肝癌血清肿瘤标志物适配体的筛选及活性鉴定

目的:肝癌血清中含有已知和未知的标志物,可以作为SELEX筛选的靶标,获得一组已知和未知肝癌血清标志物的适配体,为肝癌早期诊断提供新的分子生物学检测方法。方法：收集50例经诊断证实为原发性肝癌患者的血清,以及50例体检无异常的正常人血清,并分别等比例混合制备成肝癌混合血清和正常人混合血清,作为筛选的靶标分子,磁珠作为分离载体。先将磁珠-正常人血清复合物与ssDNA文库结合,取上清再与磁珠-肝癌血清结合,经过洗脱、分离与肝癌血清结合的特异性ssDNA,并进行扩增,链霉亲和素磁珠法制备次级ssDNA,进行9轮筛选,将9轮筛选获得的饱和文库与PMD18-T载体连接进行转化、挑选单克隆团送上海生工进行测序,同时利用流式细胞术测定肝癌血清肿瘤标志物适配体的亲和力(Kd值)。结果：经9轮筛选,成功分离出200个核酸序列,其中序列不同的有10个。结论：特异性检测表明,筛选得到的肝癌血清肿瘤标志物适配体与肝癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中Seq-1、Seq-16、Seq-17、Seq-56、Seq-72号适配体能高特异性结合肝癌血清,与正常人血清不结合,再通过200例肝癌血清和200例正常人血清进一步鉴定5条肝癌血清肿瘤标志物适配体检出肝癌的阳性率,阳性检出率达91%以上,为肝癌的早期诊断提供了新方法。     

肝癌血清肿瘤标志物适配体的筛选及其亲和力和特异性的鉴定

目的：采用指数富集的配基系统进化技术（SELEX）筛选获得一组已知和未知肝癌血清肿瘤标志物的适配体,为肝癌的早期诊断提供新的便捷方法。方法：收集50例首次经诊断证实为原发性肝癌的患者血清,以及50例体检无异常的正常人血清,并分别等比例混合制备成肝癌混合血清和正常人混合血清,作为筛选的靶标分子,磁珠作为分离载体。先将磁珠?正常人血清复合物与ssDNA文库结合,取上清再与磁珠?肝癌血清结合,经过洗脱、分离与肝癌血清结合的特异性ssDNA,并进行扩增,链霉亲和素磁珠法制备次级ssDNA,进行9轮筛选,将9轮筛选获得的饱和文库与PMD18?T载体连接进行转化、挑选单克隆送上海生工进行测序,同时利用流式细胞术测定肝癌血清肿瘤标志物适配体的亲和力（Kd值）。结果：经9轮筛选,成功分离出200个核酸序列,其中序列不同的有10个。特异性检测表明,筛选得到的肝癌血清肿瘤标志物适配体与肝癌血清的结合解离常数均在纳摩尔级水平,其中Seq?1、Seq?16、Seq?17、Seq?56、Seq?72号适配体能高特异性结合肝癌血清,与正常人血清不结合,再通过200例肝癌血清和200例正常人血清进一步鉴定5条肝癌血清肿瘤标志物适配体检出肝癌的阳性率,阳性检出率达91%以上。结论：利用随机单链寡核苷酸文库成功获得与肝癌患者血清特异性结合的适配体,所获得的适配体具有拮抗肝癌血清的能力,有可能为肝癌的早期诊断提供新的便捷方法。     

核酸适配体筛选方法研究进展

指数富集的配基数系统进化(SELEX)技术的基本过程是用化学方法合成一个单链寡核苷酸库,将之于与靶标物质混合,寡核苷酸链与靶标物质结合形成复合物,去除未结合的核酸链后,再将结合的核酸分子与靶标物质分离,以此寡核苷酸分子为模板进行PCR扩增,用其产物进行下一个循环的筛选。经过数次循环,即可得到能与靶标物质高亲和力高特异性结合的核酸适配体分子。本文综述了SELEX技术筛选核酸适配体技术的一些研究进展。     

