几丁糖影响瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的机制

目的:探讨几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的作用及机制,为临床应用几丁糖治疗瘢痕疙瘩提供理论基础。方法:以瘢痕疙瘩成纤维细胞为研究对象,正常皮肤成纤维细胞为对照,观察不同含量几丁糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成分泌胶原量及其相应I型前胶原mRNA量的变化。结果:几丁糖作用后各组3H-脯氨酸掺入量均逐减少;瘢痕疙瘩组与正常皮肤组的减少率差别显著(χ2=11.3,P<0.05)。其相应I型前胶原mRNA量显著下降。结论:丁糖可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞合成及分泌胶原的功能,有望在异常瘢痕的防治中发挥重要作用。     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成的影响

背景：近期研究提示姜黄素可能是一种抗纤维化制剂。目的：以瘢痕疙瘩成纤维细胞为靶细胞，观察不同浓度姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞合成胶原的影响。设计、时间及地点：随机对照实验，于2006-10／2007—11在懈放军第四军医大学西京医院烧伤与皮肤外科完成。材料：瘢痕疙瘩患者的手术标本5份，患者均知情同意。治疗方案经医院医学伦理委员会批准。姜黄素为美国Sigma公司产品。方法：瘢痕疙瘩成纤维细胞体外原代培养，待细胞融合后传代，取第3-6代对数生长期的成纤维细胞用于实验。将不同浓度姜黄素（5，10，20μmol／L）分别对瘢痕疙瘩成纤维细胞干预24～48h，以空白组做对照。主要观察指标：蛋白免疫印迹检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后结缔组织生长因子的表达。荧光定量聚合酶链反应检测姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子基因的表达。结果：①姜黄素作用瘢痕疙瘩成纤维细胞48h后，结缔组织生长因子蛋白的表达减少，均低于对照组（P〈0.01）。②与对照组相比，不同浓度姜黄素干预组Ⅰ、Ⅲ型前胶原及结缔组织生长因子表达均降低（P〈0．01），并且Ⅰ型前胶原表达随着药物浓度的增加，有逐渐降低的趋势，成明显的量效关系。姜黄素20μmol／L组Ⅲ型前胶原表达低于姜黄素10μmol／L组，但差异无显著性意义（P〉O．05），姜黄素10μmol／L组结缔组织生长因子表达低于姜黄素5μmol／L组，但差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：姜黄素对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用，其作用机制可能与姜黄素抑制结缔组织生长因子在瘢痕疙瘩成纤维细胞的表达有关。     

丹参对增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响及其机制研究

目的：研究丹参对增生性瘢痕成纤维细胞(fibroblast，FB)胶原合成的影响并探讨其发生机制，为增生性瘢痕的中药治疗提供理论依据。方法：体外培养增生性瘢痕组织的FB，用DMEM及含丹参0．1，0．25,0．5，1．0，2．5，5．0g／L的DMEM培养液培养48h后，通过3H-脯氨酸掺入法检测FB胶原合成，反转录聚合酶链反应(reverse tranacript polymerase chain reaction，RT-PCR)检测Ⅰ型前胶原mRNA水平，流式细胞仪行FB计数，PCNA免疫组织化学染色法检测FB增殖状况。结果：与对照组比较，丹参6个剂量组对FB胶原合成均有一定影响，其中0．25g／L以上剂量组显著抑制FB的胶原合成(t=3．579～5．486，P&;lt;0．01)；0．1g／L以上剂量组FB的Ⅰ型前胶原mRNA水平受到了显著影响，低于正常水平(t=3．247～6．324，P&;lt;0．01)；0．25g／L以上剂量组流式细胞仪细胞计数显示FB数量显著减少(t=3．785～6．478，P&;lt;0．01)，PCNA阳性率显著降低(t=3．652～6．117，P&;lt;0．01)。结论：0．25g／L以上剂量组丹参能显著抑制增生性瘢痕FB的胶原合成能力，其抑制胶原合成与丹参作用后FB数量减少、FB细胞增殖率降低有关。     

