HPLC测定血浆和脑组织中文拉法辛的浓度

目的:建立测定血浆和脑组织中文拉法辛的方法.方法:血浆和脑组织样品均用液-液萃取法,正己烷:异戊醇(99:1)萃取.色谱柱Agilent Zorbax Eclipse×DB-C8(4.6 mm× 150 mm,5 μm),流动相以乙腈:磷酸钾缓冲液(25:75);流速1.4 ml/min;室温;进样量20 μl;检测波长229 nm.结果:在0.25～32.00 μg/ml范围内,血浆中文拉法辛浓度与峰面积的线性关系良好(r=0.9999);在0.05～6.40 μg/ml,脑组织中文拉法辛浓度与峰面积也呈良好的线性关系(r=0.9994).血浆回收率为89.4%,血浆中文拉法辛浓度在0.5,4.0,32.0 μg/ml的日内变异系数(SD)分别为3.7%～5.5%,1.6%～5.2%和4.2%～5.7%,日间SD分别为6.5%,5.0%和2.0%,最低检测浓度为0.15 μg/ml.脑匀浆回收率是93.3%,脑匀浆文拉法辛浓度在0.5,4.0,32.0 μg/ml的日内SD分别为2.2%～3.4%,1.3%～6.0%和0.6%～3.4%,日间SD分别为4.1%,3.4%和5.6%,最低检测线为0.25 μg/ml.结论:建立了文拉法辛在血浆和脑组织中的高效液相色谱分离测定方法.该方法准确、重复性好、选择性强,适用于大鼠体内药代动力学研究和脑组织中药物浓度的测定.     

亲水色谱-质谱联用（HILIC-MS）定量测定大鼠血浆中美金刚浓度及药代动力学研究

目的建立灵敏、可靠的亲水色谱-质谱联用（HILIC-MS）方法测定大鼠血浆中美金刚的浓度。方法血浆样品前处理采用蛋白沉淀,用HILIC-MS法测定。通过电喷雾电离源以选择离子监测（SIM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子分别为m/z 180（美金刚）和m/z 285（内标Ro 64-0802）。色谱分离采用Amide-80柱（100 mm×4.6 mm,5μm）,以乙腈-水-甲酸（70∶30∶0.1,v/v/v,0.35 ml/min）为流动相。结果美金刚的线性范围为2～500 ng/ml,相关系数r2为0.99882,定量下限为2 ng/ml,批内、批间精密度在3.9%和5.6%以内,准确度控制在84.9%～111.2%。结论本方法通过HILIC技术,使美金刚保留时间增加,基质抑制降低并使检测灵敏度提高。该方法成功应用于大鼠血浆测定研究中。     

自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法分析比格犬血浆中的葛根素含量

目的:建立自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法测定犬血浆中葛根素的含量,研究葛根素制剂在比格犬体内的药代动力学.方法:分析流动相为甲醇-乙腈-0.1%甲酸溶液(25:25:50,v/v/v),流速为0.2 ml/min,分析色谱柱为Grace Vydac C8柱.在线固相萃取流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(5:95,v/v),流速为2.0 ml/min,固相萃取柱的填料为Zobax C18(50 μm).配有电喷雾离子源(ESI)的线性离子阱 LTQ 质谱仪用于定量分析葛根素,采用选择离子反应监测(SRM)方式,用于定量分析的离子反应分别为m/z 415.2→m/z 195.2(葛根素).结果:线性范围0.39～400 ng/ml(r2＞ 0.999) ,最低定量限为0.39 ng/ml.日内、日间精密度(RSD%)分别小于7.6% 和6.4%,低、中、高3个浓度的QC样品准确度分别平均为 -0.51%,1.20%,-2.31%.单样品分析时间为6.5 min.结论:所建立的在线固相萃取HPLC / MS / MS 法样品处理简便、分析测试速度快、灵敏度高、线性范围宽、精密度和准确度满足药代动力学研究的需要,可用于非临床和临床药代动力学研究.     

