临床分离产AmpC β-内酰胺酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的研究我院临床分离阴沟肠杆菌的产AmpC酶耐药情况及ampC基因型。方法收集临床分离的耐药阴沟肠杆菌15株；检测产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的菌株；测定MIC值；PCR扩增检测ampC基因及序列测定。结果15株菌中8株菌（53．3％）产AmpC酶，3株菌（20．0％）产ESBLs。产AmpC酶的菌株除对亚胺培南全敏感外。对其它抗菌药不同程度耐药。ampC基因与阴沟肠杆菌ECLC074的ampC基因高度同源。结论产AmpC酶是阴沟肠杆菌对阻内酰胺类抗生素耐药的主要机制之一。阴沟肠杆菌ECLC074 ampC基因是我院主要的阴沟肠杆菌ampC基因型。产AmpC酶的阴沟肠杆菌常呈多重耐药，亚胺堵南是治疗此类菌所致感染的最有效药物。     

产AmpC酶的克雷伯菌药敏结果分析及质粒介导的AmpC和ESBLs耐药基因检测

目的 了解克雷伯菌的耐药性及产AmpC菌株同时产ESBLs药敏的变化。方法 采用Vitek60型和Vitek32型、纸片扩散法（KB法）测定42株产AmpC酶同时产ESBLs克雷伯菌的药敏结果，并与24株产AmpC酶但不产ESBLs克雷伯菌和138株不产AmpC酶但产ESBLs的克雷伯菌药敏结果对比分析；采用PCR分析产AmpC酶但不产ESBLs肺炎克雷伯菌的AmpC基因型。结果 产AmpC不管是否产ESBLs的克雷伯菌对亚胺培南敏感，对其他抗生素均有不同程度的耐药；单纯产ESBLs时，第四代头孢菌素如头孢吡肟对其活性较好，但产AmpC酶同时产ESBLs时，令头孢吡肟几乎失去活性。肺炎克雷伯菌产AmpC酶但不产ESBLs的20株菌中7株检出blaDan基因，占35％，1株检出blaMIR基因，占5％。另外同时产AmpC酶和ESBLs的20株肺炎克雷伯菌中100％检出blaTEM基因，90％检出blacTX-M-1。基因，100%检出blaSHV基因，85％检出blaDHA基因，15％检出blaMIR基因，90％检出不同的氨基糖苷类修饰酶基因。结论 克雷伯菌产AmpC酶和同时产ESBLs的耐药性比单纯产AmpC酶的耐药性更高、更显著；肺炎克雷伯菌产AmpC酶的主要基因型为DHA，对同时存在2～6种不同类型耐药基因的克雷伯菌，碳青霉烯类药物亚胺培南的体外活性最好。     

AmpC酶、超广谱β-内酰胺酶在下呼吸道感染细菌检测中的临床研究

目的探讨下呼吸道感染标本常见革兰阴性杆菌分离株中AmpC酶和超广谱β-内酰腔酶（ESBLs）的检出情况。方法 通过酶提取物三维试验检测单产AmpC酶、单产ESBLs、同时产AmpC酶和ESBLs菌株。结果 280株革兰阴性杆菌耐药株中检出单产AmpC酶菌株43株，以阴沟肠杆菌检出率最高。单产ESBLs菌株134株，以肺炎克雷伯菌检出率最高。同时产AmpC酶和ESBLs菌株19株，以阴沟肠杆菌检出率最高。结论 正确区分ESBLs和AmpC酶，对临床选择性用药具有重要的意义。     

