小鼠急性肺损伤后肺内CFTR和ENaC的表达变化

目的:探讨囊性纤维化跨膜调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)氯离子通道和上皮细胞钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)蛋白在内毒素诱发急性肺损伤小鼠肺内的表达变化。方法:将内毒素经小鼠气管注入肺内后诱发急性肺损伤,24h、48h、72h后取肺组织,检测其CFTR和ENaC的mRNA浓度变化、肺泡液体清除率、湿干重比。结果:小鼠急性肺损伤后24h、48h、72h,CFTR在肺内的表达均降低(P0.05)。小鼠急性肺损伤后24h、48h、72h,α-ENaC在肺内表达均降低(P0.05);β-ENaC、γ-ENaC在急性肺损伤后24h、48h表达降低(P0.05),而在急性肺损伤后72h恢复正常。小鼠急性肺损伤后24h、48h、72h,肺泡液体清除率和肺湿干重比出现类似的改变。结论:内毒素诱发的小鼠急性肺损伤组织中,CFTR和ENaC的表达均下降,肺泡液体清除率与其一致,肺湿干重的变化与其相反。     

骨髓间充质干细胞移植清除急性肺损伤大鼠的肺泡液体

背景:肺泡液体增多是急性肺损伤的重要病理生理改变,而修复受损的肺泡一毛细血管膜屏障是减轻肺水肿的有效途径.目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对内毒素诱导急性肺损伤模型大鼠肺泡液体的清除作用.方法:采用改良的Peister法分离培养大鼠骨髓充质干细胞,传至第3代制成单细胞悬液.将大鼠随机分为3组,急性肺损伤组和骨髓间充质干细胞干预组采用腹腔注射内毒素建立急性肺损伤模型.成功造模1 h后,干预组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液0.5 mL(细胞数1×106个),对照组和损伤组同法予以等量生理盐水.各组在尾静脉注射后6,24,48 h,检测肺泡液体清除率、肺水含量程度测定,观察肺组织病理变化.结果与结论:肺水含量程度测定湿干比肺损伤组在24 h点与其他组比明显升高(P＜0.05);细胞移植组湿干比在各时间点与肺损伤组比明显降低(P＜0.05).细胞移植组在各时间点肺泡液体清除率与肺损伤组比明显升高(P＜0.05).苏木精一伊红染色光镜观察,肺损伤组6 h点表现为毛细血管充血,肺泡腔内炎性细胞浸润,24 h点加重;细胞移植组6 h点肺泡腔内炎性细胞浸润较肺损伤组轻,24 h点继续减轻,48 h点基本接近正常对照组.提示,骨髓间充质干细胞移植可能通过能修复受损的肺泡一毛细血管膜屏障从而增加急性肺损伤大鼠肺泡液体清除.     

急性肺损伤时肺泡上皮Na+通道研究的进展

急性肺水肿是急性肺损伤(ALI)的重要特征,肺泡上皮主动液体清除功能是影响ALI肺水肿的重要环节[1].研究表明肺泡上皮细胞钠离子通道(ENaC)是肺泡内液体主动转运的重要机制.肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)通过ENaC对肺泡腔的液体平衡进行调节[2-3].ALI导致肺水肿时,肺泡中的液体成分主要通过ENaC、Na+-K+-ATP酶(NKA) 和肺血管内皮细胞的水通道蛋白(AQP)重吸收.现主要对ALI时肺泡上皮ENaC的研究进展进行回顾.     

内毒素对大鼠肺内钠通道表达的影响

目的通过测定内毒素（LPS）对肺内钠通道（ENaC）表达的影响,探讨ENac在急性肺损伤（ALI）发病机制中的作用。方法16只雄性Wistar大鼠腹腔麻醉后随机分为对照组（Nc组）和内毒素组（LPS组）,分别静脉注射生理盐水8ml／kg、LPS 8mg／kg后6h处死。比较两组PaO2、肺病理切片肺水肿程度,Real-time PCR半定量检测肺组织钠通道α、β、γ-ENaC mRNA表达,免疫组化方法检测α-ENaC蛋白在肺内表达。结果LPS组肺病理切片可见间质增宽、水肿,中性粒细胞浸润,正常肺泡结构破坏。以Nc组α、β、γ-ENaC mRNA基因表达量为100％,则LPS组α、β、γ-ENaC基因相对表达量为28％、40％、59％。LPS组α-ENaC蛋白在气管上皮细胞、支气管腺体、血管内皮细胞的表达无明显下降,主要是肺泡上皮细胞表达下降。结论ENaC基因和蛋白表达下调可能是Au发生肺水肿的重要机制之一。     