HPLC法测定人血浆中克林霉素含量及其药动学研究

目的建立人血浆中克林霉素的HPLC检测方法。方法采用HPLC法检测人血浆中克林霉素含量,检测条件为:色谱柱:InertsilDOS-3 C185μm硅胶柱(250 mm×4.6 mm);流动相:乙腈/0.05 M KH2PO4=30/70(v/v),流速:1 ml/min;柱温:35℃,检测波长:204 nm,进样量为100μl。结果血浆中克林霉素浓度在0.20~16.0μg/ml范围内线性关系良好(r=0.9992~0.9998),最低检测浓度为0.20μg/ml,方法学回收率为82.42%~89.37%,日内及日间精密度RSD<15%。结论此方法专属、准确、灵敏度高,样品处理过程简便,适合克林霉素临床药代动力学研究。     

LC/MS/MS分析方法测定人血浆中匹多莫德的浓度

目的建立LC/MS/MS测定人血浆中匹多莫德的浓度。方法以舒巴坦为内标,采用甲醇-1%甲酸水溶液(10∶90,v/v)为流动相,以SymmetrySheildC18(3.5μm,20cm×2.1mm)色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以正离子多离子反应监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z245.2→m/z134.0(匹多莫德),m/z234.0→m/z124.2(舒巴坦)。结果匹多莫德线性范围0.010~20.0mg·L-1,定量下限为0.010mg·L-1(n=5)。日内、日间的RSD均<6.7%,平均回收率>90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于匹多莫德临床药动学研究。     

高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中西酞普兰含量

目的探讨应用高效液相色谱串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定血浆中西酞普兰药物浓度的方法。方法设立色谱柱为Agilent-ZORBAX-C8柱;流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（60：40）;流速：0.5 ml/min;柱温：20℃;质谱条件为电喷雾电离源（ESI）,以多反应监测（MRM）方式进行检测,用于定量分析的反应离子为m/z 325.1 262.1（西酞普兰）和m/z256.2 67.1（苯海拉明,内标）。结果西酞普兰在0.5～100 ng/ml范围内线性关系良好（r=0.9979）;西酞普兰的日内、日间精密度RSD均〈10%。结论该方法分析速度快,专属性强,灵敏度高,可作为西酞普兰的血浆药物浓度检测方法。     

高效液相色谱法测定人血清中普罗帕酮的浓度

 目的改进高效液相色谱法测定人血清中普罗帕酮的方法.方法色谱柱:shim-pack vp-ODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm).流动相为甲醇:醋酸盐缓冲液:丁胺=60:39.5:0.5(v/v),醋酸滴定pH至4.7,流速1.0 ml/min.检测波长250nm.结果最低检出限为0.125 μg/ml.日内变异系数为5.1%～8.1%,日间变异系数为7.8%～9.0%.结论该法简便可行,值得在临床检验中推广应用.     

HPLC法测定硝基安定的血药浓度

目的　测定血清中硝基安定浓度。方法　采用高效液相色谱法 ,甲基睾丸酮为内标 ,经YWG -C18色谱柱 (4.6mmi.d .× 2 0 0mm ,5 μm)分离 ,流动相为 [乙腈 -甲醇 (1∶2 ,v/v) ]-水 (5 8∶4 2 ,v/v) ,2 6 5nm波长处二极管阵列检测品检测 ;13例服药患者 ,设定时间抽血 ,测定血药浓度。结果　在 4 5 .4～ 4 5 4 μg·L-1浓度范围内硝基安定和内标的色谱峰高比与浓度呈线性关系(r =0 .9999) ;平均回收率为 92 .0 8% (RSD =2 .30 % ,n =9) ;最低检测限为 2 5 μg·L-1。 13例服药患者血药浓度监测结果平均值为 98.90± 36 .74 μg·L-1,其中 5例连用卡马西平 ,8例连用丙戊酸钠的癫痫患者 ,其抗癫痫药的有效治疗浓度均有下降趋势 (P <0 .0 5 )。结论　本法测定硝基安定的血药浓度方法简便、快速准确 ,可用于临床的常规监测。     

LC-MS-MS法测定人血浆中米格列奈浓度

目的建立液质联用色谱法（LC-MS-MS）测定人血浆中米格列奈（mitiglinide）浓度。方法空白血浆加米格列奈,用乙腈做为沉淀剂,取上清液用于LC-MS-MS分析。分析柱为日本资生堂CAPCELL PAK C18 MG5,μm150 mm×2.0 mm（ID）柱,流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵（0.1%氨水）分段洗脱（0～2 min 10∶90,2.1～8 min 90∶10,8.1～10 min 10∶90）,流速为0.3 ml/min;质谱条件：电喷雾离子化电离源ESI负离子检测,喷雾电压（SP）4000 kV,鞘气（SGP）流速30 Arb,辅助气（AGP）流速0 Arb,毛细管温度（TEM）314℃;米格列奈和内标瑞格列奈的碰撞能量均分别为21 EV、23 EV;选择反应监测（SRM）分别测定米格列奈和内标瑞格列奈负离子m/z 314→189和m/z451→379.2。结果米格列奈在2.5～2000μg/L检测浓度范围内呈良好线性关系（R〉0.99）,最低定量限（LLOQ）为2.5μg/L,绝对回收率在70%以上,高中低3种浓度的日内和日间RSD≤15%。结论该方法操作简便、灵敏、准确,适用于临床米格列奈的血药浓度监测及其药动学研究。     

