lncRNA MT1DP在结直肠癌组织中的表达及对癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探究lncRNA MTIDP在结直肠癌组织中的表达和对结直肠癌HCT116细胞增殖、迁移、侵袭的影响.方法:qPCR检测结直肠癌组织、癌旁组织、人结肠上皮细胞HCoEpiC和结直肠癌细胞系HT-29、SW480、HCT116中lncRNA MTIDP的表达;将pcDNA3.1和pcDNA3.1-MTIDP转染至结...     

MAGE-A3、MAGE-A4和MAGE-A10蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A10基因在结直肠原发腺癌组织中的蛋白表达及临床意义.方法 采用组织芯片技术、免疫组化方法分析多种MAGE基因在97例结直肠原发腺癌配对癌组织、癌旁组织中的蛋白表达.统计学方法采用x2检验.结果 MAGE-A3,MAGE-A4,MAGE-A10蛋白在97例结直肠原发腺癌组织中的表达率分别为57％(56/97),63％(61/97),28％(27/97).MAGE-A3在低分化腺癌中的表达率明显高于中分化和高分化腺癌中的表达率(x2=9.133,P=0.010).MAGE-A10在低分化腺癌中的表达率明显高于中分化和高分化腺癌(x2=15.280,P=0.000);在TNMⅢ+Ⅳ期中的表达率明显高于Ⅰ+Ⅱ期(x2=4.227,P=0.040);在有淋巴结转移原发灶中的表达率明显高于无淋巴结转移原发灶(x2 =5.557,P=0.018);且随淋巴结转移数目的增多在原发灶表达率显著增高(x2=7.296,P=0.026).结论 MAGE基因的蛋白表达与结直肠癌的病理组织学分化、TNM分期、癌淋巴结转移有关.MAGE-A3和MAGE-A10可能成为结直肠癌的预后标志物及结直肠癌免疫治疗的候选靶点.     

CXCR3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨CXCR3在结直肠癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用SP免疫组织化学方法检测52例结直肠癌组织CXCR3的表达,Western印迹和体外迁移实验检测趋化因子受体CXCR3在大肠癌细胞株SW480、SW620、HT29细胞的表达及迁移能力.结果 CXCR3的阳性表达率为88%(46/52),CXCR3的高表达与结直肠癌患者的年龄、性别、结直肠癌组织类型、分化程度无关,而与临床转移(肝脏、淋巴结转移)有关(x2=12.1、21.5,P＜0.01).SW480、SW620及HT29的CXCR3表达均呈阳性,其中大肠癌细胞HT29和SW620 CXCR3高表达,大肠癌细胞SW480 CXCR3低表达.在体外迁移实验中,大肠癌细胞HT29和SW620发生体外迁移细胞明显增多(75±6比147±8、63±5比9l±6,P＜0.01),而大肠癌细胞SW480体外迁移无明显变化(47±4比45±3,P>0.05).结论 CXCR3上调表达与结直肠癌转移有关.     

miR-562靶向调控FGFR1对结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的探究微小RNA 562(miR-562)调控成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对结直肠癌细胞迁移及侵袭的影响。方法选取2019年10月至2020年10月十堰市人民医院(湖北医药学院附属人民医院)25例行手术切除术的结直肠癌患者, 获取其结直肠癌组织及肿瘤边缘>5 cm处正常癌旁组织样本。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测癌旁组织、结肠癌组织、人正常结直肠细胞(FHC细胞)和人结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT29及HCT116细胞)中miR-562的表达。将SW480细胞分为对照组、miR-NC组、miR-562 mimics组、miR-562 mimics+pcDNA3.1组、miR-562 mimics+pcDNA3.1-FGFR1组。CCK-8法检测SW480细胞增殖;Transwell法检测SW480细胞侵袭迁移;双荧光素酶报告基因检测miR-562和FGFR1靶向关系;Western blot检测SW480细胞中FGFR1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP2)的表达情况。结果与癌旁组织相比, 结肠癌组织中miR-5...     

