碱性羟胺比色法测定冷藏全血滤液乙酰胆碱

碱性羟胺比色法测定冷藏全血滤液乙酰胆碱邬刚①胡琳俐②梁彪②许鸣②关键词乙酰胆碱比色法测定中图法分类号Ｒ４４６１９用碱性羟胺比色法检测全血乙酰胆碱（Ａｃｈ）简单可靠，易于推广。为解决实际工作中因每日采样少而造成检测次数和实验误差机会多之问题，尝试分两...     

全血乙酰胆碱羟胺比色法的探讨

全血乙酰胆碱(Ach)羟胺比色法,方法简便,无需特殊的试剂和器材。鲁祖荪等报道用此法测定健康成人及慢性阻塞性肺病患者,所得结果相差显著。为防止Ach在血样处理过程中被乙酰胆碱酪酶(AChE)分解,作者采用了硫酸毒扁豆碱(PSS)作AChE抑制剂,认为方法可靠。但是,我们完全按此方法测定本地区健康成人全血Ach含量时,发现测定值远远大于该文献值。对此异常现象我们进行了探讨。 通过检测试样中非Ach成分(试剂)在540nm处的吸收(A_(540)),以及不同浓度的PSS在各比色管产     

乙酰胆碱和幽门螺杆菌与慢性胃炎、消化性溃疡的关系

本文对76例慢性胃炎(CG)和消化性溃疡(PU)患者测定全血和胃液乙酰胆碱(Ach),并检测胃窦部幽门螺杆菌(Hp)的感染指标,同时测定18例健康对照组全血Ach.结果:Ach在CG、PU及对照组间、不同胃炎程度间、活动性与非活动性胃炎间、以及Hp阳性与阴性间均无差异;Hp阳性率在PU患者高于CG、活动性高于非活动性胃炎、并随胃炎程度加重而增高;清除Hp后PU愈合、胃炎改善.提示Hp感染是CG和PU的病因之一,胆碱能神经功能紊乱可能不是其主要病因.     

血液分析仪免疫比浊法检测C反应蛋白临床应用

目的探讨BC-5390血液分析仪免疫比浊法检测全血C反应蛋白(CRP)的临床应用。方法收集2015年3—6月德阳市人民医院就诊的患者和健康体检人员各20例EDTA抗凝全血标本,根据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)的要求,结合实际工作对仪器的分析性能进行评价。结果 BC-5390全自动血细胞分析仪(简称BC-5390血液分析仪)检测CRP批内精密度变异系数(CV)值为2.01%,批间精密度两个浓度CV值分别为2.76%和2.70%。仪器检测线性验证回归方程:Y=0.983X+4.814,r~2=0.995。20例健康体检人员的CRP检测结果均在参考范围0~4 mg/L。BC-5390血液分析仪和QuikRead go分析仪检测全血CRP结果进行对比分析,回归方程:Y=0.833X-3.271,r~2=0.991。室温或冷藏条件保存的抗凝血标本24 h内,结果稳定性良好,相对偏差<3%。BC-5390血液分析仪检测CRP携带污染符合相应要求。结论 BC-5390血液分析仪测定全血标本的CRP性能验证指标合格,能够满足临床需求。     

