80和CD86,SEA-肝癌细胞表面CD54表达率高于BEL-7402肝癌细胞(P＜0.01).结论:SEA-肝癌细胞经过多次冻存复苏和传代培养,仍能够稳定表达SEA蛋白,SEA-肝癌细胞表面CD54表达水平高于BEL-7402肝癌细胞.     

HLA-ABC、HLA-DR在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达及意义

目的探讨人类白细胞ABC抗原（HLA-ABC）、人类白细胞DR抗原（HLA-DR）在肝硬化门静脉高压症脾脏中的表达及临床意义。方法用免疫组化Envision法,检测45例肝硬化门静脉高压症（研究组）和15例外伤性脾破裂（对照组）患者脾脏中HLA-ABC及HLA-DR的表达情况。结果研究组HLA-ABC、HLA-DR阳性细胞率分别为（31.04±8.21）%和（7.57±2.57）%,显著低于对照组的阳性细胞率（46.54±6.14）%和（13.46±1.89）%（P〈0.01）。HLA-ABC、HLA-DR的表达随巨脾纤维化分级和肝功能Child-pugh分级的加重而下降,且均呈负相关;而与年龄、性别、上消化道出血次数及食道胃底静脉曲张程度无关。结论肝硬化门静脉高压症脾脏中HLA-ABC、HLA-DR表达下调,可能是患者脾脏免疫功能低下的原因之一;且脾脏纤维化程度和肝功能Child-pugh分级结果可能有助于患者脾脏免疫功能的评估。     

人羊水源性间充质干细胞的分离培养及鉴定

目的 体外分离培养人羊水间充质干细胞(HAFMSCs),观察生物学特性,并鉴定其多向分化能力.方法 采用改良两步法分离培养HAFMSCs,用MTT法观察细胞增殖能力.FACS检测表面抗原CD29,CD34,CD44,CD45,CD73,CD90,HLA-ABC,HLA-DR等的表达.RT-PCR法分析细胞中OCT-4,Nanog mRNA水平的表达.用成脂、成骨、内皮细胞培养基对HAFMSCs进行诱导,并分别采用油红O,Yon Kossa染色及细胞免疫荧光染色检测其分化能力.结果 羊水细胞于2-3d开始贴壁,10-15d形成细胞集落.传至第3代HAFMSCs呈旋涡状排列,生长曲线呈S形.FACS检测显示CD29,CD44,CD73,CD90,HLA-ABC表达阳性,CD34,CD45,HLA-DR表达阴性,RT-PCR法检测显示HAFMSCs中OCT-4、Nanog mRNA的表达阳性.成脂、成骨诱导21d后油红O、Von Kossa染色阳性,成内皮细胞诱导4周后细胞免疫荧光染色检测vWF抗体表达阳性.结论 成功分离培养出HAFMSCs,细胞具有干细胞特征,具有多向分化潜能.     

脐血来源树突状细胞的培养鉴定

目的：探索体外诱导出的成熟脐血来源树突状细胞(CBDCs)功能性抗原表达的变化规律。方法：用光镜观察培养12dCBDCs的形态。用流式细胞仪分析培养不同时间CBDCs功能性抗原表达的变化规律。结果：体外诱导出典型形态的CBDCs，HLA-ABC、HLA-DR、CD1a在培养0～8d表达率渐升高，在第12d达高峰，第16d表达有所下降；CD83、CD80在第12d的表达略高于其他时间段；CD54在0d、4d、8d的表达率相近，而第12d的表达率明显升高，第16d明显降低。结论：应用本的方法，在体外培养第12d，能诱导出典型形态的CBDCs，多种功能性抗原的表达达到高峰。     

人胎盘间充质干细胞对脐血淋巴细胞转化的影响

目的从人胎盘中分离间充质干细胞(MSC),研究胎盘MSC在脐血移植中的免疫调节作用。方法分离人胎盘组织灌流液中单个核细胞(MNC)贴壁培养、集落筛选,鉴定表面标志及纯度,向脂肪、成骨诱导鉴定多向分化潜能。应用3HTdR掺入法,观察胎盘MSC对成人外周血淋巴细胞及脐血淋巴细胞的免疫抑制作用。将不同数量胎盘MSC分别与成人外周血和脐血淋巴细胞共培养,加入植物血凝素(PHA)刺激淋巴细胞增殖,观察胎盘MSC对淋巴细胞转化的影响。结果从人胎盘组织中分离获得的贴壁细胞,具有同骨髓MSC相同的细胞表型及多向分化能力,可以显著抑制成人外周血和脐血淋巴细胞转化,抑制作用与MSC的数量呈正相关。与无MSC作用相比,当MSC为2×105/孔时对成人外周血和脐血淋巴细胞转化的抑制率分别为79.97%和64.06%,而当MSC为1.25×104/孔时抑制率则分别为46.83%和12.19%。结论从人胎盘中可以成功地分离出MSC,利用其对脐血淋巴细胞的免疫调节作用,除了可以作为与脐血造血干/祖细胞相适应的培养基质,还有望降低脐血移植中困扰已久的移植物抗宿主疾病(GVHD)问题,促进脐血移植的广泛应用。     