产"超-超广谱"β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的耐药表型及基因分析

目的 首次分析本地区产超-超广谱β-内酰胺酶(super-spectrum β-lactamase,SSBLs)菌株的耐药性及分子流行病学现状.方法 收集自2008年1月～2009年6月本院从临床分离的对头孢西丁和头孢他啶耐药的革兰阴性杆菌105株,采用改良三维试验与质粒结合实验筛选产SSBLs菌株,通过药敏试验鉴定其耐药表型,运用PCR扩增检测其ESBLs基因型与AmpC酶基因型.结果 筛选出的2株产SSBLs菌株(1株阴沟肠杆菌和1株大肠埃希菌)均表现为多重耐药,仅对亚胺培南敏感.阴沟肠杆菌质粒编码的ESBLs基因型为TEM、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT;大肠埃希菌质粒编码的ESBLs基因型为SHV、CTX-M,AmpC酶基因型为ACT.结论 本院存在产SSBLs革兰阴性杆菌引起的感染,但此类菌株尚未在本院传播流行,ACT型是SSBLs菌株质粒AmpC酶主要基因型.     

同时产CTX-M-22及TEM-1型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌耐药性分析

目的 了解临床分离阴沟肠杆菌株EC003产β-内酰胺酶的耐药特征和基因型。方法采用琼脂二倍稀释法对阴沟肠杆菌EC003进行MIC检测，酶提取物三维实验检测AmpC酶，双纸片法筛选及确证实验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs），等电聚焦（IEF）电泳测定其等电点。以耐药质粒为模板进行PCR扩增，将β-内酰胺酶全编码基因克隆、表达，并对其扩增产物进行DNA序列测定和同源性分析。结果阴沟肠杆菌株EC003对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药，表型检测AmpC酶为阴性。ESBLs阳性，IEF显示该菌产两种p1分别为8．7及5．4的β-内酰胺酶。PCR扩增产物DNA测序证实为CTX-M-22、TEM-1型β-内酰胺酶全编码基因，产TEM-1的克隆菌株仅对青霉素类耐药，产CTX—M-22的克隆菌株对所试多数β-内酰胺类抗生素耐药。对头孢噻肟的水解程度明显强于头孢他啶。结论临床分离阴沟肠杆菌株EC003同时产CTX—M-22和TEM-1型两种β-内酰胺酶，可导致对多数β-内酰胺类抗生素耐药。     

阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制研究

目的 探讨阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制。方法 运用双纸片协同试验和正交三维试验检测耐药菌株的产酶情况，通过接合传递试验和质粒谱分析等方法探讨耐药性播散的规律。结果 37株耐药菌中，产ESBLs的有2l株菌，占56．8％；产去阻遏型AmpC酶的有13株菌，占35．1％；两种酶均阳性的菌株有2株，均阴性的有l株。在同时产两种酶的2株菌中，其中l株菌CH29的两种酶均在质粒上，耐药表型可通过质粒传递到受体菌株大肠埃希氏菌ECNK5449，属于超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)。结论 产生ESBLs和去阻遏型AmpC酶是阴沟肠杆菌临床株对第三代头孢菌素耐药的主要机制。发现l株产SSBLs的临床分离株，可能与耐药性的水平传播有关。     

肠杆菌科细菌ESBLs和AmpC酶检测及耐药分析

目的 观察肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和β-内酰胺酶（AmpC）酶检测结果,分析其耐药情况.方法 抽取本院自2010年5月～2012年5月收治的68例患者标本培养的135株肠杆菌,分别经双纸片确证试验与双纸片氯唑西林增效试验检测细菌ESBLs和AmpC酶,并经相关药敏试验观察其耐药性.结果 135株肠杆菌中检出ESBLs菌82株,AmpC酶菌53株,其中单产AmpC酶菌、单株ESBLs菌、产ESBLs及AmpC酶菌对头孢噻肟、氨曲南等药物耐药性明显高于非产AmpC酶菌,P＜0.05;所有肠杆菌耐药率均较高.结论 ESBLs菌和AmpC酶菌作为肠杆菌科细菌耐药重要因素,临床诊断及检测时应高度重视.     