不同温度及保存时间对糖化血红蛋白检测结果的影响

 目的 探讨标本在不同温度及不同保存时间的条件下,对糖化血红蛋白(HbA₁c)检测结果的影响。方法 取10例患者抗凝新鲜全血标本进行预处理(溶血处理),在室温下分装成6组,每组10个标本。A组立即检测,B、C、D、E、F组分别在分装后1、2、3、4、5 h检测。取5例全血标本分别充分混匀后,分4组保存,每组5个标本。A1组在室温(18～22 ℃)、B1组冷藏(2～8 ℃)、C1组冷冻(-18～-20 ℃)、 D1组低温冷冻(-80 ℃)条件下保存不同时间后,分别用OLIMPO进行检测。以低温冷冻组测定结果为标准,每个标本的HbA₁c测定结果都在低温冷冻组结果的±3s范围内为可接受结果。结果 溶血后不同时间HbA₁c检测结果:A组(7.98±1.61)%;B组(7.97±1.61)%;C组(7.95±1.60)%;D组(7.94±1.61)%;E组(7.77±1.61)%;F组(7.46±1.57)%。与A组比较,F组差异有统计学意义(t=1.57,P<0.05)。要使OLIMPO检测HbA₁c结果保持稳定,则标本的保存时间分别为:室温2 d,冷藏15 d,冷冻3 d;低温冷冻半年以上。结论 OLIMPO检测HbA₁c时,不同处理条件下,HbA₁c结果的稳定性差异较大。样本溶血处理后4 h内完成检测,结果较准确;如果全血标本需要保存较长的时间,则在2~8 ℃冷藏和-80 ℃条件下保存效果较好。     

全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠血清和骨组织碱性磷酸酶水平的影响

目的:观察全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠血清和骨组织碱性磷酸酶水平的影响。方法:将36只3月龄雌性SD大鼠按体重分层后随机分为假手术、去卵巢静止和去卵巢振动三组。去卵巢10周后,去卵巢振动组每天进行2次全身垂直振动治疗,振动频率90 Hz,时间15 min。治疗7周时,采用双能Χ线骨密度仪检测各组大鼠左侧离体股骨骨密度,用721分光光度计检测血清和右侧股骨远端碱性磷酸酶水平。结果:与假手术组比较,去卵巢静止组血清碱性磷酸酶水平显著增加,股骨远端碱性磷酸酶水平以及离体股骨近端和远端的骨密度显著下降,而离体股骨中段骨密度无显著变化。与去卵巢静止组比较,去卵巢振动组离体股骨远端碱性磷酸酶水平以及股骨近端和远端骨密度显著增加,而血清碱性磷酸酶水平和离体股骨中段骨密度无显著变化。结论:全身垂直振动可能通过增加骨组织碱性磷酸酶水平改善去卵巢骨质疏松大鼠的骨密度。     

全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎转录因子Osterix蛋白表达的影响

目的:观察全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠腰椎转录因子Osterix蛋白表达的影响,探讨全身垂直振动治疗绝经后骨质疏松的作用机制。方法:将36只3月龄健康雌性未孕SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、去卵巢静止组(OVX组)和去卵巢振动组(WBV组),每组12只。手术后10周,WBV组开始接受全身垂直振动治疗。振动频率90 Hz,重力加速度3.8 g,振幅0.5 mm,每天2次,每次15 min,每周7天,振动7周。振动结束后,腹主动脉取血处死各大鼠,按解剖位置分离第2腰椎(L2)和第3腰椎(L3)。用HE染色观察L2组织形态学变化;用TRAP染色法对L2石蜡切片破骨细胞进行染色并计数;用免疫组化检测L2转录因子Osterix定位变化;用Western blot检测L3转录因子Osterix蛋白表达水平的变化。结果:与Sham组和WBV组比较,OVX组大鼠腰椎骨髓腔脂肪空泡数目、骨小梁表面破骨细胞数目显著增加,而转录因子Osterix蛋白表达显著下降。结论:全身垂直振动能降低去卵巢骨质疏松大鼠腰椎破骨细胞的数目,增强腰椎转录因子Osterix蛋白的表达。     

人脑脊液髓鞘碱性蛋白自身抗体的测定

从人脑中提取纯化了髓鞘碱性蛋白(MBP),所得蛋白在 SDS 凝胶电泳中为单一带,分子量为21000道尔顿,等电点在 pH9.5以上,经氨基酸组成分析证明与文献报道值接近。脑脊液中碱性蛋白自身抗体的测定步骤是其自身抗体通过抗原抗体反应与MBP 包被的固相载体结合,然后加入发光剂氨基丁基乙基异鲁米诺标记的羊抗人 IgG 抗体进行发光测定。脑脊液中 IgG 含量也采用发光免疫分析法来测定,其包被固相载体的抗体则用羊抗人 IgG 抗体。脑脊液中 IgG 及碱性蛋白自身抗体测定同时进行,使用同一IgG标准曲线计算脑脊液中 IgG 及碱性蛋白自身抗体的含量。15名脱髓鞘性疾病患者脑脊液IgG 及碱性蛋白自身抗体分别为6.65±5.74mg%及9.69±9.99μg%。19名其他神经系统病人脑脊液中 IgG 及碱性蛋白自身抗体分别为6.73±4.89mg%及5.06±6.37μg%。     

