缺氧对人胰腺癌细胞整合素α5、β1表达的影响

目的探讨缺氧环境对人胰腺癌细胞株PANC1诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、整合素α5(integrinα,INFα5)和整合素β_1(integrinβ,INTβ_1)表达及侵袭力的影响。方法以5%氧条件下培养PANC1,采用RT-PCR和Western blot检测HIF-1α、INTα_s、INTβ_1的mRNA和蛋白表达;采用Matrigel胶观测人胰腺癌细胞黏附侵袭能力的变化。并加入HIF-1α抑制剂YC-1缺氧培养PANC1,观察上述各指标的变化。结果HIF-1α蛋白表达从常规培养时0.497±0.011逐渐上升到缺氧培养24h的1.455±0.133(P<0.05),应用YC-1后蛋白表达下降到0.465±0.073(P<0.05),而HIF-1αmRNA表达无明显变化;INT_(α5)蛋白从常规培养时0.964±0.032逐渐下降到缺氧培养24h的0.465±0.073(P<0.05),应用YC-1后蛋白表达又上升到0.883±0.013(P<0.05).INT_(α5)mRNA的表达从0.212±0.023下降到0.018±0.002(P<0.05),应用YC-1后再上升到0.069±0.011(P<0.05);INTβ1的蛋白和mRNA表达于缺氧培养及YC-1处理后均无明显变化。细胞侵袭力从常规培养时69.9±30.5逐渐上升到缺氧培养24h的105.0±14.9(P<0.05),应用YC-1后又下降到79.7±20.9(P<0.05)。结论缺氧微环境下HIF-1α过表达可能通过下调INT_(α5)来调控胰腺癌细胞间和细胞与基质间的黏附能力,有利于进一步侵袭转移。     

整合素β1基因沉默对胰腺癌细胞PANC1体外侵袭能力的影响及机制研究

目的 应用短发夹RNA(shRNA)沉默人胰腺癌细胞株PANC1的整合素α1(integrinβ1)基因表达,观察其对PNAC1细胞体外侵袭能力的影响,探讨其机制.方法 构建靶向integrinβ1基因的shRNA真核表达质粒integrinβ1-shRNA及对照真核表达质粒c-shRNA,转染人胰腺癌PANC1细胞,以未转染质粒的细胞作为对照组.应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测integrinβ1、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平,应用Transwell侵袭小室检测细胞体外侵袭能力.结果 integrinβ1-shRNA 组、c-shRNA组和对照组细胞integrinβ1 mRNA表达量分别为0.0029±0.0004、0.0131±0.0009、0.0138±0.0005;integrinβ1蛋白表达量为0.0159±0.0062、0.3215 ±0.0126、0.3107±0.0094.integrinβ1-shRNA 组integrinβ1 mRNA和蛋白表达抑制率分别为(78.6±7.2)％和(92.9±3.2)％(P＜0.01).而c-shRNA 组与对照组差异无统计学意义(P =0.2999).integrinβ1-shRNA组穿膜细胞数由(52±5)个降低至(21 ±4)个(P＜0.01);MMP-2和MMP-9mRNA表达分别从0.592±0.073和0.847±0.069降低到0.102±0.034和0.273±0.071;MMP-2和MMP-9蛋白表达分别从0.225±0.046和0.416±0.081降低到0.059±0.013和0.106±0.022(P值均＜0.05).结论 重组质粒integrinβ1-shRNA能有效地抑制PANC1细胞integrinβ1基因的表达,并可能通过下调MMP-2和MMP-9基因表达而抑制其体外侵袭能力.     

胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖与侵袭能力的影响

目的 研究胰岛素对人胰腺癌PANC1细胞增殖、侵袭能力及细胞低氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子( VEGF)表达的影响.方法 采用0.1、1、10、100 nmol/L胰岛素处理PANC1.噻唑蓝法和Transwell小室侵袭实验检测细胞增殖和侵袭能力;蛋白质印迹法和实时PCR法检测增殖性细胞核抗原(PCNA)及HIF-1α、VEGF蛋白和mRNA的表达.结果 胰岛素呈剂量依赖性诱导PANC1细胞的增殖,上调HIF-1α、VEGF蛋白表达.100 nmol/L胰岛素干预4d,PANC1细胞的PCNA蛋白表达显著上调(1.196±0.014比1.157±0.013,P＜0.05);Transwell小室穿膜细胞数量显著增加[(141.0±2.1)个比(89.0±1.4)个,P＜0.05];HIF-1α蛋白表达显著上调(1.139±0.020比0.598 ±0.013,P＜0.05),但HIF-1α mRNA表达无明显变化;VEGF蛋白表达显著上调(1.011±0.023比0.627±0.013,P ＞0.05),VEGF mRNA表达亦显著上调(0.970±0.016比0.350±0.013,P＜0.05).结论 高胰岛素微环境可诱导PANC1细胞增殖,并通过上调HIF-1α及VEGF的表达增强细胞的侵袭能力.     

缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响

目的探讨缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响。方法建立人胰腺癌SW1990细胞体外缺氧培养模型,随机分为缺氧培养8h、16h、24h组及常规培养组。采用RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白的表达。结果HIF-1α在常规培养细胞中的表达较弱,而在缺氧培养细胞中的表达水平明显增高。SW1990胰腺癌细胞株HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白在缺氧条件下的表达显著增强,并随缺氧时间的延长而升高。结论缺氧可诱导人胰腺癌SW1990细胞Glut1和VEGF的表达,这种作用可能是通过HIF-1α途径介导的。     

HIF-1α在胰腺癌组织中的表达及其对细胞凋亡的影响

目的 通过检测胰腺癌组织HIF-1α、Bcl-XL的表达,探讨HIF-1α对胰腺癌细胞凋亡的影响.方法 应用免疫组化方法检测41例胰腺癌和20例正常胰腺组织中HIF-1α、Bcl-XL的表达,TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测21例胰腺癌组织和10例正常胰腺中HIF-1α、Bcl-XL mRNA和蛋白的表达.结果 正常胰腺组织均无HIF-1α、Bcl-XL蛋白和mRNA的表达.胰腺癌组织HIF-1α、Bcl-XL蛋白表达率分别为63.4%和87.8%,HIF-1α mRNA和Bcl-XL mRNA的表达率分别为71.4%和80.9%,两者的表达呈正相关(r = 0.335, P = 0.032),HIF-1α阳性表达的胰腺癌的凋亡指数较阴性表达者低[(1.32 ± 0.59)% vs (1.79 ± 0.77)%,P = 0.034].结论 HIF-1α和Bcl-XL在胰腺癌组织中存在高表达.HIF-1α可能通过上调Bcl-XL的表达抑制胰腺癌细胞凋亡,在胰腺癌发生发展中起重要作用.     

缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响

目的 探讨缺氧对人胰腺癌SW1990细胞HIF-1α及靶基因Glut1、VEGF表达的影响.方法 建立人胰腺癌SW1990细胞体外缺氧培养模型,随机分为缺氧培养8 h、16 h、24 h组及常规培养组.采用RT-PCR和Western blot方法分别检测各组细胞HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白的表达.结果 HIF-1α在常规培养细胞中的表达较弱,而在缺氧培养细胞中的表达水平明显增高.SW1990胰腺癌细胞株HIF-1α、Glut1、VEGF mRNA和蛋白在缺氧条件下的表达显著增强,并随缺氧时间的延长而升高.结论 缺氧可诱导人胰腺癌SW1990细胞Glut1和VEGF的表达,这种作用可能是通过HIF-1α途径介导的.     

