三联抗肿瘤疗法预防晚期原发性肝癌肝移植术后肿瘤复发的临床研究

目的初步探讨联合应用西罗莫司、胸腺肽α-1(Tα-1)及槐耳颗粒在预防晚期原发性肝癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发的有效性及安全性。方法联合治疗组为2010年至2012年在解放军第309医院接受肝移植的12例晚期肝癌患者(符合杭州标准)。历史对照组为2002年至2006年在该院接受晚期肝癌肝移植术15例患者,其随访资料完整。术后1个月根据患者的个体差异调整免疫抑制剂的种类或剂量,应用他克莫司(FK506)联合吗替麦考酚酯(MMF),术后1个月逐渐撤出FK506,由西罗莫司替代;术中给予甲泼尼龙500 mg,术后小剂量甲泼尼龙治疗,1周停药,此时开始加用Tα-1及槐耳颗粒。Tα-1用法:先连续皮下注射10 d,每次1.6 mg,每日1次,以后每周2次。槐耳颗粒:每次20 g,每日3次。所有患者均予随访。收集患者术后随访资料,内容包括术后1年血清甲胎蛋白(AFP)变化,术后排斥反应发生情况,肿瘤复发情况及处理方式,生存时间。结果联合治疗组随访8～35个月,中位随访时间18个月,无失访、退组等情况,患者均存活;历史对照组中位随访时间14个月,直至所有患者死亡。联合治疗中2例术后出现肺部孤立性转移灶(单发)和2例术后出现肺部多发转移灶(多发),经γ刀治疗后治愈。历史对照组中术后6个月15例患者中7例复发,术后1年内15例患者全部复发,且全部出现肺部转移,单发6例,多发9例,均死于肿瘤多处转移。结论联合应用西罗莫司、Tα-1及槐耳颗粒在预防晚期肝癌肝移植术后肿瘤复发有显著疗效,能延缓肿瘤的复发,延长患者的生存时间。     

肝癌肝移植术后肿瘤复发与外周血调节性T细胞及细胞因子表达水平的关系

目的  分析肝细胞癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发与调节性T细胞(Treg)及细胞因子表达水平的关系。方法  以解放军第309医院2010年至2014年56例肝移植患者为研究对象。根据术后病理资料分为肝癌肝移植组(28例)和肝硬化肝移植组(肝硬化组,28例),肝癌肝移植组再根据术后患者有否肿瘤复发分为未复发组(8例)和复发组(20例)。比较各组患者外周血中Treg及调节性细胞因子[血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-2、IL-10、IL-12、转化生长因子(TGF)-β、干扰素(IFN)-γ]的表达水平。结果  与肝硬化组比较,未复发组的IFN-γ、IL-12水平显著升高(均为P＜0.05);复发组的Treg%、VEGF、IFN-γ、IL-10、TGF-β水平均显著升高,IL-2和IL-12水平明显降低(均为P＜0.05)。与未复发组比较,复发组的Treg%、VEGF、IL-10、TGF-β水平均显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-12水平明显降低(均为P＜0.05)。结论  Treg及细胞因子水平可作为肝癌肝移植术后肿瘤复发的预测指标。     

西罗莫司应用于肝癌肝移植受者的疗效分析

目的 评估肝癌肝移植受者应用西罗莫司对肿瘤复发和受者存活的影响.方法 回顾性分析2006年1月至2011年1月行肝癌肝移植的142例受者的资料,根据术后是否应用西罗莫司分为研究组(62例)和对照组(80例).采用生存分析方法比较两组患者的无瘤生存时间、带瘤生存时间及受者对西罗莫司的耐受性.结果 两组受者无瘤生存率的差异无统计学意义(P＞0.05).两组符合米兰标准者、超过米兰标准且符合美国加州大学旧金山分校(UCSF)标准者、超过UCSF标准者分别相比较,受者无瘤生存率的差异无统计学意义(P＞0.05).对照组中有35例肝移植后肿瘤复发,其中21例肿瘤复发后加用西罗莫司,带瘤生存时间中位数为12个月;14例复发后继续使用原有免疫抑制剂,带瘤生存时间中位数为8个月;两者带瘤生存时间的差异有统计学意义(P=0.039).研究组新发糖尿病发生率低于对照组,但是口腔溃疡和高脂血症发生率却高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 未发现西罗莫司能明显降低肝癌肝移植后肿瘤复发率,但移植后肿瘤复发者应用西罗莫司可延长其带瘤生存时间;应用西罗莫司者移植后糖尿病的发生率较低.     