囊性纤维化跨膜调节因子在小鼠胸膜腔液体转运中的作用

目的:探讨囊性纤维化跨膜调节因子(cystic fibrisis transmembrane conductance regulator.CFTR)在小鼠胸腔液体转运中的作用。方法:小鼠吸入麻醉后,胸膜腔内分别注入0.25ml等渗液体,分别予以异丙肾上腺素、CFTR激动剂CF-16和抑制剂CF_(mh)-172.在不同时间点回收胸腔液体,测量其容积。根据胸腔液体滤出率和吸收率变化,研究CFTR在胸腔液体转运中的作用。用RT-PCR检测ENaC和CFTR在胸膜上的表达情况。结果:小鼠胸膜上有ENaC和CFTR的表达,CFTR抑制剂CF_(mh)-172显著抑制异丙肾上腺素对于胸腔液体吸收的促进作用(P<0.01),激动剂CF-16不能显著增强异丙肾上腺素的这种作用(P>0.05)。结论:CFTR抑制剂可以显著抑制异丙肾上腺素对胸腔内等渗液体吸收促进作用,但是CFTR激动剂则没有明显作用。     

内毒素肺损伤小鼠肺内清道夫受体A表达的变化

目的 观察内毒素肺损伤发病中小鼠肺组织及肺泡巨噬细胞(AM)清道夫受体A(SR-A)表达的变化.方法 腹腔注射内毒素脂多糖(LPS)复制小鼠急性肺损伤模型,实验分为LPS致伤后0.5、1、2、4和8 h组及对照组,用小鼠AM株J774A.1细胞作体外实验,分为LPS作用后0.5、1、2、4和8 h组及无血清培养液对照组.用免疫组化及流式细胞仪观察分析小鼠肺组织及AM、J774A.1细胞的SR-A表达及分布.结果 LPS各组小鼠动脉血氧分压(PaO2)均明显低于对照组,且肺湿/干重(W/D)比值明显高于对照组(P均＜0.01).对照组小鼠肺组织除支气管上皮细胞、淋巴细胞无SR-A表达外,AM、肺血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、肺泡上皮细胞、中性粒细胞胞膜及胞质均有SR-A表达.LPS致伤后0.5 h即可观察到肺组织SR-A免疫组化染色弱于对照组,并且随着致伤时间延长,染色逐渐变浅,表明内毒素肺损伤发病中肺内SR-A表达减少.用J774A.1细胞作体外实验也发现类似结果,以4 h和8 h组降低最为显著.流式细胞仪检测AM及J774A.1细胞的SR-A表达与免疫组化染色结果相符,且细胞膜SR-A下降较细胞总SR-A显著.结论 内毒素肺损伤小鼠肺组织及AM的SR-A表达减少,其表达变化可能与内毒素作用有关.     

不同浓度异氟醚预处理对内毒素性急性肺损伤肺泡毛细血管通透性的影响

目的:比较0.5肺泡气最低有效浓度(MAC)、1.0MAC及1.3MAC3种浓度异氟醚预处理对内毒素诱导幼猪急性肺损伤肺泡毛细血管通透性的影响。方法:24头5~6周龄、9~14kg雄性幼猪随机分成4组,分别为LPS组、0.5MAC LPS组、1.0MAC LPS组、1.3MAC LPS组,每组6头。实验动物麻醉后行气管插管,接呼吸机机械通气后,分离左颈外静脉及左颈内动脉,放置中心静脉导管和Picco热稀释导管,用于输注液体及监测血流动力学、血管外肺水(EVLW)、肺泡毛细血管通透性指数(PVPI)、全心舒张末期容积(GEDV)。预处理组先经不同浓度异氟醚预处理30min,1h后,经中心静脉微泵输注20μg.kg-1内毒素(LPS),60min内输注完毕。待急性肺损伤形成后观察12h并处死实验动物。实验结束后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)检测总蛋白(TP)及肺组织测湿干重比(W/D)。结果:1.3MAC LPS组与LPS组相比,PVPI在急性肺损伤形成时(ALI0h)增加(P<0.05),在急性肺损伤形成后8h(ALI8h)、急性肺损伤形成后12h(ALI12h)显著增加(P<0.01);1.0MAC LPS组与LPS组相比,肺湿干重比(W/D)及BALF中总蛋白含量减少(P<0.05)。结论:1.0MAC异氟醚预处理可以降低内毒素诱导的幼猪急性肺损伤肺泡毛细血管通透性。     

