套式PCR扩增SSU rDNA特定片段检测云南金平县疟原虫感染的研究

目的　采用套式 PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。　方法　采用已建立的套式 PCR系统扩增 SSU r DNA特定片段检测云南金平县恶性疟镜检阳性患者的 6份血样 ,并设阳性与阴性对照。　结果　间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出 10 4 bp、10 2 bp和 115 bp预期大小的特定扩增带。正常人血、人源弓形虫、杜氏利什曼原虫 DNA及灭菌双蒸水均未产生特异扩增带。 6份血样中检出 4份 P.v.、P.f.和 P.m.的混合感染 ,1份 P.v.和 P.f .及 1份 P.f .和 P.m.的混合感染。　结论　该系统特异、灵敏、稳定 ,在诊断疟疾的同时可准确地判定混合感染 ,对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控等具有实际应用价值。     

套式PCR扩增特定SSU rRNA基因片段检测四川疟原虫感染的研究

目的用套式PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。方法以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSUrRNA）基因为靶基因,选用1对疟原虫属特异性引物和4对种特异性引物,建立套式PCR扩增系统并用于四川省疟疾病人血样的检测。结果从间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出104bp、102bp和115bp预期大小的特定扩增带。61份血样检测结果与镜检的间日疟阳性符合率为100％。并查出镜检漏诊的2例P.v.和P.m.的混合感染及1例P.v.、P.f.和P.m.的混合感染病例。结论本系统特异、灵敏、稳定、简便,可在诊断疟疾的同时判定混合感染,故对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控有实际应用价值。     

套式PCR扩增特定SSUrDNA基因片段检测四川疟原虫感染的研究

目的：用套式PCR系统诊断、鉴别人体疟原虫感染。方法：以疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸（SSUrDNA）基因为靶基因,选用1对疟原属特异性引物,建立套式PCR扩增系统并用于四川省疟疾病人血样的检测。结果：从间日疟原虫、恶性疟原虫和三日疟原虫感染血样中分别扩增出104bp,102bp和115bp预测大小的特定扩增带。61份血样检测结果与镜检的间日疟阳性符合率为100％,并查出镜检漏诊的2例P.v.和P.m.的混合感染及1例P.v.、P.F.和P.m.的混合感染病例,结论本系统特异、灵敏,稳定、简便,可在诊断疟疾的同时判定混合感染,故对疟疾的诊断,大规模流行病学研究及疫情监控有实际应用价值。     

套式PCR扩增特定SSrRNA基因片段诊断间日疟及混合感染的研究

根据间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳｒＲＮＡ）基因序列，设计并合成两对特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增出一条长１２０个碱基对（ｂｐ）的间日疟原虫ＳＳｒＲＮＡ基因特定片段，并用于云南间日疟患者的血样检测。结果表明：该系统特异性强，除间日疟原虫外，恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）、三日疟原虫（Ｐ．ｍ．）及正常人血ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。该系统检测原虫的敏感度为０．１个疟原虫／ｌμｌ血，大大高于常规镜检。在进行间日疟检测中，该系统与镜检的阳性符合率为１００％，更重要的是发现镜检漏诊的４例Ｐ．ｖ．和Ｐ．ｆ．的混合感染病例。鉴于该系统具有特异、敏感、稳定、简便的特点和鉴别疟原虫种类、判定混合感染等优点，故对疟疾的诊断、大规模流行病学研究及疫情监控具有应用价值     

套式PCR法检测间日疟原虫的研究

以滤纸采集间日疟原虫患者血样，煮沸法萃取ＤＮＡ模板，用间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ特异序列为内外引物，进行双温度点套式ＰＣＲ扩增，其检测原虫率水平为０．８４×１０＾－６，特异性强。检测云南疟区发热患者血样１６６份，检出率为６３．９％，显著高于镜检法的４８．２％。以镜检法为参照，本法的敏感性为９７％，特异性为６１％，阳性预期值和阴性预期值分别为６５％和９７％，表明是检测间日疟原虫感染的一个良好手段，可作     