以西罗莫司为主的免疫抑制方案在肝癌肝移植受者中的应用

目的 探讨肝癌肝移植受者术后采用以西罗莫司联合两剂激素为主的免疫抑制方案的安全性和有效性.方法 2004年3月至2006年10月间,共为92例超出米兰标准的中晚期肝癌患者施行了肝移植.其中89例纳入研究.前54例患者采用以他克莫司为主的免疫抑制方案,后35例患者采用以西罗莫司为主的新免疫抑制方案.术后对两组受者均进行了随访.随访时检测受者的肝肾功能、血糖和血脂水平等生化指标,监测受者感染、急性排斥反应、肿瘤复发、存活率及药物副作用等表现,并对两组免疫抑制方案的效果进行了分析和比较.结果 两组间1年肿瘤复发率、3个月内感染发牛率、术后1个月高血糖发生率及术后1年肾功能损害和高脂血症发生率的比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其它指标的比较,无显著性差异.结论 肝癌肝移植受者采用以西罗莫司联合两剂激素为主的免疫抑制方案是安全和有效的.该方案在有效抑制排斥反应的同时可显著降低受者的肿瘤复发率,还可减少感染发生率、高血糖及.肾功能损害,但增加了高脂血症发生率.     

西罗莫司用于治疗肝癌肝移植术后肿瘤复发患者的疗效分析

目的 探讨原发性肝细胞癌(肝癌)肝移植术后肿瘤复发患者在减少钙调磷酸酶抑制剂(他克莫司或环孢素)剂量并联用西罗莫司的临床疗效.方法 24例复发患者随机分为两组:研究组12例,确诊复发后即将钙调磷酸酶抑制剂减量并联合应用西罗莫司(3 mg/d,连用3 d后改为1.5 mg/d,按血药谷浓度4～8 ng/ml调整用量)治疗...     

西罗莫司促进小鼠心脏移植模型中调节性T细胞的分化和增殖

目的  探讨西罗莫司(SRL)对小鼠异位心脏移植模型的移植物存活时间以及脾脏中调节性T细胞(Treg)分化和增殖的影响。方法  应用Cuff法建立雄性BALB/c→C57BL/6小鼠颈部异位心脏移植模型。术后随机分为3组各10只受体:对照组术后不予特殊药物治疗, SRL组术后1~14 d予SRL 10 mg/(kg·d)灌胃, 环孢素(CsA)组术后1~14 d予CsA 30 mg/(kg·d)灌胃。记录移植心脏存活时间, 于移植心停搏或术后14 d取脾, 分离单个核细胞, 上流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺Treg占CD4⁺T细胞比例(CD4⁺CD25⁺Treg%), 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测Foxp3信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果  与对照组比较, CsA组和SRL组均明显延长小鼠移植心的生存时间(均为P < 0.01), 而两者之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较, CsA组脾脏中CD4⁺CD25⁺Treg%明显降低, 而SRL组则明显升高(均为P < 0.01), 后两组比较差异有统计学意义(P < 0.01)。SRL组脾脏T细胞的Foxp3 mRNA表达明显高于对照组和CsA组, 其中对照组亦明显高于CsA组(均为P < 0.01)。结论  在小鼠心脏移植模型中, SRL明显延长移植物的存活期, 促进CD4⁺CD25⁺Treg的增殖与生长, 有利于免疫耐受的形成。     

