胰岛素样细胞生长因子-1、碱性成纤维细胞生长因子及转化生长因子α对人表皮干细胞增殖的影响

目的 表皮干细胞是组织工程化皮肤的"种子细胞".文中研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、胰岛素样细胞生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)和转化生长因子α(transforming growth factor α,TGFα)对人表皮干细胞增殖的影响.方法 采用两步酶消化法和Ⅳ型胶原差速贴壁相结合的方法获得人原代表皮干细胞,将表皮干细胞分为A组(K-SFM)、B组(K-SFM+bFGF)、C组(K-SFM+IGF-1)及D组(K-SFM+TGFα)进行培养.比较不同组之间表皮干细胞的克隆形成率、生长增殖、生长曲线和细胞周期等指标.结果 B组、C组及D组培养的表皮干细胞在细胞增殖、细胞克隆率方面检测结果均明显高于A组(P<0.05);流式细胞仪检测B组、C组与A组及D组处于G0/G1细胞比例比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1、bFGF及TGF-α均对表皮干细胞的增殖有促进作用,IGF-1及bFGF对表皮干细胞表型的维持有较好的作用.     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠胰腺干细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胰腺干细胞增殖的影响。方法大鼠胰腺干细胞经体外纯化、扩增,观察其生长特性,免疫组化法检测CK-19和PDX-1的表达。研究不同浓度的bFGF对大鼠胰腺干细胞生长曲线的影响。结果原代培养的细胞经差速贴壁后,得到纯化的胰腺干细胞。免疫组化显示大鼠胰腺干细胞呈CK-19阳性和PDX-1阴性。对照组(无bFGF)、bFGF浓度分别为5,10,20 ng/ml各组的细胞数分别是3.29×105/ml,3.47×105/ml,3.83×105/ml和3.83×105/ml。加bFGF 3组的细胞数与对照组比较均有显著性差异(均P<0.01),10,20 ng/ml bFGF组细胞数与5 ng/ml bFGF组细胞数比较差异有显著性(P<0.01);10 ng/ml和20 ng/ml bFGF组差异无显著性(P>0.05)。结论5,10,20 ng/ml浓度的bFGF可明显促进SD大鼠胰腺干细胞增殖。     

KGF在成纤维细胞促进表皮细胞增殖中的作用

目的  研究成纤维细胞产生的角质细胞生长因子（KGF）对表皮细胞增殖的影响。方法  自包皮分离培养成纤维细胞和表皮细胞,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT PCR)、酶联免疫吸附法(ELISA)、MTT法和免疫荧光等方法分别检测成纤维细胞KGF基因的转录水平、培养液中KGF的浓度、成纤维细胞培养液对表皮细胞增殖的促进作用。结果  RT-PCR结果显示,成纤维细胞中KGF转录水平显著,ELISA法可检测到成纤维细胞培养液中存在较高水平的KGF,细胞计数结果和MTT结果表明,含有KGF的成纤维细胞培养液能够促进表皮细胞增殖,保持表皮细胞的活性,免疫荧光观察到KGF与表皮细胞表面的特异性受体结合。结论  成纤维细胞能够合成和分泌较高水平的KGF,成为其促进表皮细胞增殖的重要因素。     

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子-1对牙周膜细胞增殖的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对人牙周膜(PDL)细胞增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用噻唑盐(MTT)法检测bFGF和IGF-1单独或联合应用时对人PDL细胞增殖的影响。结果bFGF和IGF-1单独应用时均可明显促进PDL细胞增殖,在实验的5d范围内,bFGF浓度在1～100ng/ml和IGF-1浓度在1～100ng/ml时呈浓度-时间依赖关系,bFGF最佳效应浓度为10ng/ml(比对照组增加了247.8%),IGF-1最佳效应浓度为100ng/ml(比对照组增加了236.5%),两者的最佳效应时间均为3d。以二者的最佳效应浓度联合应用时,作用更为显著,培养3d时比对照组增加了290.4%(P<0.001)。结论bFGF和IGF-1均能促进人PDL细胞的分化和增殖,二者联合应用有协同效应。     

