人胃癌裸鼠原位移植高转移模型的建立

目的 为探讨胃恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法 采用显微外科原位移植技术，将人胃癌新鲜组织移植裸鼠胃（黏膜层）壁内，观察原位移植成瘤率，侵袭和转移，及形态学特征（光镜，免疫组化电镜）。结果 从47例胃癌标本中筛选出一株人胃腺癌。裸鼠原位移植高转移模型已传至27代，一株人胃鳞腺癌裸鼠原位移植转移模型，已传至25代和一株人胃鳞癌裸鼠原位移植模型，已传至21代。共移植裸鼠426只。肿瘤的移植生长率为96．5％。自发转移率和液氮冻存复苏成活率均为100％。人胃癌在裸鼠胃壁内自主侵袭性生长，侵袭破坏胃壁各层组织结构，并直接侵袭到邻器官和组织。经血行转移到肝、肺、脾、肾等。淋巴道转移到胃的黏膜和黏膜下淋巴丛。局部及远处淋巴结。多伴发幽门梗阻癌性腹水，卵巢和腹腔内广泛种植转移。具有分泌癌胚抗原CEA的功能。移植瘤对p53、C－erbB-2、rasp21癌基因呈阳性表达，并与肿瘤的生长方式侵袭的深度和淋巴结转移有关。移植瘤细胞病理学，超微结构观察，流式细胞仪DNA含量测定，染色体核型分析，结果表明与人胃癌细胞相似。结论 三株人胃癌裸鼠原位移植高转移模型，完整的模拟了人胃癌患的临床过程，且转移模式与临床患相似。为研究人胃癌转移机制及实验治疗提供了理想的动物模型。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立

目的为探讨胃恶性淋巴瘤的发病机制和治疗方法提供理想的动物模型。方法采用人胃恶性淋巴瘤术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织植入裸小鼠胃黏膜下层,观察原位移植成瘤率,移植瘤的侵袭和转移率,进行形态学、染色体核型和流式细胞分析。结果13例人胃恶性淋巴瘤标本9例移植成功。依据WHO新分类标准,从中筛选出1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型HGBL-9903,1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9904和1株人胃原发性霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9902。免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45和CD79a均阳性。染色体众数范围75~87条,流式细胞分析示DI值1.23~1.47,均为异倍体。3株模型分别传至83代、87代和89代,共移植裸鼠785只;自第3代起肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%。HGBL-9903肝转移率为100%,脾转移率为36.7%,淋巴结转移率为57.6%。人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃壁内自主侵袭性生长,侵袭破坏胃壁各层组织结构。发生血液(肝,脾)转移,淋巴转移和腹腔内种植转移。结论HGBL-9904、HGBL-9903和HGBL-9902三株人胃原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,移植瘤的组织病理学、超微结构、DNA含量测定及染色体核型分析结果与来源人胃恶性淋巴瘤细胞相一致。完整的模拟了人胃恶性淋巴瘤患者的自然临床过程。     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型的建立

目的 建立人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型.方法 采用人原发性胃恶性淋巴瘤术中新鲜瘤组织块植入裸小鼠胃壁黏膜下层,观察原位移植的成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学）、染色体核型和流式细胞分析.结果在裸小鼠体内建成了一株人原发性胃恶性淋巴瘤原位移植高转移模型（HGBL-0305）.移植瘤的组织病理学为原发性胃弥漫性大B细胞淋巴瘤.免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD22、CD79α阳性,CD3、CD7阴性.染色体众数范围56～69条;移植瘤细胞DNA指数为1.47±0.12,均为异倍体.目前该瘤株在裸鼠体内生长4年,已经传至45代,共移植裸鼠156只;肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃内自主侵袭性生长,浸润破坏胃壁各层组织结构.HGBL-0305模型的肝转移率为69.5%,脾转移率为55.6%,淋巴结转移率为45.7%,腹腔种植转移率为30.5%.结论 HGBL-0305模型是成功的人原发性胃恶性淋巴瘤裸鼠原位移植自发性高转移模型,完整地模拟了人原发性胃恶性淋巴瘤患者的自然临床病理过程,为研究原发性胃恶性淋巴瘤发病机制、转移生物学和抗转移治疗提供了理想的动物模型.     