西罗莫司对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用

目的探讨联合西罗莫司的联合免疫抑制方案对肝癌肝移植术后肿瘤复发的抑制作用。方法选用Wistar大鼠40只,建立大鼠肝癌肝移植术后肿瘤复发模型,实验组予(SRL MP CSA),对照组(MP CSA),观察60 d,死后剖腹探查取病理检查。对比结果。结果实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重为(12.5±0.2)g,较对照组(14.4±0.3)g轻,差异有统计学意义(P<0.05);实验组荷瘤大鼠荷瘤肝重比为(0.0613±0.0006),较对照组(0.0708±0.0013)小,差异有统计学意义(P<0.05);实验组复发率为90%,对照组为95%,差异无统计学意义(P>0.05);实验组生存时间为(25.0±1.9)d,对照组为(14.8±2.3)d,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组大鼠PCNA指数为(64.1±2.1)%,较对照组(80.8±1.0)%低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用联合西罗莫司的联合免疫抑制方案虽然对肿瘤复发率改善不明显,但能够有效抑制肿瘤的生长速度、延长带瘤生存时间。     

术前调节性T细胞水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系

目的:探讨术前调节性T细胞(Treg)水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发的关系.方法:搜集2006年1月至2007年2月在我院实施的32例肝癌肝移植病人术前外周血及肿瘤组织,采用流式细胞技术检测外周血CD4 D25 调节性T细胞的比例,采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中FoxP<,3> 细胞浸润的比例,以正常人的外周血、正常肝组织及肝硬化组织作对照.对32例病人随访18个月,观察肿瘤复发时间.分析术前Treg水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发时间的相关性,单因素回归判断术前Treg水平对肿瘤复发时间的影响.结果:肝癌病人外周血及肝脏中Treg的水平较正常人为高:术前外周血Treg水平与肝移植术后肿瘤复发时间呈负相关(r=-0.87);术前Treg水平是影响术后肿瘤复发时间的独立危险因素(P<0.01);高Treg组病人肝移植术后一年肿瘤复发率高于低Treg组者,差异有统计学意义(P<0.05).结论:术前调节性T细胞水平可作为肝癌肝移植术后肿瘤复发的预测指标之一.     

不同免疫抑制剂对肝移植受者外周血中调节性T淋巴细胞比例的影响

目的 探讨西罗莫司(SRL)和钙调磷酸酶抑制剂(CNI)对肝移植受者外周血中CD4+CD25high T淋巴细胞水平的影响.方法 排除肝移植远期移植肝功能异常的受者,将移植肝功能长期(超过2年)稳定的受者47例纳入研究,其中免疫抑制方案使用SRL者15例(SRL组),使用CNI(均为他克莫司)者32例(CNI组).以同期38名健康成人志愿者作为正常对照.使用流式细胞仪检测各组受试者外周血中单个核细胞CD4、CD25及Foxp3的表达水平,比较各组间外周血中CD4+CD25high调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的差异.结果 与正常对照组相比,CNI组外周血淋巴细胞中CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著减少(P<0.05),SRL组CD4+ CD25high T淋巴细胞的比例显著升高(P<0.05).SRL组、正常对照组和CNI组受试者外周血中CD4+ CD25high Foxp3+ Treg 细胞占CD4+ T淋巴细胞的比例依次降低,分别为1.88%(1.56%～2.60%)、1.15%(0.57%～1.48%)和0.84%(0.46%～1.45%),3组间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01或P<0.05).CD4+ CD25 high T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率超过95%,CD4+ CD25 low T淋巴细胞表达Foxp3的阳性率低于20%,CD4+ CD25-T淋巴细胞不表达Foxp3.结论 SRL可促进肝移植受者外周血中Treg细胞水平的升高,而CNI可降低Treg细胞的水平.     