HIF—1α在胰腺癌组织中的表达及其对细胞凋亡的影响

目的通过检测胰腺癌组织HIF-1α、Bcl-XL的表达,探讨HIF-1α对胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用免疫组化方法检测41例胰腺癌和20例正常胰腺组织中HIF-1α、Bcl-XL的表达,TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测21例胰腺癌组织和10例正常胰腺中HIF-1α、Bcl-XLmRNA和蛋白的表达。结果正常胰腺组织均无HIF-1α、Bcl-XL蛋白和mRNA的表达。胰腺癌组织HIF-1α、Bcl-XL蛋白表达率分别为63.4%和87.8%,HIF-1αmRNA和Bcl-XL mRNA的表达率分别为71.4%和80.9%,两者的表达呈正相关(r=0.335,P=0.032),HIF-1α阳性表达的胰腺癌的凋亡指数较阴性表达者低[(1.32±0.59)%vs(1.79±0.77)%,P=0.034]。结论HIF-1α和Bcl-XL在胰腺癌组织中存在高表达。HIF-1α可能通过上调Bcl-XL的表达抑制胰腺癌细胞凋亡,在胰腺癌发生发展中起重要作用。     

缺氧对大鼠心肌细胞系H9C2中HIF-1α、CT-1表达的影响

目的 观察缺氧对大鼠心肌细胞系H9C2细胞中HIF-1、CT-1的影响.方法 采用向培养液中加氯化钴( CoCl2)模拟缺氧.实验分为缺氧组(培养液中加入100 μmol/L的CoCl2)和对照组(培养液中无CoCl2).通过CCK-8试剂盒检测各组H9C2细胞的存活率.通过Real-time PCR检测HIF-1α和CT-1的mRNA水平,通过Western blot技术检测HIF-1 α和CT-1的蛋白质水平.结果 缺氧3d和4d后,缺氧组H9C2细胞的存活率较对照组下降(P＜0.05),缺氧后H9C2细胞中HIF-1α mRNA表达无明显改变(P＞0.05),而蛋白表达增加(P＜0.05).缺氧后H9C2细胞中CT-1 mRNA和蛋白水平均增加(P均＜0.05).结论 缺氧环境下大鼠心肌细胞系H9C2中HIF-1α和CT-1的表达增加.     

Wortmannin阻断PI3K/AKT途径对食管癌缺氧诱导因子-1α及糖酵解的影响

目的 探讨人食管癌细胞TE1、TE13中应用wortmannin阻断PI3K/AKT通路对缺氧诱导因子(HIF)-1α的抑制效果及对糖酵解相关基因表达的影响,分析PI3K/AKT-HIF-1α途径对食管癌细胞糖酵解通路之间的关系.方法 wortmannin(2μmol/L)预处理食管癌细胞TE1、TE13后常氧和缺氧培养,分为①常氧组(N);②缺氧组(H);③常氧处理组(N+W);④缺氧处理组(H+W).采用Western印迹检测细胞中HIF-1α蛋白及己糖激酶(HK)-Ⅱ、葡萄糖载体蛋白(GLUT)-1、乳酸脱氢酶(LDH )-A等糖酵解相关基因蛋白的表达;实时定量PCR检测HIF-1α及HK-Ⅱ、GLUT-1、LDH-A等糖酵解相关基因mRNA的表达;分光光度法测定胞液中LDH、HK-Ⅱ活性和培养上清液中乳酸浓度.结果 常氧状态下,在TE1细胞中存在HIF-1α蛋白的表达,wortmannin(2 μmol/L)能抑制HIF-1α蛋白表达,12 h后抑制效应最明显,故选取12 h为后续实验的缺氧时间.TE1、TE13细胞经wortmannin预处理后HIF-1α、HK-Ⅱ、GLUT-1、LDHA蛋白表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05);HIF-1α、HK-ⅡmRNA表达较未加药细胞明显减弱(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin的TE1,TE13组食管癌细胞胞液LDH、HK-Ⅱ活性均较未加药细胞组明显减弱(P＜0.05),未加药细胞缺氧后酶活性增强(P＜0.05).常氧和缺氧条件下加用wortmannin组较未加药组细胞上清液乳酸浓度明显减低(P＜0.05),加wortmannin组细胞缺氧后表达增强(P＜0.05).结论 常氧及缺氧条件下,wortmannin能通过抑制食管癌细胞HIF-1α和糖酵解相关基因的表达导致乳酸水平降低,表明PI3K/AKT- HIF-1α途径与食管癌细胞糖酵解通路密切相关.     