套式PCR检测滤纸干血滴中恶性疟原虫的研究

目的：建立简易、实用的套式ＰＣＲ检测恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）的方法。方法：以小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）为目的片段的双温度点套式ＰＣＲ扩增滤纸干血滴中Ｐ．ｆ．ＤＮＡ，并将结果与镜检法进行比较研究。结果：１４３例标本中两法均阳性和均阴性分别有５５份和５１份，镜检阴性而ＰＣＲ阳性者３４份，镜检阳性而ＰＣＲ法阴性３份。套式ＰＣＲ总阳性率为６２％，显著高于镜检法的４１％，两者符合率为７４％。结论：本法简便、快速，敏感性高、特异性强，具有一定的现场应用价值。     

套式PCR扩增特定SSUrDNA片段诊断恶性疟的研究

设计2对针对恶性疟原虫（P．f.）小亚单位核糖体核糖核酸基因（SSUrDNA）的特异引物，采用双温度点套式聚合酶链式反应（PCR）技术，从用煮沸法快速萃取的样本DNA中，扩增P．f.SSUrDNA片段，进行恶性疟原虫的检测。结果表明，该系统扩增样本DNA片段大小恒定，经限制性酶切进一步分析，证实均为P．f.SSUrDNA目的片段，其检测原虫的灵敏度为0．8×10-6，较常规镜检敏感，并具有鉴别红内期早期阶段疟原虫种类和确认有无混合感染的潜力。因而认为该系统是灵敏、准确、简易、快速的疟疾诊断新方法，值得推广使用。     

PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的 评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。方法 采集海南省疟疾混合感染流行区304份滤纸干血滴样本，根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列，设计合成3条引物．采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段，检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA；同时与镜检法进行比较。结果 在304份样本中，PCR法阳性15份，其中间日疟7份．恶性疟8份；镜检法阳性11份，其中间日疟6份，恶性疟5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性；镜检阴性而PCR阳性的4份样本，其扩增产物经限制性酶切鉴定，证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。结论 此PCR检测体系灵敏、特异．对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

套式PCR检测不同地理株间日疟原虫及部分SSU rRNA基因序列鉴定

为了确定扩增的特定 Ｓ Ｓ Ｕｒ Ｒ Ｎ Ａ 基因片段是否适用于不同地理株间日疟原虫的检测,在以往工作的基础上,用同一套式 Ｐ Ｃ Ｒ 体系对 ２２ 例四川和 ３０ 例云南患者及１ 例在印度感染疟疾的归国患者进行间日疟筛查,并从 Ｐ．ｖ 阳性的四川和云南血样中任取 １ 例,与 Ｐ．ｖ 阳性的印度血样分别扩增,用 Ｐ Ｃ Ｒ 产物测序,结果显示３ 者序列完全一致;与美国 Ｎ Ｃ Ｂ Ｉ的网上基因数据库比较,发现这３ 者又与萨尔瓦多等其他５ 个间日疟原虫不同地理株的小亚单位核糖体核糖核酸相应基因片段完全一致。该结果进一步证实了所扩增的片段确为目的片段,并提示该诊断体系可以适用于不同地区的间日疟原虫地理株的检测。     

套式PCR扩增特定SSrRNA基因片段诊断间日疟及混合感染的研究

根据间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳｒＲＮＡ）基因序列，设计并合成两对特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增出一条长１２０个碱基对（ｂｐ）的间日疟原虫ＳＳｒＲＮＡ基因特定片段，并并用于云南间日疟患者的血样检测，结果表明，该系统特异性强，除间日疟原虫外，恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）三日疟原虫（Ｐ．ｍ．）及正常人血ＤＮＡ样本均无此扩增带出现，该系统检测原虫的敏感度为０．１个疟原     

