PCP大鼠肺泡巨噬细胞C/EBPε、IL-6、TNFαmRNA表达的研究

目的　研究脂多糖 (LPS)刺激PCP大鼠肺泡巨噬细胞后C/EBPε、IL - 1、IL - 6、TNFα的mRNA表达和相互调变关系及其对PCP大鼠肺泡巨噬细胞的免疫调节作用。方法　取PCP大鼠的肺泡巨噬细胞 ,加入LPS培养 ,分别于 1h、4h、8h及2 4h取贴壁细胞 ,提取总RNA ,用半定量RT -PCR检测C/EBPε、IL - 6、TNFα的mRNA表达。结果　我们发现 ,PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,TNFα和IL - 6的表达在 1～ 2 4h内表达均明显增强 (p <0 0 5 ) ,C/EBPε的表达呈逐渐上升趋势 ,8h后可见高表达 (p <0 0 5 ) ,C/EBPε达到高峰的时间较TNFα和IL - 6晚。 结论　PCP大鼠肺泡巨噬细胞在LPS的诱导下 ,产生具有免疫活性的细胞因子 (如IL - 6、TNFα等 )明显增加 ,这些细胞因子作为生物信息正反馈回上游基因 ,进一步引起C/EBPε表达增强。     

乌司他丁对内毒素血症大鼠心肌TOLL样受体4表达的影响

目的 观察乌司他丁对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导心肌TOLL样受体4(TLR4)受体表达的影响及与炎症反应的关系.方法 选取8周龄的雄性SD大鼠32只,分成四组:正常对照组,内毒素血症组(LPS组),LPS+乌司他丁组,LPS+地塞米松组.除正常对照组以外,其余三组给予脂多糖8 mg/kg大鼠阴茎静脉注射,LPS+乌司他丁组与LPS+地塞米松组分别同时给予乌司他丁2.5万/kg、地塞米松5 mg/kg;正常对照组给予同量的生理盐水,3h后断头取血并取心肌液氮保存;ELISA法测血浆TNF-α的水平;放免法测定心肌组织中AngⅡ水平;RT-PCR法测定心肌组织TLR4 mRNA表达;免疫组化法和蛋白免疫印迹法测心肌组织TLR4含量.结果 (1)LPS组TNF-α、CRP、IL-6水平和心肌AngⅡ水平显著增高;与LPS组相比,乌司他丁组TNF-α 、CRP、IL-6和心肌AngⅡ显著降低(2)LPS可明显增加心肌中TLR 4 mRNA及蛋白表达,乌司他丁明显抑制心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.结论 乌司他丁能抑制LPS诱导大鼠心肌的炎症反应.乌司他丁能降低LPS诱导大鼠的心肌TLR4 mRNA及蛋白的表达.乌司他丁可能通过降低TLR4水平抑制LPS诱导的炎症反应.     

黄体酮对小胶质细胞活化的影响

目的 观察黄体酮对体外培养小胶质细胞活化的抑制作用.方法 取新生sD大鼠皮层,分离、纯化、培养小胶质细胞,脂多糖(LPS)诱导其活化,ELISA法检测活化前后细胞培养上清液内TNFα、IL-1β水平的变化.结果 黄体酮干预组小胶质细胞培养上清液内TNFα、IL-1β的表达水平明显低于LPS处理组.结论 黄体酮可以显著减少上清液内炎症介质的水平,抑制体外培养小胶质细胞的活化.     