几丁糖对不同来源成纤维细胞分泌细胞因子的影响

目的 观察几丁糖对增生性瘢痕和瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，白细胞介素8(IL-8)的影响，探讨几丁糖对异常瘢痕成纤维细胞生物学活性的作用。方法 以瘢痕疙瘩及增生性瘢痕成纤维细胞为研究对象，正常皮肤成纤维细胞为对照，用组织块法进行不同标本成纤维细胞体外培养。用定量酶联检测试剂盒测定TGF-β1、bFGF、IL-8等。结果 几丁糖对不同来源成纤维细胞分泌TGF-β1、bFGF、IL-8的能力作用不同。不同含量几丁糖作用后,TGF-β1、bFGF分泌量逐渐减少，IL-8分泌量逐渐增加。无几丁糖和相同含量下，TGF-β1、bFGF分泌量，瘢痕疙瘩组与增生性瘢痕组无显著差别(t=0．7，P&;gt;0．05)，两组与正常皮肤组差别显著(t=2．8，P&;lt;0．05)，3组的减少率无显著差异(t=0．5，P&;gt;0．05)。IL-8的分泌量，无几丁糖时3组无显著差异(t=1．2，P&;gt;0．05)；不同含量几丁糖作用下，IL-8分泌量逐渐增加率无显著差异(t=0．8，P&;gt;0．05)。结论 几丁糖可抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞分泌TGF-β1、bFGF，促进其分泌IL-8，进而调节成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌胶原的功能。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast，FB)作用的机制。方法：实验于2000-01／2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞，采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响，采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecell nuclear antigen，PCNA)的表达，采用流式细胞仪对异硫氰荧光素一连接素V／碘化丙啶双染情况(FITC-Armexin V／PI)检测细胞凋亡率。结果：苦参碱在O．10-10g／L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用；增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱；FTTC-Armexin V／P1示苦参碱组的凋亡率为40．7，对照组为1．6(P＜O．01)。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法对所取新鲜组织标本进行细胞培养,设计P53基因外显子4,5,6的引物序列,从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA,采用PCR技术对所需基因片段进行扩增,并对目的基因进行测序。结果对PCR产物DNA序列分析后发现,所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞(6/6)均存在P53外显子4的基因突变,有2例(2/6)P53外显子5存在基因突变,表现为点突变及移码突变,而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变,这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

常山酮对人瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的：探索常山酮以体外培养的人成纤维细胞胶原合成和生物学行为的影响。方法：于2003-03／06在重庆医科大学附属第一医院，采用人瘢痕体外培养的成纤维细胞，分别将不同浓度的常山酮加入培养基中，在不同时相点观察常山酮对成纤维细胞生物学特性的影响．并应用放射免疫法检测Ⅰ，Ⅲ型胶原含量。结果：常山酮在0．1～10mg／L．对成纤维细胞的形态和增殖活性均未见明显影响；常山酮可抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原，且随浓度增加作用增强．但不影响Ⅲ型胶原的合成。结论：常山酮可抑制人瘢痕成纤维细胞的Ⅰ型胶原合成，对瘢痕的预防和治疗有实用前景。     

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的:观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:与空白对照组相比,三七总甙含量在0.5,1.0和1.5g/L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P<0.01),但在1.5g/L时对细胞具有毒性作用。结论:三七总甙具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞(fibroblast,FB)作用的机制。方法:实验于2000-01/2004-06在武装警察部队总医院烧伤整形科实验室完成。将苦参碱以不同浓度梯度作用于体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞,采用四唑盐比色法检测苦参碱对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响,采用免疫组织化学检测增殖性细胞核抗原(proliferativecellnuclearantigen,PCNA)的表达,采用流式细胞仪对异硫氰荧光素-连接素V/碘化丙啶双染情况(FITC-AnnexinⅤ/PI)检测细胞凋亡率。结果:苦参碱在0.10～10g/L对人瘢痕疙瘩成纤维细胞呈剂量依赖性增殖抑制作用;增殖性细胞核抗原经苦参碱作用后表达明显减弱;FITC-AnnexinⅤ/PI示苦参碱组的凋亡率为40.7,对照组为1.6(P<0.01)。结论:苦参碱在体外能明显抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖活性,并促进其凋亡。     