人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立

目的为探讨胃恶性淋巴瘤的发病机制和治疗方法提供理想的动物模型。方法采用人胃恶性淋巴瘤术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织植入裸小鼠胃黏膜下层，观察原位移植成瘤率，移植瘤的侵袭和转移率，进行形态学、染色体核型和流式细胞分析。结果13例人胃恶性淋巴瘤标本9例移植成功。依据WHO新分类标准，从中筛选出1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型HGBL-9903，1株人胃原发性非霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9904和1株人胃原发性霍奇金B细胞恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HGBL-9902。免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45和CD79a均阳性。染色体众数范围75～87条，流式细胞分析示DI值1.23～1.47，均为异倍体。3株模型分别传至83代、87代和89代，共移植裸鼠785只；自第3代起肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100％。HGBL-9903肝转移率为100％，脾转移率为36．7％，淋巴结转移率为57．6％。人胃恶性淋巴瘤在裸鼠胃壁内自主侵袭性生长，侵袭破坏胃壁各层组织结构。发生血液（肝，脾）转移，淋巴转移和腹腔内种植转移。结论HGBL-9904、HGBL-9903和HGBL-9902三株人胃原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型，移植瘤的组织病理学、超微结构、DNA含量测定及染色体核型分析结果与来源人胃恶性淋巴瘤细胞相一致。完整的模拟了人胃恶性淋巴瘤患者的自然临床过程。     

人原发性小肠恶性黑色素瘤裸小鼠原位移植肝转移模型的建立

目的为探讨小肠恶性黑色素瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法将原发性小肠恶性黑色素瘤患者术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织块分别植入裸小鼠的小肠黏膜层，观察原位移植成瘤率，移植瘤的侵袭和肝转移率。进行形态学[光镜、电镜和免疫组织化学（免疫组化）]染色体核型和流式细胞分析。结果人小肠恶性黑色素瘤原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织均获移植成功。建成一株人原发性小肠（原发灶）恶性黑色素瘤裸鼠原位移植模型（HSIM-0501）和一株人原发性小肠（肝转移灶）恶性黑色素瘤裸鼠原位移植肝转移模型（HSIM-0502）。移植瘤组织病理学为高度恶性黑色素瘤；免疫组化显示S-100蛋白；黑色素瘤单克隆抗体45阳性；电镜下瘤细胞质内可见大量黑色素颗粒及黑色素复合体。染色体众数55～59条；流式细胞DNA指数值1．49-1．61；均为异倍体。HSIM-0501和HSIM-0502分别传至25代和27代；共移植裸鼠317只；肿瘤移植成瘤率和液氮冻存复苏成活率均为100％。HSIM-0501肝转移率为46．2％，淋巴结转移率为36．7％；HSIM-0502肝转移率和淋巴结转移率均为100％。移植瘤在裸鼠小肠内自主侵袭生长，发生血液转移、淋巴结转移和腹腔内种植性转移。结论HSIM-0501和HSIM-0502是首次成功建立的人原发性小肠恶性黑色素裸鼠原位移植肝转移模型，可用于小肠恶性黑色素瘤的发病机制、侵袭和转移及抗转移实验治疗的研究。     

人原发性直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性

目的 建立人原发性直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型，探讨其生物学特性。方法 采用人直肠原发性恶性淋巴瘤切除术中的新鲜瘤组织块植入裸鼠的直肠黏膜层内，观察原位移植的成瘤率、移植瘤的侵袭和转移率。进行形态学（光镜、电镜）、免疫组织化学、染色体核型、流式细胞分析。结果 依据WHO新的分类标准，建成1株人直肠原发性（非霍奇金B细胞性）恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HRBL-0305。移植瘤组织病理学为（非霍奇金B细胞性）高度恶性淋巴瘤，免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45阳性，CD3、CD7阴性，染色体56～69条，流式细胞DI值为1．57～1．61，均为异倍体。HRBL-0305已传至31代，共移植裸鼠187只。其肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100％。肝转移率为45．4％，淋巴结和腹腔种植转移率均为38．0％，移植瘤在裸鼠的直肠内自主侵袭性生长，发生血液转移、淋巴转移和腹腔内种植性转移。移植瘤组织病理学、超微结构的观察、流式细胞DNA含量测定及染色体核型的分析，表明与人源直肠恶性淋巴瘤细胞相一致。结论 HRBL-0305是首次建立成功的人直肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型。该模型完整地重现了人直肠原发性恶性淋巴瘤的自然临床病理过程，且转移模式与临床患者相似。为研究直肠恶性淋巴瘤的生物学特性和实验治疗提供了理想动物模型平台。     