成纤维细胞生长因子受体1在大鼠各组织中的表达

目的研究成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)mRNA及蛋白在大鼠各组织中的表达。方法采用实时定量荧光聚合酶链式反应测大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉等组织中FGFR1 mRNA表达;采用酶联免疫吸附法及免疫组织化学法检测各组织中FGFR1蛋白的表达。结果 FGFR1 mRNA和蛋白在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中均有表达,主要分布于细胞膜。FGFR1 mRNA在大鼠脂肪、肝脏、心脏、血管、肾脏、肌肉中表达量分别为2.623 0±0.524 9、1.003 0±0.077 2、6.755 0±0.278 4、1.613 0±0.320 1、4.833 0±0.421 5、6.123 0±0.348 7,FGFR1蛋白在以上各组织中的表达量分别为(10.670 0±1.197 0)、(0.356 0±0.105 5)、(0.860 0±0.163 9)、(5.152 0±0.801 4)、(0.186 0±0.046 7)、(2.110 0±0.161 9)μg·g-1,FGFR1 mRNA在各组织中的表达从高至低依次为心脏、肌肉、肾脏、脂肪、血管和肝脏;FGFR1蛋白在各组织中的表达量从高至低依次为脂肪、血管、肌肉、心脏、肝脏、肾脏。FGFR1 mRNA和蛋白在各组织中的表达量比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论 FGFR1在大鼠各主要组织器官中均有表达,主要分布于细胞膜,且在各组织中的表达存在一定差异。     

细胞间粘附分子-1和碱性成纤维细胞生长因子在脑梗死中的作用

目的了解脑梗死急性期血清可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的含量变化,以及在脑梗死发生发展过程中的作用.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA) 检测55例急性期脑梗死患者和32例其他疾病对照组及30例正常健康人为对照组,测量血清sICAM-1和bFGF 含量.结果 (1)脑梗死患者血清sICAM-1和bFGF含量分别为766.2 μg/L±178.8 μg/L和17.4 μg/L±8.2 μg/L,较其他疾病对照组分别529.6 μg/±76.7 μg/L和8.3 μg/L±2.8 μg/L,正常健康对照组分别520.7 μg/±115.9 μg/L和5.8 μg/L±2.7 μg/L,差异有显著意义(P=0.000).(2)相关分析脑梗死时血清sICAM-1含量与bFGF含量呈正相关(r=0.471,P=0.000),与外周血白细胞数呈正相关(r=0.285,P=0.035),与神经功能缺损评分呈负相关(r=-0.333,P=0.013),而与血脂水平无明显相关关系(胆固醇r=-0.042,P=0.758;甘油三脂r=0.061,P=0.657).(3)脑梗死患者血清sICAM-1和bFGF含量与高血压史关系不密切.而bFGF含量与病灶大小有关.结论 ICAM-1和bFGF可能通过炎症机制参与了脑梗死的病理生理过程;急性期监测血清sICAM-1和bFGF含量变化有助于判断病情轻重和病灶大小.     

成纤维细胞生长因子及受体在肾小管间质纤维化过程中的表达

利用免疫组织化学及原位杂交技术观察30例肾间质纤维化模型大鼠,探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFG）及受体（FGFR－1）与肾小管间质纤维化的关系。结果显示大鼠模型中损伤的肾小管上皮过度表达bFGF、FGFR－1,且合成Ⅲ型胶元;肾间质细胞广泛表达bFGF和FGFR－1,而且此表达程度和间质细胞核增殖及小管间质Ⅲ型胶元沉积程度一致．本实验证实肾小管损伤刺激bFGF、FGFR－1的分泌,提示bFGF可能通过自分泌和（或）旁分泌机制促进肾小管上皮的再生修复、间质细胞的增殖及Ⅲ型胶元的合成,从而促进肾小管间质纤维化的形成。     

碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌中的表达及其意义

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和成纤维细胞生长因子受体-4(fibroblast growth factor receptor-4，FGFR-4)在胃癌组织中的表达及其意义。方法：应用免疫组化方法，检测81例胃癌及其癌旁组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4的表达。结果：11例癌旁正常胃粘膜上皮有1例碱性成纤维细胞生长因子(9．1％)，2例成纤维细胞生长因子受体-4(18．2％)染色阳性；5例癌旁不典型增生中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性各2例(40％)；4例癌旁肠化碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别有2例(50．0％)和1例(25．0％)；81例癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性分别为72例(88．89％)和74例(91．36％)；癌组织碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色阳性率明显高于癌旁肠化及不典型增生(P＜0．01)；胃癌组织中碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4表达的水平与患者肿瘤部位、组织学类型及分化程度无关(P＞0．05)；碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4染色呈明显相关(P＜0．01)。结论：碱性成纤维细胞生长因子和成纤维细胞生长因子受体-4在胃癌组织中表达明显增高可能与肿瘤的发生发展有关。     

氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响

目的探讨氧化应激对人胰腺导管上皮细胞增殖的影响。方法不同浓度过氧化氢（H,0,）作用于人胰腺导管上皮细胞6～48h,采用四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法检测细胞光密度（OD）,绘制细胞生长曲线,计算细胞存活率;采用碘化丙啶（PI）单染色法检测细胞周期,计算细胞增殖指数（proliferationindex,PI’）。结果细胞处理6h．H202300μmol／L组存活率下降[（79．10±9．21）％VS．（100．00±14．84）％,P〈O．05]。12hH202300vμmoYL组OD值降低（O．277±0．022vs．0．309±0．015;P〈0．05）,存活率明显下降f（56．90±29．91）％vs．（100．00±20．91）％,P〈0．01]。24hH20,100、200、300~mol／L组OD值明显降低（0．493±0．011,0．434±0．029,0．373~0．014VS．0．529~0．011;P〈0．01）．存活率明显下降[（87．95±3．73）％,（67．61±9．87）％,（46．84±4．76）％VS．（100．00~3．85）％;P〈0．01】,PI’明显降低【（25．50~1．81）％。（25．20~1．80）％,（21．11＋1．78）％VS．（32．20~2．33）％;P〈0．011。48hH202251~mol／L组OD值明显升高（0．683~0．014VS．0．587~0．024,P〈0．01）,存活率明显升高[（127．39~3．99）％VS．（100．00~6．72）％;P〈0．011,H20225、50~moUL组PI’明显升高【（44．20~4．75）％,（40．50~2．67）％VS．（35．40~1．25）％;P〈0．01】;而H202100、200、300txmol／L组OD值明显降低（0．533±0．011,0．440±0．018,0．376~0．003VS．0．587~0．024;P〈0．01）,存活率明显下降『（84．74±3．08）％,（58．20±5．10）％,（39．87±0．71）％vs．（100．00±6．72）％;P〈0．01】,PI’明显降低f（24．30±1．83）％,（21．97~1．82）％,（16．94±3．55）％vs．（35．40±1．25）％;P〈0．011。结论低浓度H202显著促进人胰腺导管上皮细胞增殖,呈时效及量效关系：反之,高浓度H,0,抑制细胞增殖。     

人生长激素对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨人生长激素在体内对人胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法建立裸鼠胰腺癌移植瘤皮下模型,分为对照组、顺铂（DDP）组、重组人生长激素（rhGH）组和DDP＋rhGH组,通过流式细胞仪、免疫组化和TUNEL法检测移植瘤的细胞周期、核增殖抗原、凋亡细胞。结果 DDP组和DDP＋rhGH组比对照组或rhGH组S期细胞、核增殖抗原明显降低（P〈0.05）,凋亡指数明显升高（P〈0.05）;而rhGH组与对照组各项指标比较无明显差异（P〉0.05）。结论外源性人生长激素在体内对人胰腺癌细胞的增殖和凋亡无明显作用。     

PDX-1 Expression in Pancreatic Ductal Cells after Partial Pancreatectomy in Adult Rats

Inrecentyears ,therehadbeenanumberofsightingsofthe”elusivepancreaticstemcell” ,buttherewaslackofconsensusonwhetheranyofthesesightingswereofreal pancreaticstem/progenitorcells[1] .Sharmaetal[2 ] reportedthatthemainpro genitorsourceforpancreaticgrowthandr…     

转录因子Sp1在胰腺癌中的表达及其与预后的关系

目的研究转录因子Sp1在胰腺导管腺癌组织中的表达特征,并探讨其表达对胰腺导管腺癌患者预后的影响。方法采用免疫组织化学技术检测60例胰腺导管腺癌组织Sp1的表达情况,分析该因子的表达与胰腺导管腺癌患者预后的关系。结果Sp1在胰腺导管腺癌组织中的阳性表达率为75%（45/60）,伴有门静脉侵犯和神经侵犯患者Sp1阳性表达明显高于不伴有门静脉侵犯和神经侵犯患者,而Sp1的阳性表达和肿瘤的部位、分化程度、淋巴结转移、是否伴有十二指肠侵犯及肿瘤分期无明显相关。Sp1阳性组患者中位生存期12个月,Sp1阴性组患者中位生存期19个月,Sp1阴性组患者生存期长于Sp1阳性组生存期,有显著性差异。结论Sp1在胰腺导管腺癌中呈过度表达和活化,Sp1对胰腺导管腺癌侵犯门静脉和胰周神经具有提示作用,是一个预后不良的指标。     