套式PCR检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性

目的：分析套式聚合酶链反应技术检测蚊体内疟原虫的敏感性与特异性。方法：采用２对针对间日疟原虫小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）的特异引物，利用套式ＰＣＲ技术，从蚊体ＤＮＡ样本中，扩增间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ片段，进行间日疟原虫的检测。结果：扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分析，可见扩增出特异的约１２１ｂｐ大小的ＤＮＡ片段，估测每份蚊虫ＤＮＡ样本中含有３个以上子孢子或１００只蚊中含有１只阳性蚊即可得此片段，而对恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、约氏疟原虫及正常蚊虫ＤＮＡ不能扩增出此片段。结论：此法具有高度的敏感性和特异性。     

标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究

目的 建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应（PCR）系统。 方法 应用标签引物扩增技术、Primer Premier 5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR，检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。 结果 新建立的标签引物套式/多重PCR，检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血，间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样（恶性疟24份和间日疟47份）的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。 结论 通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统，适用于检测现场采集的滤纸血样，其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法，是很有潜力的疟疾诊断技术。     

聚合酶反应扩增谷氨酸富有蛋白基因片段应用于恶性疟原虫基因分型

目的：建立恶性疟原虫谷氨酸富有蛋白（ＧＬＵＲＰ）基因分型诊断鉴别系统。方法：设计并合成两对针对恶性疟原虫ＧＬＵＲＰ基因的特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增ＧＬＵＲＰ基因Ｒ２多态区目的基因，并应用于泰国Ｂｏｒａｉ疟区恶性疟患者虫株基因分型。结果：在自然感染的恶性疟原虫株群中，ＧＬＵＲＰ基因存在明显的多态性。在１５４份恶性疟感染血样中，共检查出２９０个基因株，它们属于１２种ＤＮＡ片段长度不同的ＧＬＵＲＰ基因型；其中以７７０ｂｐ片段基因型较为常见，１１００ｂｐ片段基因型较少见。４３％以上病人为不同恶性疟原虫基因株混合感染者。在９个月的流行季节中，１２种不同基因株的频率构成比无明显变化。结论：建立ＧＬＵＲＰ基因分型诊断鉴别系统，将有助于疟原虫虫株分类和致病性研究，对疟疾的流行病学研究与防治具有实用意义。     

聚合酶链反应扩增谷氨酸富有蛋白基因片段应用于恶性疟原虫基因分型

目的：建立恶性疟原虫谷氨酸富有蛋白（ＧＬＵＲＰ）基因分型诊断鉴别系统。方法：设计并合成两对针对恶性疟原虫ＧＬＵＲＰ基因的特异引物，采用套式聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，扩增ＧＬＵＲＰ基因Ｒ２多态区目的基因，并应用于泰国Ｂｏｒａｉ疟区恶性疟患者虫株基因分型。结果：在自然感染的恶性疟原虫株群中，ＧＬＵＲＰ基因存在明显的多态性。在１５４份恶性疟感染血样中，共检查出２９０个基因株，它们属于１２种ＤＮＡ片段长度不同的ＧＬＵＲＰ基因型；其中以７７０ｂｐ片段基因型较为常见，１１００ｂｐ片段基因型较少见。４３％以上病人为不同恶性疟原虫基因株混合感染者。在９个月的流行季节中，１２种不同基因株的频率构成比无明显变化。结论：建立ＧＬＵＲＰ基因分型诊断鉴别系统，将有助于疟原虫虫株分类和致病性研究，对疟疾的流行病学研究与防治具有实用意义。     