激活素A和卵泡抑素对冻融人胎儿卵巢雌二醇分泌的影响

目的：研究组织培养条件下冻融人胎儿卵巢雌二醇（E2）的分泌及激活素A（Act A）和卵泡抑素（FS）对E2分泌的影响。方法：冻融人胎儿卵巢组织体外培养，分别加入基础培养液（对照组，即MEM组）、基础培养液＋100ng／ml Act A（Act A组）、基础培养液＋100ng／ml FS（FS组）和基础培养液＋100ng／ml Act A＋100ng／ml FS（A＋F组），每组4块组织，培养8d。收集培养2d、4d、6d、8d各组培养液，测定比较其E2值。结果：培养4d、6d、8d卵巢组织分泌的E2值均高于2d的E2值（均P〈0．05），随培养时间延长，E2分泌量先增加后减少，在培养后6d可达较高分泌水平；Act A组E2分泌量明显高于对照组、FS组和A＋F组（均P〈0．01）。结论：冻融人胎儿卵巢在组织培养条件下能分泌E2，Act A能促进体外培养胎儿卵巢E2的分泌，其作用可能受到FS的调节。     

夫妇HLA-DR抗原相容性与习惯性流产的关系

目的探讨夫妇HLA-DR抗原相容性和习惯性流产的关系。方法采集2007年8月—2009年8月在我院就诊的30对习惯性流产夫妇外周血,各5 ml,以同时期正常妊娠夫妇作为对照组,抽提样本基因组DNA,确定HLA-DR等位基因位点及其对应抗原,分析疾病组与对照组中抗原相容性分布是否具有差异。结果在检出的DR抗原中,两组抗原频率差别无统计学意义（P〉0.05）。疾病组中,有6对（20%）夫妇HLA-DR抗原零相容,18对（60%）夫妇一个抗原相容,6对（20%）夫妇两个抗原相容。对照组中,21对（70%）夫妇零相容,7对（23%）夫妇一个抗原相容,2对（7%）夫妇两个抗原相容。两组夫妇抗原相容性分布有显著性差异（P〈0.01）。一个抗原相容对于零抗原相容的相对危险度（RR）为9,两个抗原相容相对于零抗原相容的相对危险度（RR）为10.5。结论习惯性流产的发生与免疫失衡有关,夫妇双方HLA-DR抗原相容性增加,致母体对异体抗原识别不足,不能产生足够的封闭性抗体,胚胎遭排斥而产生流产。     

成人骨髓间充质干细胞的体外分离培养和生物学特性

目的：建立一种成人骨髓间充质干细胞体外分离、培养和扩增的方法，并探讨其部分生物学活性及向脂肪细胞诱导分化的方法，并以此鉴定所获细胞。方法：采用1．073g／ml的Percoll分离液分离成人骨髓间充质干细胞。接种于纤维连接蛋白包被，含有表皮生长因子和血小板原性生长因子BB的2％胎牛血清培养液中，并利用其贴壁性进行纯化；观察其形态学变化及超微结构，流式细胞仪检测其表面标记物；采用10％胎牛血清和尼克酰胺诱导其向脂肪细胞的分化。结果：原代和传代培养均保持较强的增殖能力，超微结构显示了干细胞的幼稚特性，流式细胞仪检测示CD34、CD45、CD19、组织相容性抗原-DR阴性，CD44、CD10、CD29、CD13阳性。体外能够分化成为脂肪细胞，油红O染色阳性。结论：采用该方法骨髓间充质干细胞生长稳定，扩增较快；一定条件下能够定向分化成为脂肪细胞；我们所获得的细胞具有间充质干细胞的特性。     

胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞的分离鉴定

目的：建立胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞(MSCs) 的分离培养方法,并对两种来源细胞的生物学特性加以鉴定。方法：取胎龄4或5月水囊引产胎儿肝脏和骨髓,用1.073 g·mL^-1的percoll密度梯度离心分离低密度细胞,MSCs培养基纯化贴壁细胞,用流式细胞术检测其表面标志,成脂肪及成骨诱导鉴定多向分化潜能,对比两种来源的MSCs增殖及生长特征。 结果：胎儿肝脏及胎儿骨髓MSCs CD29、CD44、CD73（SH-3,4）、CD105（SH-2）、CD166、HLA-ABC阳性,CD35、CD45、HLA-DR阴性,均能成脂肪及成骨诱导分化,随MSCs 数量增加,其对外周血T 淋巴细胞转化的抑制作用增强。结论：胎儿肝脏和骨髓中可成功分离MSCs。