IL-18、TNFα在脂多糖介导的急性肝坏死发生中的作用研究

目的探讨IL-18、TNFα在急性肝损伤中的作用.方法采用D-氨基半乳糖(D-Gal)900mg/kg与脂多糖(LPS)10μg/kg诱导BALB/C小鼠急性肝坏死动物模型,腹腔内注入D-Gal/LPS后0～9h分别检测血清转氨酶(ALT、AST)、肝组织病理、DNA梯形条带,评估肝损伤情况;用半定量RT-PCR和相应的分析软件分析不同时间点肝组织中IL-18 mRNA、TNFαmRNA表达及ELISA试剂盒检测血浆IL-18、TNFα的蛋白表达.结果D-Gal/LPS给予后4h血清转氨酶明显升高,7h小鼠开始死亡,10h死亡率达80%.肝组织病理学检查发现,5h肝窦扩张、炎性细胞浸润、库普弗细胞增生;7h肝细胞大量凋亡、坏死或肝组织出现大量出血性坏死;5h电镜示肝细胞核仁碎裂、线粒体肿胀或空泡变性;7h核仁边聚,呈半月型,表现为典型的凋亡形态学变化,线粒体大部分空泡变性.DNA电泳显示5h始出现梯形条带.正常情况下肝组织IL-18 mRNA少量表达,经D-Gal/LPS诱导后小鼠肝组织IL-18 mRNA表达量明显增加,表达高峰在LPS刺激后1～2h(与0h比较,P＜0.01);正常情况下肝组织TNFα mRNA不表达或呈微弱表达,但在该模型诱导过程中肝组织TNFα mRNA有不同程度的表达,且其表达的时间模式与IL-18 mRNA不同,TNFα mRNA表达高峰见于LPS刺激后2h和5h(与0h比较,P＜0.01).血浆IL-18、TNFα蛋白表达也与mRNA表达一致.结论本实验诱导的急性肝坏死模型中,肝细胞凋亡和坏死同时存在,在肝细胞坏死的发生过程中细胞因子IL-18 mRNA、TNFα mRNA及其蛋白在肝内的表达量明显增多,其变化早于转氨酶指标和组织学变化,而且在LPS刺激后IL-18 mRNA的表达先于TNFαmRNA,提示IL-18、TNFα均参与了此型肝损伤,且IL-18可能是TNFα的上游细胞因子.     

应用载体介导小干扰RNA抑制小鼠巨噬细胞表达肿瘤坏死因子α

目的 研究特异性载体介导的小干扰RNA(siRNA)对小鼠巨噬细胞株表达肿瘤坏死因子(TNF)-α基因的抑制作用.方法 设计两段靶向TNF-α基因的特异性siRNA,合成相应寡核苷酸,插入载体H1启动子下游,构建表达干扰性发夹状RNA(shRNA)载体pHS-A和pHS-B,转染小鼠巨噬细胞株(RAW264.7),用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附法检测siRNA对TNF-α mRNA和蛋白表达的抑制作用.结果 内毒素脂多糖(LPS)刺激后6 h,巨噬细胞表达TNF-α mRNA和合成的TNF-α量均增加,于9～12 h达高峰.pHS-A转染后,LPS刺激巨噬细胞的TNF-α mRNA为0.003 56±0.001 87,TNF-α蛋白表达为(149.93±21.02)pg/ml,比未转染组[分别为0.021 34±0.009 60、(1922.30±149.05)pg/ml]显著减少(P＜0.01),抑制率达83.3%.pHS-B及阴性对照组对基因及蛋白表达均无影响.结论 LPS可刺激小鼠巨噬细胞合成TNF-α.pHS-A可抑制小鼠巨噬细胞TNF-α表达.     