N-myc下游调节基因对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制研究

目的 探究N-myc下游调节基因（NDRG1）对胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响,并分析可能的机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞系MZ-3262细胞,并分为空白对照组（细胞不做特殊处理）、pcDNANC组（细胞转染pcDNA-NC）、pcDNA-NDRG1组（细胞转染pcDNA-NDRG1）、通路抑制剂组[转染pcDNA-NDRG1后加入含终浓度为1 mmol/L磷脂肌醇3-激酶（PI3K）通路激活剂bpv的培养液];采用实时荧光定量聚合酶链反应检测NDRG1 m RNA的表达;CCK-8法检测细胞存活情况;划痕实验、Transwell实验分别检测细胞迁移、侵袭能力;Western blotting检测NDRG1、增殖及侵袭迁移相关蛋白[细胞增殖相关核抗原（PCNA）、E-钙黏附蛋白（E-Cadherin）、N-钙黏附蛋白（N-Cadherin）、波形蛋白（Vimentin）]及蛋白激酶B/转录激活因子3(Akt/STAT3)通路蛋白[PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、STAT3]的表达。结果 与空白对照组、pcDNA-NC组比较,pcDNA-NDRG1组、通路激活剂组MZ-3...     

MAPKs在细菌所致细胞凋亡中的作用

MAPK家族是与细胞生长、分化、凋亡等密切相关的信号转导途径中的关键物质，它在介导细胞凋亡过程中起着重要的作用。近年研究发现MAPK途径在调控细菌诱导细胞凋亡的过程中发挥了极为重要的作用。探讨细菌诱导细胞凋亡的发生发展过程与MAPK信号途径中各成员间的关系，有助于从分子水平上更好地阐明病原微生物的致病机制，可能为开发新型抗感染药物提供新的靶点。     

磷脂酶D1对胰腺癌细胞增殖的影响

目的 探究磷脂酶D1（PLD1）对于胰腺癌细胞增殖的影响。方法 通过CCK-8法、EdU荧光染色和流式细胞术检测PLD、PLD1及PLD2抑制剂对胰腺癌细胞系Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响;采用同样方法检测抑制/过表达PLD1对Capan-2细胞活力、增殖、周期的影响。结果 PLD、PLD1抑制剂均抑制了Capan-2增殖（P=0.004、0.044）,而PLD2抑制剂对Capan-2增殖无明显影响（P=0.945）。下调PLD1的表达使Capan-2细胞活力降低（P=0.000）、增殖能力减弱（P=0.002）,阻碍了细胞周期进展（P=0.004、0.002）;上调PLD1的表达使Capan-2细胞活力提高（P=0.004）、增殖能力增强（P=0.002）,促进细胞周期进展（P=0.0004、0.035）。结论 PLD1能够促进胰腺癌细胞的增殖,在胰腺癌的发展中发挥着重要的作用。     

靶向表皮生长因子受体的小分子干扰RNA抑制TJ905人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的实验研究

目的　比较靶向表皮生长因子受体 (EGFR)的小分子干扰RNA与反义RNA构建体对TJ90 5人脑胶质瘤细胞增殖和侵袭的抑制作用。方法　选择人EGFR的二个siRNA靶序列构建靶向EGFR的siRNA表达质粒 ,并以反义EGFRRNA为对照进行脂质体介导的TJ90 5人脑恶性胶质瘤细胞系表达。应用免疫荧光和蛋白印迹检查EGFR的表达水平 ;应用TUNEL法分析细胞凋亡 ,流式细胞术分析细胞周期变化 ,MTT法分析细胞增殖 ;蛋白印迹检测基质金属蛋白酶 9的表达 ,明胶酶谱分析MMP9酶活性 ,Transwell法分析侵袭能力。结果　与TJ90 5细胞和转染空载体的TJ90 5细胞比较 ,转染反义EGFRRNA使EGFR表达下调 82 % ,转染siRNA表达质粒组EGFR表达下调 90 %和 92 %。TJ90 5组和空载转染组几乎没有凋亡细胞 ,反义EGFR转染组与siRNA表达质粒组的凋亡率明显增加 ( χ2 =31 5 4 9,P <0 0 0 1) ;siRNA表达载体转染后S期指数较对照和反义RNA转染组细胞明显减少 ,与TJ90 5组和空载转染组比较 ,转染组细胞自第 1天起存活率均明显下降 (P <0 0 0 1) ,且反义组与siRNA表达载体转染组之间存活率差异有显著意义 (P <0 0 1) ;同时蛋白印迹发现转染siRNA表达载体后MMP 9的表达明显下调 ,明胶酶谱分析发现在反义组与siRNA表达载体转染组MMP 9酶活性明显下降 ,以siRNA     