人原发性结肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植肝转移模型的建立

目的 为探讨结肠恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法将结肠恶性淋巴瘤术中原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织块植入裸小鼠结肠黏膜层内，观察原位移植的成瘤率，移植瘤的侵袭和转移率。进行形态学（光镜、电镜、免疫组织化学）、染色体核型和流式细胞分析。结果人结肠淋巴瘤原发灶和肝转移灶新鲜瘤组织均获得移植成功。依据WHO新的分类标准，建成1株人结肠原发性（原发灶）非霍奇金B细胞性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型（HCBL-0303）和1株人结肠原发性（肝转移灶）非霍奇金B细胞性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植肝转移模型（HCBL-0304）。移植瘤组织病理学为（非霍奇金B细胞性）高度恶性淋巴瘤；免疫组化显示CDl9、CD20、CD22阳性，CD3、CD7阴性。染色体数目55—59条；流式细胞DI值1．59—1．71，均为异倍体。HCBL-0303肝转移率为63．7％，淋巴结转移率为56．4％；HCBL-0304肝转移率和淋巴结转移率为100％。移植瘤在裸鼠结肠内自主侵袭性生长，发生血液转移、淋巴转移和腹腔内种植性转移。结论HCBL-0303和HCBL-0304是首次成功建立的人结肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植自发性肝转移模型，可用于结肠恶性淋巴瘤的发病机制、侵袭、转移及实验治疗的研究。     

人小肠原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位和皮下移植高转移模型的建立

目的为探讨小肠恶性淋巴瘤的发病机制和实验治疗提供理想的动物模型。方法将人小肠恶性淋巴瘤术中原发灶新鲜组织块和肝转移灶瘤组织分别移植于裸小鼠的小肠黏膜层内和肩胛间皮下,观察原位移植和皮下移植的成瘤率、移植瘤的侵袭和转移率;进行形态学、染色体核型和流式细胞分析。结果5例人小肠恶性淋巴瘤标本3例移植成功。从中筛选出1株同一人体瘤源人小肠原发性(非霍奇金B细胞性)恶性淋巴瘤裸鼠原位移植高转移模型(HSIL-0101)和皮下移植高转移模型(HSIL-0102)。移植瘤病理组织学为非霍奇金(大B细胞性)高度恶性淋巴瘤;免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45阳性,CD3、CD7阴性。染色体众数范围55～59条;流式细胞分析示DI值1.47～1.61,均为异倍体。HSIL-0101和HSIL-0102分别传至32和38代;共移植裸鼠357只;肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%。HSIL-0101肝和淋巴结转移率为100%;HSIL-0102肝转移率为63.5%,淋巴结转移率为62.7%。移植瘤在裸鼠的小肠内和皮下侵袭性生长,发生血液(肝、脾)转移、淋巴转移和腹腔内种植性转移。结论HSIL-0101和HSIL-0102是首次建立成功的人小肠恶性淋巴瘤裸鼠原位移植和皮下移植均出现自发性高转移模型,可用于小肠恶性淋巴瘤的发病机制、侵袭和转移及实验治疗的研究。     