普萘洛尔对BALB/C小鼠腹膜巨噬细胞分泌细胞因子及吞噬功能的影响

目的:探讨普萘洛尔对脂多糖诱导BALB/C小鼠腹膜巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-10以及吞噬功能的影响。方法:将腹膜巨噬细胞分为8组:空白组,脂多糖组,普萘洛尔(0.1μmol/L)组,普萘洛尔(1.0μmol/L)组,普萘洛尔(10.0μmol/L)组;普萘洛尔(0.1μmol/L)加脂多糖组,普萘洛尔(1.0μmol/L)加脂多糖组,普萘洛尔(10.0μmol/L)加脂多糖组。在培养6h和24h后用酶联免疫法测定各培养瓶上清液中TNF-α和IL-10的浓度,用中性红吞噬试验检测巨噬细胞吞噬功能。结果:空白组与单用普萘洛尔时,巨噬细胞均无细胞因子分泌(无数据显示),吞噬功能无明显影响。单用脂多糖组巨噬细胞释放TNF-α和IL-10显著增加,吞噬能力明显增强。而普萘洛尔加脂多糖组巨噬细胞继续分泌TNF-α,IL-10分泌减少,吞噬功能显著降低,该作用随普萘洛尔浓度增加而增强。结论:普萘洛尔可调节腹膜巨噬细胞炎症递质的分泌,并能影响腹膜巨噬细胞的吞噬能力。     

肿瘤坏死因子α致暴发性肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡的作用

目的研究肿瘤坏死因子α(TNFα)对暴发性肝功能衰竭(FHF)小鼠肠黏膜上皮细胞凋亡的作用。方法用D-氨基半乳糖(GalN) 脂多糖(LPS)或TNFα造FHF小鼠模型;酶联免疫吸附法测定血清TNFα含量;光学显微镜和电子显微镜观察肠组织;末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法检测肠组织细胞凋亡情况;免疫组织化学法检测肿瘤坏死因子受体I(TNFRⅠ)蛋白在肠组织的表达与分布。结果实验各组动物各时间点光学显微镜下肠黏膜上皮细胞结构均保持完整,电镜下可见肝功能衰竭组有典型的凋亡细胞;对照组、LPS组、GalN组血清TNFα水平几乎正常,凋亡率低且基本没有TNFRⅠ蛋白表达;GalN LPS组血清TNFα水平12h明显升高(P<0.01),且TNFRⅠ蛋白在6h(大肠:2.82e 4±4.60e 3;小肠:1.14e 4±2.13e 3)即有表达,此时肠上皮细胞凋亡不明显,9h和12hTNFRⅠ蛋白表达明显增加,同时肠上皮细胞凋亡也明显。用GalN TNFα造FHF模型,结果也与GalN LPS组类似。应用抗TNFα抗体,可降低TNFRⅠ蛋白表达和减少肠上皮细胞凋亡的发生。结论TNFα能诱导肝功能衰竭小鼠肠上皮细胞凋亡,抗TNFα抗体能阻断这一作用;在FHF的模型动物中,TNFRⅠ蛋白表达增多,TNFRⅠ蛋白表达与肠上皮细胞凋亡在一定程度上呈正相关。     

LALF对增敏小鼠内毒素致死性攻击的保护作用及其对炎症因子产生的调节

目的　观察LALF(鲎抗脂多糖因子 )对D -氨基半乳糖 (D -Gal)增敏的小鼠败血症休克的保护作用 ,以及LALF对内毒素 (LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮 (NO)和白介素 - 10 (IL - 10 )的影响。方法　体内实验用D -Gal增敏建立LPS休克模型 ;治疗组接受LALF处理 ,对照组给予缓冲液。体外实验提取小鼠腹腔巨噬细胞 ,分别给予单独LPS或LALF/LPS处理 ,收集培养上清 ,分别用比色法和ELISA法检测NO及IL - 10浓度。结果　体内实验表明 :LALF与LPS体外预混合后可明显改善小鼠的生存率 ,且在LPS攻击之后给予LALF仍有一定的保护作用。体外实验提示LALF可明显降低LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放NO ,并呈剂量依赖关系 ;与此相反 ,LALF能增加LPS诱导IL - 10的生成。结论　LALF能保护D -氨基半乳糖增敏小鼠抵抗内毒素休克。体外实验提示LALF的保护效应可能与LALF降低LPS诱导的炎症因子NO的产生而同时增加抗炎因子IL - 10的分泌有关。     

