双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究

目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag)。方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的最佳实验条件。对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性。结果10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为最佳工作浓度。利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%~87.2%,特异性为100%。结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点。     

广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠保护性免疫的研究

目的 探讨广州管圆线虫成虫可溶性抗原诱导小鼠的保护性免疫,为广州管圆线虫病的免疫预防研究提供科学依据。方法 以广州管圆线虫成虫可溶性抗原隔周腹腔注射免疫小鼠1次,共3次,末次免疫1w后,用300条广州管圆线虫第三期幼虫感染每鼠,攻击感染4w后解剖每鼠检获虫体,计算减虫率,并观察、测量检获虫体形态、大小。此外,还检测了小鼠体内血清特异性抗体IgG和血液嗜酸性粒细胞含量。结果 免疫组小鼠与对照组比较,有极显著的减虫效果（P＜0．01）,800μg、400μg和200μg免疫原组小鼠的减虫率分别是44．0％、42．6％和18．7％。免疫组小鼠体内检获的虫体比对照组要少。免疫组小鼠血清抗体水平及血液嗜酸性粒细胞绝对值均高于对照组（P＜0．01）。结论 广州管圆线虫成虫可溶性抗原可诱导小鼠产生保护性免疫。     

ELISA法检测广州管圆线虫感染实验大鼠血清抗体

目的 探讨ＥＬＩＳＡ法检测广州管圆线虫血清抗体的可行性,从而为广州管圆线虫病的免疫诊断提供实验依据。方法 用雌性成虫粗抗原作ＥＬＩＳＡ检测不同时期实验大鼠血甭工选用四种对照血清,以比较该法的特异性。结果 大鼠血清抗体在感染后２０ｄ适宜检测,４０ｄ左右达最高峰,８０ｄ仍维持阳性检测水平。ＥＬＩＳＡ法对旋毛虫抗体阳性血清、犬弓蛔ＥＬＩＳＡ法用于检测广州圆线虫血清具有较高的敏感性和特异性。大鼠血清抗体的     

广州管圆线虫成虫cDNA文库抗原基因的筛选

目的从广州管圆线虫成虫cDNA文库中筛选特异性抗原基因。方法用大鼠感染血清做免疫探针,筛选广州管圆线虫成虫cDNA文库,对筛选得到的阳性克隆作交叉反应试验,PCR扩增外源基因插入片段并测序,用在线生物信息学软件进行同源性比对,推导氨基酸序列和蛋白质结构及进行功能分析。结果获得15个阳性克隆,分属三种基因,1个属中间纤维(IF)家族基因,3个与旋盘尾丝虫和秀丽杆线虫的真皮抗原同源,11个属主要精原蛋白(MSP)家族基因。其中1种基因表达产物没有发生明显交叉反应。结论从广州管圆线虫成虫cDNA文库中初步筛选出1个潜在特异性抗原基因和1个可能的主要抗原基因。     

广州管圆线虫成虫cDNA文库构建

目的　构建广州管圆线虫成虫cDNA文库。方法　提取广州管圆线虫成虫总RNA ,用Clontech公司SMARTTMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA ,然后通过长距离PCR方法合成双链cDNA并扩增 ;PCR产物与λTripIE× 2载体连接并包装 ,建成未扩增文库 ;检测未扩增文库滴度和重组效率后 ,进行文库扩增及测定扩增文库的滴度。结果　经测定 ,未扩增文库滴度为 9 7× 1 0 6 pfu/ml,重组效率达 99 2 %以上 ,文库扩增后滴度达 9 1 3× 1 0 9pfu/ml。结论　已成功构建了广州管圆线虫成虫cDNA文库     

不同发育阶段广州管圆线虫的抗原分析

目的 分析不同发育阶段广州管圆线虫抗原差异 ,筛选优势诊断抗原分子。　方法　对不同发育阶段的广州管圆线虫的虫体蛋白进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和免疫印迹分析。结果　不同发育阶段的虫体蛋白质谱大致相同 ,SDS PAGE中出现的少数差异带在免疫印迹试验(Westernblotting)中无明显差异。各期虫体抗原相对分子质量为Mr 40 000、50 000、 66 000和 80 000的 ,与感染大鼠和正常大鼠血清均出现反应条带。 2～3周幼虫Mr 104 000与 2周感染血清出现明显反应条带。雌虫Mr 33 000及所有虫体的Mr 32 000抗原与感染后 2周血清出现反应条带 ,与感染 3周～5月的大鼠血清均出现明显反应 ,与正常大鼠血清均无明显反应。　结论　Mr 40 000、50 000、66 000和80 000抗原可能在以虫体粗抗原作探针的免疫诊断中引起非特异性反应。幼虫Mr 104 000、雌虫Mr 33 000和所有虫体的Mr 32 000可作为广州管圆线虫病早期诊断和流行病学调查的候选抗原分子。     

甲苯咪唑杀广州管圆线虫成虫的效果观察

目的观察甲苯咪唑对广州管圆线虫成虫的杀灭效果。方法用广州管圆线虫感染大鼠70d后，将其分为3组：1）甲苯咪唑组：用灌胃的方法给予甲苯咪唑50mg／kg，1次／d，连续2d；2）吡喹酮＋甲苯咪唑组：第1d灌服吡喹酮1次，剂量为300mg／kg；第4d和第5d灌服甲苯咪唑，给药剂量和次数同甲苯咪唑组；3）对照组：灌胃生理盐水。给药结束后第6d分别剖杀实验大鼠，分离、记数、观察广州管圃线虫成虫。结果甲苯咪唑组的减虫率为28．32％，虫荷数与对照组比较差异有显著性（P=0．0445）；吡喹酮＋甲苯咪唑组与甲苯咪唑组比较，减虫率差异无显著性（P=0．999）。结论甲苯咪唑对广州管圆线虫成虫有效，但杀灭效果较差。吡喹酮和甲苯咪唑联用对广州管圆线虫成虫无明显协同杀灭效应。     