BMP-4基因/TGF-β1对兔火器性股骨缺损的治疗作用

目的 观察BMP-4基因联合TGF-β1对火器性股骨缺损的修复作用. 方法 用火器性钢珠造成兔股骨中段缺损,伤后2周于骨缺损上、下端和中部注射经体外鉴定的BMP-4基因和TGF-β1.用RT-PCR和Western blot检测BMP-4 mRNA与蛋白在体内的表达,用碱性磷酸酶(ALP)活性和钙含量检测局部组织的成骨能力,用病理学和X线检查成骨过程和质量. 结果 注射后BMP-4 mRNA和蛋白可在体内表达6周.实验组ALP活性伤后8周时增加到(13.17±0.51)U/100 ml,显著高于对照组的(8.77±0.44)U/100 ml,提示实验组的成骨能力增强,钙含量检测与此相符.病理学和X线检查证明实验组成骨过程加快,成骨质量提高. 结论 BMP-4基因/TGF-β1对火器性骨缺损有明显的促修复作用.     

Hp培养滤液诱导下抑制hTERT基因对SGC7901细胞bcl-2蛋白表达的影响

目的:探讨bcl-2表达与端粒酶活性二者之间的调控关系,了解Hp的致癌机制。方法:在Hp培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测抑制hTERT基因之后SGC7901胃癌细胞bcl-2蛋白的表达。结果:对照组SGC7901胃癌细胞24 h、36 h和48 h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数显著低于经Hp培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05)。在Hp滤液诱导下,抑制hTERT基因的SGC791胃癌细胞24 h、36 h和48 h表达bcl-2蛋白的阳性细胞率和荧光指数与SGC7901胃癌细胞无显著差异(P>0.05)。结论:Hp感染可以促进bcl-2蛋白表达,这可能是Hp感染致胃癌的重要机制之一。端粒酶活化不参与调控bcl-2蛋白表达。     

血清肌酸直接显色测定及正常参考值

血清肌酸测定通常采用间接测定法,即无蛋白血滤液经加酸加热处理,使肌酸脱水产生肌酐,再由测定加热前后肌酐之差值求得肌酸含量。由于需要两次测定,干扰因素较多,往往影响结果的准确性。我们参考有关资料,采用肌酸与α-萘酚和丁二酮在碱性条件下显色原理,应用于血清肌酸直接测定,同时做了105例成年人正常参考值,现介绍如下。     

全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞分化的调节作用

目的:观察全身垂直振动对去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞分化的调节作用.方法:将36只3月龄雌性未孕SD大鼠按体重分层后随机分为假手术、去卵巢静止和去卵巢振动3个组.去卵巢手术后10周,去卵巢振动组大鼠经过1周适应振动治疗后,开始接受正式全身垂直振动治疗,每次振动15 min、频率为90 Hz,每天振动2次,每周7次.治疗7周时,用721分光光度计检测血清碱性磷酸酶和甘油三酯水平;常规HE染色观察左侧胫骨组织形态学;收集右侧股骨和胫骨骨髓细胞,一部分细胞用作碱性磷酸酶和油红O染色,另一部分细胞用作尼罗红(Nile Red)染色.结果:与假手术组比较,去卵巢静止组骨髓细胞碱性磷酸酶阳性染色细胞数目显著降低,而骨髓细胞Nile Red阳性染色细胞百分比和胫骨骨髓脂肪空泡数目显著增加;与去卵巢静止组比较,去卵巢振动组骨髓细胞碱性磷酸酶阳性染色细胞数目显著增加,而骨髓细胞Nile Red阳性染色细胞百分比和胫骨骨髓脂肪空泡数目显著下降.结论:全身垂直振动不仅增加去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞的成骨分化能力,而且降低去卵巢骨质疏松大鼠骨髓细胞的成脂分化能力.     