急性坏死性胰腺炎大鼠肺泡巨噬细胞中TNFα的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子α（TNFα）在急性坏死性胰腺炎（ANP）大鼠肺泡巨噬细胞中的表达及意义。方法将72只SD大鼠随机分为Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组。Ⅰ、Ⅱ组逆行性胰胆管注射5％牛磺酸钠建立ANP模型。支气管肺泡灌洗获取各组肺泡巨噬细胞，检测TNFα水平；检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶（MPO）水平；以逆转录聚合酶链反应法测定肺泡巨噬细胞TNFαmRNA表达情况；行肺组织病理学检查。结果ANP发生后，肺泡巨噬细胞TNFαmRNA的表达逐渐增强，6h最显著，12h表达减弱，Ⅰ、Ⅱ组TNFα水平随时间变化趋势与TNFαmRNA相符。ANP大鼠肺损伤随病情进展而逐渐加重，肺组织MPO及BALF蛋白含量随时间延长而逐渐升高，Ⅰ组各指标与Ⅲ组相比，P均〈0．05。Ⅱ组各指标与Ⅲ组相比仍然升高（P均〈0．05），但与Ⅰ组比较明显降低（P均〈0．05）。肺泡巨噬细胞分泌TNFα水平与肺组织MPO及BALF蛋白含量密切相关。结论ANP发生后，肺泡巨噬细胞分泌的TNFα过度表达，并导致肺损伤。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究．

目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组。巨噬细胞 卡介苗 LPS组，巨噬细胞 卡介苗组以及巨噬细胞 LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞产生较少量的IL-12，TNF-α，LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12，TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比，LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1，IL-2，IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12，而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠肺泡巨噬细胞上清液TNF—α和NO水平的影响

目的 研究双氢青蒿素治疗对卡氏肺孢子虫肺炎大鼠泡巨噬细胞上清液TNF－α和NO水平的。方法 以醋酸可的松皮下注射Wistar大鼠建立卡氏肺孢子虫肺炎动物模型。用60mg/kg双氢青蒿素治疗实验大鼠后杀鼠取,用胶原酶消化法分离肺泡巨噬细胞,用LPS刺激培养72h,同时庙有感染组和正常对照。用TNF－α和NO试剂盒分别检测培养上清液TNF－α和NO活性。结果 感染组和治疗组TNF－α和NO水平均高于正常对照,治疗组TNF－α和NO水平则低于感染组。结论 卡氏肺孢子虫感染引起大鼠肺泡巨噬细胞分泌高水平的TNF－α和NO,胆双氢青蒿素治疗后PCR大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF－α和NO水平降低。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的 探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组，巨噬细胞 卡介苗 LPS组，巨噬细胞 卡介苗组以及巨噬细胞 LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞组产生较少量的IL-12，TNF-α，LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12，TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比，LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1，IL-2，IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12，而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

库普弗细胞内毒素受体CD14在大鼠肝损伤中的变化

目的动态观察四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝损伤过程中库普弗细胞膜上脂多糖(LPS)受体CD14表达变化及其在细胞因子分泌中的作用。方法以CCl4皮下注射诱导大鼠肝损伤。采用联合酶灌注消化、不连续密度梯度离心法分离不同时期大鼠肝脏库普弗细胞。将库普弗细胞与不同浓度内毒素孵育6h,收集培养上清并抽提细胞RNA。ELISA检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子(TNF)α水平。RTPCR法检测库普弗细胞CD14mRNA表达。偶氮基质显色法测定大鼠血浆内毒素水平。结果经CCl4处理4周和6周,大鼠库普弗细胞在体外培养时TNFα基础分泌量明显高于正常大鼠(P<0.05)。在LPS刺激下,CCl4处理2、4和6周库普弗细胞的TNFα分泌水平明显增加(P<0.05),呈浓度依赖方式。CCl4组大鼠库普弗细胞CD14mRNA表达从2周开始增加,6周时最明显,8周时恢复至正常水平。大鼠外周血内毒素浓度在肝损伤过程中升高。结论在CCl4诱导的大鼠慢性肝损伤早期过程中,库普弗细胞内毒素受体CD14表达上调,对内毒素敏感性增加。库普弗细胞是肝脏早期炎症反应中的一个重要效应细胞。     