重组 PBP2a 转肽酶区蛋白核酸适配体的筛选及鉴定

目的：筛选和鉴定重组青霉素结合蛋白2a（PBP2a）转肽酶区蛋白的核酸适配体。方法利用指数富集的配体系统进化技术（SELEX）,以重组 PBP2a 转肽酶区蛋白为靶标,从单链 DNA 文库中筛选能与之特异性结合的核酸适配体。筛选产物克隆测序后,对其进行结构分析和特性鉴定。结果经过11轮筛选,单链 DNA 文库与靶标蛋白的亲和力趋向稳定,将第8、10轮筛选产物克隆测序,对获得的40个适配体进行分析,一级结构分析显示40个适配体并无共同的保守序列,二级结构预测分析表明,其可分为3个家族。其中13号适配体与重组 PBP2a 蛋白亲和力最高,并能与之特异性结合。结论利用 SELEX 技术成功筛选出特异性结合重组 PBP2a 转肽酶区蛋白的核酸适配体,为探索耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的诊疗新途径奠定基础。     

高特异性心肌肌钙蛋白I适配体的ePCR技术筛选及其表征

目的筛选出与心肌肌钙蛋白I(cTnI)具有高亲和力和高特异性的核酸适配体,为诊断急性心肌梗死(AMI)提供实验基础。方法采用基于乳液PCR(ePCR)的SELEX技术筛选出能与cTnI特异性结合的3个适配体,并对ePCR条件进行优化,对适配体进行亲和力(Kd值)测定并与市售cTnI抗体进行比较,选出Kd值最小的适配体,进行特异性鉴定。结果SELEX过程中通过优化得到ePCR最佳条件,筛选得到的3个适配体均对cTnI具有较强的亲和力,其Kd值范围为2.04~16.85 nmol/L,其中适配体Apt-1的亲和力最强[Kd为(2.04±0.11) nmol/L]且优于市售抗体,特异性高,敏感性强,不与其他相关蛋白有非特异性结合。结论筛选出的适配体Apt-1能与cTnI产生高亲和力的特异性结合,可进一步用于临床样本中cTnI的检测。     

高特异性心肌肌钙蛋白Ⅰ适配体的ePCR技术筛选及其表征

目的 筛选出与心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)具有高亲和力和高特异性的核酸适配体,为诊断急性心肌梗死(AMI)提供实验基础.方法 采用基于乳液PCR(ePCR)的SELEX技术筛选出能与cTnI特异性结合的3个适配体,并对ePCR条件进行优化,对适配体进行亲和力(Kd值)测定并与市售cTnI抗体进行比较,选出Kd值最小的适配...     

基于EpCAM核酸适配体分子信标的构建及其对胃癌细胞的靶向成像研究

目的 设计并构建靶向上皮细胞黏附分子(EpCAM)的核酸适配体分子信标MAB-SYL3L用于胃癌细胞的靶向识别/成像。方法 根据分子信标探针的设计原则,将靶向EpCAM的核酸适配体SYL3进行适当的截短,构建核酸适配体分子信标MAB-SYL3L。采用流式细胞术对MAB-SYL3L的特异性和亲和性进行分析,并观察不同温度下MAB-SYL3L的结合能力;采用流式细胞术和荧光显微镜对MAB-SYL3L与SGC-7901细胞一步法靶向识别/成像进行分析。结果 构建的MAB-SYL3L与SGC-7901细胞的结合具有高亲和性和高特异性,解离常数为(47.0±3.8)nmol/L。MAB-SYL3L与SGC-7901细胞的结合不受温度的影响,不需洗涤过程便能一步法实现SGC-7901细胞的靶向识别/成像。结论 成功构建出基于EpCAM的核酸适配体分子信标MAB-SYL3L,建立了一种快速、便捷的胃癌细胞靶向识别/成像方法。     

胃癌血清肿瘤标志物的研究进展

胃癌的发病率高、死亡率高,严重威胁人类健康,但其早期诊断率低。胃癌早期筛查和诊断主要依靠有创性的检查,如胃镜和活检,费用比较高,可行性较差。血清肿瘤标志物以其简便、快捷、无痛苦等优点,成为胃癌患者的理想检查指标。本文主要就近期相关肿瘤标志物的研究以及其对胃癌的协助诊断、预后评估做一综述。     

血脂及脂蛋白代谢改变在胃癌中的临床意义

目的 探讨血脂及脂蛋白代谢改变与胃癌临床病理特征和预后的关系.方法 比较山东大学齐鲁医院收治的127例胃癌患者(胃癌组)和100例健康体检者(对照组)的血脂、脂蛋白水平;胃癌组血脂、脂蛋白水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存曲线及COX回归分析其与患者预后的关系.结果 胃癌组的TC、TG、HDL-C、LDL-C水平明显低于对照组(P＜0.05);胃癌患者血脂及脂蛋白水平与临床病理特征有不同程度的相关性;Kaplan-Meier生存分析显示TC、HDL-C与胃癌患者的总生存和无进展生存相关(P＜0.05),COX回归分析提示TC水平、TNM分期、术后辅助化疗是胃癌的独立预后因素.结论 胃癌患者存在脂代谢异常,血脂及脂蛋白水平可能作为进展期胃癌患者病情评估、预后判断的探索性指标.     

