乌头碱配伍人参皂苷Rg_1对心肌细胞毒效浓度研究

目的探究乌头碱与人参皂苷Rg1配伍对正常心肌细胞和心力衰竭心肌细胞活力及细胞内离子的影响。方法原代培养正常心肌细胞,并建立心力衰竭心肌细胞模型,采用MTT比色法筛选乌头碱及人参皂苷Rg1的毒效浓度;采用MTT比色法和试剂盒观察乌头碱和人参皂苷Rg1毒-效及效-效浓度配伍对心肌细胞活力和细胞内Na+,K+,Ca2+,Mg2+浓度的影响。结果人参皂苷Rg1的最小毒性浓度为1×10-5mol/L,药效浓度为1×10-8mol/L;乌头碱药效浓度为1×10-9mol/L;乌头碱与人参皂苷Rg1毒-效浓度配伍可分别减轻乌头碱和人参皂苷Rg1对正常心肌细胞的毒性,且均以1∶2(Ac∶Rg1)配伍效果最佳;两者效-效浓度配伍可增强心力衰竭心肌细胞活力,且以1∶1(Ac∶Rg1)配伍效果最佳。结论乌头碱与人参皂苷Rg1配伍对心肌细胞具有减毒增效作用,其机制与调节心肌细胞内Na+,Mg2+,K+,Ca2+浓度有关。     

人参皂苷类成分对戊巴比妥钠损伤心肌细胞ATP酶及相关离子的影响

目的:探讨人参皂苷类成分对戊巴比妥钠损伤心肌细胞的影响。方法:将培养至第5日的乳鼠大鼠心肌细胞暴露于0.8%戊巴妥钠5min制备大鼠乳鼠心肌细胞损伤模型;选用人参皂苷Rg1为代表,MTT法确定作用浓度;然后选取最佳浓度作为人参皂苷Rg1、Rb1、Re及阳性药物西地兰的作用浓度,作用时间为24h,试剂盒测定心肌细胞内Na+、K+、Ca2+、Mg2+浓度和细胞膜上Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:在1×10-8M剂量下,人参皂苷Rg1、Rb1、Re均能不同程度升高模型细胞Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,降低Na+-K+-ATP酶的活性,同时纠正因造模引起的细胞内Na+、K+、Mg2+、Ca2+等离子浓度的异常。结论:人参皂苷Rg1、Rb1、Re对心衰心肌细胞具有一定治疗作用。     

参附注射液中间体及不同配比对心肌细胞ATP酶及相关离子的影响

目的通过探讨参附注射液中间体及不同配比对新生大鼠心肌细胞膜ATP酶活性及细胞内相关离子的影响,揭示参附注射液两种中间体最佳配比。方法通过胰蛋白酶消化法和差速贴壁法获得心肌细胞,分别给予附子提取物30μl·ml-1、红参提取物30μl·ml-1及附子:红参1∶2、2∶1、1∶1不同配比药液,作用1h,检测心肌细胞的细胞活力、ATP酶的活性及相关离子的浓度。结果参附注射液中间体及各配比药液对心肌细胞的细胞活力,Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性及细胞内Na+、Ca2+、K+、Mg2+的浓度产生不同影响,其中以附子:红参2:1作用最强,且与前期研究中参附注射液的作用一致,均能提高心肌细胞的细胞活力,提高Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性,降低细胞内Na+、Ca2+的浓度,提高Mg2+、K+的浓度。结论参附注射液中间体及不同配比均对正常心肌细胞具有保护作用,作用以附子:红参2∶1最强。     

