miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为

目的探讨miR-34a通过Notch信号通路影响乳腺癌细胞的生物学行为。方法乳腺癌细胞MCF-7分为miR-34a及Control组,分别利用脂质体转染miR-34a mimics及miR-34a NC,RT-PCR法检测细胞中miR-34a表达,MTT、Hoechst染色及transwell法分别检测细胞活力、凋亡及侵袭情况;western blot检测细胞中Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达情况。结果与Control组比较,miR-34 mimics组中miR-34a表达量上调,细胞皱缩,变圆变亮,细胞活力降低(P0.01),细胞凋亡率显著提高(P0.01),细胞侵袭数目减少(P0.01),Notch1,Notch2,Dll1及Jagged-1蛋白表达量都显著降低(P0.01)。结论 miR-34a mimics通过抑制Notch信号通路进而诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡并抑制其侵袭。     

miR-34a靶向调控SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖

探讨miR-34a通过靶向调控SOX7表达对垂体腺瘤细胞增殖的影响。结果显示,miR-34a mimics转染组和siRNA-SOX7组细胞活力、S期、G2期分别低于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组,细胞凋亡率和G1期分别高于NC-miR-34a转染组和NC-SOX7转染组。miR-34a mimics转染组SOX7 mRNA、SOX7蛋白的相对表达量低于NC-miR-34a转染组。结果表明,miR-34a可以通过靶向抑制SOX7表达抑制垂体腺瘤细胞增殖。     

miR-34a通过靶向抑制Notch信号通路减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤

目的 探讨miR-34a介导Notch信号通路对糖尿病肾病（DN）足细胞损伤及凋亡的影响。方法 体外实验：通过RT-PCR法检测高糖（30 mmol/L）环境下足细胞中miR-34a表达水平,构建miR-34a过表达足细胞系（miR-34a组）及其阴性对照（miR-NC组）,使用荧光素酶实验验证miR-34a与Notch 1的靶向关系,构建Notch 1过表达足细胞系（Notch 1组）和miR-34a、Notch 1均表达升高细胞系（miR-34+Notch 1组）;采用CCK-8法检测足细胞存活情况,流式细胞法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞凋亡关蛋白水平。体内实验：通过高脂饮食和链脲佐菌素建立DN小鼠模型并分为模型组、miR-34a组（n=15/组）,另选15只不做干预小鼠为对照组,miR-34a组和模型组小鼠分别尾静脉注射agomir-34a[80 mg/(kg·d)]、agomir-NC[80 mg/(kg·d)],连续注射3 d,4周后,HE染色、TUNEL法分别观察肾组织病理、凋亡情况,Western blot检测肾组织凋亡相关蛋白和Notch 1蛋白...     

miR-34a通过靶向抗凋亡基因Survivin抑制皮肤鳞状细胞癌增殖的研究

[摘要]　目的　研究miR-34a在皮肤鳞状细胞癌(SCC)中的表达及对肿瘤细胞增殖、抗凋亡的调控作用及机制。　方法　采用实时定量PCR检测46例SCC病人肿瘤组织及15例正常皮肤组织中miR-34a及Survivin的表达;将miR-34a mimic转染进皮肤鳞状细胞癌A431细胞系,探讨miR-34a对SCC细胞增殖、Survivin表达的影响;评估miR-34a及Survivin表达对SCC预后的生物诊断价值。 　结果　　（1）低分化SCC患者miR-34a显著低于高分化组,而Survivin则显著高于高分化组（P均<0.05）。与正常皮肤比较,SCC病人的miR-34a显著降低,而Survivin表达则显著提高,P值分别为0.0013及<0.0001,差异均有极显著性意义。（2）与未转染组相比,miR-34a mimic可以显著抑制A431细胞增殖（P<0.05）;同时显著降低Survivin蛋白表达（P<0.01）。（3）高miR-34a表达的SCC患者生存率显著高于低表达者,P=0.020567;高Survivin表达的SCC患者生存率则显著低于高表达者,P=0.008198。　结论　　miR-34a可通过对Survivin表达调控影响SCC细胞增殖,同时它也可作为一个很好的生物学诊断指标为评估SCC病人预后提供参考。     

