骨髓基质细胞体外扩增能力及支持造血的研究

目的：观察成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）贴壁层的形成,体外传代培养,扩增的情况,研究各阶段（CFU－F）对粒－单核细胞集落形成单位（CFU－GM）和红细胞集落形成单位（CFU－E）生长及细胞因子对造血的支持作用,并测定骨髓有核细胞对基质细胞的粘附能力,方法：利用改进的液体培养法,培养骨髓基质细胞并传代,利用甲基纤维素半固体培养法,培养人骨髓细胞,观察CFU－GM,CFU－E集落数,：人骨髓基质细胞在体外可以传代培养4代并能扩增28倍,其中F3代对CFU－GM和CFUE的促进增殖作用最强,且对骨髓有核细胞的粘附能力最强,结论：人,骨髓基质细胞可体外传代扩增并支持造血细胞生长。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

目的 :研究正常人骨髓基质祖细胞 ( CFU- F)在体外传代培养过程中的功能变化。方法 :采用体外液体单层和半固体培养法。结果 :F1传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位 ( CFU- E)和粒系祖细胞集落形成单位 ( CFU- GM)支持能力最显著 ,F2 代对有核细胞粘附能力最显著。结论 :F1代是进行第二次接种骨髓细胞的最佳时机 ,而对有核细胞的粘附能力主要与成纤维细胞有关。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

人骨髓基质干细胞克隆对脐血造血干细胞体外扩增作用的研究

目的：探讨人骨髓基质干细胞的克隆化培养及其对体外造血干细胞扩增的影响。方法：取正常肋骨分离骨髓，制备单个核细胞贴壁培养，约5d后取集落样生长的梭形细胞扩增培养，传代、将分选的脐血造血干／祖细胞接种到克隆培养的人骨髓基质干细胞及其他培养条件液上，比较不同培养条件及不同代次骨髓基质干细胞对造血干／祖细胞扩增能力及集落形成能力的影响。结果：人骨髓基质干细胞能扩增达20代以上，经流式细胞仪检测证实基质干细胞，单纯细胞因子组和细胞因子加基质干细胞组能有效扩增造血细胞，而后者有维持长期造血的作用。结论：该克隆培养方法能有效扩增骨髓基质干细胞，培养的细胞有体外支持长期造血的作用。     

胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用

目的 :探讨胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子的协同造血支持作用。方法 :联合应用胎儿骨髓基质细胞与外源性细胞因子如重组人干细胞因子 (rh SCF)、IL - 3、IL - 6、粒巨噬细胞集落刺激因子 (GM- CSF)、粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)、促红细胞生成素 (EPO)等先后对成人骨髓单个核细胞及 CD34 + 富集细胞培养 5 d至 2周。结果 :胎儿骨髓基质细胞与上述细胞因子具有良好的协同作用 ,CD34 +富集细胞以胎儿骨髓基质细胞 +SCF+IL- 3+IL- 6 +G- CSF+EPO培养 2周 ,可使细胞总数、粒 -单系造血祖细胞 (CFU- GM)、早期红系造血祖细胞 (BFU- E)及 CD34 +细胞分别扩增 (119.6± 30 .9)倍、(5 4.6± 17.4)倍、(2 5 .2± 4.4)倍、(11.1± 4.2 )倍。结论 :胎儿骨髓基质细胞可协同上述外源性细胞因子支持成人骨髓造血祖细胞的有效扩增     

脐血造血细胞体外集落培养最佳收获时机的探讨

目的 探讨脐血（CB）多系造血集落培养在不同培养条件下脐血造血细胞体外扩增的最佳收获时机。方法 将从新鲜CB标本中分离出的单个核细胞（MNC）分别接种于已建立的无血清培养基，该培养基分别含单用人骨髓基质细胞、单用细胞因子及细胞因子联合入骨髓基质细胞（HBMSC）支持培养体系。在0、6、10及14d各时间点分别取细胞进行巨细胞集落形成单位（CFU—MK）、红乐爆式集落形成单位（BFU—E）及粒单细胞集落形成单位（CFU—GM）培养。结果在体外培养过程中，第10d时各组CFU—MK、BFU—E及CFU—GM数均高于组内其它时间点（P〈0．05）；在含HBMSC支持培养的组集落生成数优于其它组（P〈0．05）。结论 脐血MNC体外培养过程中，第10d可能是收获的最佳时机。FIBMSC能更好地维持造血干／祖细胞的活性，使其集落形成能数得到有效扩增。     