肝癌肝移植术后肝癌复发大鼠模型的建立

目的通过在大鼠肝癌肝移植后免疫抑制状态下接种肿瘤组织块来模拟临床中同种异体肝移植后肝癌复发的进程,建立稳定的肝移植后肝癌复发模型。方法应用Wistar大鼠肝癌细胞系CBRH-7919经过培养传代、皮下成瘤、肝内接种等过程建立大鼠的种植性肝癌模型。行SD→Wistar的大鼠移植,免疫抑制状态下肝内植入瘤块。A组(n=15),以免疫抑制状态下的未行肝移植的Wistar大鼠肝内植瘤,作为对照组;B组(n=15),为肝移植术中植瘤组;C组(n=15),为术后1周植瘤组。观察各组大鼠的成瘤率,在B超下观察肿瘤生长情况,绘制生长曲线。结果肝移植术中植瘤组(B组)大鼠仅6只成瘤,成瘤率为40.0%,而对照组(A组)和术后植瘤组(C组)大鼠各有13只成瘤,成瘤率为86.7%。术中植瘤组大鼠肿瘤生长速度明显降低。结论肝移植术后1周在免疫抑制状态下肝内接种瘤块成瘤,建立了安全、可靠的肝移植术后肝癌复发的大鼠模型。     

Hippo信号通路相关蛋白对肝癌肝移植术后肿瘤复发的影响

目的检测Hippo信号通路相关蛋白在肝癌组织中的表达,探讨其对肝癌肝移植术后肿瘤复发的影响。方法回顾性分析2004年7月至2009年9月广州中山大学附属第三医院收治的105例肝癌患者的临床资料。收集施行同种异体肝移植、经组织病理学检查证实为肝细胞癌患者的手术切除标本、肿瘤数目、肿瘤直径、肿瘤侵犯血管情况、术前AFP水平、术后病理检查结果等临床病理资料。通过门诊、信件和电话等方式对患者进行术后随访,肝移植术后1个月内每周随访1次,半年内每个月随访1次,1年后每3个月随访1次。随访时间截至2012年12月,以首次观察到患者肿瘤复发为终点,无瘤生存时间以手术日期至发现患者肿瘤复发为终点。免疫组织化学染色检测肝癌组织中YAP和磷酸化YAP蛋白、Hippo信号通路核心蛋白（Latsl／2、磷酸化Latsl／2、Mstl、磷酸化Mstl／2）的表达。计数资料采用Ⅳ。检验,连续资料采用Studentt检验,对影响肝癌肝移植术后患者无瘤生存时间的因素进行单因素及多因素分析采用COX比例风险模型,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Log—rank检验分析患者无瘤生存情况。结果YAP和磷酸化YAP蛋白在肝癌组织中的阳性表达主要定位于细胞核及细胞质,Latsl／2、磷酸化Latsl／2、Mstl、磷酸化Mstl／2蛋白主要定位于细胞质。YAP和磷酸化YAP蛋白阳性表达率为51．43％（54／105）和55．24％（58／105）,Latsl／2、磷酸化Latsl／2、Mstl、磷酸化Mstl／2蛋白阳性表达率分别为45．71％（48／105）、9．52％（10／105）、64．76％（68／105）和20．00％（21／105）。YAP蛋白阳性表达与肿瘤直径、静脉大血管侵犯及肝癌AJCC分期有关（χ^2=4．173,9．611,7．233,P〈0．05）;Latsl／2蛋白阳性表达与肿瘤直径及肝癌AJCC分期有关（χ^2=14．413,7．969,P〈0．05）;Mstl蛋白阳性表达与肿瘤直径有关（χ^2=4．129,P〈0．05）。单因素分析结果表明：YAP蛋白表达、Latsl／2蛋白表达、磷酸化Mstl／2蛋白表达、年龄、肿瘤直径、组织分化程度、术前AFP水平、静脉大血管侵犯、肝癌AJCC分期是影响患者肝移植术后肿瘤复发的危险因素（HR=2．603,0．502,1．802,0．955,3．559,2．395,2．414,2．915,2．086,95％可信区间：1．452～4．666,0．287～0．880,1．040～3．123,0．931—0．981,1．921—6．595,1．475—3．889,1．313～4．337,1．604～5．229,1．370～3．176,P〈0．05）。多因素分析结果表明：YAP蛋白阳性表达、肿瘤直径〉5em、组织低分化、肝癌AJCCⅢ期是影响患者肝移植术后肿瘤复发的独立危险因素（HR=2．011,2．176,2．390,1．574,95％可信区间：1．115～3．628,1．125—4．206,1．448～3．945,1．041～2．381,P〈0．05）。患者中位随访时间为13．0个月（1．0～96．0个月）,失访8例,54例患者肿瘤复发,复发时间为1．0～41．0个月,平均复发时间为6．7个月。YAP蛋白阳性表达者与YAP蛋白阴性表达者比较肝移植术后无瘤生存时间明显缩短（Log—rank值=12．890,P〈0．05）。结论YAP和磷酸化YAP蛋白在肝癌组织中的阳性表达主要定位于细胞核及细胞质,Lats1／2、磷酸化Lats1／2、Mst1、磷酸化Mst1／2蛋白阳性表达主要定位于细胞质。Hippo信号通路中,只有YAP蛋白阳性表达是肝癌患者肝移植术后肿瘤复发的独立危险因素。     