瘢痕疙瘩成纤维细胞P53基因突变检测

目的：探讨瘢痕疙瘩体外培养成纤维细胞是否存在P53基因突变及形成发展机制。方法：对所取新鲜组织标本进行细胞培养，设计P53基因外显子4，5，6的引物序列，从所培养各组成纤维细胞中提取细胞总DNA，采用PCR技术对所需基因片段进行扩增，并对目的的基因进行测序。结果：对PCR产物DNA序列分析后发现，所有体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞（6／6）均存在P53外显子4的基因突变，有2例（2／6）P53外显子5存在基因突变，表现为点突变及移码突变，而正常皮肤成纤维细胞则未发现有任何形式的基因突变。结论：瘢痕疙瘩成纤维细胞存在P53基因突变，这可引起其细胞增殖凋亡异常。     

三七总甙对人瘢痕疙瘩成纤维细胞的作用

目的：观察三七总甙对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用，以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法：体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞，分别应用噻唑蓝(MTT)比色法和H^3-脯氨酸掺入法检测三七总甙作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果：与空白对照组相比，三七总甙含量在0．5，1．0和1．5g／L时均能够显著抑制成纤维细胞增殖及胶原合成(P&;lt;0．01)，但在1．5g／L时对细胞具有毒性作用。结论：三七总甙具有体外抗纤维化作用，可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

常山酮对人瘢痕成纤维细胞Ⅰ型胶原合成的影响

目的:探索常山酮对体外培养的人成纤维细胞胶原合成和生物学行为的影响。方法:于2003-03/06在重庆医科大学附属第一医院,采用人瘢痕体外培养的成纤维细胞,分别将不同浓度的常山酮加入培养基中,在不同时相点观察常山酮对成纤维细胞生物学特性的影响,并应用放射免疫法检测Ⅰ,Ⅲ型胶原含量。结果:常山酮在0.1～10mg/L,对成纤维细胞的形态和增殖活性均未见明显影响;常山酮可抑制成纤维细胞合成Ⅰ型胶原,且随浓度增加作用增强,但不影响Ⅲ型胶原的合成。结论:常山酮可抑制人瘢痕成纤维细胞的Ⅰ型胶原合成,对瘢痕的预防和治疗有实用前景。     

苏拉明对瘢痕疙瘩成纤维细胞生物学特性的影响

目的探讨苏拉明（suramin）对立体培养条件下瘢痕疙瘩成纤维细胞（KFb）的药物学作用。方法建立以人纤维蛋白原为支架的KFb三维培养系统,分别通过测定细胞的生长曲线。细胞的胶原合成量及I型前胶原mRNA的表达情况来观察苏拉明对KFb影响及其与转化生长因子(TGF－β1)的相互作用。结果苏拉明对KFb的生长及胶原合成均有抑制作用,且能明显抑制TGF－β1对KFb胶原合成的诱导作用。结论苏拉明能明显抑制KFb的生物学功能且对TGF－β1有明显的拮抗作用,这可能使其成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物之一。     

几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：增生性瘢痕的成因来源于成纤维细胞的生物学特性异常，观察几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响。 方法：正常皮肤、增生性瘢痕各3例，供者均系第二军医大学长海医院整形科门诊患者，均知情同意。以增生性瘢痕成纤维细胞为观察对象，正常皮肤成纤维细胞为对照，用组织块法进行不同标本成纤维细胞体外培养。根据成纤维细胞来源不同，分为正常皮肤，增生性瘢痕2组，每组再按添加几丁糖的浓度不同，分为0，0，1，0．2，0．4，0．8，1．6，2．4，4．8r,／L8组。四唑盐比色检测几丁糖对两组成纤维细胞生长增殖的影响（吸光度值变化率）；光镜与透射电镜观察几丁糖对两组成纤维细胞的形态结构的影响；^3H-脯氨酸掺人法检测几丁糖对两组成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响。 结果：①几丁糖对两组成纤维细胞生长增殖的影响：几丁糖能减少增生性瘢痕成纤维细胞的吸光度值；几丁糖的浓度和吸光度值改变之间存在剂量一效应关系。相同条件下增生性瘢痕组的成纤维细胞的吸光度值大于正常皮肤组（P〈0．05）；几丁糖对2组吸光度值变化率影响无显著差异（P〉0．05）。②几丁糖对两组成纤维细胞形态结构的影响：光学显微镜下，各组细胞均呈梭型，胞体较大，界限清楚，呈放射状行走。两组无明显细胞形态区别。透射电镜下，随几丁糖浓度增加，细胞内胶原，核糖体，高尔基体等减少，线粒体脊低、少。细胞功能明显受抑制，凋亡细胞增加，两组细胞形态上差异不明显。③几丁糖对两组成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响：随几丁糖质量浓度的增加，各组^3H-脯氨酸掺人量均逐渐减少；几丁糖相同浓度下增生性瘢痕组与正常皮肤组有非常显著性差异（P〈0．01）。增生性瘢痕组的减少率与正常皮肤组的减少率有显著性差异（P〈0．05）。 结论：几丁糖可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌功能，有望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用。     