MicroRNA-34a通过下调Notch1的表达促进心肌细胞凋亡

目的：探讨microRNA-34a（miR-34a）对心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,分别转染miR-34a mimics、miR-34a inhibitor、随机合成的miR-NC片段、Notch1的siRNA、随机合成的siRNA-NC片段,将实验分为6 组：normal组、miR-34a组、miR-inhibitor组、miR-NC组、miRinhibitor+siRNA-Notch1组和miR-inhibitor+siRNA-NC组。RT-qPCR检测各组miR-34a的表达量,Westernbolt技术检测各组中caspase-3 和Notch1的表达量,流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率。双荧光素酶报告实验鉴定Notch1为miR-34a的靶基因。结果：双荧光素酶报告实验证实miR-34a和Notch1间存在靶向关系。与miR-NC组比较,miR-34a组的miR-34a和caspase-3的表达量明显增多,Notch1的表达量明显减少,细胞凋亡率明显升高（P ＜0.01）。与miR-NC组比较,miR-inhibitor组的miR-34a和caspase-3的表达量明显减少,Notch1的表达量明显增多,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。与miR-inhibitor+siRNA-NC组比较,miRinhibitor+siRNA-Notch1组的Notch1的表达量明显降少,caspase-3的表达量明显减少,细胞凋亡率明显减低（P ＜0.01）。结论：miR-34a促进心肌细胞凋亡,其作用机制与靶向负调控Notch1有关。     

miR-195调控人乳腺癌细胞MCF-7增殖与凋亡的作用及机制研究

目的 研究miR-195调控人乳腺癌细胞MCF-7(MCF-7)增殖与凋亡作用及机制.方法 体外培养正常乳腺上皮细胞MCF-10A(MCF-10A)和MCF-7,qRT-PCR检测miR-195表达,蛋白质免疫印迹(WB)检测蛋白磷酸酶1D(PPM1D)蛋白表达.MCF-7瞬时转染,3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,...     

miR-34a-5p下调Notch1表达增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的敏感性

目的:本研究旨在阐明miR-34a-5p是否通过下调Notch1表达,进而增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞对紫杉醇的化疗敏感性.方法:qRT-PCR测定MCF-10A细胞与MDA-MB-231细胞miR-34a-5p的表达水平;以miR-34a mimic瞬时转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR与wes...     

miRNA-191对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-191在人乳腺癌细胞中的表达情况,研究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法 real-time PCR检测乳腺癌细胞[MDA-MB-231(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)中miR-191表达水平的差异;利用Lipofectamine2000将miR-191抑制体瞬时转染乳腺癌MCF-7,并用real-time PCR检测转染效果;分别用CCK-8法检测MCF-7细胞增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞的细胞周期,Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果与正常乳腺细胞相比,miR-191在乳腺癌细胞中高表达(P<0.01),且在ER(+)乳腺癌细胞MCF-7中的表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01),转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P<0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P<0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P<0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P<0.01)。结论 miR-191在人乳腺癌细胞中,特别是ER(+)乳腺癌中高表达,转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制。     

