HLAⅡ类基因PCR-SSP分型技术在骨髓移植配型中的应用

建立快速、准确的ＨＬＡ基因分型方法,满足临床移植配型的需要。方法通过序列特异性引物聚合酶链反应,对拟行骨髓移植的１０例血液病患者及１２名相关供者的ＨＬＡ－Ⅱ类基因ＤＲＢ１,ＤＱＢ１位点扩增,琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ产物并确定其基因型。结论该方法具有快速准确,特异性高,简便省时的特点。     

肾移植HLA配型影响因素的探讨

为了快速准确地配型肾移植受体的ＨＬＡ型别，对ＨＬＡ分型试验的影响因素进行了探讨，结果显示：采用玻璃珠脱纤维抗凝血标本，可以获得比肝素抗凝法更高纯度的淋巴细胞，并能大大地降低细胞悬液中血小板的污染，加样时采用软加法可避免相邻孔间反应的相互污染，ＨＬＡ抗体和补体相互间能弥补因为方效价下降而引起的试验敏感性降低，使用淋巴细胞分离液分离细胞时应根据不同的试剂生产厂家而区别对待细胞分离时的离心时间。     

HLA基因分型三种操作系统的效果比较

在器官和造血干细胞移植中准确的ＨＬＡ配型是影响ＧＶＨＤ、ＧＶＬ、存活率及存活时间的重要因素 ,2 0 0 0年美国联邦政府立法 ,器官移植前必须进行ＨＬＡ配型。ＰＣＲ 序列特异性寡核苷酸 (ｓｅｑｕｅｎｃｅｓｐｅ ｃｉｆｉｃｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ,ＰＣＲ ＳＳＯ)探针方法是 1994年报道的ＨＬＡ分子生物学分型方法〔1〕,本文报道在半量扩增体积基础上ｒｅｖｅｒｓｅ ＳＳＯ技术。材料和方法标本收集 :1999～ 2 0 0 1年广东地区肾脏及骨髓移植 4 75例和脐血 160例 ,ＡＣＤ Ｂ抗凝血。模板ＤＮＡ提取 :提取ＤＮＡ使用ＱＩＡａｍ…     

HLA抗体筛选技术的最新进展及其在器官移植中的应用

人类白细胞抗原(HLA)是介导器官移植排斥反应的主要因素,良好的组织配型是肾移植患者长期存活和术后移植肾功能恢复的重要条件之一。在多次输血、生育史、再次移植的受者受到同种HLA免疫致敏可产生群体反应性抗体(panelreactive antibody,PRA)。PRA是一组特定的人类白细胞抗原(HLA)抗体,有多种类型,包括HLA-A、B、C、DR、DQ等抗体[1],是造成超急性和加速性排斥反应和移植物丢失的危险因素之一。PRA水平的高低更直接地影响移植肾的近期存活率。因此,将抗体筛选技术应用于器官移植实践,对减少移植后排斥反应,提高移植成功率和移植…     

脐带血移植治疗重型地中海贫血的HLA配型策略

目的建立针对重型地中海贫血(简称地贫)移植治疗前HLA配型策略,探讨重型地中海贫血患儿与其母妊娠胎儿之间,是否可以接受移植治疗,减少过度医疗消费,减轻患者经济负担。方法①采用反向探针杂交技术,确定患儿及其父母亲的地贫基因型;②对确诊重型地中海贫血患儿拟采取脐带血移植治疗时,抽取母亲妊娠16周±胎儿羊水进行地贫基因诊断及HLA配型。结果10例重型地贫中有8例拟行脐带血移植治疗,其中3/8例胎儿HLA与患儿全相合,2/8例不相合自愿终止妊娠,还有3/8例不相合继续妊娠。结论①胎儿羊水HLA配型对重型地贫脐带血移植治疗供体选择有重要意义;②一次性抽取羊水即可实施地贫基因诊断又可HLA配型;③计划配型策略可以指导重型地贫父母正确选择脐血移植供体,继续妊娠或终止妊娠。     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

用PCR指纹图作HLA－DR快速配型的研究

ＰＣＲ指纹图技术选用通用型引物扩增ＨＬＡ－ＤＲＢ基因第二外显子，其产物在ＰＡＧＥ电泳中显示特定的“卫星”条带。可用于个体间作ＨＬＡ－ＤＲ的基因水平交叉配型，确定供受体间ＤＲＢ基因的相容性。采用ＨＬＡ纯合的Ｂ淋巴细胞系，分析单倍型上ＤＲＢＩ、ＤＲＢ３等基因异同时指纹图格局的变化，并通过１５对细胞间组合和比较，证实经ＤＮＡ交叉配合后的指纹图格局能十分敏感地反映个体间ＤＲ基因间的差异。在此基础上进一步对１７对随机个体作ＰＣＲ指纹图及交叉配型分析，表明这一技术在判别供受体间ＤＲ基因匹配性上十分有效，并有简单、快速、准确等优点。     