辣椒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力和胶原合成的影响

目的：探讨辣椒素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力和胶原合成的影响，以期为辣椒素在瘢痕防治的临床应用方面提供实验依据。方法：取增生性瘢痕10例，采用组织块培养法获得原代成纤维细胞。选用4代细胞为实验模型，将辣椒素(2～100mg／L)加入细胞培养体系中进行干预并与对照组比较，用^3H-TdR和^3H-脯氨酸参入法分别检测成纤维细胞增殖能力和胶原合成水平的变化。结果：辣椒素对成纤维细胞的作用表现为剂量和时间依赖性。高含量的辣椒素(&;gt;50mg／L)对成纤维细胞有直接的损伤作用。作用24h后可导致细胞死亡；2和10mg／L低含量的辣椒素在不杀伤细胞的同时，能够显著抑制增生性瘢痕成纤维细胞^3H-TdR和^3H-脯氨酸参入，仅为未用药组的50％和30％。结论：辣椒素可以导致培养的增生性成纤维细胞功能发生明显改变，细胞增殖能力和胶原合成能力受到显著抑制。结合同期临床观察表明，辣椒素在瘢痕防治的临床应用方面具有潜在的价值。     

Saad4反义寡核苷酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖的影响

目的 了解Smad4反义寡核甘酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长增殖的影响。方法 将Smad4反义寡核苷酸（antisense-Smad4)作用于体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞，测定^3H-TdR掺入量、MTT反应A值及Smad4蛋白表达（Western blot法）。结果 1μmol/L，5μmol/L antisense-Smad4均能使瘢痕疙瘩成纤维细胞^3H-TdR掺入量及MTT反应A值降低（P＜0．01），并下调Smad4蛋白表达。结论 Smad4反义寡核苷酸通过抑制Smad4蛋白的合成，阻断Smad蛋白的信号转导过程，从而抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的生长增殖。     

几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的:增生性瘢痕的成因来源于成纤维细胞的生物学特性异常,观察几丁糖对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响。方法:正常皮肤、增生性瘢痕各3例,供者均系第二军医大学长海医院整形科门诊患者,均知情同意。以增生性瘢痕成纤维细胞为观察对象,正常皮肤成纤维细胞为对照,用组织块法进行不同标本成纤维细胞体外培养。根据成纤维细胞来源不同,分为正常皮肤,增生性瘢痕2组,每组再按添加几丁糖的浓度不同,分为0,0.1,0.2,0.4,0.8,1.6,2.4,4.8g/L8组。四唑盐比色检测几丁糖对两组成纤维细胞生长增殖的影响(吸光度值变化率);光镜与透射电镜观察几丁糖对两组成纤维细胞的形态结构的影响;3H-脯氨酸掺入法检测几丁糖对两组成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响。结果:①几丁糖对两组成纤维细胞生长增殖的影响:几丁糖能减少增生性瘢痕成纤维细胞的吸光度值;几丁糖的浓度和吸光度值改变之间存在剂量-效应关系。相同条件下增生性瘢痕组的成纤维细胞的吸光度值大于正常皮肤组(P<0.05);几丁糖对2组吸光度值变化率影响无显著差异(P>0.05)。②几丁糖对两组成纤维细胞形态结构的影响:光学显微镜下,各组细胞均呈梭型,胞体较大,界限清楚,呈放射状行走。两组无明显细胞形态区别。透射电镜下,随几丁糖浓度增加,细胞内胶原、核糖体、高尔基体等减少,线粒体脊低、少。细胞功能明显受抑制,凋亡细胞增加,两组细胞形态上差异不明显。③几丁糖对两组成纤维细胞合成及分泌胶原功能的影响:随几丁糖质量浓度的增加,各组3H-脯氨酸掺入量均逐渐减少;几丁糖相同浓度下增生性瘢痕组与正常皮肤组有非常显著性差异(P<0.01)。增生性瘢痕组的减少率与正常皮肤组的减少率有显著性差异(P<0.05)。结论:几丁糖可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长、增殖、合成及分泌功能,有望在增生性瘢痕的防治中发挥重要作用。     