基质细胞对小鼠骨髓单个核细胞体外扩增的促进作用

目的 阐明基质细胞在造血细胞体外扩增中的作用。方法 采用骨髓基质细胞培养、骨髓单个核细胞（BMMNC）体外液体培养和各种造血相细胞集落培养技术,进行基质细胞支持条件下骨髓单个核细胞体外扩增的研究,并与单纯细胞因子支持下的细胞扩增进行比较。结果 在照射后细胞层存在的条件下,同时含有细胞因子组合的培养体系,对细胞总数和集落形成细胞数的扩增作用明显高于其它各组。结论 基质细胞对细胞因子作用下的造血细胞体外扩增有明显的促进作用。     

人脐血基质细胞深低温保存的实验研究

目的　探讨一种简便可行的人脐血基质细胞冻存方法。方法　采用 5 %二甲基亚砜 (DMSO) ,3%羟乙基淀粉 (HES)和 4 %人血白蛋白 (HAS)作冷冻保护剂 - 80℃冻存人脐血基质细胞 ,观察不同时相点的基质细胞活性、细胞计数 ,回收率 ,基质细胞集落形成单位 (CFU F)及其支持集落生长的作用 (CFU S ,CFU GM ,CFU E)。结果　保存 6个月后人脐血基质细胞的细胞活性仍保持在 (90 .6± 2 .8) % ,CFU F产率也达到 (83.6± 1 .8) % ,其支持集落生长的作用与保存前无统计学差异。结论　本方法是一种简便易行的人脐血基质细胞保存法     

犬骨髓基质干细胞分离培养与向软骨样细胞 诱导分化的研究

 【目的】 探讨犬骨髓基质干细胞的提取。分离和体外扩增的最佳条件,研究其在体外培养中定向诱导分化为软骨样细胞的可能。【方法】 从幼年犬骨髓中分离基质干细胞进行培养扩增,观察其生长特性,体外应用碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子-B1(TGF-B1)对第3代传代细胞诱导分化,并通过细胞的染色和Ⅱ型胶原免疫组化鉴定诱导分化细胞的类型。【结果】 原代培养时形成由基质干细胞组成的细胞集落融合周期约6 ~ 9 d左右。第3代传代细胞经碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-B1)诱导后,传代细胞在形态上呈软骨样改变;甲苯氨蓝异染性。阿新蓝染色阳性;Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性。【结论】 犬骨髓基质干细胞在体外培养条件下生长良好和持续扩增,在碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和转化生长因子(TGF-B1)作用下可被诱导分化为软骨样细胞。     

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。     

5．0 Gy放射损伤对小鼠早期骨髓造血基质细胞周期及其DNA含量的影响

取５．０Ｇｙγ射线照射后３ｄ和７ｄ的小鼠骨髓体外液体培养１４ｄ和２１ｄ，显示骨髓基质细胞仍能贴壁生长，但骨髓基质细胞集落（ＣＦＵ－Ｆ）数量显著低于正常，照后７ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量虽比照后３ｄ的ＣＦＵ－Ｆ数量有所增加，但恢复缓慢；延长培养时间，显示照射鼠的骨髓基质细胞增殖受抑。流式细胞仪检测结果表明Ｇ２＋Ｍ期细胞和ＤＮＡ含量显著低于正常对照组；随着照后时间的延长，Ｓ、Ｇ２＋Ｍ期含量有所恢复，但仍显著低于正常对照组。说明骨髓造血基质细胞具有较高的辐射敏感性且对辐射损伤持续较久。     

人参总皂甙诱导人骨髓基质细胞表达GM-CSF的实验研究

目的：研究人参总皂甙(TSPG)对人骨髓基质细胞表达GM—CSF的影响及其与人粒单系血细胞发生的关系。方法：采用造血祖细胞与骨髓基质细胞体外培养、造血生长因子生物学活性检测、免疫细胞化学和核酸分子原位杂交等技术。结果：TSPG能显著刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)增殖；经TSPG诱导制备的骨髓基质细胞条件培养液富含GM—CSF样活性；TSPG能显著促进骨髓基质细胞的GM—CSF蛋白和mRNA表达。结论：TSPG可能通过直接和/或间接途径促进造血诱导微环境中的骨髓基质细胞合成和分泌GM—CSF，进而促进CFU—GM的增殖分化。     

