结缔组织生长因子与硬皮病关系的研究进展

硬皮病病因不清，由转化生长因子β诱导产生的结缔组织生长因子在其发病机制中起重要怍用。结缔组织生长因子可通过整合素介导的信号途径，使成纤维细胞获得趋化活性及有丝分裂活性，导致胶原合成增多，并与动脉内膜增殖及血栓形成相关。结缔组织生长因子表达的调控与其启动子上的Smad结合位点及转化生长因子β反应元件密切相关。     

辛伐他汀对硬皮病小鼠模型的影响

目的 探讨辛伐他汀对硬皮病小鼠模型胶原合成的影响。方法 采用博来霉素诱导的动物模型,分早期给药组和硬化后给药组。用5 mg·kg-1·d-1辛伐他汀处理,用药4周后收集标本,采用HE染色观察皮损组织病理改变并测量表真皮厚度,比色法检测皮损羟脯氨酸含量,并利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测小鼠硬皮病皮损前胶原（pro-COL1α1） mRNA的表达情况。结果 早期给药组中,模型组与阴性对照组比较,小鼠真皮内胶原增粗,表真皮厚度和羟脯氨酸含量及pro-COL1α1 mRNA 表达明显增加（P < 0.01）;而5 mg·kg-1·d-1辛伐他汀处理组较模型组小鼠真皮厚度变薄（P < 0.05）,羟脯氨酸含量降低（P < 0.01）,皮损pro-COL1α1 mRNA表达下降（P < 0.05）。硬化后给药组中,辛伐他汀处理组与空白对照组比较小鼠真皮厚度、羟脯氨酸含量均无明显改善,但pro-COL1α1 mRNA表达下降（P < 0.05）。结论 早期予以辛伐他汀处理可以减轻博来霉素诱导的小鼠皮肤硬化程度。硬化后予以辛伐他汀处理则皮肤硬化改善不明显。     

结缔组织生长因子与硬皮病关系的研究进展

硬皮病病因不清,由转化生长因子β诱导产生的结缔组织生长因子在其发病机制中起重要作用.结缔组织生长因子可通过整合素介导的信号途径,使成纤维细胞获得趋化活性及有丝分裂活性,导致胶原合成增多,并与动脉内膜增殖及血栓形成相关.结缔组织生长因子表达的调控与其启动子上的Smad结合位点及转化生长因子β反应元件密切相关.     

硬皮病患者皮损转化生长因子β1、β2 mRNA的表达

目的 探讨转化生长因子(TGF)β1和β2在硬皮病发病中的作用。方法 采用原位逆转录聚合酶链反应技术检测17例硬皮病患者皮损中TGF-β1、β2mRNA的原位表达情况,并以10例正常人皮肤组织作为对照。结果 TGF-β1mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度均高于对照组(P<0.05);TGF-β2mRNA在硬皮病组表达阳性率和表达程度与对照组相近(P>0.05);硬皮病皮损中TGF-β1mRNA表达阳性率和表达程度均高于TGF-β2mRNA(P<0.05).结论 TGF-β1mRNA在硬皮病皮损中高度表达,提示其在硬皮病病理纤维化的形成过程中起一定作用。     

血小板衍生生长因子在硬皮病成纤维细胞的表达

血小板衍生生长因子(platelet-de-rivedgrowthfactor,PDGF)是参与纤维化形成的主要因子[1],近年国外研究发现在硬皮病皮损处PDGF蛋白表达增高[2]。我们采用Northern杂交方法检测了培养硬皮病皮损成纤维细胞PDGF-B链mRNA的表达,现报道如下。一、材料和方法主要试剂:PDGF-B链cDNA探针,β-actincDNA探针,购自ATCC(Americantypeculturecollection),随机引物试剂盒购自美国Promega公司。研究对象:病例为北京医科大学第一医院确诊的局限性硬皮病3例、系统性硬皮病1例,诊断符合美国风湿病协会的标准。男1例,女3例,年龄21～56岁,病程0…     