高效液相-荧光色谱方法测定血清中甲磺酸帕珠沙星浓度

目的 建立甲磺酸帕珠沙星的血药浓度的高效液相色谱方法.方法 以特拉唑嗪为内标,以ZORBAX C18(4.6mm×150mm,4.6μm)色谱柱为分析柱;采用乙腈-0.01mol·L-1柠檬酸水溶液-三乙胺-冰醋酸(13.9:85.7:0.3:0.1,v/v/v/v,pH值5.5)为流动相;流速为1ml/min;激发波长为335nm;发射波长为450nm.结果 甲磺酸帕珠沙星线性范围0.037 2～19.5333 μg·ml-1,定量下限为0.037 2 μg·ml-1.日内、日间精密度RSD＜8%,平均回收率＞50%.结论 本方法简便、准确、灵敏,特异性强,重复性好,适用于甲磺酸帕珠沙星临床药动学研究.     

LC/MS/MS法测定家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物含量及其药代动力学研究

目的建立准确、灵敏、可靠的LC/MS/MS方法,定量检测家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物浓度,并用于家兔给予咪哒酚衍生物滴眼后血浆及房水中药代动力学研究。方法血浆及房水样品经蛋白沉淀前处理,内标选用Amms,液相色谱柱为TOSOHTSKgel Amide,流动相为含0.1%甲酸的甲醇∶水（80∶20,体积比）,仪器选用Finni-gan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择反应离子监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 381→308（咪哒酚衍生物）和m/z 285→138（Amms）。结果在本实验条件下,咪哒酚衍生物与内标Amms分离良好,保留时间分别为1.48和1.55 min,血浆和房水中药物浓度分别在5~2000和10~10 000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数（r2）分别为0.9971和0.9999,定量下限分别为5和10 ng/ml,回收率均大于80%,日内、日间精密度均小于15%（n=5）。结论该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于咪哒酚衍生物在家兔体内的药物代谢动力学研究。     

LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮的方法,并应用于其缓释制剂药代动力学研究。方法：血浆样品经液-液萃取,内标选用曲马多,色谱柱采用Zorbax SB-C18柱（2．1mm×100mm,3．5μm）;流动相为甲醇-水-甲酸（40：60：0．1）,流速0．2ml／min;用美国Finnigan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪器,配有电喷雾离子化电离源（ESI）,正离子检测模式,扫描方式为选择反应监测（SRM）,用于定量分析的离子反应分别为m／z 386．2→121．97（丁螺环酮）和m／z 264．3→58．0（内标,曲马多）。结果：测定丁螺环酮的线性范围为0．025→7．5μg/L,相关系数为0．99893,提取回收率为72．2％,方法回收率为99．1％,日内日间精密度均小于10．7％,血浆中丁螺环酮的最低定量下限为0．025μg／L。结论：该方法简便、快速、准确,灵敏度高,专一性好,成功应用于丁螺环酮缓释制刺的药代动力学研究。     

HPLC-MS/MS法快速测定人血浆中氟哌噻吨浓度及生物等效性研究

目的建立测定人血浆中氟哌噻吨浓度的高效液相串联质谱法（HPLC-MS/MS）,用于氟哌噻吨美利曲辛片的生物等效性研究。方法以Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18（4.6mm×150mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈（含1%甲酸）：0.02mol/L甲酸铵水溶液（80：20,V：V）,流速：0.8ml/min;柱温：40℃,以醋酸乙酯：二氯甲烷（4：1,V：V）为提取剂。样品经电喷雾离子源正离子化后,通过三重四级杆串联质谱仪,采用选择性反应监测（SRM）对氟哌噻吨（m/z435.2→305.1）和氯普噻吨（m/z316.2→231.1）进行测定。结果氟哌噻吨的高（1μg/L）、中（0.5μg/L）、低（0.05μg/L）3个浓度的平均回收率分别为101.01%、96.19%和106.63%,日内（n=5）、日间（n=3）RSD均小于15%;分析方法的最低定量限为0.025μg/L。线性范围为：0.025～2.5μg/L,回归方程为：F=0.6625ρ＋0.0049,r=0.997（n=7）,权重为1/ρ2。结论该方法灵敏、准确、简单、快速,可用于临床血浓监测和药动学研究。     