血糖仪与半自动生化分析仪葡萄糖氧化酶法检测血糖的对比分析

目的:探讨强生稳步型血糖仪与半自动生化分析仪检测血糖的相关性,为临床提供可靠数据。方法:随机选取本院就诊血糖测定患者,血糖仪标本为静脉血全血,采血后立即测试,血糖仪试条为随机附带,仪器用质控液校正,生化仪为同一标本,采血后2 h内测试,血清是静脉血抽取后立即离心分离。结果:通过对122例血糖仪与半自动生化分析仪的血糖检测结果进行对比分析,表明两种检测方法在检测血糖中差异无显著(P>0.05)。结论:在血糖仪的测定范围内,两种方法都是可靠的,干化学法测葡萄糖具有方便、快捷、可用全血进行检测、无需定标、试纸易保存等优点,适用于糖尿病患者的自我监测及临床检验科的急诊检测,但血糖仪测定范围受限,过高或过低时无数据显示,应结合临床症状观察,用生化法复测后综合考虑。     

辐射诱导SCID细胞恶性转化

目的:探讨辐射诱导SCID细胞恶性转化的机制。方法:1命名为3T1的SCID原代成纤维细胞取自孕16d的小鼠胚胎。2在指数生长期的细胞用137　Csγ射线照射6～8周后,用转化实验分别测定C3H10T1/2细胞和3T1细胞的转化率;2.5Gy辐射后3h提取细胞总蛋白,用Westernblot法测定Trp53、Cdkn1α(又称P21、Cip1)蛋白表达。3用直接PCR序列分析检测Trp53(又称p53)基因突变。4用3H标记法测定G1期阻滞。514C标记的胸腺嘧啶脱氧核苷参入集落细胞,用双向电离室测定放射性核素在集落中的分布,观察细胞接触抑制。6转化细胞克隆:4～5周雄性无胸腺小鼠皮下注…     

小儿血骨碱性磷酸酶测定80例临床分析

目的:探讨小儿血骨碱性磷酸酶测定的临床意义。方法:随机抽取80名来院门诊的2个月～4岁的患儿,用骨碱性磷酸酶试剂盒,取微量全血,测量血骨碱性磷酸酶。结果:对可疑病例和阳性病例按检测值和临床表现的不同,子适当的补钙和补充维生素D2或D3制剂等治疗,一个月后再测其血骨碱性磷酸酶,其值均有不同程度的下降。结论:血骨碱性磷酸酶能早期反映小儿佝偻病,并能及时对治疗效果做出评估,且简单,易行,方便,灵敏,快捷,特异性高,确实适于各级医院推广应用。     

乙型肝炎病毒前S_2蛋白活力与病毒复制的关系

本文通过用ELISA法检测了122例各型乙型肝炎病人血清中的Pre-s_2蛋白:研究其与HBV复制的各种标志的关系,并讨论了其临床意义。 前s_2蛋白(Pre-s_z蛋白)测定以单克隆抗Pre-s_2抗体为主要试剂,采用夹心法原理,检测患者血清中Pre-s_2蛋白,具体操作方法按试剂盒说明书进行,S/N比值≥2.1及血清滴度>1∶10为阳性;HBV标志(HB_sAg,抗-HB_s、HB_eAg、抗-HB_e、抗-HB_c)均采用ELISA法     

Use of C - reactive Protein in Differential Diagnosis of Childrens' Respiratory Tract Infection

目的:探讨C-反应蛋白(CRP)在鉴别诊断儿童呼吸道细菌性感染、病毒性感染、及支原体感染中的价值.方法:同时测定40例细菌性感染、40例病毒性感染、及40例支原体感染患者的全血CRP水平(EDTA -K2抗凝),比较细菌性感染组、病毒性感染组、及支原体感染组之间的CRP水平的差别.结果:细菌性感染组的CRP水平明显高于病毒性感染组(P＜0.05)、及支原体感染组(P＜0.05).结论:抗凝全血CRP的检测,是鉴别诊断儿童呼吸道细菌性感染、病毒性感染、及支原体感染的重要检测指标之一.     