乌头碱对心肌细胞内ATP酶及相关离子的影响

目的:研究乌头碱对心肌细胞内Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶的活性;Na+、Ca2+、K+含量以及钙超载的影响;探讨乌头碱对乳鼠心肌细胞生物电活动的影响。方法:不同浓度的乌头碱处理原代心肌细胞,通过Na+、Ca2+、K+检测试剂盒和Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶检测试剂盒检测以上各指标的改变;使用激光扫描共聚焦显微镜,检测在不同浓度乌头碱给药下钙瞬变的发生;并利用Real-time PCR法及Western blot技术对不同浓度乌头碱处理组进行mRNA及蛋白的检测。结果:乌头碱低(1μmol/L)、中(μmol/L)、高(10μmol/L)剂量组作用于心肌细胞后,细胞内Na+,Ca2+浓度上升,而K+浓度降低,并且不同程度的降低了Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活性;乌头碱低(1μmol/L)、中(5μmol/L)、高(10μmol/L)剂量组作用于心肌细胞后,各自与空白组相比,不同浓度乌头碱均可抑制钙瞬变浓度,高浓度乌头碱可以显著增加钙瞬变频率,以及增加钙离子浓度;乌头碱对SERCA2的mRNA与蛋白表达显著下调,对RyR2的mRNA与蛋白表达显著上调,结果具有浓度依赖性。结论:乌头碱在高剂量时对心肌细胞具有明显的毒性作用,毒性机制可能与调节心肌细胞膜以及细胞内各离子的浓度有关。乌头碱可以调节钙离子通道相关蛋白SERCA2、RyR2的mRNA与蛋白质水平的表达,这种调节作用可能与乌头碱的毒性机制有关。     

附子水溶性生物碱对心衰细胞模型的治疗作用

目的:研究附子水溶性生物碱对心力衰竭大鼠心肌细胞膜ATP酶以及相关离子的影响,以揭示其对急性心力衰竭细胞的治疗作用。方法:取新生大鼠心室肌细胞原代培养5 d至细胞成熟,用0.8%戊巴比妥钠作用5 min造模后,分别给予附子水溶性生物碱0.01,0.02,0.04 g·L-1,以及阳性药物去乙酰毛花苷注射液4 mL·L-1,作用1.5 h后检测心肌细胞ATP酶活性以及各相关离子浓度。结果:模型组与正常组比较,心肌细胞活力明显减小,细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性与Na+,Mg2+含量降低,K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性上升;去乙酰毛花苷4 mL·L-1以及附子水溶性生物碱各剂量组均能提高心衰细胞的细胞活性,并能升高模型细胞Na+,Mg2+含量,提高细胞内Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性,降低K+,Ca2+的含量与Na+-K+-ATP酶的活性。结论:附子水溶性生物碱能调节心衰细胞内酶的活力与离子浓度使之趋于正常,对戊巴比妥钠致心衰细胞模型具有一定的治疗作用。     

乌头碱致SD乳鼠心肌细胞心律失常模型的研究

目的建立一种细胞水平的心律失常模型,以用于抗心律失常药物的筛选和评价。方法采用胰酶消化法体外培养SD乳鼠心肌细胞,通过差速贴壁的方法纯化后,在细胞水平给予传统诱发心律失常药物乌头碱,应用试剂盒测定给予乌头碱后心肌细胞内Na+、K+、Ca2+离子含量及Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活力的变化。结果乌头碱作用心肌细胞15 min后,使细胞内Na+、Ca2+离子含量增加,K+含量有减少,并呈一定的剂量依赖关系,其中1、2μmol/L乌头碱使细胞内Na+离子含量明显增加,与空白组比较有显著差异(P0.01);能抑制细胞Na+-K+-ATP酶活力,其中0.5,1.0,2.0μmol/L乌头碱与空白组比较有差异(P0.05),1.5μmol/L乌头碱与空白组比较有显著差异(P0.01);有降低细胞Ca2+-ATP酶活力的趋势。结论在细胞水平给予乌头碱能引起细胞内离子含量及酶活性的改变,与心律失常发生机制基本一致。因此乌头碱心肌细胞模型是一种稳定可靠的抗心律失常药物筛选模型。     

丹参酮ⅡA抗过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡作用及机制研究

目的:观察丹参酮ⅡA对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:采用差数贴壁法体外分离培养新生乳鼠心肌细胞,以200μmol/L过氧化氢作用2h模拟心肌细胞氧化应激模型,分别以丹参酮ⅡA高、中、低剂量在造模前干预24h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内游离钙及心肌细胞线粒体膜电位的变化,检测心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结果:模型组心肌细胞经200μmol/L过氧化氢作用2h后,凋亡率显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞凋亡率。过氧化氢可导致心肌细胞内游离钙显著增加,线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著降低。丹参酮ⅡA可呈浓度依赖性显著降低细胞内游离钙浓度,增加线粒体膜电位、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性。结论:丹参酮ⅡA可以抑制过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡,这可能与其增强细胞Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,降低细胞内钙超载有关。     