血小板衍生生长因子受体在硬皮病皮损的表达

目的　探讨血小板衍生生长因子 (PDGF)在硬皮病发病中的作用。方法　选用特异性多克隆抗体以免疫组化方法检测了 8例硬皮病患者和 9例正常皮肤标本 PDGF受体的表达。结果　研究发现PDGF受体 α和 β亚单位在 8例硬皮病患者皮损表达均明显增高 ,而 9例正常皮肤中仅少数标本呈微弱表达 ,此差异经统计学检验显示有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论　 PDGF受体 α和 β亚单位表达的增高可能与硬皮病纤维化的形成相关。     

硬皮病皮损中转化生长因子β1和结缔组织生长因子的检测及其意义

硬皮病是以皮肤及各种内脏器官纤维化为特征的结缔组织疾病,其病因和发病机制尚未明确.为探讨硬皮病的病因及发病机制,人们进行了大量研究,结果表明本病与种族、地域分布、自身抗体、细胞因子以及基因遗传等密切相关.目前研究的热点是细胞因子与本病的相关性.     

结缔组织生长因子在瘢痕疙瘩中表达的研究

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在瘢痕疙瘩发病中的作用。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应技术检测30例瘢痕疙瘩患者皮损及对应邻近未受累皮肤中CTGFmRNA的表达,并以15例正常人皮肤组织作为对照。同时应用SP免疫组化技术对5例瘢痕疙瘩组织和5例正常人皮肤标本进行了检测。结果CTGFmRNA在瘢痕疙瘩及其边缘正常皮肤中的表达均明显高于正常人对照,差异有显著性(P<0.01)。瘢痕疙瘩CTGF的表达高低与病程无相关性(P>0.05)。免疫组化研究证实CTGF在瘢痕疙瘩中呈强表达,而在正常人皮肤中无表达。在瘢痕疙瘩组织边缘,CTGF表达呈现由强至弱的过渡现象。结论CTGF在瘢痕疙瘩中持续高度表达,提示其与瘢痕疙瘩的慢性纤维化有关。CTGF可能成为临床治疗瘢痕疙瘩的一个有力靶位。     

用博来霉素建立硬皮病动物模型及其应用

硬皮病是一种可累及多个器官和脏器的结缔组织病,其确切的病因和发病机制尚不完全清楚,目前亦无理想的治疗药物和方法。建立合适的硬皮病的动物模型,对于阐明发病机制和遴选治疗药物具有非常重要的意义。文中就应用博来霉素注射实验鼠,建立硬皮病动物模型及其应用情况作了归纳。     

MMP-9和TIMP-1在硬皮病模型鼠皮肤硬化过程中的作用

目的:探讨MMP-9和TIMP-1在硬皮病鼠模型皮损硬化形成中的作用.方法:利用博莱霉素诱导的硬皮病鼠模型,采用HE染色观察皮肤组织变化特点,比色法检测皮损羟脯氨酸含量,蛋白印迹法动态观察MMP-9和TIMP-1的表达情况.结果:硬化鼠模型皮损内MMP-9蛋白表达水平在第1～2周明显升高,第3～4周仍缓慢增加.从第1～4周,TIMP-1蛋白表达水平随着时间的延长逐渐升高,第4周达顶峰;且TIMP-1表达与皮损硬化程度(羟脯氨酸含量)相平行.结论:硬皮病鼠模型皮损早期以炎症浸润为主,晚期则以纤维化为主.MMP-9主要在早、中期参与皮损硬化过程中细胞外基质胶原重构,而TIMP-1主要在中、晚期皮肤硬化过程中发挥重要作用;二者或许可以作为硬皮病的防治靶位.     

Animal model of sclerotic skin. III: Histopathological comparison of bleomycin-induced scleroderma in various mice strains