转化生长因子-β1对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3,7mRNA表达的影响

目的探讨转化生长因子-β 1( TGF β 1)对瘢痕疙瘩成纤维细胞 (KFB)Smad3,7 mRNA表达的影响,以进一步明确 TGF β 1在瘢痕疙瘩的发生、发展过程中的重要作用.方法用 RT-PCR法分别检测 TGF β 1 不同含量( 0, 5, 50, 500 pmol/L;Smad3 mRNA 24 h, Smad7 mRNA 90 min)和 TGF β 1( 500 pmol/L)作用不同时间( Smad3 mRNA 1, 2, 4, 24, 48 h; Smad7 mRNA 0.5,1,1.5,2,4,24 h)对 Smad3,7mRNA表达的影响.结果不同含量 TGF β 1刺激 KFB后 ,随 TGF β 1含量的增加 ,Smad3 mRNA水平逐渐下降,并呈含量依赖性.与 Smad3相反, 5 pmol/L TGF β 1就能使 Smad7 mRNA水平明显升高 2.6倍( 46± 7, 对照组 13± 7, t=6.150, P=0.0005),并随 TGF β 1剂量加大而略有改变,说明 KFB的 Smad7 mRNA表达对 TGF β 1的刺激非常敏感.用 TGF β 1刺激细胞后, Smad3 mRNA水平随作用时间延长而逐渐下降,到作用 48 h后下降到最低( 53± 9,对照组 18± 8, t=6.011, P=0.0005),显示出时间依赖性;而 Smad7 mRNA在细胞受到 TGF β 1刺激后 120 min即达到对照组的 2.5倍( 73± 11,对照组 53± 9, t=5.215, P=0.003) ,24 h后回落到正常对照水平.结论 TGF β 1能使 KFB细胞 Smad3 mRNA发生配体依赖性的下调,而使 Smad7 mRNA表达迅速增加.     

转化生长因子-β1影响瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3和Smad7 mRNA表达的调控机制

目的研究转化生长因子-β 1(TGF-β 1)影响瘢痕疙瘩成纤维细胞( KFB) Smad3,7mRNA表达的调控机制.方法用放线菌酮( CHX)和放线菌素 D预处理 KFB,以分别阻断 KFB内源性蛋白质的合成及 mRNA合成.采用逆转录 PCR法检测瘢痕疙瘩成纤维细胞 Smad3,7 mRNA表达水平.结果经 CHX预处理后, KFB的 Smad3 mRNA表达轻度上调,并完全抑制了 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA的下调作用,而 CHX预处理对 KFB的 Smad7 mRNA表达及 TGF-β 1上调 Smad7 mRNA的作用并无明显影响.经放线菌素 D预处理后,随 TGF-β 1作用时间延长, KFB的 Smad3 mRNA表达水平无明显下降.结论 TGF-β 1对 KFB Smad3 mRNA表达的调控过程可能还需要细胞合成其他蛋白的参与;但对 Smad7 mRNA表达的调控则不需要细胞合成其他蛋白参与, KFB细胞中的 Smad7可能也是活化的 Smads的直接靶基因.