广州管圆线虫性脊髓炎一例

患者 ,男性 ,19岁 ,浙江诸暨人。因剧烈头痛 7天 ,右上肢麻木、双下肢无力 3天于 2 0 0 1年 5月 11日入院。患者 4月前始在贵州打工 ,2 0 0 1年 5月 4日出现持续性剧烈头痛 ,无呕吐。4天后出现右前臂麻木 ,双下肢乏力至无力 ,伴大小便失禁。发病以来无明显发热 ,否认传染病接触与重大疾病史。贵州打工期间有食螺史 ,种型不详。体格检查 :神清 ,全身皮肤无结节、出血点 ,眼底、胸腹部无异常 ;右上肢轻瘫试验阳性、肌力Ⅳ级 ,双下肢肌力 0级 ;双侧颈 7以下感觉减退 ,下肢痛觉过敏 ,右侧肱二、三头肌腱反射 ( +) ,双侧巴氏征 ( +)、克氏征 ( -)…     

广州管圆线虫致病机制的研究进展

广州管圆线虫是一种人兽共患寄生虫，幼虫侵入人体后可移至大脑，主要引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜脑炎。其发病为幼虫移行，幼虫在颅部占位并释放代谢产物，基质金属蛋白酶与纤溶酶原活化因子的产生，嗜酸性粒细胞对神经细胞的毒害及超敏反应等多因素作用的结果。偶尔该虫也可侵犯眼球，眼球病变主要是免疫反应导致的损害。了解广州管圆线虫的发病机制，对该病的防治和诊断具有重要意义。     

广州管圆线虫及广州管圆线虫病研究概况——对PubMed中相关文献的分析

广州管圆线虫是一种寄生于鼠肺动脉系统的蠕虫,人类是其非正常宿主,因生食含有广州管圆线虫III期幼虫的螺肉而感染。幼虫侵入人体后,进入中枢神经系统可引起嗜酸性粒细胞增高性脑膜炎、嗜酸性粒细胞增高性脑炎或眼部广州管圆线虫病。本综述通过对PubMed中有关广州管圆线虫及广州管圆线虫病的文献进行检索,着重分析了近10年来有关广州管圆线虫及广州管圆线虫病的研究概况,对广州管圆线虫病原学、致病机制、诊断技术、治疗药物及方案、流行病学和预防等方面进行了阐述。     

一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因的克隆与表达

目的用免疫探针交叉筛选前期实验获得的广州管圆线虫候选抗原基因，将筛选出的特异抗原候选基因进行原核表达、鉴定。方法制备抗血吸虫和抗旋毛虫多克隆抗体血清，交叉筛选广州管圆线虫抗原候选基因，从中获得特异性抗原候选基因，将其从重组噬茵体状态转化为质粒状态，再亚克隆入原核表达载体pET-30a—c（＋）进行融合表达，SDS-PAGE鉴定表达产物，同时对该基因进行生物信患学分析。结果获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因，经生物信患学分析该抗原基因属中问纤维家族基因（intermediate filament，IF），原核表达产物为48KDa。结论获得了一个广州管圆线虫特异性抗原候选基因及其原核表达产物。     

3例广州管圆线虫病患儿死亡的原因

目的　报告 3例广州管圆线虫病婴幼儿死亡的病因。为诊治该病提出建议。方法　根据临床症状、病理组织学的检查和有关资料复习及分析。结果与结论　 3例广州管圆线虫病患儿均为临床上误诊、误治和延误救治时机而死亡。及早检查脑脊液、气管冲洗液和粪便等查幼虫和及时治疗有可能挽救患儿。     

云南省广州管圆线虫病流行现状概述

整理分析1980年以来云南省有关广州管圆线虫病的文献资料,从广州管圆线虫的自然疫源地、中间宿主、终宿主以及人群发病等几个方面对云南省广州管圆线虫病的流行现状进行综述,为今后广州管圆线虫病的防治提供线索和依据。     

Presence of Angiostrongylus cantonensis in Haiti

In the West Indies Angiostrongylus cantonensis was found first in Cuba in 1973, then in Puerto Rico (1986), in the Dominican Republic (1992) and recently in Jamaica (2002). Concurrently, the presence of the parasite was detected in the Bahamas and in New Orleans (LA, USA) in 1990. To assess the occurrence of A. cantonensis in Haiti, we investigated a number of rats in Port-au-Prince in 2002. Preliminary results among 23 captured and examined rats show that 75% (three of four) Rattus norvegicus and 21% (four of 19) R. rattus harboured A. cantonensis in their cardiopulmonary systems. Haiti is, for the first time, recognized as a new enzootic area for A. cantonensis in the Caribbean. This emerging zoonosis should be considered as a new public health hazard in Haiti.     

细粒棘球绦虫成虫的单克隆抗体制备

为建立抗细粒棘球绦虫成虫的单克隆抗体细胞株，采用经口感染狗肠壁上寄生的成虫制备抗原免疫BALB／c小鼠脾细胞与骨髓瘤sp2／0进行细胞融合。结果显示经筛选克隆后建立了一株分泌抗成虫单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2G5E8F4E4。腹水的抗体效价为1：12800。初步建立了分泌抗细粒棘球绦虫成虫的单克隆抗体杂交瘤细胞株。