结直肠癌细胞株趋化因子受体的表达及其趋化实验

目的 观察结直肠癌细胞株趋化因子受体CXCR4的表达及其趋化实验,探讨CXCR4在结直肠癌转移中的作用.方法 培养结直肠癌细胞株HT-29、SW480,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组织化学染色、Western blot检测结直肠癌细胞株的趋化因子受体CXCR4表达.采用SDF-1诱导的趋化实验模型检测两种结直肠癌细胞株的趋化活动.结果 免疫组织化学检测每100个HT-29或SW480细胞表达CXCR4蛋白的阳性率分别为48.7%和52.6%,RT-PCR和Western blot检测显示CXCR4呈阳性表达;趋化实验表明区化因子SDF-1处理组的细胞移动计数(HT-29:27.6±3.9;SW480:25.3±4.4)显著高于空白对照组(HT-29:9.6±2.5;SW480:9.8±2.1)和抗体处理组(HT-29:9.1±3.1;SW480:9.3±2.0).结论 结直肠癌细胞株可表达CXCR4,趋化因子SDF-1可以趋化结直肠癌细胞.     

miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达及其对结肠癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达状况,以及miR-338-5p过表达对结肠癌细胞系HCT116和SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法使用实时定量PCR方法检测miR-338-5p在40例临床诊断为结直肠癌患者配对癌组织及癌旁组织中的表达情况。随后使用miR-338-5p-mimics转染结肠癌细胞系HCT116和SW620,确认过表达成功后,分别使用CCK-8法、FITC-AnnexinV．PI法及Propidiumiodide法检测肿瘤细胞的增殖、凋亡和细胞周期的改变。结果①miR-338-5p在结直肠癌组织中的表达明显低于其在相应的癌旁组织中的表达（P〈0．01）。②与转染阴性对照比较,转染miR-338．5p．mimics后,HCT116和SW620细胞增殖能力明显减弱（P〈0．01）,凋亡率明显增加[HCT116细胞：（11．43±0．67）％比（7．98±0．36）％,P〈0．01;SW620细胞：（10．5±0．2）％比（7．93±0．5）％,P〈0．01],诱导HCT116和SW620细胞G1期阻滞[HCT116细胞：（80．41±1.34）％比（64．87±1．83）％,P〈0．01;SW620细胞：（68．76±0．41）％比（54．89±0．78）％,P〈0．01]。结论miR-338-5p可能作为抑癌基因在结直肠癌中发挥作用,并对细胞增殖、凋亡和周期有显著影响。     

c-Met在结直肠癌细胞株中的表达及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的探讨c-Met在结直肠癌细胞株中的表达以及其配体肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌SW480细胞系增殖、侵袭能力的影响。方法应用RT-PCR及Western blot技术检测HGF受体c-Met在不同结直肠癌细胞中的表达,筛选出c-Met高表达细胞系;用不同浓度(0、20、40、70 ng/m L)的HGF作用SW480细胞48 h,分别用MTT法、Transwell法检测其对SW480细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 1 RT-PCR及Western blot检测结果均表明,c-Met在不同结直肠癌细胞系中均有表达,其中体外培养的结肠癌细胞系SW480中存在c-Met和蛋白高表达。2 MTT实验结果显示,HGF可增强SW480细胞的增殖能力,且在一定范围内随浓度增高作用增强,呈剂量依赖性关系。3 Transwell实验结果显示,HGF处理后的SW480细胞侵袭能力增强。结论 c-Met在结肠癌SW480细胞中存在高表达,HGF可促进结直肠癌细胞的增殖及增加其体外侵袭能力。     

人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3表达与Wnt信号通路的关系

目的:探讨人结肠癌细胞中高尔基磷蛋白3(GOLPH3)基因表达与Wnt信号通路活性的关系。方法:用RT-PCR方法检测4种人结肠癌细胞(HCT116、HT29、SW480、SW620)中GOLPH3mRNA的表达,选取GOLPH3高表达的细胞株行GOLPH3基因干扰,用RT-PCR检测干扰效果,然后用TOPFlash报告基因、平板克隆实验、Western blot法分别检测干扰后细胞Wnt信号通路活性、增殖活性以及GOLPH3与β-catenin表达的变化。结果:4种结肠癌细胞中SW620细胞的GOLPH3mRNA相对表达量最高;SW620细胞转染GOLPH3siRNA后GOLPH3 mRNA的相对表达量明显降低(P0.001);与未处理的SW620细胞比较,转染GOLPH3siRNA的SW620细胞Wnt通路转录活性明显降低(0.342 vs.1.000,P0.001)、癌细胞集落形成数明显减少(82.333 vs.207.333,P0.001)、GOLPH3与β-catenin蛋白表达均明显降低(0.260 vs.1.00;0.182 vs.1.00,均P0.001)。结论:人结肠癌细胞中GOLPH3的高表达可增加Wnt/β-catenin细胞信号通路活性,从而促进细胞增殖。结肠肿瘤;高尔基磷蛋白3;Wnt信号通路     