人原发性直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性

目的建立人原发性直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型,探讨其生物学特性。方法采用人直肠原发性恶性淋巴瘤切除术中的新鲜瘤组织块植入裸鼠的直肠黏膜层内,观察原位移植的成瘤率、移植瘤的侵袭和转移率。进行形态学(光镜、电镜)、免疫组织化学、染色体核型、流式细胞分析。结果依据WHO新的分类标准,建成1株人直肠原发性(非霍奇金B细胞性)恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型HRBL-0305。移植瘤组织病理学为(非霍奇金B细胞性)高度恶性淋巴瘤,免疫组织化学示CD19、CD20、CD22、CD45阳性,CD3、CD7阴性,染色体56~69条,流式细胞DI值为1.57~1.61,均为异倍体。HRBL-0305已传至31代,共移植裸鼠187只。其肿瘤移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%。肝转移率为45.4%,淋巴结和腹腔种植转移率均为38.0%,移植瘤在裸鼠的直肠内自主侵袭性生长,发生血液转移、淋巴转移和腹腔内种植性转移。移植瘤组织病理学、超微结构的观察、流式细胞DNA含量测定及染色体核型的分析,表明与人源直肠恶性淋巴瘤细胞相一致。结论HRBL-0305是首次建立成功的人直肠原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型。该模型完整地重现了人直肠原发性恶性淋巴瘤的自然临床病理过程,且转移模式与临床患者相似。为研究直肠恶性淋巴瘤的生物学特性和实验治疗提供了理想动物模型平台。     

人结肠鳞癌直肠鳞腺癌SCID鼠原位移植高转移模型的建立及其生物学特性的研究

目的 建立人结肠鳞癌直肠鳞腺癌SCID鼠原位移植高转移模型,为探讨理想的治疗结肠癌肝转移和预防结肠癌根治术后肝转移的方法提供实验工具。方法 采用组织学完整的结肠癌手术标本植入SCID鼠结直肠（粘膜层）壁内,观察原位移植的成瘤、移植瘤的侵袭和转移及其形态学特征（光镜、电镜、免疫组织化学）。结果 两株人结肠癌SCID鼠均获原位移植成功。人结肠鳞癌SCID鼠原位移植模型HCS-HMN-1已传至19代,人直肠鳞癌SCID鼠原位移植模型HRSA-HMN-2已传至23代,共移植SCID鼠223只,其移植生长率和自发转移率及液氮冻存复苏成活率均为100％,移植瘤在结直肠内呈广泛原位侵袭性生长、淋巴结转移、肝转移和全腹腔播散转移。并具有分泌CEA的功能。移植瘤细胞病理学和电镜观察、流式细胞仪DNA含量检测及染色体核型分析与瘤源人结直肠癌细胞完全一致。结论 本研究所建立的两株人结直肠癌SCID鼠高转移模型完整地模拟了人结直肠癌侵袭和转移的临床过程。为进一步研究结直肠癌肝转移、治疗和预防结直肠癌根治术后肝转移的方法提供了理想的实验动物模型。     

胃癌淋巴管生成与淋巴结转移的关系

目的:研究胃癌淋巴管生成与淋巴结转移的关系。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和血管内皮生长因子受体-3(VEGFR-3)mRNA及其蛋白在5株胃癌细胞株和3对伴有淋巴结转移的胃癌组织及相应的正常黏膜中的表达。此外,还应用免疫组织化学方法检测86例胃癌标本的淋巴管密度(LVD)和VEGF-C蛋白的表达。结果:VEGF-C mRNA和蛋白高表达于3株胃癌细胞,而VEGFR-3 mRNA和蛋白在上述3个细胞株中均呈弱表达。VEGF-C和VEGFR-3 mRNA均表达于3对伴有淋巴结转移的胃癌和相应的正常黏膜组织中,但在正常组织中的表达水平低于肿瘤组织。VEGF-C蛋白在66.3%(57/86)的病例中呈阳性表达。在伴淋巴结转移的胃癌中,VEGF-C表达较无淋巴结转移者更显著(P<0.001),其表达与淋巴管浸润(P<0.001)和TNM分期(P<0.01)均密切相关,但与病人的年龄和性别、肿瘤大小、位置、组织学类型、浸润深度及远处转移均无明显相关。LVD则与VEGF-C蛋白表达(P<0.001)、淋巴结转移(P<0.01)、淋巴管浸润(P<0.01)、TNM分期(P<0.05)及组织学类型(P<0.05)密切相关,但与病人的年龄和性别、肿瘤大小、位置、浸润深度及远处转移无明显相关。结论:在胃癌中,VEGF-C可能通过VEGFR-3信号通道促进淋巴管生成,从而增加胃癌淋巴结转移率。因此,肿瘤淋巴管生成可能成为治疗胃癌的一个新靶点。     

胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型的建立

目的建立胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型并观察淋巴引流情况。方法应用我们前期建立的肝门部胆管癌细胞系QBC939,行裸鼠背部皮下接种,建立高转移特性胆管癌裸鼠皮下种植瘤模型,然后将高转移性种植瘤组织接种于裸鼠肝门部胆管与门静脉间组织间隙紧贴胆管处,4周及6周后行种植瘤瘤组织解剖学和病理学检查,并观察淋巴管引流情况。结果模型建立过程中,胆管癌细胞系QBC939细胞裸鼠皮下接种成瘤率为100%(10/10);原位种植4周后,肝门部胆管原位种植瘤成瘤率为100%(10/10),原位种植6周后,合并发生肝脏转移及腹腔淋巴结转移为80%(8/10)。结论成功建立了胆管癌细胞系QBC939裸鼠肝门部胆管原位种植瘤模型。     

Lymph node and pulmonary metastases after transplantation of oral squamous cell carcinoma cell line (HSC-3) into the subcutaneous tissue of nude mouse: detection of metastases by genetic methods using beta-globin and mutant p53 genes.

We attempted to establish an in vivo experimental model of metastasis of oral caner. The HSC-3 cell line, originating from human oral squamous cell carcinoma, was transplanted into nude mice, and metastases to the lymph node and the lung were investigated using genetic analysis. The HSC-3 cells, transplanted subcutaneously into the lateral back of nude mice, and punctured repeatedly after cyst formation, could metastasize to the lymph node and the lung. Genetic analysis using human beta-globin gene demonstrated that the frequency of metastasis to the lymph node and the lung at 12 weeks after the transplantation was 45% and 40%, respectively. Mutant allele-specific amplification of p53 gene could also detect micrometastasis with almost equal sensitivity of polymerase chain reaction with beta-globin gene. Subcutaneous transplantation is easy with excellent reproducibility compared with intravenous or orthotopic transplantation, and we think that this experimental model can be one of standard models of cancer metastasis.     

VEGF-C和MMP-7的表达与胃癌侵袭转移的关系

目的 探讨胃癌中血管内皮生长因子C（VEGF-C）和基质金属蛋白酶7（MMP-7）的表达及两者与胃癌侵袭和淋巴结转移的关系。方法 采用SP免疫组化技术，分别检测60例胃癌组织、癌旁组织及30例癌周区域淋巴结中VEGF-C及MMP-7的表达水平。结果 VEGF-C和MMP-7在胃癌组织中的阳性表达率明显高于正常胃黏膜及癌旁组织；在区域淋巴结癌转移组中的阳性表达率明显高于无癌转移组（P〈0．01）；伴有淋巴结转移的胃癌组织中VEGF-C，MMP-7的阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P〈0．05）；VEGF-C，MMP-7表达与淋巴结转移、淋巴管侵犯、浸润深度、TNM分期有密切关系（P〈0．05）。结论 VEGF-C和MMP-7在胃癌中的高表达与胃癌浸润侵袭程度、淋巴结转移有密切关系。     

促肝细胞再生磷酸酶3基因在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶3(PRL-3)蛋白与胃癌的侵袭转移及预后的关系。方法采用免疫组化方法检测121例胃癌原发灶和95例淋巴结转移灶中PRL-3的表达,分析其表达水平与临床病理资料的关系及其对胃癌预后的影响。结果PRL-3在胃癌原发灶中表达的阳性率为71.9%,其中伴淋巴结转移原发灶的表达率(77.9%)明显高于无淋巴结转移的原发灶者(50.0%),两者之间差异有统计学意义(P=0.005);淋巴结转移灶中PRL-3的表达率(91.6%)明显高于原发灶(77.9%),两者之间差异有统计学意义(P=0.009)。另外,PRL-3的表达与胃癌的淋巴管侵犯、淋巴结转移程度、TNM分期密切相关,并且与患者的预后呈负相关。结论PRL-3与胃癌的浸润转移密切相关,与患者的预后相关。