脂多糖对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子影响的研究

目的　探讨脂多糖(LPS)对感染卡介苗巨噬细胞表达细胞因子的影响。方法 用ELISA方法比较单独巨噬细胞组,巨噬细胞+卡介苗+LPS组,巨噬细胞+卡介苗组以及巨噬细胞+LPS组细胞因子表达的差异。结果 单纯巨噬细胞组产生较少量的IL-12,TNF-α,LPS能刺激巨噬细胞组特别是感染卡介苗巨噬细胞组产生大量的IL-12,TNF-α。与单纯巨噬细胞组相比,LPS也不能有效地刺激巨噬细胞产生更多的IL-1,IL-2,IL-18和IFN-γ。结论 LPS能诱导巨噬细胞(包括卡介苗感染巨噬细胞)产生更多的TNF-α和IL-12,而有利于宿主的免疫应答。提示LPS及其同系物有潜力作为抗结核药物和疫苗或其佐剂。     

1-磷酸鞘胺醇受体3参与巨噬细胞迁移及脓毒症诱导的心肌损伤

目的探讨巨噬细胞中1-磷酸鞘胺醇受体(sphingosine 1-phosphate receptor,S1PR)的表达及其作用,观察干预S1PR3(S1P3)对脂多糖诱导的心肌损伤的影响。方法传代培养小鼠Ana-1巨噬细胞,给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/ml)刺激或S1P3特异性抑制剂CAY-10444(10μmol/L)干预,细胞随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444预处理2h+LPS组,Transwell小室观测巨噬细胞迁移,蛋白免疫印迹检测巨噬细胞S1PR的表达,并检测p-Akt/Akt蛋白水平。在体实验,6~8周龄雄性C57/B6小鼠,随机分为对照组、LPS组、CAY-10444组、CAY-10444干预+LPS组,每组12只,LPS(10 mg/kg)腹腔注射,或CAY-10444 1 mg/kg于LPS诱导后30 min腹腔注射干预,24 h后取心脏组织HE染色观察病理改变,免疫组化染色观察巨噬细胞浸润程度以及炎症因子的表达情况,实时荧光定量PCR检测心肌损伤标记分子BNP、巨噬细胞表面分子F4/80、炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平。结果与对照组比较,LPS诱导巨噬细胞大量迁移S1P3蛋白表达增加(P0.01),p-Akt Ser473/Akt表达上调(P0.01);与LPS组相比,S1P3抑制剂CAY-10444干预后再给予LPS刺激,巨噬细胞迁移被抑制(P0.01),p-Akt Ser473/Akt表达也降低(P0.01);在体实验,LPS诱导小鼠后BNP mRNA水平明显上调(P0.01),同时F4/80以及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平上调(P0.01),HE染色可见心肌损伤及炎细胞浸润,免疫组化染色法显示F4/80及炎症因子的大量阳性表达(P0.01);使用S1P3抑制剂后,与LPS组比较,心肌损伤减轻免疫组化中巨噬细胞减少(P0.01),炎症因子表达降低(P0.01),BNP mRNA水平降低(P0.01),F4/80以及TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA水平也明显降低(P0.01)。结论抑制巨噬细胞S1P3表达可抑制巨噬细胞的迁移并提示p-Akt/Akt与了这一过程,此外,S1P3抑制剂的干预可有效减轻LPS诱导的心肌损伤。     