肝癌肝移植术后肿瘤复发转移的防治

肝癌肝移植术后肿瘤复发转移是影响肝移植治疗肝癌疗效的主要因素.深入研究肝癌的生物学特性和肝移植术后患者免疫状态与肿瘤复发转移的关系,筛选准确预测肝癌肝移植的预后指标,对高危复发风险的患者进行有效的干预治疗,对复发转移者进行个体化综合治疗有助于进一步提高肝移植治疗肝癌的疗效.

Abstract：

Post-transplant tumor recurrence and metastasis remain the main obstacles for long-term survival after liver transplantation (LT) for hepatocellular carcinoma (HCC). Measures to explore the HCC biological characteristics and the relationship between post-transplant immuno-suppression and tumor recurrence, to determine precisely the prognostic factors associated with post-transplant recurrence, to intervene effectively for those with high risk of recurrence, and to use individualized multimodality treatment for recurrence and metastasis may improve the therapeutic results of LT for HCC.     

肝脏恶性肿瘤肝移植术后肿瘤复发的临床研究

目的 总结肝脏恶性肿瘤患者行肝移植术后肿瘤复发的临床特点,探讨术后复查的规范方法和治疗复发肿瘤的措施.方法 回顾性分析215例原位肝移植患者的临床资料,分析其中81例复发患者的肿瘤复发时间、复发部位和治疗效果.结果 81例患者的随访时间为6～108个月.首次发现肿瘤复发的时间为肝移植术后3～20个月,常见的复发部位为肺、腹腔种植或淋巴结转移、移植肝内复发和骨转移.复发肿瘤的治疗以局部治疗为主,包括肺转移瘤切除术6例次、伽马刀治疗74例次;腹盆腔转移癌切除术10例次,腹腔淋巴结伽马刀治疗8例次;肝转移癌切除术6例次、消融治疗5例次、伽马刀治疗15例次、TACE 33例次,二次肝移植3例次;骨转移瘤切除术15例、伽马刀治疗16例次以及病理性骨折内固定术3例;脑转移瘤伽马刀治疗4例次.本组患者治愈3例,带瘤生存6例,已存活21～56个月,中位生存时间为39个月.死亡72例,中位生存时间为15个月.结论 肝移植术后对恶性肿瘤患者要进行有针对性的规范检查、积极治疗复发肿瘤,尽量延长患者的生存时间.     