何首乌提取物对放射线照射小鼠血小板生成的保护作用

目的：探讨何首乌提取物对放射线照射后小鼠血小板（Plt）生成功能的促进作用。方法：24只BALB/C小鼠随机分为正常组（A组。不接受照射和药物处理）,对照组（B组）和何首乌提取物组（C组）,每组8只。B、C组予3.5Gy Cs137射线全身照射;照射后C组每天腹腔注射何首乌提取物125mg.kg-1.d-1,连续21 d,B组注射等容积NS。于照射前及照射后第7、14、21 d采集尾部静脉血,观察全血细胞计数变化;第21 d采血后取骨髓行巨核细胞集落形成（CFU-MK）、骨髓基质细胞集落形成（CFU-F）、红系爆增性集落形成（BFU-E）及粒单系集落形成（CFU-GM）培养。观察6只正常小鼠体外骨髓CFU-MK、CFU-F在不同浓度（0、10、50、100、200、500μg/mL）何首乌提取物作用下的生长情况。结果：C组Plt计数回升明显高于B组（P〈0.01）,体内C组的CFU-MK、CFU-F、BFU-E、CFU-GM集落生长明显优于B组（P〈0.05,P〈0.01）。体外小鼠骨髓CFU-F的生长对何首乌提取物有浓度-依赖性。而何首乌提取物对体外骨髓CFU-MK生长无明显作用。结论：何首乌提取物对照射后小鼠骨髓的Plt生成功能有促进作用,它的作用机制可能通过刺激骨髓基质细胞增殖,改善巨核细胞造血微环境,进而提升外周血Plt数量。     

豚鼠胸腺与骨髓细胞混合培养体外造血的研究

本文对豚鼠胸腺与骨髓细胞混合培养,及其体外造血、上悬液中成纤维细胞集落生成细胞(FCFC)的再次培养,底层贴壁的基质祖细胞(CFU—F)分泌成集落刺激因子(CSF),粒一巨噬系祖细胞(CFU—GM)培养等进行了初步研究,并对胸腺与骨髓混合培养体外违血的作用机制进行了观察和讨论。     

电离辐射对胎鼠皮肤间充质干细胞支持骨髓粒系造血作用的影响

目的：观察不同剂量的X射线照射对体外培养的胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)支持造血细胞增殖作用的影响,为提高造血干细胞体外扩增效率提供一种更为有效的方法,进而为造血干细胞移植提供一个新的途径。 方法：分别用不同剂量的X射线照射培养的胎鼠皮肤MSCs层,然后将骨髓细胞种植于该细胞层上,扩增后不同时间(0~12 d)进行骨髓CFU-GM集落培养,同时取经X射线照射的皮肤MSCs的上清液进行骨髓CFU-GM、CFU-E及BFU-E培养,观察射线对胎鼠皮肤MSCs造血支持作用的影响。 结果：6、8和10 Gy剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs与骨髓细胞共同作用7 d时,骨髓祖细胞集落显著增加,其中6 Gy组增加最为明显,CFU-GM是0 Gy组的2.17倍。6、8和10 Gy剂量X射线照射培养皮肤的上清液体外亦可刺激骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E的生长,与0 Gy组比较差异均有显著性(P<0.05)。其中6 Gy组增加最为明显,分别达0 Gy组的1.81倍、3.94倍和3.51倍,集落亦明显加大。 结论：一定剂量X射线照射胎鼠皮肤MSCs,其体外支持造血的作用增强,无论照射后的单纯MSCs细胞层还是上清液都可使骨髓细胞集落数增多。     

Effects of Weiganfi on the Hemopoietic Function of the Myelosuppressed Anemic Mice