肿瘤-睾丸抗原基因在肾透明细胞癌中的表达

目的 研究6种肿瘤.睾丸抗原(CT)基因在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测42例肾透明细胞癌患者癌组织(新鲜标本,T1期16例,12期12例,T3期10例,T4期4例;G1 10例,G2 18例,G3 14例)及其中14例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A12及NY-ESO-1基因mRNA的表达.结果 42例肾透明细胞癌组织中100%(42/42)至少表达6种CT基因中一种,14例癌旁组织表达均阴性.肾透明细胞癌组织中MAGE-A12表达最高,其次为MAGE-A3,MAGE-A1,cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为71%(30/42),69%(29/42),67%(28/42),64%(27/42),60%(25/42)及48%(20/42).肿瘤不同分期、不同分级之间6种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearson x2检验法,P＞0.05).结论 CT基因在肾透明细胞癌中有较高表达,可望成为肾透明细胞癌特异性免疫治疗的靶基因.     

微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究

目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.     

膀胱移行细胞癌组织中黑色素瘤抗原基因及蛋白的表达

目的探讨膀胱移行细胞癌(TCC)中黑色素瘤抗原(MAGE)基因mRNA的表达及其临床意义。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测3个膀胱TCC细胞株和20例膀胱TCC患者癌组织(新鲜标本,T1期7例,T2期5例,T3期6例,T4期2例;G11例,G211例,G38例)MAGE A1,A2,A3,A4mRNA表达,免疫组化法检测105例膀胱TCC患者癌组织(石蜡标本,T1期35例,T2期12例,T3期26例,T4期13例,另19例无法确定分期;G113例,G244例,G348例)MAGE A4蛋白的表达。结果3个膀胱TCC细胞株均有MAGE基因mRNA的表达;20例膀胱TCC新鲜标本组织MAGEmRNA阳性:A112例(60%),A216例(80%),A311例(55%),A418例(90%),A1～A4均阳性8例(40%)。105例膀胱TCC石蜡标本组织中MAGE A4蛋白阳性53例(50%),高分级膀胱TCC组织中强表达(++或+++)率为27%(13/48),显著高于低分级的4%(2/57)(F=12.00,P<0.01),高分期膀胱TCC组织中强表达率为27%(14/51),显著高于低分期的0%(0/35)(F=11.48,P<0.01)。结论MAGE基因在膀胱TCC中有较高表达,分级或分期高的膀胱TCC中MACE A4蛋白明显强表达。     

肿瘤-睾丸抗原在胃癌组织中的表达

目的 检测8种肿瘤-睾丸抗原(CTA)基因mRNA在胃癌组织及相应癌旁组织中的表达.方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测55例胃癌患者的癌组织和相应癌旁组织中8种CTA基因mRNA的表达,30例非肿瘤患者胃黏膜组织作为对照.结果 55例胃癌组织中,表达MAGE-A1、MAGE-A3、CT9、CT10、NY-ESO-1、SSX-1、SSX-2、SXX-4基因的阳性率分别是60.0%(33/55)、30.9%(17/55)、34.5%(19/55)、12.7%(7/55)、10.9%(6/55)、23.6%(13/55)、3.6%(2/55)和27.3%(15/55),而相应的癌旁组织均为阴性.非肿瘤患者胃黏膜组织未见此8种CTA基因的表达.8种CTA基因的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、幽门螺旋杆菌感染及TNM分期无明显相关(P>0.05).结论 多种CTA基因在胃癌中呈特异性高表达,为胃癌的免疫治疗提供了新的潜在的靶位.     