m iR-335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用

目的：探讨miR‐335通过靶向生存素对乳腺癌细胞增殖的调控作用。方法（1）选取乳腺癌组织及癌旁正常组织,分别采用RT‐PCR、Western blot检测组织中 miR‐335及生存素蛋白表达。（2）选取乳腺癌细胞系 MCF‐7,分别转染 miR‐335 mimic及mimic对照组,采用RT‐PCR、Western blot检测组织中miR‐335及生存素蛋白表达。（3）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别将野生型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐wt）和突变型survivin 3′‐UTR质粒（survivin‐Mut）与miR‐335 mimic或模拟物阴性对照（NC）共转染至乳腺癌细胞系MCF‐7,双荧光素酶报告基因检测细胞荧光素酶活性。（4）选取乳腺癌细胞系MCF‐7,分别转染mimic对照组、miR‐335 mimic及miR‐335 mimic＋survivin ,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞增殖活性。结果（1）与癌旁组织相比较,乳腺癌组织中miR‐335表达显著降低（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达显著增高（P＜0．05）。（2）与转染mimic对照组相比较,转染miR‐335 mimic可使乳腺癌细胞MCF‐7中miR‐335表达上调（P＜0．05）,同时生存素蛋白表达表达下调（P＜0．05）。（3）与转染NC相比较,共转染miR‐335 mimic与survivin‐wt可使MCF‐7荧光素酶活性降低（P＜0．05）,而共转染miR‐335 mimic与survivin‐Mut则MCF‐7荧光素酶活性无显著性变化（P＞0．05）。（4）转染miR‐335mimic后,MCF‐7增殖活性较转染mimic对照组显著降低（P＜0．05）;而转染miR‐335 mimic＋survivin后,MCF‐7增殖活性较单纯转染miR‐335 mimic显著提高（P＜0．05）,但仍显著低于转染mimic对照组（P＜0．05）。结论在乳腺癌组织中miR‐335呈现低表达,生存素呈现高表达;而miR‐335可通过靶向生存素抑制乳腺癌细胞系MCF‐7增殖。     

miR-34a在膀胱癌细胞中的表达及对细胞的增殖、迁移的影响

目的:探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖、迁移的影响。方法:在ATCC细胞库购买膀胱癌细胞株,随机分为3组,miR-34a组通过转染方法将miR-34a mimics转染到膀胱癌细胞中;膀胱癌组(BC组)单纯膀胱癌细胞株不做其他处理,正常培养;抑制组(IN组)将miR-34a inhibitor转染到膀胱癌细胞株中。通过TUNEL法、CCK-8法、克隆实验、Transwell分析3组膀胱癌细胞凋亡、增殖、迁移、侵袭情况的差异性来探究在膀胱癌细胞中miR-34a的表达及对细胞的增殖的影响。结果:结果显示,IN组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,IN组和BC组、miR-34a组相比较miR-34a mRNA含量下降,说明转染成功(P<0.05)。IN组癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组癌细胞大量凋亡,IN组和BC组、miR-34a组相比较癌细胞分布明显稀疏,数量明显减少(P<0.05)。组间两两比较发现IN组和miR-34a组之间OD值具有明显差异,IN组癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组癌细胞的增殖数量最少,IN组显著高于BC组,BC组癌细胞的生长情况显著高于miR-34a组(P<0.05)。对3组癌细胞进行克隆迁移实验。由结果明显可知,IN组癌细胞迁移能力强,显微镜下细胞数量多(P<0.05),IN组和BC组、miR-34a组相比较整体迁移能力明显增强,癌细胞数量明显增多(P<0.05)。由结果明显可知,IN组膀胱癌细胞侵袭能力强,miR-34a组膀胱癌细胞显微镜下细胞数量少,侵袭能力弱(P<0.05),IN组和CO组、miR-34a组相比较,数量显著上升,整体侵袭能力增强(P<0.05)。结论:在膀胱癌细胞中,过表达的miR-34a能够抑制癌细胞生长,降低miR-34a的水平含量可以促进膀胱癌细胞的增殖。     