氢气饱和生理盐水对内毒素诱导的小鼠急性肺损伤的早期保护作用

目的:探讨氢气饱和生理盐水对内毒素(LPS)诱导的小鼠急性肺损伤(ALI)的早期保护作用。方法:将小鼠随机分为正常对照组、氢气饱和生理盐水对照组(H2组)、内毒素损伤组(LPS组)、氢气饱和生理盐水治疗组(LPS+H2组),1或2 h后检测肺湿干重比、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)m RNA表达量。结果 :与正常对照组相比,LPS组的湿干重比显著增加(P<0.01),TNF-αm RNA表达量持续增加(P<0.01),IL-10 m RNA表达量在2 h时才增加(P<0.05)。与LPS组同一时间相比,LPS+H2组湿干重比降低(P<0.05),TNF-αm RNA表达量先降低(P<0.01),后差异无显著性(P>0.05),IL-10 m RNA表达量差异均无显著性(P>0.05)。结论:LPS诱导的ALI早期,腹腔注射氢气饱和生理盐水能够抑制促炎因子的早期表达,从而减轻内毒素诱导的小鼠急性肺损伤。     

地塞米松对急性肺损伤肺组织中foxml基因的作用

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)内毒素所致的小鼠急性肺损伤(acute lung in-jury,ALI)时肺组织foxml转录因子和foxml基因表达及其在ALI中的保护作用,并观察地塞米松(dex-amethasone,DEX)对foxml基因表达和病情转归的影响.方法 72只健康小鼠随机(随机数字法)分为3组:对照组(A组,n=24),模型组(B组,n=24),地塞米松治疗组(C组,n=24).对照组小鼠腹腔注射0.9%生理盐水(0.3 mL).模型组小鼠腹腔注射LPS(5 mg/kg).地塞米松治疗组小鼠腹腔注射u)s(5 mg/kg),6 h后腹腔注射地塞米松(5 mg/kg),三组分别选取24 h,48 h,72 h三个观测点.免疫组织化学方法检测各组小鼠肺组织foxml蛋白的表达,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测各组小鼠肺组织foxml基因的表达强度,并观察肺组织病理变化.结果 组间比较,在24 h,48 h,72 h时,模型组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均显著高于对照组(P<0.05),地塞米松治疗组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均显著高于模型组(P<0.05);组内比较,在48 h无论模型组和地塞米松治疗组小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白均达到高峰,48 h小鼠肺组织foxml mRNA与foxml蛋白显著高于72 h(P<0.05),72 h显著高于24 h(P<0.05).地塞米松治疗组和模型组比较,肺组织病理改变明显减轻.结论 在模型组和地塞米松治疗组,肺组织中foxml mRNA和foxml蛋白均明显增加.地塞米松通过促进肺组织中foxml mRNA和foxml蛋白表达,修复受损的内皮细胞和上皮细胞,减轻肺损伤的程度.     

重症急性胰腺炎并发肺损伤促/抗炎症因子的变化及大黄附子汤的干预研究

目的观察大黄附子汤对重症急性胰腺炎并肺损伤（SAP-ALI）时血清促/抗炎症因子的影响。方法健康长白猪,体重25～30kg,13头,随机分成三组：对照组（n=4）、重症急性胰腺炎肺损伤组（模型组,n=4）、大黄附子汤治疗组（治疗组,n=5）。其中模型组采用主胰管内逆行注入4%牛磺胆酸钠（1ml/kg）诱导SAP-ALI模型。三组均于术后即刻、术后6h、12h、24h、48h、72h取血,ELISA法动态检测血清中促炎因子（TNF-α和IL-1β）、抗炎因子（IL-4）浓度变化,同时动态比浊法测定血清内毒素（LPS）含量。术后72h处死动物,计算肺组织湿/干重比,观察胰腺与肺病理形态学变化。结果模型组6～72h血清淀粉酶、内毒素、TNF-α、IL-1β浓度及肺病理组织学评分均较对照组明显升高（P〈0.05）,IL-4浓度在术后24h开始较对照组逐渐升高（P〈0.05）。治疗组各时间点血清淀粉酶、内毒素、TNF-α、IL-1β浓度均较模型组明显下降（P〈0.05）,但血清IL-4浓度于术后12h出现明显升高,48h达到峰值。结论促炎因子（TNF-α、IL-1β）、抗炎因子（IL-4）及内毒素等共同参与了SAP-ALI的发病过程。大黄附子汤通过降低血清LPS水平,进而下调血清TNF-α及IL-1β表达,上调IL-4表达,减轻SAP-ALI的程度。