PLAC1/CP1蛋白在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 检测PLAC1/CP1(cancer-placenta 1)基因在结直肠癌肿瘤组织中的表达,探讨其与临床病理因素的关系.方法 免疫组化方法检测PLAC1/CP1基因在125例结直肠癌配对癌组织、癌旁组织芯片中的蛋白表达.统计学采用χ2检验.结果 PLAC1/CP1蛋白在125例结直肠癌组织中的表达率为57.6%(72/125).在原发腺癌中的表达率为56.7%(55/97),在低分化腺癌、中分化腺癌和高分化腺癌的表达分别为78.9%(15/19)、55.7%(34/61)、35.3%(6/17),差异有统计学意义(χ2=7.026,P=0.03);在TNMⅢ+Ⅳ期中的表达率为71.2%(37/52),明显高于Ⅰ+Ⅱ期的表达(40%,18/45)(χ2=9.537,P=0.002);在有淋巴结转移的原发灶中的表达率为69.6%(32/46)明显高于无淋巴结转移者的45.1%(23/51)(χ2=5.897,P=0.015);随淋巴结转移数目的增多,PLAC1/CP1在原发灶的表达显著增高(χ2=13.353,P=0.001).结论 PLAC1/CP1基因的蛋白表达与结直肠癌的组织学分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关.     

以黑色素瘤抗原基因mRNA为标记检测胃癌患者外周血肿瘤细胞

目的以黑色素瘤抗原基因（MAGE）-1和MAGE-3mRNA作为特异性肿瘤标记物,建立用RT-PCR检测胃癌患者外周血中肿瘤细胞的有效方法。方法采集40例胃癌患者及20名健康志愿者的外周血,用RT—PCR方法检测其外周血单核细胞（PBMC）中MAGE-1和MAGE-3mRNA表达。同时用RT—PCR方法检测胃癌患者肿瘤组织中上述MAGE-1和MAGE-3的表达。结果40例胃癌患者中,分别有19例（47．5％）和10例（25．0％）PBMC中可检测到MAGE-1和MAGE-3 mRNA表达：在25例（62．5％）的胃癌患者PBMC中,至少可以检测到一种MAGEmRNA的表达。胃癌组织中MAGE-1和MAGE-3的表达率分别为62．5％和30％;胃癌组织中不表达MAGE-1和（或）MAGE-3基因的患者．其外周血中也检测不到相应的MAGE中mRNA;20例健康志愿者的PBMC中均未测出MAGE基因mRNA。胃癌患者PBMC中MAGE-1和（或）MAGE-3 mRNA的检出率与淋巴结转移和TNM分期密切相关（P〈0．05）。此外,外周血PBMC中CEA mRNA的检出率为32．5％．MAGE-1、MAGE-3和CEA互者在胃癌中联合检测的检出率为72．5％。结论MAGE—1和MAGE-3 mRNA可作为相对特异性标记物用于检测胃癌患者外周血肿瘤细胞．联合CEA可以提高其敏感性;MAGE mRNA的检测结果有助于对胃癌患者的预后进行判断。     

黑色素瘤抗原A8和A12在膀胱移行细胞癌中超表达的临床研究

目的:研究肿瘤特异性黑色素瘤抗原(Melanoma antigen,MAGE)家族成员MAGE-A8、MAGE-A12基因在膀胱移行细胞癌(Transitional cell carcinoma,TCC)组织中的表达情况及其与相应病例临床特点的关系,评价这些基因或基因产物作为膀胱TCC组织免疫学检测和免疫治疗、基因治疗分子标志物的可行性。方法:选择膀胱TCC组织标本42例,相应的癌旁组织8例,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对MAGE-A8、MAGE-A12基因的表达情况进行检测。结果:42例膀胱TCC组织中,MAGE-A8mRNA阳性表达26例(62%),MAGE-A12mRNA阳性表达18例(43%),MAGE-A8及MAGE-A12同时表达8例(19%)。8例癌旁组织均不表达MAGE-A8和MAGE-A12。结论:MAGE-A8、MAGE-A12基因在膀胱TCC中超表达,有可能作为膀胱TCC组织免疫学检测的分子标志物,并且具有作为免疫治疗、基因治疗特异性靶位的潜在价值。