Abstract We have recently established a mouse model for scleroderma by repeated local bleomycin treatment. In this study, we compared the susceptibility to bleomycin in the development of dermal sclerosis among Balb/c, C3H/He, C57BL/6J, A/J, DBA/2, B10.BR, B10.A, and B10.D2 mouse strains. After either bleomycin or PBS treatment, skin from the injection site was histologically examined. Dermal sclerosis was induced by bleomycin treatment for 4 weeks in all of the strains examined. In particular, C3H/He, DBA/2, B10.D2 and B10.A mice developed intense dermal sclerosis characterized by deposition of homogeneous material in the dermis and thickened collagen bundles. Dermal thickness showed a more than twofold increase following bleomycin treatment, as compared with PBS treatment, except in C57BL/6J and DBA/2 mice. In A/J, C3H/He, B10.A, and B10.D2 mice, dermal thickness showed a more than 2.5-fold increase. Mast cell numbers in sclerotic skin were significantly greater than in PBS-treated skin in Balb/c and B10.A mice after 4 weeks of treatment. We also examined whether bleomycin treatment for 3 weeks could induce dermal sclerosis in C3H mice. Histological examination revealed that epidermal thickness as well as dermal sclerosis was increased in C3H mice following bleomycin treatment for 3 weeks. Increased hydroxyproline content as well as mRNA expression of α1(I) collagen, as determined by Northern blot analysis, were observed following bleomycin treatment. Taken together, we conclude that C3H/He and B10.A mouse strains are bleomycin-’susceptible’, and these strains are considered to be a suitable experimental model of bleomycin-induced scleroderma. Received: 8 June 2000 / Revised: 1 August 2000 / Accepted: 4 September 2000     

Fas- and FasL-deficient mice are resistant to the induction of bleomycin-induced scleroderma

We have recently shown that apoptosis is induced in the lesional skin in a murine scleroderma model by local bleomycin injections, and the apoptotic pathway was mainly mediated by Fas/Fas ligand (FasL) signaling. To further investigate the involvement of apoptosis in scleroderma, we examined whether the induction of dermal sclerosis is suppressed in Fas-deficient (lpr) and FasL-deficient (gld) mice. Results of histological examination showed that the induction of dermal sclerosis by bleomycin treatment was significantly suppressed in both lpr and gld mice, in comparison with wild-type mice. The ratio of collagen contents in the bleomycin-treated skin as compared with PBS-treated skin was significantly lower in both lpr and gld mice than that in wild-type mice. The number of TUNEL-positive infiltrating cells was markedly increased following bleomycin exposure (60 ± 11.4/HPF) in comparison with PBS treatment (9.5 ± 6.0/HPF) in wild-type mice, which was significantly decreased in both lpr (22 ± 4.5/HPF, P < 0.05) and gld (26 ± 6.1/HPF, P < 0.05) mice. Our findings that lpr and gld mice were resistant to the induction of dermal sclerosis by bleomycin further suggest that Fas/FasL pathway is an important contributor involved in the pathophysiology of bleomycin-induced dermal sclerosis.     

Upregulation of histidine decarboxylase mRNA expression in scleroderma skin

Abstract The involvement of histamine in the pathogenesis of systemic sclerosis (SSc) has been suggested. Possible involvement of histamine and histidine decarboxylase (HDC), the synthesizing enzyme for histamine, in the formation of the skin abnormalities in SSc was studied. Skin histamine concentrations in SSc were significantly lower than in normal controls (P < 0.02). In situ hybridization with an HDC probe revealed that the expression of the HDC gene in SSc was greater than in normal controls. The number of cells and the mean grain number per cell expressing HDC mRNA were both significantly greater in SSc than in normal controls (both P < 0.01). These results show a reduction in histamine concentration and an elevated HDC gene expression in SSc skin, indicating an increase in both histamine release and HDC gene expression. The upregulation of histamine turnover appears to be involved in the formation of the skin abnormalities of SSc. Received: 4 July 2000 / Revised: 27 October 2000 / Accepted: 20 December 2000     

血管内皮生长因子165基因转染小鼠硬皮病皮损的实验研究

目的:探讨硬皮病基因治疗的新方法。方法:建立小鼠硬皮病动物模型后,应用电穿孔技术将血管内皮生长因子(VEGF)165真核表达质粒导入硬皮病小鼠硬化的皮下;再利用免疫组化、原位杂交法检测小鼠硬皮病皮损VEGF165的表达及观察组织病理改变。结果:①转基因后硬皮病鼠毛发生长明显增多,而未转基因硬皮病鼠毛发未见生长。②组织病理检查示转基因鼠毛囊明显增生,毛囊数每一低倍视野平均为(12.0±1.6)个,显著高于未转基因硬皮病鼠组(P<0.05)。真皮厚度增加,新生血管增加。③免疫组化、原位杂交法检测示转基因鼠表皮和真皮细胞及间质VEGF165表达明显增加。结论:电穿孔技术可将外源性基因转入小鼠硬化的皮肤,使其高表达。外源性VEGF165基因转染后,可明显促进小鼠硬化的皮肤毛发生长,已萎缩的真皮组织增生。     