缺氧诱导因子-1α在胰腺癌中的作用

目的:探讨缺氧环境下胰腺癌细胞胰腺癌肿瘤细胞株SW1990中缺氧诱导因子HIF- 1α、血管生长因子VEGF、葡萄糖转运体GLUT1、和耐药基因MDR1的变化,并阐明其中可能存在的分子调控机制．方法:将胰腺癌肿瘤细胞株SW1990分为常氧组和化学诱导缺氧组(CoCl2诱导),分别采用RT-PCR方法和Western blot方法观察两组HIF- 1α、VEGE、GLUT1及MDR1基因和蛋白的表达;再分别将两组分为对照组、空白质粒转染组和HIF-1α/PCDNA3．0质粒转染组,观察上述因子的基因和蛋白水平表达的变化．结果:化学诱导的缺氧能明显诱导细胞HIF- 1α蛋白的表达(P=0．0089),但对其mRNA的表达没有明显影响(P=0．057);缺氧时胰腺癌肿瘤细胞株SW1990中的VEGF(P=0．046, 0．039)、GLUT1(P=0．0024,0．036)、MDR1(P =0．021,0．038)基因和蛋白的表达水平都明显增高．转染质粒的缺氧组与常氧组相比,HIF- 1α、VEGF、GLUT1、MDR1的基因与蛋白水平都相应的有所增高．结论:缺氧时,胰腺癌细胞通过上调HIF-1α的表达引起其下游的靶基因VEGF、GLUT1和MDR1的表达,从而耐受缺氧并进一步恶性进展．     

缺氧诱导因子-1α表达与胰腺癌病理学特征及新生血管生成的关系

目的研究胰腺癌组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达与胰腺癌病理学特征的关系,以及HIF-1α表达与血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤微血管密度(MVD)之间的相互关系.方法应用免疫组织化学方法检测47例胰腺癌和10例正常胰腺组织中HIF-1α和VEGF蛋白的表达.同时用CD34单克隆抗体标记胰腺癌和正常胰腺组织中的微血管.结果HIF-1α和VEGF蛋白在47例胰腺癌组织中的阳性表达率分别为55.3%(26/47)和61.7%(29/47),而在10例正常胰腺组织中均未见表达.胰腺癌组织MVD为37.61±14.3,正常胰腺组织为7.55±2.4,二者间有显著性差别(t'=13.51,P＜0.001).HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率及MVD均与胰腺癌的浸润和转移密切相关(χ2=4.32,6.01,4.75,4.62;t=2.38,3.92;P＜0.05),而与胰腺肿块大小、组织学分级和患者术后1年生存率无关(P＞0.05).HIF-1α与VEGF(r=0.329,x2=5.71;P＜0.05)、HIF-1α与MVD(r=0.594,t=4.96;P＜0.001)及VEGF与MVD(r=0.366,t=2.64;P＜0.05)间在胰腺癌组织中的表达均呈显著的正相关性.结论在缺氧状态下,胰腺癌组织中HTF-1α基因被激活,过量表达HIF-1α蛋白,并通过诱导VEGF的生成而刺激肿瘤新生血管的生成,促进癌细胞的浸润和转移.     