HP培养滤液诱导下抑制bcl-2基因表达对SGC7901细胞端粒酶活性的影响

目的:探讨bcl-2表达与hTERT、端粒酶活性之间的调控关系,了解HP的致癌机制。方法:在HP培养滤液诱导前后,采用流式细胞仪检测bcl-2AODN抑制bcl-2基因之后人SGC7901细胞hTERT蛋白的表达。结果:对照组人SGC7901细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于经HP培养滤液诱导的SGC7901胃癌细胞组(P<0.05)。在HP滤液诱导下,抑制bcl-2基因的SGC7901胃癌细胞24h、36h和48h表达hTERT蛋白的阳性细胞数和荧光指数显著低于与SGC7901胃癌细胞(P<0.05),同时显著高于对照组(P<0.05)。结论:bcl-2基因正向调控hTERT蛋白表达,bcl-2表达上调可能是端粒酶活化的主要途径之一。端粒酶的激活不完全依赖于bcl-2途径,还存在其他的调控因素。HP感染不仅通过上调bcl-2的表达,还可以通过其他途径激活端粒酶,这可能是HP感染致癌的一条重要途径。     

ALS2调控初级纤毛发生的机制研究

目的 探究肌萎缩侧索硬化症蛋白2(ALS2)对初级纤毛发生的调控作用及其可能机制。方法 通过免疫荧光染色检测ALS2蛋白的亚细胞定位。采用siRNA干涉特异性敲低RPE-1细胞中ALS2 mRNA含量,检测ALS2蛋白含量减少对初级纤毛的影响。利用Western印迹检测初级纤毛组装与去组装过程中ALS2蛋白的动态变化。建立初级纤毛去组装实验体系,检测ALS2蛋白缺失对初级纤毛去组装过程的影响,Time-laps活细胞实时成像技术检测ALS2对初级纤毛去组装过程中纤毛末端剪切的影响。结果 免疫荧光显示,ALS2定位于初级纤毛发生的基体——中心体周围。在RPE-1细胞中敲低ALS2会显著提高初级纤毛异常发生的比例。蛋白水平动态检测结果显示,在初级纤毛去组装过程中ALS2蛋白表达水平逐渐增加;敲低ALS可显著抑制纤毛去组装过程。活细胞实时成像显示,ALS2蛋白缺失可抑制初级纤毛去组装过程的末端剪切。结论 ALS2作为中心体定位蛋白,通过促进初级纤毛末端剪切的正常进行,调控初级纤毛组装与去组装之间的动态平衡,防止纤毛异常生长引起的纤毛类疾病的发生。     

有机磷化合物体外全血胆碱酯酶检测方法学研究

目的建立一种在体外快速测定乙酰胆碱酯酶（AChE）活性的方法,为有机磷毒剂中毒的诊断及救治提供依据。方法用改良的5,5-连硫代-双-2-硝基苯甲酸（DTNB）法测定AChE活性,以兔全血作为酶源进行方法学研究,并用不同种属动物全血进行了适用性考察,用SPECTRA MAX 190读板机测定412 nm处光密度的变化即可测定AChE活性。结果不同动物全血40倍稀释后作为酶源较为合适,批内差异为0.44%～0.67%,批间差异为1.03%～2.27%,该方法适用于兔、比格犬、豚鼠和猴全血AChE测定。梭曼和沙林对兔全血AChE活性抑制具有明显的量效关系。结论该方法简便、易行,适用于不同种属动物全血AChE活性的测定。