miR-205慢病毒表达载体的构建及其对乳腺癌细胞作用的初步研究

目的 构建micoRNA-205(miR-205)慢病毒表达载体,感染乳腺癌细胞MB231,建立稳定表达miR-205的MB231细胞株,观察其增殖能力的变化.方法 酶切慢病毒载体GV369,设计并合成miR-205引物,通过PCR扩增目的基因连接到慢病毒载体上.对重组质粒双酶切鉴定,进行慢病毒hsa-miR-205的包装和滴度测定.用构建好的慢病毒感染MB231细胞,定量PCR检测细胞中miR-205表达水平的变化,MTT和划痕实验观察过表达miR-205后MB231细胞增殖和迁移能力的变化.结果 测序显示,目的基因连接慢病毒载体成功.慢病毒稳定感染了MB231,定量PCR结果显示,感染hsa-miR-205的MB231中miR-205表达明显提高,MTT和划痕实验结果显示感染后MB231的细胞增殖和迁移能力受到抑制.结论 成功构建了miR-205慢病毒表达载体,并建立了稳定表达miR-205的细胞株MB231,显示其可能负调控乳腺癌细胞的恶性生物学行为,为后期进一步研究miR-205的功能和机制奠定了基础.     

Inhibitory effects of microRNA-34a on cell migration and invasion of invasive urothelial bladder carcinoma by targeting notch1

MicroRNAs (miRNAs or miRs) are a class of short, non-coding RNAs that participate in various oncological processes. This study aims to explore the roles of microRNA-34a (miR-34a) in invasive urothelial bladder carcinoma. miR-34a was transfected into bladder cancer cell lines 253J and J82. The miR-34a expression levels in tissues and cells were detected by using qRT-PCR. The Notch1 expression was detected by qRT-PCR and Western blotting. Cell migratory and invasive abilities were measured by Transwell chamber assay. Bioinformatics and luciferase assay were performed to predict and analyze the binding sites between miRNA-34a and Notch1. It was found that there was aberrant expression of miR-34a in bladder cancer tissues. Moreover, we revealed that ectopic expression of miR-34a suppressed cell migration and invasion, while forced expression of Notch1 increased cell migratory and invasive abilities. Finally, we observed that miR-34a transfection significantly down-regulated luciferase activity and reduced the mRNA and protein levels of Notch1. Our study concluded that microRNA-34a antagonizes Notch1 and inhibits cell migration and invasion of bladder cancer cells, which indicates the tumor-suppressive function of microRNA-34a in bladder cancer.     

miR-506在乳腺肿瘤细胞增殖及转移中的作用

目的分析miR．506与乳腺癌增殖转移的关系。方法miR-506minics／inhibitor／NC瞬转入MDA—MB一231乳腺癌细胞后进行CCK-8细胞增殖,细胞计数,集落形成,Transwell小室实验及Real—TimePCR。结果miR-506相关核苷酸（mimics、inhibitor、NC）瞬转入细胞后第1天miR-506inhibitor即显现出促进细胞增殖的效应,第3天后miR-506mimics开始出现明显的细胞增殖抑制效应;集落形成实验中miR-506mimics组细胞所形成的集落数量明显少于miR-506 inhibitor组和NC组;Transwell小室实验显示三种miR．506mimics所转染细胞的穿过膜的数量少于miR-506inhibitor组和NC组。Real—TimePCR显示,与miR-506 inhibitor组相比,miR-506mimics组酌5、MMP2基因表达增高,而RASSFl基因降低。结论miR-506过表达可以明显的抑制细胞的增殖能力,单克隆集落形成能力和侵袭转移能力,即miR-506高表达可以抑制乳腺癌细胞的恶性表型。这种作用可能与p65、MMP2及RASSFl表达有关。     

miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响

目的研究miR-27a低表达对子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖的影响。 方法构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。细胞实验分为空白对照组(HEC-1-A不做任何处理)、NC-miR组(转染miR-27a空载体)及miR-27a inhibitor组(转染miR-27a抑制剂)。qRT-PCR法检测各组细胞miR-27a表达情况;MTT比色法和平板克隆技术检测各组细胞增殖能力。 结果成功构建miR-27a低表达HEC-1-A细胞株。miR-27a inhibitor组miR-27a水平及细胞增殖能力均低于NC-miR组及空白对照组(P＜0.05)。 结论miR-27a低表达抑制子宫内膜癌HEC-1-A细胞增殖能力。