胃癌血清TPS的表达及意义

目的探讨血清组织多肽特异性抗原（TPS）检测在胃癌中的意义。方法ELISA方法检测50例胃癌患者（胃癌组）及25例健康体检者（对照组）血清TPS水平。结果胃癌组血清TPS水平明显高于对照组（P〈0．01）;手术前后胃癌患者血清TPS水平差异有非常显著性意义（P〈0．01）;淋巴结转移组与无淋巴结转移组血清TPS水平差异有显著性意义（P〈0．05）。结论血清TPS表达与胃癌发生及淋巴结转移有关。     

胃癌患者血浆可溶性血管内皮细胞生长因子的检测及其意义

目的：应用定量ELISA法检测胃癌患者血浆可溶性血管内皮细胞生长因(VEGF)的水平,并探讨其临床意义。方法：采用定量酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测32例胃癌患者和20例正常对照人群的血浆可溶性VEGF水平。结果：血浆可溶性VEGF水平胃癌患者显著高于正常对照人群,分化程度较差、有区域淋巴结转移和远处转移的胃癌患者显著高于分化程度较好、没有区域淋巴结转移和远处转移的患者。结论：血浆可溶性VEGF浓度对于预测胃癌的侵袭和转移可能具有重要临床意义。     

益气消积方含药血清对人胃癌NKN-28细胞株的作用

目的:研究益气消积方含药血清对人胃癌NKN-28细胞株的作用。方法:以SD大鼠为实验血清的供体,将大鼠血清灭活,以灭活前给药与否及给药剂量分为高、中、低剂量组及空白血清组,以细胞抑制率为观察指标,对实验结果进行分析。结果:4组大鼠血清对NKN-28细胞株生长均有抑制作用,且对NKN-28细胞株生长的抑制作用具有一定的浓度依赖性;实验组各浓度组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:益气消积方含药血清可明显抑制NKN-28细胞株的生长,抑制作用呈一定的浓度依赖性。     

靶向乳腺癌的核酸适配体应用研究进展

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,实现乳腺癌的早期诊断和早期治疗意义重大.核酸适配体是经过指数富集配体系统进化技术(systematic evolution of ligands by exponential enrichment, SELEX)筛选得到的寡核苷酸序列,在肿瘤诊断及治疗方面拥有良好的应用前景.本文对靶向乳腺癌的核酸适配体及适配体作为载体和探针在乳腺癌诊疗中的作用进行综述.     

胃癌相关血清标志物的临床意义及研究进展

胃癌是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一,早期诊断、早期治疗是提高患者生存期及降低病死率的关键。血清肿瘤标志物检测具有无创、标准化等特点,是近年来众多学者研究的热点。该文针对基因与蛋白水平中近期研究较多的4种胃癌相关的血清标志物(E-cadherin、Runx3、hGC-1和VEGF家族的三个亚型)作一综述,并分析其对于诊断早期胃癌、监测病情变化及判断预后的应用价值。     

利用2DE-MS技术筛选和鉴定大肠癌血清标志物

目的 利用2DE-MS技术对大肠癌患者血清和正常人血清蛋白进行比较分析,筛选和鉴定差异蛋白.方法 收集正常人(n=10)和大肠癌患者(n=15)术前血清,进行去除白蛋白和免疫球蛋白及脱盐浓缩预处理,应用2DE-PAGE分离处理后血清蛋白,比较两者的差异蛋白质点,采用MALDI-TOF分析鉴定差异蛋白质.结果 血清经预处理后,可提高样品的上样量,2DE-PAGE图谱的蛋白质点数明显增加,水平条带明显减少.大肠癌患者血清中共筛选2个差异的蛋白点,经质谱鉴定为转甲状腺素蛋白( transthyretin,TTR)和细胞角蛋白1(cytokeratin-1,CK-1).其中TTR在大肠癌患者血清中为低表达,而CK-1为高表达.大肠癌患者血清中TTR含量为(245.87±60.72) mg/L,明显低于大肠腺瘤组和正常血清组[分别为(299.53±67.91)、(311.31±67.01) mg/L,P＜0.01].结论 2DE-MS技术是筛选和鉴定疾病血清标志物的良好工具,TTR可能是大肠癌潜在的血清标志物.