HPLC-MS/MS法定量研究比格犬口服氨氯地平后的血浆药代动力学

目的建立比格犬血浆中氨氯地平的HPLC-MS/MS定量测定方法。方法 HPLC分离采用Zorbax SB-C18柱,流动相为乙腈-水（42∶58,0.1%甲酸,4 mmol·L-1醋酸铵）,流速为0.2 ml·min-1;质谱检测采用电喷雾（ESI）离子源,正离子多反应监测（MRM）方式检测。血浆样品经甲醇-乙腈混合液沉淀蛋白、高速离心后进样分析,检测反应为m/z409.4-238.1（氨氯地平）,m/z256.2-167.0（苯海拉明,内标）。结果氨氯地平在比格犬血浆中定量范围为0.5～500 ng·ml-1,日内和日间精密度≤9.04%、回收率高且血浆样品稳定性好。结论本方法特异、快速、准确、可靠,可满足氨氯地平比格犬血浆动力学研究需要。     

液质联用法测定龙胆水煎剂中三种环烯醚萜的含量

目的利用液质联用（LC／MS／MS）方法测定龙胆水煎剂中环烯醚萜类化合物龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和马钱苷的含量。方法色谱柱为J’Sphere ODS-H80（150mm×2．0mm，4μm）；流动相为甲醇-10mmol·L^-1醋酸铵溶液（30：70）；流速为200μl／min。样品经电喷雾离子源（ESI）正离子化后，通过三级四极杆串联质谱仪，采用多反应离子监测方式测定样品中龙胆苦苷（m／z 357．2-195．3）、獐牙菜苦苷（m／z 392．1→195．2）和马钱苷（m／z 408．4→229．1）浓度。结果在该分析条件下，3种化合物能够同时进行检测。龙胆苦苷浓度在200～5000ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=1．26×10^3X＋2．27×10^3，r=0．9983；獐牙菜苦苷浓度在20-500ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=360X＋144，r=0．9991；马钱苷浓度在20-500ng·ml^-1范围内线性关系良好，回归方程为Y=782X＋42．6，r=0．9994。对照品峰面积精密度RSD分别为龙胆苦苷2．52％，獐牙菜苦苷2．77％和马钱苷2．89％；平均加样回收率分别为龙胆苦苷98．2％，獐牙菜苦苷99．1％和马钱苷99．7％。结论该方法灵敏、准确、特异性强。     

HPLC-MS/MS法定量研究比格犬口服替米沙坦后的血浆药代动力学

目的建立比格犬血浆中替米沙坦的HPLC-MS/MS定量测定方法。方法液相色谱分离采用Zorbax SB-C18色谱柱,流动相为乙腈-4 mmol·L-1醋酸铵水（40∶60,0.1%甲酸）,流速为0.2 ml·min-1;质谱检测采用电喷雾（ESI）离子源,正离子多反应监测（MRM）方式检测。血浆样品经乙腈沉淀蛋白、高速离心后进样分析,检测反应为m/z 515.2-276.3（替米沙坦）,m/z 256.2-167.0（苯海拉明,内标）。结果替米沙坦在比格犬血浆中定量范围为0.5~2000 ng·ml-1,日内和日间精密度≤9.13%、回收率满足血浆测定要求,且血浆样品稳定性好。结论本方法特异、快速、准确、可靠,可满足替米沙坦比格犬血浆动力学研究需要。     

在线固相萃取-液质联用法测定小鼠血浆中寡肽RX31肽的药代动力学研究

目的建立测定昆明小鼠血浆中RX31肽的在线固相萃取-液质联用法（on-line SPE HPLC-MS/MS）。方法血浆样品经乙腈沉淀蛋白后,取上清经on-line SPE,以甲醇和0.1%甲酸为流动相,资生堂CAPCELL PAK MGⅢ柱分析;采用电喷雾电离源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测,采用外标法对RX31肽样品进行定量分析。结果与结论定量分析的离子反应为m/z 640.3→m/z 303.3。测定昆明小鼠血浆中RX31肽的线性范围为10～500 ng/ml,最低定量限（LLOQ）为10.0 ng/ml,方法学符合药代动力学研究要求。将该法应用于昆明小鼠单次皮下注射RX31肽（10、30和90 mg/kg）后的药代动力学研究中,利用单一的固相萃取柱完成了全部血浆样品的定量分析。此方法为RX31肽的非临床药代动力学研究提供了可靠的数据,对其临床研究具有重要的参考价值。     