老年原发性肺癌患者缺氧诱导因子-1α和葡萄糖转运蛋白-1的表达及临床意义

目的 探讨缺氧诱导因子-1(HIF-1α)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在低氧培养条件下肺腺癌细胞株A549及老年人原发性肺癌组织中的表达及临床意义. 方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测氯化钴诱导缺氧下肺腺癌细胞A549的生长活性.分别采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫印迹(Western blot)、免疫组化法测定缺氧不同时间下A549细胞及60例老年人原发性肺癌组织和26例老年人良性疾病(非癌组)组织中HIF-1α和GLUT-1的mRNA和蛋白表达,并分析HIF-1α、GLUT-1与临床病理特点之间的关系. 结果 肺腺癌细胞在缺氧下增殖能力较正常时增强.RT-PCR结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA的表达分别为0.69±0.08、0.65±0.09,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1 mRNA表达分别为0.99±0.16、0.83±0.11,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.47±0.11、0.40±0.08(t值分别为3.81、4.97、6.35、7.89,P＜0.01);Western blot结果显示,缺氧24 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为1.57±0.29、1.66±0.28,缺氧48 h组HIF-1α、GLUT-1蛋白表达分别为2.31±0.46、2.22±0.34,高于正常对照组(缺氧0 h)的0.93±0.07、1.06±0.17(t值分别为3.67、3.21、5.19、5.37,P＜0.01).肺癌组织中HIF-1α、GLUT-1的mRNA和蛋白阳性表达率明显高于非癌组(X2值分别为25.31、31.12、20.26、28.70,P＜0.01).有淋巴结转移的表达高于无淋巴结转移者,中晚期(Ⅲ+Ⅳ期)肺癌组织中的表达高于早期(Ⅰ+Ⅱ期),差异有统计学意义(t值分别为2.56、2.19、3.46、2.15,X2值分别为5.14、4.15、7.54、5.57,P＜0.05).HIF-1α与GLUT-1的mRNA和蛋白表达呈正相关(r=0.527与r=0.408,P＜0.01). 结论 氯化钻诱导缺氧可以上调HIF-1α、GLUT-1在肺腺癌细胞中的表达,加速肺癌细胞的生长,使之进一步耐受缺氧.HIF-1α、GLUT-1在老年人原发性肺癌组织中的过表达与肺癌的恶性进展有密切关系,联合两者的检测有助于老年人原发性肺癌的诊断及预后评估.     

香烟烟雾暴露对大鼠肺组织缺氧诱导因子1α表达的影响

目的 研究烟雾暴露对大鼠肺组织缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible faetor-1α,HIF-1α)和核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB) p65表达的影响,探讨烟雾暴露致大鼠肺动脉高压的发生机制.方法 雄性Wistar大鼠32只,随机分为对照组、烟雾暴露4、8、12周组,每组8只,制备各组烟雾暴露模型.右心导管法测肺动脉平均压(mPAP),并计算右心肥厚指数(RVHI),荧光定量PCR测各组大鼠肺组织HIF-1α mRNA,免疫组织化学方法测各组大鼠肺组织HIF-1α、NF-κB p65蛋白表达.结果 ①大鼠mPAP烟雾暴露8周组[(14.700±1.125) mm Hg]、12周组[(17.830±2.437)mm Hg]明显高于对照组[(10.670±1.125)mm Hg],差异有统计学意义(P＜0.05);烟雾暴露12周组大鼠RVHI(0.260±0.006)高于对照组(0.220±0.020),差异有统计学意义(P＜0.05);②大鼠肺组织中HIF-1αmRNA相对表达量在烟雾暴露8周组(1.170±0.211)、12周组(1.360±0.185)高于4周组(0.920±0.141)及对照组(0.760±0.137),差异有统计学意义(P＜0.05);③各烟雾暴露组大鼠肺血管平滑肌中HIF-1α及NF-κBp65蛋白的表达明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);④HIF-1α蛋白的表达与mPAP、RVHI、HIF-1α mRNA的相对表达量及NF-κBp65蛋白的表达均呈正相关(r=0.688、r =0.497、r =0.706、r =0.583,P值均＜0.01).结论 HIF-1α和NF-κB在烟雾暴露大鼠肺组织中表达均增高,HIF-1α和NF-κB在烟雾暴露引起肺动脉平均压增高的过程中可能发挥了一定作用.     

食管鳞癌细胞系EC-109中缺氧诱导因子-1α的表达意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在食管鳞癌细胞系EC-109中的表达及其意义.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot分别检测HIF-1αmRNA和蛋白在常氧及缺氧状态下在食管鳞癌EC-109细胞中的表达.结果:HIF-1αmRNA在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中过表达(P<0.05),在缺氧24h时HIF-1αmRNA表达最高,其后随时间延长表达下降;HIF-1α蛋白水平在缺氧食管鳞癌EC-109细胞中无明显上调(P>0.05).结论:低氧可诱导食管鳞癌EC-109细胞中HIF-1αmRNA的过度表达,缺氧状态下HIF-1α蛋白水平较常氧时无明显增加.     