脂肪因子WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸及脂多糖诱导的巨噬细胞极化的调节作用

目的探讨WNT1诱导信号通路蛋白2对棕榈酸以及脂多糖诱导的炎症中巨噬细胞极化的调节作用。方法用不同浓度的WISP2蛋白处理巨噬细胞系RAW264.7, 采用Cell-Titer发光法测定细胞活力, 确定WISP的作用浓度。将细胞分为对照组、棕榈酸处理组、棕榈酸联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)以及脂多糖处理组、脂多糖联合不同浓度WISP2处理组(10 μg/L及100 μg/L)。应用实时定量聚合酶链式反应检测各组巨噬细胞中M1及M2表型分子的mRNA水平;应用酶联免疫吸附实验检测巨噬细胞分泌的重要炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6的蛋白水平。结果和对照组相比, 10 μg/L、100 μg/L WISP2处理组均未对RAW264.7细胞的活性产生影响, 却显著上调Tnfα(1.877±0.039、2.202±0.034, F=309.7, P<0.001)、Il6(1.418±0.056、1.506±0.059, F=81.39, P<0.001)、单核细胞趋化蛋白1(Mcp1)(1.620±0.014、1.982±0...     

替米沙坦通过激活PPARγ而下调NF-κB通路抑制脂多糖诱导的单核细胞THP-1炎症反应

目的探讨替米沙坦（Telm）对脂多糖（LPS）诱导的人THP-1巨噬细胞炎症因子释放的影响及机制。方法体外培养人THP-1单核细胞随机分为对照组、脂多糖组和替米沙坦组（LPS+Telm）。替米沙坦组细胞予替米沙坦（10μmol/L）预孵育2h后与脂多糖组均加入脂多糖刺激24h。应用Westernblot检测各组细胞过氧化体增殖物激活型受体γ（PPARγ）、磷酸化过氧化体增殖物激活型受体γ（p-PPARγ）、IκBα、磷酸化IκBα（p-IκBα）、核因子κB（NF-κB）、磷酸化核因子κB（p-NF-κB）的蛋白表达,ELISA法检测各组细胞培养上清中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的表达水平,应用实时定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞MCP-1、TNF-α和IL-6的mRNA表达水平。结果Westernblot检测发现,与对照组相比,脂多糖组p-PPARγ、p-NF-κB和p-IκBα蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,IκBα表达明显下降（P<0.05）,PPARγ和NF-κB表达水平无显著差异（P>0.05）;RT-PCR和ELISA检测发现,与对照组相比,脂多糖组MCP-1、TNF-α和IL-6蛋白水平和mRNA表达水平均明显增高（P<0.05）。与脂多糖组相比,替米沙坦组p-NF-κB和p-IκBα蛋白水平表达明显下降,MCP-1、TNF-α及IL-6分泌水平和mRNA水平也均明显降低,p-PPARγ和IκBα蛋白表达水平明显增加（P<0.05）,但是NF-κB和PPARγ表达水平依然无显著差异（P>0.05）。结论替米沙坦预处理可通过激活PPARγ而下调NF-κB活化从而抑制脂多糖诱导单核细胞THP-1产生炎症反应。     

糖皮质激素对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞增殖和细胞因子的影响

目的：探讨脂多糖(LPS)和长期大剂量应用地塞米松对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖活化及细胞因子表达的影响。方法不同剂量地塞米松(10、50、100、150 mg/L)作用于小鼠巨噬细胞RAW264.724 h 后,1 mg/L LPS 再作用于细胞24 h,应用 CCK-8检测RAW264.7细胞增殖情况,ELISA检测炎症因子 IL-6和趋化因子 IL-8的表达水平。结果1 mg/L LPS 促进RAW264.7细胞增殖并激活细胞产生大量 IL-6和 IL-8,不同剂量地塞米松干预细胞24 h 后,RAW264.7细胞增殖情况受到抑制,呈浓度依赖性。炎症因子 IL-6和趋化因子 IL-8表达水平也随地塞米松浓度增加而降低。结论小剂量LPS 促进巨噬细胞增殖并活化产生大量细胞因子。而长期大剂量应用地塞米松抑制巨噬细胞的生长增殖,同时抑制炎症因子及趋化因子的表达,降低机体清除病原体的能力,造成了免疫抑制患者发生难以控制的感染。     