To study the effect of Weiganli （维肝力） on bone marrow hemopoiesis. Methods： The effects of Weiganli on the peripheral blood picture and the number of bone marrow nucleated cells （BMCs） were observed in myelosuppressed anemic model mice, and the effects of Weiganli on the growth of colony forming unit-granulocyte macrophage （CFU-GM）, colony forming unit-erythroid （CFU-E）, burst forming unit-erythroid （BFU-E）, colony forming unit-megkaryocyte （CFU-Meg） were investigated by in vitro cell culture technique. The hemopoietic stem cells （HSCs, c-kit＋） in bone marrow were double stained with fluorescent antibody PE-C-Kit and FITC-CD45, and the HSCs （c-kit＋） were counted by flow cytometer with CD45/SSC （side scatter） gating. Results： Peripheral blood cell counts and the number of BMCs were significantly improved after Weiganli administration; and bone marrow hemopoietic stem/progenitor cells were significantly increased. Conclusion： Weiganli can effectively promote the recovery of hemopoietic function in the mvelosuooressed anemic mice.     

小鼠骨髓基质成纤维细胞与成骨关系的实验研究

目的 :研究骨髓基质成纤维细胞与成骨的关系。方法 :Luria多器官培养器体外器官培养法、肾被膜下移植技术以及石蜡切片技术。结果 :移植物在移植处形成软骨细胞团及骨基质。结论 :骨髓基质成纤维细胞集落形成细胞 ( CFU-F)为基质多能干细胞 ,能增生分化为成骨所必需的基质细胞     

银杏叶提取物对兔外周血干细胞动员的影响

目的:探讨银杏叶提取物对兔外周血干细胞的动员作用。方法:30只26²8周龄新西兰大白兔,体重为2.528周龄新西兰大白兔,体重为2.5³.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后23.0kg,随机分三组:银杏叶提取物组(Egb)、G-CSF组、生理盐水组,给药方法为腹腔注射7d,1次/d;给药后2⁸d,采用外周血WBC和MNC计数、造血干细胞体外培养、免疫细胞化学等检测各组外周血WBC、MNC、CD34+细胞、CD49d阳性细胞、CFU-GM、CFU-MK、CFU-E的产率及兔骨髓基质细胞中VCAM-1阳性细胞百分率。结果:Egb组给药第7天外周血WBC、MNC数量达到高峰,分别为给药前的3倍和3.5倍;Egb组CD49d阳性细胞、外周血CD34+及骨髓基质细胞的VCAM-1阳性细胞百分率分别为(9.37±3.01)%、(0.63±0.37)%和(48.13±9.84)%,均高于生理盐水组;其中CFU-GM、CFU-MK和CFU-E产率分别为(12.94±3.03)%、(11.49±2.93)%和(24.52±8.62)%,均高于生理盐水组。结论:银杏叶提取物(Egb)对兔骨髓造血细胞有一定的增生作用,同时对外周血干细胞有一定的动员作用,这可能与其上调兔骨髓基质细胞和外周血粘附分子的表达有关。     

大鼠骨髓细胞悬液培养及中药953对该培养中CFU－F形成影响的研究

Ｗｉｓｔａｒ大鼠分成３组：高剂量组、低剂量组、对照组进行中药９５３喂养。８０ｄ后，杀鼠，取股骨制成骨髓细胞悬液，于微孔滤膜上培养１２ｄ，观察ＣＦＵ－Ｆ形成情况。发现随着培养时间的延长，骨髓基质细胞形成集落增多，在基质细胞形成的集落周围有少量淋巴细胞，而无基质细胞的空白区，则无淋巴细胞。说明骨髓内存在的基质祖细胞，在体外培养中，可形成集落，并支持、调节造血细胞的增殖分化，同时，由实验所得数据知，高剂量组、低剂量组分别与正常组比较，经／检验，Ｐ＞０．５０，差别不显著，说明该中药虽然对骨髓ＣＦＵ－Ｆ形成有影响，但影响不大。     

人骨髓基质细胞上清液对原代白血病细胞的杀伤作用及CFU-F生成的影响

观察了人胎骨髓基质细胞上清液对6例白血病患者骨髓原代白血病细胞存活程度及CFU-F形成的影响。结果表明。骨髓基质细胞上清液对原代白血病细胞具有杀伤作用(p<0.002—0.001)。同时发现基质细胞上清液还能促进CFU-F的形成(p<0.01-0.001)。本文还对上述变化的可能机制进行了讨论。