产AmpC酶阴沟肠杆菌耐药的基础与临床

目的 对四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的检出率、耐药性及ampC结构基因序列进行分析．探讨阴沟肠杆菌产AmpC酶菌株的耐药性及临床特点。方法 采用琼脂稀释法对临床标本中分离的阴沟肠杆菌进行产AmpC酶株的筛选，用酶粗提物头孢西丁三维试验结合PCR法检测AmpC酶．并测定产AmpC酶菌株对9种抗菌药物的MIC值。对3株高度耐药阴沟肠杆菌产AmpC酶的结构基因和1株敏感菌进行PCR扩增并对产物序列进行分析，测序的菌株与E。cloacae p99进行核苷酸序列比较和推导的氨基酸序列比较。结果 阴沟肠杆菌产AmpC酶株的检出率为24．6％。产AmpC酶菌株多呈多重耐药，产AmpC酶耐药菌对9种抗菌药物的耐药率由高至低为头孢西丁、头孢噻肟、阿米卡星、氨曲南、头孢他啶、头孢哌酮／舒巴坦、环丙沙星、头孢吡肟、亚胺培南。阴沟肠杆菌耐药株ampC结构基因的核苷酸序列与E.cloacae p99的同源性为99％．推导的氨基酸序列仅Ala-58→Pro发生点突变。结论 四川大学华西医院阴沟肠杆菌产AmpC酶细菌检出率较高。产AmpC酶细菌多呈多重耐药，亚胺培南是治疗产AmpC酶细菌感染的较可靠的药物。阴沟肠杆菌产AmpC酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的原因之一，其ampC结构基因突变可能与其耐药性有关。     

ESBLs在大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中的检出率及耐药情况比较

目的检测我国大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌中超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)产生及耐药情况。方法对2000-2001年中国细菌耐药监测研究所收集的来自9座城市13家医院的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌采用平皿二倍稀释法测定抗菌药物对各种致病菌的MIC值，计算MIC50与MIC90，并按NCCLS2002规定的临界浓度，求出各类细菌对所测定的各种抗菌药物的耐药率(R％)。以纸片扩散法确证试验检测产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，以三维试验检测产ESBLs和AmpC酶的阴沟肠杆菌。结果在总共341株大肠埃希菌和212株肺炎克雷伯菌中共检测到产ESBLs菌100株，检出率18．1％(100／553)。其中产ESBLs大肠埃希菌63株，检出率18．5％(63／341)；产ESBLs肺炎克雷伯菌37株，检出率17．5％(37／212)。产ESBLs菌株对β-内酰胺类抗生素的耐药率明显高于非ESBLs菌株。酶抑制剂联合制剂头孢哌酮／舒巴坦、第四代头孢菌素头孢吡肟和碳青霉烯类对产ESBLs菌株有较好作用。81株阴沟肠杆菌中，28株产ESBLs，检出率34．6％；31株产AmpC酶，检出率38．3％；14株同时产生此二类酶，检出率17．3％。在对头孢曲松中介的14株阴沟肠杆菌中，AmpC酶检出率为42．9％(6／14)，而ESBLs的检出率高达92．9％(13／14)，是AmpC酶检出率的两倍多。但在对头孢曲松耐药的27株阴沟肠杆菌中．情况刚好相反，AmpC酶的检出率为88．9％(24／27)，是ESBLs检出率(40．7％，11／27)的两倍多。头孢噻肟中介和耐药株中两酶的检出情况与头孢曲松相似。头孢他啶只有1株中介株，耐药株中AmpC酶检出率(78．4％，29／37)约是ESBLs检出率(56．8%，21／37)的1．4倍。若将敏感和中介株合并计算可见，头孢他啶敏感和中介株中两酶的检出率明显低于头孢曲松和头孢噻肟。结论①细菌耐药研究显示ESBLs在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率为18．1％；②ESBLs在我国阴沟肠杆菌中有很高的检出率；③在阴沟肠杆菌中，对头孢曲松和头孢噻肟中介的菌株，以产ESBLs为主，而耐药菌株以产AmpC酶为主。     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶的基因型调查