HLA分型进展

HLA在免疫应答中占有重要地位 ,其在器官移植中的作用 ,与疾病相关性的意义 ,以及在亲子鉴定 ,人类学研究等方面的应用一直为临床所关注 ,建立快速而准确的HLA分型技术具有重要的临床与社会价值。现就HLA分型的各种方法及每种方法的长处与不足加以比较 ,综述如下。     

008 HLA分型进展

HLA在免疫应答中占有重要地位,其在器官移植中的作用,与疾病相关性的意义,以及在亲子鉴定,人类学研究等方面的应用一直为临床所关注,建立快速而准确的HLA分型技术具有重要的临床与社会价值.现就HLA分型的各种方法及每种方法的长处与不足加以比较,综述如下.     

肾移植供受者HLA快速配型软件开发与研究

目的采用计算机程序和数据库技术,开发一个用于肾移植手术的实用软件,以能快速准确地从等待肾移植的、已作过HLA分型的病人列表中查找与供者符合一定HLA配型准则的病人,供外科医师临床决策参考.同时兼有病案管理、术前检查、术中情况和术后随访记录的操作界面,以及多种常用统计报表功能,以满足临床、科研和病人监护的需求.方法 HLA分型数据是基于血清学法检测的抗原特异性;供、受者HLA配型主要考虑HLA-A,B和DR共6个抗原数据;软件开发采用Delphi 5.0.供、受者HLA配型程序模块采用数据库表保存中间结果,以提高查找速度;成活率统计采用Kaplan-Meyer方法.结果和结论经广州珠江医院一年多来的使用结果,证明该软件设计科学合理,操作简便,功能强大,运行稳定,实用性强.对各医院泌尿外科、HLA分型室、以及其他需要进行HLA配型的部门有推广应用价值.     

异基因骨髓移植中PCR-SSP和RFLP对HLA-DRB、DPB1分型的应用

目的:探讨序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）和聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCR-RFLP）对HLA-DRB、DPB1分型在异基因骨髓移植中应用的可行性。方法:应用19对不同的DRB抗原所对应等位基因序列特异性的引物,PCR扩增供受者各20个样本DRB,产物直接琼脂糖凝胶电泳分析;同时用另一对引物PCR扩增DPB1第二外显子,产物10种限制性内切酶酶切分析。结果:各DRB带清晰可辨,直接确定为该型;DPB1的多态性片段编码转换后确定其基因型;4例找到供者。结论:它们是异基因骨髓植前快速、精确和可靠的基因分型手段。     

造血干细胞移植中HLA—Ⅱ类基因分型影响因素的探讨

目的：为了准确地进行造血干细胞移植供－受体的ＨＬＡ－Ⅱ类配型，对ＨＬＡ－Ⅱ类基因分型实验的影响因素进行了探讨。方法：采用美国莱姆达公司提供的微量ＳＳＰ＾ＴＭＨＬＡ－Ⅱ类ＰＣＲ－ＳＳＰ分型试剂盒对４００例造血干细胞移植供－受体进行基因分型。结果：采用０．５％ＥＤＴＡ抗凝的血标本与肝素抗凝的血标本相比，前者的护增效果好。ＤＮＡ终浓度为２５～２００ｎｇ／ｕｌ，最佳浓度为１００ｎｇ／ｕｌ，Ａ２６０／Ａ２８     

HLA基因分型的最新进展

ＨＬＡ分型在人类学、法医学、疾病相关性及器官、组织移植等研究中有重要的意义。以往，用于ＨＬＡ分型的方法主要是血清学和细胞学方法，由于其方法学上的缺点，分型的准确性较差，且不能进行亚型分析。最近几年，随着分子生物学的不断进步，特别是ＰＣＲ技术的广泛应用，ＨＬＡ基因分型技术得到了迅速的发展，各具特点的不同ＨＬＡ基因分型技术不断出现，在方法学上达到了稳定、准确、精细、简便、实用的程度，为其临床推广应用奠定了技术基础。本文对ＨＬＡ基因分型技术的最新进展情况进行综述。     

HLA单倍型等位基因交换重组对移植配型的影响(7个家系分析)