乌腺金丝桃抗快速型心律失常活性成分作用机制研究

目的:通过观察分离的单体物质芦丁和金丝桃苷对心肌细胞膜Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶的影响,探讨乌腺金丝桃抗快速型心律失常作用的机理.方法:采用无机磷比色法检测乌腺金丝桃抗快速型心律失常有效部位的化合物对大鼠心肌细胞膜Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活力的影响.结果:金丝桃苷能够提高快速型心律失常大鼠心肌细胞膜Na+-K+-ATP酶活力及Ca2+-Mg2+-ATP酶活力.结论:乌腺金丝桃抗快速型心律失常的作用机制可能与调节心肌细胞膜Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活力有关.     

甲基原薯蓣皂苷对心肌细胞内钙及ATP酶功能的影响及其机制

目的:研究甲基原薯蓣皂苷(MPD)对大鼠心肌细胞内钙浓度([Ca2+]i)的活动及细胞膜ATP酶功能的影响,并分析其机制。方法:将乳鼠心肌细胞悬液随机分为对照组、MPD组、地尔硫卓(Dil)组,荧光分光光度计法观察心肌细胞[Ca2+]i的变化。将培养的乳鼠心肌细胞分为对照组和MPD组,分别检测心肌细胞膜ATP酶活性,并观察肌浆网钙ATP酶SERCA2a基因的mRNA表达水平。结果:在静息状态下,各组的心肌细胞[Ca2+]i均无显著性差异。但在KCl刺激下,MPD和Dil组与对照组相比,荧光信号峰值和[Ca2+]i浓度均低于对照组(P0.001)。在心肌细胞膜ATP酶的活性中,MPD组的Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性显著高于对照组(P0.05,P0.01),而Mg2+-ATP酶的活性在2组间的比较无差异性。MPD组与对照组2组SERCA2a的mRNA表达量也无差异性。结论:MPD在一定程度上可以抑制细胞膜上电压依赖型钙通道开放,减少钙离子内流。MPD还可以通过提高心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境。     

乌头碱配伍人参皂苷Rb1对原代培养心肌细胞能量代谢的影响

目的：探讨乌头碱配伍人参皂苷Rb₁对心肌细胞能量代谢的影响。方法：采用胰蛋白酶消化和差速贴壁法培养大鼠乳鼠心肌细胞,分为正常对照组、0.2%乌头碱组、0.1%乌头碱组、人参皂苷Rb₁组、乌头碱配伍人参皂苷Rb₁组（1?1、1?2、2?1）,给药作用1 h,检测心肌细胞的细胞活力和体内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶以及细胞乳酸脱氢酶的含量。结果：0.2%乌头碱能够明显降低心肌细胞活力,增加乳酸脱氢酶含量,降低细胞内糖原、琥珀酸脱氢酶、细胞色素C氧化酶含量;1×10^-6 mol·L^-1或2×10^-6 mol·L^-1浓度的人参皂苷Rb1配伍乌头碱,可明显对抗0.2%乌头碱对心肌细胞的毒性。结论：人参皂苷Rb1可降低乌头碱心肌细胞毒性,其作用机制可能与对抗细胞能量代谢有关。     

参附注射液对戊巴比妥钠致心衰模型心肌细胞膜ATP酶和相关离子的影响

目的: 通过探讨参附注射液对新生大鼠心力衰竭心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶、Na⁺-K⁺-ATP酶活性及细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺浓度的影响,揭示参附注射液强心作用的机制。 方法: 通过胰蛋白酶消化法和差速贴壁法获得心肌细胞,经0.8%戊巴比妥钠作用5min后,分别给予1.5, 3, 6 mg·L^-1(5,10,20 mL·L^-1)3个不同浓度的参附注射液,作用1 h,检测心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶,Na⁺-K⁺-ATP酶的活性和细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺的浓度。 结果: 参附注射液能增加心衰模型心肌细胞的搏动强度,提高Ca²⁺-ATP酶和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶的活性,抑制Na⁺-K⁺-ATP酶的活性,降低细胞内K⁺,Ca²⁺的浓度,升高细胞内Na⁺,Mg²⁺的浓度。 结论: 参附注射液对戊巴比妥钠致心衰细胞有明显的保护作用,且作用的发挥与调节心肌细胞Ca²⁺-ATP酶,Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶,Na⁺-K⁺-ATP酶的活性和细胞内Na⁺,Mg²⁺,K⁺,Ca²⁺的浓度有关。     