低氧对系统性硬化病患者皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的 研究低氧对系统性硬化病(SSc)患者和正常人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成及胶原基因表达的影响。方法 分别以5例SSc患者和5例正常人皮肤成纤维细胞系作为实验对象。将成纤维细胞分别放入20%正常氧和2%低氧分压环境中培养,用分光光度仪测定细胞培养基上清液中羟脯氨酸含量,并折算成胶原蛋白含量。用Trizol提取细胞总RNA,用RT-PCR方法测定其中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果 培养至第6天,低氧分压条件下,SSc患者皮肤成纤维细胞培养基中胶原蛋白含量比正常氧分压条件下显著增加(t=3.97,P=0.0041);正常人皮肤成纤维细胞培养基中胶原蛋白含量此时也显著增加(t=2.63,P=0.0302)。培养至第3天,低氧分压条件下,SSc成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达量比正常氧分压条件下均有显著增加(Ⅰ型:t=5.81,P=0.0004;Ⅲ型:t=6.44,P=0.0002);正常人皮肤成纤维细胞此时的Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达量与SSc患者相似,低氧分压条件下比正常氧分压条件下均有显著增加(Ⅰ型:t=4.40,P=0.0023;Ⅲ型:t=2.24,P=0.0453)。结论 低氧状态下,SSc患者和正常人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成均有增加,Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达也均增加.低氧可能是皮肤硬化的一个相关因素。     

环丙沙星对博来霉素诱导小鼠真皮纤维化的抑制作用

目的 观察环丙沙星对博来霉素诱导实验性硬皮病小鼠模型真皮胶原合成及致纤维化基因表达的影响。 方法 用博来霉素连续4周皮下注射BALB/c小鼠背部建立实验性硬皮病小鼠模型,随后分为3组,分别给予1%环丙沙星乳膏（环丙沙星组）、2.5%积雪草苷乳膏（积雪草苷组）以及乳膏基质（模型组）连续外擦5周,另外,于小鼠背部皮下注射磷酸盐缓冲液后外擦乳膏基质设立空白对照（对照组）。连续治疗5周后取各组皮肤标本行HE染色、Masson染色、Ⅰ型胶原蛋白以及基质金属蛋白酶1（MMP1）和金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）免疫组化分析;同时用半定量逆转录PCR技术测定结缔组织生长因子（CTGF）、转化生长因子 1（TGFβ1）和Smad3基因的表达水平,碱水解-分光光度法测定皮肤羟脯氨酸含量。各组间比较采用单因素方差分析,模型组和各处理组间两两比较采用LSD检验。 结果 博来霉素模型组小鼠注射区真皮厚度［（432.76 ± 93.74） μm］较对照组［（301.69 ± 79.47） μm］明显增厚（P < 0.01）,Masson染色可见真皮胶原纤维束粗大致密,排列错乱,符合硬皮病真皮纤维化表现。环丙沙星和积雪草苷组小鼠皮肤胶原总含量、Ⅰ型胶原、TIMP1、MMP1染色强度比模型组明显减少（F值分别为1628.54、33.29、84.82、224.81,均P < 0.01）,但真皮厚度改变不明显（均P > 0.05）。与模型组比较,积雪草苷不同程度下调CTGF、TGFβ1和Smad3基因表达水平（均P < 0.05）,而环丙沙星仅抑制TGFβ1（P < 0.05）和Smad3（P < 0.05）的表达,对CTGF基因表达作用不明显（P > 0.05）。 结论 环丙沙星可抑制TGFβ1/Smad3通路,改变失衡的MMP1和TIMP1表达,显示抗真皮纤维化作用。     

系统性硬皮病105例临床分析

对１０５例系统性硬皮病患的一般情况、临床表现了详细分析。男女患者之比为１：４，发病年龄１５岁－７２岁，２１－５０岁患者占大多数，所有患者均有不同程度的皮肤改变，皮受累范围大小不一。９９％，患者嗓手皮肤受累，８１％患者有雷诺现象，６７例患者内脏器官受累。还对其实验室检查，伴发病、病因、诊断和治疗作了分析和讨论。