人类白细胞抗原（HLA）又称移植抗原，在器官移植中起着重要作用。HLA遗传区域在人的第6号染色体短臂6p21位置上，HLA—A，B，C，D，E，F，G的7个座位是表达基因，由于其座位靠得很近，故在遗传时常一起传递。同一条染色体不同座位上的等位基因组合成单倍型，每个人都有两条分别来自父母的单倍型。HLA复合体是紧密连锁的，这些连锁在一条染色体上的等位基因很少发生同源染色体间的交换。2005．3-2006．6期间，我们在骨髓移植HLA配型时，发现7例家系中的7位个体HLA单倍型座位中等位基因分别发生交换重组。现分析报告如下。     

供者特异性HLA抗体在配型不合Allo-SCT植入失败中的作用:现状与挑战

单倍型相合供者已经成为缺乏人类白细胞分化抗原(human leukocyte antigen, HLA)相合供者的移植候选患者的重要替代干细胞来源之一。然而,植入失败仍是单倍型相合移植、HLA不合无关供者和脐血移植后的主要并发症和死亡原因之一。近年来的研究发现,供者特异性抗HLA抗体(donor specific anti-HLA antibody, DSA)与HLA不合移植后的植入失败密切相关。了解DSA检测方法、流行病学以及处理手段对于减少植入失败、改善移植预后具有重要意义。     

PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因

建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ,扩增HLA A基因 ;再设计两对HLA A2组特异性引物 ,采用套式PCR分别扩增HLA A基因的 5’端和 3’端 ,如出现特异条带 ,则将后两对引物的PCR产物进行测序分析 ,对照HLA A2组等位基因的第 2和第 3外显子序列图 ,确定是否为HLA A 0 2 0 1 1～ 0 2 0 1 6的 6个等位基因。结果 :以HLA A 0 2 0 1阳性的T2细胞株为阳性对照进行检测 ,结果完全正确 ,并设立非HLA A 0 2 0 1的A2细胞株RML (HLA A 0 2 0 4 )及Raii细胞株 (非A2组 )为对照 ,同时随机检测 30份门诊病人血样 ,其中 7份为HLA A2阳性 ,经测序 ,2例为HLA A 0 2 0 1 1 ,1例为HLA A 0 2 1 1或 0 2 35 ,1例是HLA A 0 2 0 6或0 2 2 1或 0 2 4 1或 0 2 4 4或 0 2 5 1或 0 2 5 4 ,1例是HLA A 0 2 0 5或 0 2 1 4 ,1例是HLA A 0 2 34或 0 2 35 ,1例是 0 2 5 0。本方法利用位点特异性引物进行 2～ 3次PCR扩增 ,结合PCR产物测序便可相对简便经济地检测出HLA A 0 2 0 1的全部 6个亚等位基因 ,为快速检测其他特定HLA等位基因?     

HLA-A位点PCR-SSP基因分型和血清学分型的比较

目的：建立优化ＨＬＡ－Ａ位点ＰＣＲ－ＳＰ分型方法。方法：采用普通扩增仪和Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管对细胞系ＤＮＡ和３７个健康正常人进行基因分型,血清学检测采用标准淋巴细胞毒试验方法。结果：发现引物浓度和浓度比、ＤＮＡ的纯度及酶的选用,是影响ＨＬＡ－Ａ位点ＰＣＲ－ＳＳＰ分型准确性的重要因素。该方法对３７个标本的基因分型结果与血清学结果相符合。结论：ＰＣＲ－ＳＳＰ方法具有简便准确的优点,可以作为ＨＬＡ－Ａ位     

脐带血库HLA相合供体查询结果预测

目的预测患者某一具体HLA表型在脐带血库查询到相合脐带血的可能性.方法以脐带血库单体型频率和脐带血库容量为基础计算出某一具体表型的理论值与实际查询结果相比较.结果6个等位基因相合脐带血的理论值最低为0.128,最高为2.808,平均为1.029,5个等位基因相合脐带血的理论值最低为0.004,最高为0.427,平均为0.067,4个等位基因相合脐带血的理论值最低为0.0002,最高为0.045,平均为0.006 5.结论查询到与患者6个等位基因相同脐带血的理论值与实际查询结果相比较,准确率能达到80%以上.尤其是划定某一表型是否能找到6个等位基因相合的脐带血时可做出较为准确的判断.但对预测找到5个或4个等位基因相合的脐带血区别能力较差.     

人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因PCR-SSP分型方法的建立及其应用

目的建立PCR-SSP方法检测人类杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）基因。方法参照K／R基因数据库，采用计算机软件设计一系列特异性引物建立PCR-SSP方法，以人类生长激素基因特异性引物作为内对照，以Dynal公司的KIR PCR-SSP分型试剂盒作为验证。结果本实验所设计的KIR特异性引物可检测出所有K／R基因，扩增产物条带清晰，特异性强。结论本实验建立的KIR PCR-SSP方法结果准确，具有可行性。