甘丙肽体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究

目的 探讨甘丙肽对小鼠RAW264.7巨噬细胞功能的影响。方法 取小鼠RAW264.7巨噬细胞体外培养,分为对照组、脂多糖（LPS）处理组和LPS联合甘丙肽处理组。给予后两组细胞LPS（1μg/ml）刺激2h,使细胞激活,其中一组再加入甘丙肽1000nmol/L继续处理24h,镜下观察各组细胞形态变化;采用荧光定量PCR法检测培养上清TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA水平;采用Western blot法检测细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和精氨酸酶1（Arg1）蛋白表达水平。结果 LPS处理组IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA分别较对照组升高（7083±432.5）倍、（3106±104.3）倍和（108.0±47.58）倍,而甘丙肽处理组三者水平较LPS处理组下降（1.2±0.2）倍、（0.3±0.08）倍和（19±1.3）倍,差异均有统计学意义（P<0.05）;LPS组iNOS蛋白较对照组升高（19.5±1.964）倍,Arg1蛋白水平较对照组降低（1.6±0.3）倍,而给予甘丙肽混合处理后,iNOS蛋白水平较LPS处理组降低（1.7±0.32）倍,而Arg1蛋白升高（2.31±0.12）倍,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 甘丙肽可抑制LPS诱导的小鼠Raw264.7巨噬细胞的促炎反应。     

辛伐他汀抑制人外周血单核巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2表达

目的 观察辛伐他汀对人外周血单核巨噬细胞脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)表达的影响,并探讨其调控机制.方法 分离培养人外周血单核巨噬细胞,实验分为脂多糖(LPS)组、辛伐他汀组和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)干预组.LPS组:分别用不同浓度(0、1、10、102、103和104ng/ml)的LPS与细胞共同孵育6 h,观察不同浓度的辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响;并用1μg/ml的LPS与细胞孵育不同时间(0、6、12、24和48 h),观察辛伐他汀作用不同时间对LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达的影响.辛伐他汀组:1 μg/ml的LPS+不同浓度的辛伐他汀(10-2～10-7mmol/L)与单核巨噬细胞共同孵育24 h,1 μg/ml LPS+10-3mmol/L的辛伐他汀与单核巨噬细胞孵育不同时间(0、6、24、24和48 h),观察辛伐他汀对LPS诱导的Lp-PLA2mRNA和蛋白表达及酶活性的影响.MAPK组:分别用10 μmol/L的p38抑制剂SB203580、20 μmol/L的ERK抑制剂U0126和20 μmol/L的JNK抑制剂SP600125预处理30 min后,将单核巨噬细胞与1μg/ml的LPS共同孵育24 h,观察MAPK信号通路在LPS介导的Lp-PLA2表达中的作用.逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测Lp-PLA2 mRNA表达,比色法测定酶活性,Western blot方法 检测Lp-PLA2蛋白表达以及p38-MAPK蛋白及磷酸化水平.结果 (1)0.1μg/ml的LPS刺激6 h即可显著增加单核巨噬细胞Lp-PLA2 mRNA和蛋白的表达及其酶活性,并且随LPS浓度的增加和刺激时间的延长,该作用增强.(2)辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2的表达增加,并且降低酶活性,该作用呈浓度及时间依赖性.(3)辛伐他汀抑制LPS诱导的p38MAPK蛋白活化,p38MAPK的抑制剂SB203580可以完全阻断LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达增加,与辛伐他汀作用相似.而MEK1/2的抑制剂U0126和JNK的抑制剂SP600125对LPS介导的Lp-PLA2蛋白表达的增加没有影响.结论 在培养的人外周血单核巨噬细胞中,辛伐他汀可以明显抑制LPS诱导的Lp-PLA2 mRNA和蛋白表达,降低Lp-PLA2酶活性,该作用至少部分由抑制p38MAPK信号转导通路介导.