丹酚酸B药动学动物实验研究

 目的 采用液相色谱-串联质谱法进行丹酚酸B药动学动物实验研究。方法 比格犬静脉滴注丹酚酸B后不同时间经前腿静脉采血。血浆样品经液-液萃取后,以乙腈-水（含0.5%甲酸）：70-30（V/V）作为流动相,采用Symmetry C18（2.0 mm×50 mm,3 μm）柱分离,通过ESI源电离在负离子方式下进行检测,以选择反应监测（SRM）方式。用于定量分析的离子分别为 m/z 717.2→m/z 519.2（丹酚酸B）和 m/z 364.0→m/z 189.0(吲达帕胺,内标)。结果 在该测定条件下丹酚酸B和内标物的保留时间分别为1.03、1.24 min。丹酚酸B的线性范围为10.24～1.200×10⁴ ng/ml;定量下限为10.24 ng/ml,批内、批间精密度（RSD）均小于15%,准确度（RE）在-2.8%～1.9%之间。结论 所建立的LC-MS/MS法专属性强、灵敏度高,已成功用于丹酚酸B血药浓度测定和药动学研究。血中丹酚酸B半衰期较短,体内代谢呈一级线性动力学,符合三室模型。     

LC-MS/MS法测定血浆中呋塞米浓度的研究

目的建立UFLC-MS/MS测定血浆中呋塞米浓度的方法。方法通过电喷雾离子化,采用多反应检测方式进行负离子检测,用于定量分析的检测离子为m/z 328.8→284.6。采用Shim-pack XR-ODS(3.0 mm×75 mm,2.0μm)柱分离,以乙腈-水-甲酸(60∶40∶0.1)为流动相,流速为0.40 ml.min-1。结果在3 min内完成呋塞米定量分析。线性范围为2.5～1000 ng.ml-1,最低定量限为2.5 ng.ml-1;日内、日间测定的相对标准偏差分别小于2.13%、2.68%。结论本方法重复性好,灵敏度高、分析速度快、操作简单,可作为血浆样品中呋塞米浓度的测定方法,适用于人体呋塞米血药浓度监测。     

HPLC-MS/MS测定比格犬血浆中非诺贝酸浓度及其药代动力学研究

目的建立快速有效的HPLC-MS/MS方法测定比格犬血浆中非诺贝特的代谢物非诺贝酸,并探讨其在比格犬体内的药代动力学。方法 4只健康雄性比格犬随机分为两组,在禁食状态下口服给药〔非诺贝特片（纳米）和对照药Tri-cor〕,HPLC-MS/MS测定非诺贝酸浓度。流动相为甲醇-水（0.1%甲酸）,在200μl.min-1流速下梯度洗脱,地西泮为内标,色谱柱为Thermo Syncronic-C8,柱温：20℃。质谱测定利用多离子监测扫描模式,电离方式为ESI正离子模式,检测离子反应非诺贝酸为m/z 319.10→232.86,地西泮为m/z 285.04→193.04。血药浓度数据经Origin Pro 7.5与WinNonlin Phoenix软件处理,计算主要药动学参数。结果本方法中非诺贝酸在5～1000 ng.ml-1范围内线性良好（r2〉0.98）,定量下限为5 ng.ml-1。方法的精密度准确度,专属性,绝对回收率,稳定性和基质效应均符合要求。非诺贝特纳米片和Tricor在比格犬体内的主要药动学参数：tmax为（1.50±1.16）和（1.94±2.48）h、t1/2为（8.58±3.41）和（8.02±2.08）h、Cmax为（5857.20±3563.44）和（6697.56±3912.92）ng.ml-1、AUC为（25 328.13±16 009.09）和（26 379.89±17 392.47）ng.h.ml-1。结论建立了准确、灵敏的HPLC-MS/MS检测方法用于比格犬血浆中非诺贝特代谢产物非诺贝酸的含量测定;研究了非诺贝酸在比格犬体内的药代动力学,结果显示非诺贝酸在比格犬体内的代谢动力学过程呈单室模型,该结果为不同来源非诺贝特片的生物等效性研究奠定了基础,为非诺贝特临床安全合理用药提供参考依据。