套式聚合酶链式反应诊断恶性疟原虫及混合感染的研究

为了建立一种特异、敏感、简便的疟疾诊断方法,设计并合成两对针对恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）小亚单位核糖体核糖核酸（ＳＳＵｒＲＮＡ）基因特异的引物,采用套式聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,扩增恶性疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ基因特定片段。利用该系统诊断云南及海南疟疾患者血样,并随机选取扩增产物进行克隆测序鉴定。结果显示,恶性疟原虫模板均扩增出长度为２０５ｂｐ的特定基因片段,经Ｔ－载体克隆测序与恶性疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ特定基因片段序列完全符合。该系统特异性强,除恶性疟原虫外,间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、三日疟原虫（Ｐ．ｍ．）、卵形疟原虫（Ｐ．ｏ．）、正常人血ＤＮＡ样本及空白对照均无此扩增带出现。该系统检测原虫的敏感度为１．５个原虫／μｌ,大大高于常规镜检。６１份Ｐ．ｆ．镜检阳性标本在进行ＰＣＲ检测时亦均呈阳性,同时联合应用套式ＰＣＲ扩增间日疟原虫ＳＳＵｒＲＮＡ特定基因片段的检测系统,发现６１例恶性疟病人中２３例是Ｐ．ｆ．和Ｐ．ｖ．混合感染。该检测系统具有特异、敏感、稳定、简便的特点,对疟疾的诊断、混合感染的判定具有一定的临床应用价值     

PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的　评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。　方法　采集海南省疟疾混合感染流行区 3 0 4份滤纸干血滴样本 ,根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列 ,设计合成 3条引物 ,采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段 ,检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA ;同时与镜检法进行比较。　结果　在 3 0 4份样本中 ,PCR法阳性 15份 ,其中间日疟 7份 ,恶性疟 8份 ;镜检法阳性11份 ,其中间日疟 6份 ,恶性疟 5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性 ;镜检阴性而PCR阳性的 4份样本 ,其扩增产物经限制性酶切鉴定 ,证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。　结论　此PCR检测体系灵敏、特异 ,对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

PCR扩增环子孢子蛋白基因3' 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3 端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。     

PCR扩增环子孢子蛋白基因3’ 端片段用于检测恶性疟原虫的初步研究

目的 :建立 PCR检测恶性疟原虫的新方法。方法 :作者采用自行设计并合成的一对恶性疟原虫特异引物 ,经 PCR扩增环子孢子蛋白 ( CSP)基因 3 端保守区序列 2 4 5bp片段 ,观察了它的特异性、敏感性和稳定性。结果 :1从 4株培养的恶性疟原虫和 2例恶性疟患者血样中均扩增出约 2 4 5bp的 DNA目的片段 ,用业已鉴定的 CSP基因序列作模板再行扩增证实其为恶性疟原虫CSP基因片段 ;2对间日疟原虫、利什曼原虫、弓形虫和健康人血样进行 PCR反应 ,均未见扩增条带 ;3本检测系统可检出恶性疟原虫感染血样中 0 .18个原虫所含的 DNA模板 ;4采用不同方法制备模板及不同反应方式均能获得满意结果 ;结论 :PCR扩增恶性疟原虫 CSP基因 3端片段用于恶性疟原虫检测具有灵敏、高度特异且稳定性好等优点。     

恶性疟原虫SSUrDNA特定片段的体外扩增及鉴定

根据已知疟原虫、其它寄生人体原虫及人的小亚单位核糖体核糖核酸基因（ＳＳＵｒＤＮＡ）编码区序列，借助计算机核酸序列软件分析，设计出一对用于恶性疟原虫（Ｐ．ｆ．）ＳＳＵｒＤＮＡ特定片段扩增的引物。采用双温度点聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，从我国Ｐ．ｆ．ＦＣＣ／ＹＮ茅芽株红内期基因组ＤＮＡ中，扩增出约５７０个碱基对（ｂｐ）的ＤＮＡ片段，与预期长度相符；而间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）、利什曼原虫（Ｌ．ｄ．）、弓形虫（Ｔ．ｇ．）及人白细胞ＤＮＡ样本均无此扩增带出现。扩增片段经限制性内切酶消化和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交分析，证实为Ｐ．ｆ．ＳＳＵｒＤＮＡ目的片段。