目的了解北京朝阳医院阴沟肠杆菌中产ESBLs的流行情况,并对携带的ESBLs基因型进行调查。方法采用表型筛选法对58株对第三代头孢菌素或氨曲南敏感性降低的阴沟肠杆菌进行检测。对20株初筛阳性的细菌进行琼脂稀释法药敏试验、等电点测定,并对β-内酰胺酶编码基因进行克隆测序。结果表型筛选法对58株阴沟肠杆菌检测的结果显示产ESBLs菌株的检出率为34.48%(20/58)。药敏结果显示,单独产生ESBLs的菌株对头孢西丁、头孢吡肟、哌拉西林/三唑巴坦和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为100%、32.5%和87.5%。同时携带ESBLs和AmpC酶的菌株只对亚胺培南敏感。20株检测阳性的细菌中,14株ESBLs编码基因PCR结果阳性,分别为:SHV-2、SHV-2a、SHV-12、CTX-M-14和CTX-M-22型ESBLs。对另外6株进行粗酶等电点测定发现分别存在7.89、8.0、8.57等电点条带,并被克拉维酸抑制。结论产生超广谱β-内酰胺酶是造成阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的另一重要原因。     

阴沟肠杆菌感染154例耐药性分析

目的分析阴沟肠杆菌耐药机理及现状,指导临床合理应用抗生素。方法收集医院分离到的154株阴沟肠杆菌,采用湖南天地人生物科技公司提供的微生物生化药敏卡进行药敏检测;用双纸片协同扩散法检测超广谱β-内酰胺酶;通过改良酶提取物头孢西丁和头孢曲松三维试验检测AmpC。结果阴沟肠杆菌对临床常用抗生素呈高度耐药;产酶株的耐药性明显高于非产酶株,耐药现象在同时产AmpC酶和ESBLs菌株中尤为严重,96%菌株对亚胺培南敏感。结论阴沟肠杆菌感染的治疗可根据药敏选用氨基糖苷类及喹诺酮类药物,感染严重者可采用碳青霉烯类抗生素。     

儿童感染革兰阴性杆菌中产AmpC酶的基因型分析

目的:研究儿童常见革兰阴性杆菌ampC基因和AmpC酶发生率,分析其产酶与非产酶菌株对抗生素的耐药性。方法:对2002年~2004年我院临床分离的革兰阴性杆菌4 022株进行细菌鉴定,K-B法进行药敏试验;选择确认的产超广谱-β内酰胺酶(ESBLs)菌108株,用聚合酶链反应(PCR)扩增ampC基因;用酶粗提物头孢西丁三维试验检测AmpC酶菌,对产酶株与非产酶株的药敏进行对比分析。结果:108株ESBLs菌中检出70株ampC基因阳性株(占64.8%),7株细菌产AmpC酶(占6.5%)。产AmpC酶菌株对头孢他啶、头孢曲松钠、氧哌嗪青霉素、氨苄青霉素、氨曲南的耐药率分别为85.7%、85.7%、71.4%、79.4%、79.4%;非产AmpC酶菌株对头孢曲松钠、氧哌嗪青霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、氨曲南的耐药率分别为50.8%、55.6%、55.6%、70.3%、54.0%;2种菌株对亚胺培南的耐药率都最低,环丙沙星次之。结论:ampC基因检出率明显高于产AmpC酶,而产AmpC酶菌对常见抗生素的耐药性高于非产AmpC酶菌。     