三氧化二砷预防大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的研究

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的预防作用。方法　选用雄性Wistar大鼠以质量分数为 0 .0 5 % 2 乙酰氨基芴的颗粒饲料饲喂 12周 ,第 2 1周剖腹取肝脏结节进行组织学检查确认建立大鼠原发性肝癌模型 ,按不同的组别进行原位肝移植。结果　A组大鼠术后平均生存 (19.83± 2 .89)d。B组大鼠术后平均生存 (75 .40± 5 .76)d。C组大鼠术后平均生存 (88.0 0± 5 .60 )d。B组大鼠术后生存时间和A组大鼠术后生存时间比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 0 1) ,C组大鼠术后生存时间和实验B组大鼠术后生存时间比较 ,差异有统计学意义(P <0 .0 0 1)。结论　大鼠原位肝移植对大鼠原发性肝癌具有治疗作用。As2 O3 对大鼠肝癌肝移植后减少肿瘤复发具有一定的预防作用。     

肝移植术后合并脓毒症患者外周血调节性T细胞比例及功能变化的分析

目的探讨肝移植患者在脓毒症不同阶段外周血调节性T细胞（Treg）比例和功能的变化。方法选取自2009年1月至2010年12月期间在中山大学附属第三医院行外科手术,术后合并脓毒症的47例患者作为研究对象,根据手术方式和美国胸科和危重症医师协会制订的脓毒症诊断和分期标准指南分为4组：肝移植脓毒症组（sepsis after liver transplantation group,TS组;11例）、肝移植严重脓毒症组（severe sepsis after liver transplantation group,TSS组;10例）、非肝移植脓毒症组（sepsis without liver transplantation group,NTS组;15例）、非肝移植严重脓毒症组（severe sepsis without liver transplantation group,NTSS组;11例）,另外选取20名健康正常人作为健康对照组。4组脓毒症患者通过急性生理和慢性健康评估（acute physiology and chronic health evaluation,APACHE）Ⅱ和感染相关的序贯器官衰竭评估（sequential organ failure assessment,SOFA）来评价与比较脓毒症严重程度。分别采集各组研究对象的外周血,采用流式细胞术检测CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞比例（Treg％）,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测Foxp3信使核糖核酸（messengerRNA,mRNA）。结果TSS和NTSS组的APACHEⅡ评分、SOFA评分均高于TS组和NTS组（均为P〈0．01）,且TS组的APACHEⅡ评分高于NTS组,TSS组的APACHEⅡ评分和SOFA评分均高于NTSS组（均为P〈0．01）。与健康对照组比较,NTS组Treg％明显降低（P〈0．001）,NTSS组明显升高（P=0．003）;而TS组与健康对照组相比差异无统计学意义（P=0．398）,TSS组也高于健康对照组（P=0．006）,但变化幅度不如NTSS组显著。4组脓毒症组的组间比较发现,NTSS组患者Treg％显著高于NTS组（P〈0．01）,而TSS组与Ts组两组比较差异无统计学意义（P=0．099）,NTS组患者Treg％低于Ts组（P=0．05）,而NTSS组则显著高于TSS组（P=0．002）。与健康对照组比较,NTSS组的Foxp3mRNA表达显著升高,差异有统计学意义（P〈0．05）。4组脓毒症组的组间比较发现,TSS组和NTSS组Foxp3mRNA表达值均高于TS组和TSS组,但移植组内（TS组与TSS组）的差异没有非移植组（NTS组与NTSS组）显著（分别为P=0．038、P〈0．001）;另外NTSS组的Foxp3mRNA表达显著高于TSS组（P=0．012）。结论免疫抑制剂的应用使移植患者在发生脓毒症时Treg的比例和功能的变化有别于普通人群,评估机体免疫状态时需要综合多个免疫指标。     

阿德福韦在预防肝移植后乙肝复发中的作用

目的评价adefovir在预防肝移植后乙肝复发中的应用效果及安全性.方法统计30例应用lamivudine出现耐药及病毒变异的肝移植病例加用adefovir后病人：ALT、HBV-DNA、Cr以及HBeAg的变化,以及观察adefovir的副作用.结果应用adefovir12周后,ALT恢复正常者占65.5%,HBVDNA转阴（＜10^4拷贝/ml）占76.7%,HBeAg转阴44%,未发现严重的肾功能异常及其它副作用.结论肝移植术后应用lamivudine出现耐药及病毒变异病例,及时加用adefovir可有效改善肝功能、抑制肝炎复发.