p38丝裂素活化蛋白激酶信号转录对IL-1β诱导肾小管细胞转分化的影响

目的　探讨 p38MAPK信号转导途径对IL 1β诱导肾小管上皮细胞转分化的影响及其导致的功能改变。方法　以培养的人近端肾小管上皮细胞 (HK 2 )为研究对象 ,给予IL 1β(10ng/ml)刺激 2 4h ,在阻断实验中加入SB2 0 35 80阻断 p38通路。采用蛋白印记杂交法检测 p38MAPK的磷酸化程度 ;细胞表型特征检测包括细胞形态变化、标志蛋白 (角蛋白、α SMA)的表达及分布、细胞增殖、黏附和移行能力。结果　 (1)IL 1β刺激 6～ 4 8h可使α SMA表达上调 ,刺激 2 4h可使角蛋白表达减弱、α SMA分布紊乱 ,但细胞形态变化不明显 ;(2 )IL 1β在 5min时可使p38激活达高峰 ,较基础水平升高 2～ 3倍 (P <0 0 5 ) ;至 12 0min时 p38则呈持续激活状态 ;(3)p38阻断剂 (SB2 0 35 80 )对HK 2细胞α SMA的基础表达有抑制作用 ,抑制率 37 13% (P <0 0 1) ;同时可明显抑制IL 1β刺激的α SMA表达 ,抑制率 4 7 0 7% (P <0 0 0 1) ;(4)IL 1β及 p38阻断剂并不影响HK 2细胞之间的黏附能力 ,但IL 1β可使细胞的移行能力增强 (P <0 0 1) ,而 p38阻断剂可明显抑制其移行能力。IL 1β并不影响HK 2细胞增殖。结论　IL 1β可以激活肾小管上皮细胞p38/MAPK ,并可使其发生表型转化 ,这一作用部分通过 p38信号通路所介导。     

Targeting of p38 Mitogen-activated Protein Kinases to Early Growth Response gene 1 （EGR-1） in the Human Paclitaxel-resistance Ovarian Carcinoma Cells

To investigate the relationship between the expression of early growth response gene 1 (EGR-1) and p38MAPK pathway in the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells, the effect of p38MAPK inhibitor SB203580 on cell apoptosis was examined by using Hoechst 33258 staining. The intracellular Rh123 (Rhodamine 123) accumulation was detected by the flow cytometry (FCM). The 50% inhibition concentration (IC50) of paclitaxel for A2780/Taxol cells was determined by MTT method. Electrophoretic motility shift assay (EMSA) was employed to examine the EGR-1DNA binding activity. MDR1 and EGR-1 mRNA were assessed by RT-PCR. The expressed of p-gp, phos- phorylated p53 and p38 were detected by Western blotting. SB203580 could remarkably promote the apoptosis of A2780/Taxol cells, and the cell apoptosis was in a time-dependent manner. Cellular Rh123 accumulation was increased, and the IC50 of paclitaxel for A2780/Taxol cells was decreased significantly. A2780/Taxol cell line after SB203580 treatment was shown to have a significantly higher level of EGR-1 DNA binding activity. SB203580 down-regulated the activity of p38MAPK pathway, but up-regulated EGR-1 expression. SB203580 significantly increased the level of cellular phosphorylated p53 protein, but decreased the p-gp protein level and MDR1 mRNA level in A2780/Taxol cells. There existed a close relationship between p38MAPK pathway and the paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells. The expression of EGR-1 mediated by p38MAPK pathway plays a critical role in paclitaxel resistance of ovarian carcinoma cells.