76株阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶的检测

目的 了解临床分离的阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）及与耐药性的关系。方法 采用纸片表型确证法、表型筛选法与三维试验法分别检测76株临床分离阴沟肠杆菌的ESBLs和去阻遏持续高产AmpC酶,同时用K-B法检测体外药敏结果。结果 在76株阴沟肠杆菌中,纸片表型确证法检出产ESBLs菌株22株,占28．9％;表型筛选法检出产AmpC酶菌株30株,占39．5％;三维试验检出产AmpC酶菌株26株,占34．2％;同时产两种酶菌株4株,两种酶均不产菌株24株。对亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦、头孢吡肟、氨曲南的体外药物敏感率产AmpC酶菌株敏感率分别为100．0％、84．6％、84．6％、76．9％,产ESBLs菌株分别为100．0％、90．9％、54．5％、27．3％。结论 产ESBLs和AmpC酶是阴沟肠杆菌耐药的主要机制,亚胺培南、哌拉西林／他唑巴坦和头孢吡肟对产酶株的效果较好。     

临床分离耐药摩氏摩根菌的β-内酰胺酶表型和基因型分析

目的探讨临床分离耐药摩氏摩根菌3-87耐药的分子机制。方法采用常规琼脂二倍稀释法对摩氏摩根菌3-87进行15种抗菌药的MIC测定；超声破碎法提取β-内酰胺酶；并用nitrocefin做定性检测，用紫外分光光度计检测酶活性；超薄层等电聚焦测定β-内酰胺酶等电点和酶抑制实验；ESBLs表型鉴定；AmpC酶的检测；纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；以摩氏摩根菌3—87质粒DNA为模板扩增blaSHV、blaTEM和blaCTX-M基因，以基因组DNA为模板扩增ampC结构基因；ampC结构基因扩增产物的DNA序列测定及同源性分析。结果摩氏摩根菌3—87对10种β-内酰胺类抗生素、2种氟喹诺酮类抗菌药耐药，对哌拉西林／三唑巴坦和头孢哌酮／舒巴坦、氨基糖苷类抗生素阿米卡星敏感。产酶活性为3727．5U的β-内酰胺酶。产生的p17．3、8．2及9．6的三种β-内酰胺酶分别能被氯唑西林、克拉维酸、EDTA部分抑制。β-内酰胺酶表型鉴定试验结果显示菌株产ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶三种β-内酰胺酶。blaCTX-M基因引物扩增出阳性扩增条带。ampC结构基因引物扩增阳性扩增带，对扩增产物进行序列分析与已报道的摩氏摩根菌ampC结构基因的核苷酸序列高度同源，推导的氨基酸序列发生了1个氨基酸残基的变异。结论临床分离耐药摩氏摩根菌3—87呈多重耐药，其对β-内酰胺类抗生素耐药的机制是产生了ESBLs、AmpC酶及金属β-内酰胺酶。     

肺炎克雷伯菌呼吸道分离株头孢菌素β-内酰胺酶检测

目的了解我院肺炎克雷伯菌（KP）呼吸道分离株头孢菌素β-内酰胺酶（AmpC）的携带情况、基因型特点及耐药状况。方法收集我院2005～2007年呼吸道分离的54株KP,以头孢西丁（FOX）耐药筛选耐药株;用碱裂解法提取耐药株质粒;采用PCR扩增AmpC基因,并对其产物进行测序以确定其基因型;对FOX耐药株进行超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型确证试验;用K-B法进行药物敏感试验。结果54株KP中29株FOX耐药;22株AmpC阳性,测序后均为DHA-1型;24株ESBLs表型确证试验阳性;AmpC阳性KP对碳氢霉烯类100%敏感,对其他抗生素均有不同程度耐药。结论KP呼吸道分离株AmpC酶检出率高,流行基因型为DHA-1,产AmpC酶菌株的ESBLs携带率高,耐药情况严重。     