旋覆代赭汤对RE模型大鼠食管黏膜Na+-K+-ATP酶及 Ca2+-Mg2+-ATP酶的影响

目的: 观察旋覆代赭汤对反流性食管炎(RE)模型大鼠食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性的影响,探讨RE食管黏膜细胞能量代谢障碍与黏膜损伤的关系以及旋覆代赭汤治疗RE的作用机制。方法: 将96只雄性Wistar大鼠随机分成6组,即假手术组、模型组、旋覆代赭汤组高、中、低剂量组(24,12,6 g·kg^-1)及西药对照组(奥美拉唑10 mg·kg^-1+2 mg·kg^-1莫沙必利),每组16只。采用"食管-十二指肠端侧吻合术"制备胃及十二指肠液混合RE模型。从术后第3天开始,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃,药物治疗组分别给予旋覆代赭汤高、中、低剂量、西药(奥美拉唑10 mg·kg^-1+莫沙必利2 mg·kg^-1)灌胃,连续7天,记录大鼠体重变化及死亡情况,于第8天处死大鼠留取标本,观察食管下段黏膜大体及病理组织学变化;化学法检测食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP和Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性。结果: 与假手术组比,模型组大鼠体重明显减轻(P<0.05),食管黏膜肉眼及镜下病理改变明显,评分增高(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.05);与模型组及西药组比,旋覆代赭汤高、中剂量组大鼠死亡率明显降低(P<0.05):与模型组比,旋覆代赭汤高、中剂量组、西药组肉眼及病理评分显著降低(P<0.05);食管黏膜组织Na⁺-K⁺-ATP酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性明显提高(P<0.05)。结论: 旋覆代赭汤能明显提高RE大鼠食管黏膜细胞膜Na⁺-K⁺-ATP 酶及Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶活性, 从而保持食管黏膜细胞完整性,减轻黏膜损伤。     

脑脉舒康胶囊对短暂性脑缺血模型小鼠的影响

目的:探讨脑脉舒康胶囊对短暂性脑缺血发作小鼠模型的影响。方法:采用昆明种小鼠,分为脑脉舒康胶囊组(1.8,0.9,0.45 g.kg-1)、模型组、假手术和阳性药(血栓通1.125 g.kg-1、尼莫地平0.03 g.kg-1)对照组,各组连续灌胃7 d,于第8天给药1 h后,结扎两侧颈总动脉30 min,并进行再灌注15 min制备短暂性脑缺血模型;眼球取血,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量;取部分小鼠脑组织匀浆,检测脑匀浆液Na+-K+-三磷酸腺苷酶(ATPase),Mg2+-ATPase,Ca2+Mg2+-ATP,Ca2+-ATPase活力;部分脑组织称重后计算脑含水量。结果:脑脉舒康胶囊可以增强Na+-K+-ATPase,Mg2+-ATPase,Ca2+-Mg2+-ATP,Ca2+-ATPase活力,降低MDA含量,提高SOD的活性,减轻脑缺血引起的脑组织间质水肿。结论:脑脉舒康胶囊可提高脑组织ATP能量,稳定离子泵功能,清除氧自由基,缓解脑水肿,具有保护脑细胞的作用。     

草苁蓉水萃取物对四氯化碳致肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用

目的:研究草苁蓉水萃取物(BRAF)对四氯化碳(CCl4)诱发的急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激的干预作用.方法:将实验小鼠随机分为对照组、模型组、水飞蓟素阳性对照组(50 mg· kg-1)及BRAF高、低剂量组(200,100 mg·kg-1).每日给小鼠灌胃水飞蓟素或BRAF 1次,共7d.实验末期,腹腔注射CCl4建立小鼠急性肝损伤模型,苏木素-伊红(HE)染色法观察肝组织病理学变化,比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)活性及肝脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase)、Ca2+-Mg2+-ATP酶(Ca2+-Mg2+-ATPase)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量.结果:BRAF明显降低CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT,AST和ALP水平,减轻肝组织损伤,升高肝脏SOD,CAT,GPx和GSH水平,升高肝线粒体SOD,Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase活性,降低肝匀浆及线粒体MDA含量.结论:BRAF降低CCl4致急性肝损伤小鼠肝脏氧化应激,对CCl4致小鼠急性肝损伤具有保护作用.     

甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞的作用

目的: 研究甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞的作用。 方法: 利用细胞培养技术体外培养大鼠大脑皮质神经细胞,运用MTT法测定甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞存活率的影响,采用比色法测定甘草酸与乌头碱配伍对神经细胞内Na⁺,K⁺含量,钠-钾三磷酸腺苷酶(Na⁺,K⁺-ATPase)活力的影响。 结果: 1,2,4 g·L^-1的甘草酸分别与2 g·L^-1乌头碱配伍作用神经细胞30 min后,能不同程度拮抗乌头碱所致活细胞数降低,以及拮抗乌头碱所引起的神经细胞内Na⁺含量降低,K⁺含量和Na⁺,K⁺A-TPase活力的升高。 结论: 甘草酸能降低乌头碱所致神经细胞毒性,拮抗乌头碱所引起的神经细胞内环境的紊乱,乌头碱与甘草酸以1:2配伍为佳。     

术后疲劳综合征大鼠骨骼肌能量代谢特点及人参皂苷Rb1的干预研究

目的:研究术后疲劳综合征大鼠骨骼肌能量代谢特点,并探讨人参皂苷Rb1的干预作用.方法:采用70％中段小肠切除端端吻合术作为术后疲劳综合征大鼠模型,将96只SPF级成年雄性SD大鼠按体重随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rb1干预组.每组再按不同时间点分为术后第1,3,7,10天4小组,共12小组,每小组8只.对照组和模型组分别于术前1h及术后每天腹腔注射1次10 mL·kg-1的生理盐水.人参皂苷Rb1干预组在相同条件下腹腔注射10 mg·kg-1的人参皂苷Rb1.分别于术后第1,3,7,10天取大鼠骨骼肌组织,用高效液相检测ATP,ADP,AMP含量,比色法检测Na+ -K+ -ATP酶和Ca2+ -ATP酶活性.结果:与对照组相比,模型组骨骼肌ATP含量在术后第3天明显下降(P＜0.05),ADP含量在术后第7,10天有不同程度的升高(P＜0.05),Na+ -K+ -ATP酶活性在术后第3,7天有不同程度的减弱(P＜0.05),Ca2 -ATP酶活性在术后第7天明显减弱(P＜0.05);补充人参皂苷Rb1后骨骼肌上述时间点的各项指标均有明显改善(P＜0.05),与对照组相比无明显差异.结论:术后一定时间内,术后疲劳综合征大鼠骨骼肌存在着能量代谢不足,补充人参皂苷Rb1能增强骨骼肌的能量代谢.     

虚寒状态大鼠肝脏能量代谢变化研究

[目的]探讨氢化泼尼松诱导的虚寒大鼠肝脏能量代谢变化特点。[方法]48只SD雄性大鼠随机分为正常组和虚寒组,每组24只。虚寒组肌肉注射氢化泼尼松琥珀酸钠生理盐水溶液20 mg/kg,正常组注射生理盐水0.25 mL。注射第14、第21天晚上8点,正常组和虚寒组各12只,禁食不禁水12 h,次日上午8点,麻醉,腹主静脉取血,分离血清,全自动生化分析仪检测乳酸(LAC)。固定位置取一块儿肝脏,4%多聚甲醛固定,免疫组化法检测解偶联蛋白2(UCP-2)蛋白表达。其余肝脏,-80℃冻存,紫外分光光度法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和三磷酸腺苷酶(ATPase)。[结果]与同期正常组比较,虚寒组大鼠血清LAC含量、肝组织SDH活性在造模第14天和第21天均明显降低(P0.05);肝组织中Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,肝脏UCP-2的阳性表达面积(Area)和积分光密度值(IOD)在造模第21天均明显降低(P0.05,P0.01)。[结论]氢化泼尼松诱导的虚寒状态动物模型肝脏能量代谢可能存在障碍。