大肠埃希菌ESBLs、AmpC酶的检测及耐药特性

目的 分析大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素（AmpC）酶的情况及耐药特性,指导临床合理用药.方法 收集2011年1月至2012年6月我院临床分离的大肠埃希菌287株.用双纸片确诊法检测ESBLs,三维试验检测AmpC酶,KB法进行药敏试验.结果 287株大肠埃希菌中,产ESBLs 119株（41.5％）,产AmpC酶47株（16.4％）,同时检出产ESBLs和AmpC酶16株（5.6％）.单一产ESBLs或AmpC酶的菌株有较高的耐药性,同时检出ESBLs和AmpC酶的菌株对多种抗菌药耐药,所有菌株对亚胺培南均敏感.结论 大肠埃希菌ESBLs和AmpC酶的分离率及耐药率都较高,同时检出ESBLs和AmpC酶的菌株具多重耐药性;亚胺培南具有良好的抗菌活性.临床应加强ESBLs和AmpC酶的检测及耐药监测,采取有效措施防止耐药菌株产生.     

产AmpC酶和ESBLs酶阴沟肠杆菌的耐药性分析

近年来随着广谱抗生素的大量使用,阴沟肠杆菌的耐药率呈上升趋势,而产AmpCβ内酰胺酶（AmpC酶）和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs酶）是阴沟肠杆菌重要的耐药机制给。因此,笔者对唐山市工人医院2007年1月至2009年12月分离出阴沟肠杆菌的临床分布及耐药性进行分析,为临床合理应用抗生素提供依据。     

产ESBLs肺炎克雷伯菌中整合子和耐消毒剂基因的研究

目的:研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌整合子携带耐药基因状况及其对常用消毒剂的耐药性。方法:采用PCR方法检测77株产ESBLs和71株非产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ整合酶基因,分析Ⅰ类整合子与耐药性关系,并用耐消毒剂试验对耐消毒剂基因予以证实。结果:产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性率分别为66.2%(51/77株)和10.0%(2/20株),两者差异有统计学意义(P<0.05)。整合子阳性株对磺胺类、氨基糖苷类和环丙沙星的耐药率较高,与整合子阴性相比差异具有统计学意义(均P<0.01);耐消毒剂基因阳性株对常用消毒剂耐药能力高于阴性株。结论:Ⅰ类整合子在产ESBLs肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产酶株,并参与产ESBLs株多重耐药性的形成,携带耐消毒剂基因的菌株具有抗常用消毒剂的能力。     

广谱β-内酰胺酶TEM-141的克隆及特性研究

目的:对临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM型β-内酰胺酶进行克隆及原核表达,并了解其相关特性。方法:以琼脂二倍稀释法检测阴沟肠杆菌EC002的耐药情况,以双纸片法筛选及确证试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs),以等电聚焦电泳(IEF)法测定酶的等电点(pI),以聚合酶链反应(PCR)扩增酶编码基因并将TEM型β-内酰胺酶基因进行原核表达及表型鉴定。结果:阴沟肠杆菌株EC002对所试多数β-内酰胺类抗菌药物耐药,ESBLs表型鉴定及质粒接合试验结果均为阳性。IEF显示该菌产2种pI分别为8.7及5.4的β-内酰胺酶,测序表明其为CTX-M-22及一种新的TEM亚型,其克隆菌株所表达酶的表型为非ESBLs。该酶的编码基因已被GenBank命名为TEM-141。结论:临床分离阴沟肠杆菌株EC002所产TEM-141为一种新型质粒介导的广谱β-内酰胺酶。     

尿路感染大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶的检测及耐药性分析

目的:了解尿路感染患者中大肠埃希菌产AmpC酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的情况及耐药性分析。方法:采用纸片扩散确证法检测ESBLs,酶提取物三维试验方法检测AmpC酶。结果:130株大肠埃希菌中检出单产ESBLs45株,AmpC酶8株,同时产AmpC酶和ESBLs共5株,检出率分别为34.6%、6.2%和3.8%;产酶菌株对抗生素的耐药率大部分均高于不产酶菌株。结论:大肠埃希菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因是产生AmpC酶和ESBLs,对产酶菌株临床经验用药首选碳青霉烯类抗生素。