缺氧对胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的 探讨氯化钴( CoCl2)模拟缺氧对人胰腺癌细胞株PANC1增殖、凋亡和迁移的影响.方法 分别用终浓度为0(对照)、100、200、400、800 μmol/L CoCl2处理PANC1细胞24h,采用实时定量PCR、蛋白质印迹法分别检测细胞缺氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA及蛋白的表达,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕试验检测细胞迁移能力.结果 对照组及100、200、400、800 μmol/L CoCl2处理组HIF-1α mRNA表达量分别为1、1.08±0.12、1.12±0.09、1.04±0.11、0.66±0.07;VEGF mRNA表达量分别为1、2.69±0.35、4.81±0.54、2.19 ±0.21、0.79±0.08;HIF-1α蛋白表达量为0.23±0.03、0.36±0.04、1.15±0.11、1.08±0.09、0.44±0.04;VEGF蛋白表达量为0.14±0.02、0.12±0.01、0.95±0.09、0.87±0.09、0.55±0.06;细胞存活率分别为100％、(98.43±2.88)％、(76.15±0.70)％、(53.87±0.77)％、(35.23±0.67)％;细胞凋亡率分别为(5.2±1.12)％、(5.74±1.07)％、(6.82±1.85)％、(12.09±3.53)％、(31.88±6.95)％;细胞爬行距离分别为(43.24±3.67)％、(59.46±5.39)％、(80.56±8.05)％、(63.89±5.96)％、(9.09±1.59)％.与对照组相比较,处理组细胞VEGF mRNA、VEGF及HIF-1α蛋白表达、细胞爬行距离均呈先上升后下降的趋势(P＜0.05),HIF-1αmRNA表达、细胞增殖率呈剂量依赖性降低,细胞凋亡率呈剂量依赖性升高.结论 CoCl2达到一定浓度时可显著抑制PANC1细胞增殖,促进细胞凋亡;CoCl2对PANC1细胞迁移效应的双向作用与高浓度CoCl2对细胞直接损伤有关.     

YC-1对人肝癌细胞缺氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是机体细胞适应缺氧应激产生的转录因子,在特异性缺氧状态下发挥生物学活性,广泛存在于肿瘤组织中.HIF-1是由HIF-1 α和HIF-1β组成的异二聚体,HIF-1α是氧调节亚单位,决定HIF-1的活性.HIF-1通过与靶基因血管内皮生长因子(VEGF)等特定序列DNA结合而调控它们的转录.本研究应用HIF-1α抑制剂3-(5'-羟甲基-2'-呋喃基)-1苯甲基引唑(YC-1)作用于肝癌细胞,检测药物干预前后肝癌细胞株HIF-1、VEGF在mRNA和蛋白质水平表达的变化,明确YC-1对人肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响.     

缺氧诱导因子-2α和多药耐药基因1在乳腺癌中的表达及相关性

目的探讨缺氧诱导因子(HIF)-2α和多药耐药基因(MDR)1在乳腺癌中的表达及相关性。方法采用免疫组化和RT-PCR法检测47例乳腺癌组织和30例癌旁正常乳腺组织中的HIF-2α和MDR1蛋白和mRNA的表达及其相关性。低氧培养建立乳腺癌MCF-7细胞缺氧模型,应用荧光定量PCR和Western印迹分别检测每组缺氧模型细胞中HIF-2α和MDR1蛋白和mRNA的表达及其相关性。结果在乳腺癌组织中HIF-2α蛋白的阳性表达率(76.7%)和MDR1蛋白的阳性表达率(80.0%)均显著高于正常乳腺组织(P<0.05);在乳腺癌组织中HIF-2αmRNA的表达水平(0.896±0.012)和MDR1 mRNA的表达水平(0.884±0.016)均显著高于正常乳腺组织(P<0.05);乳腺癌组织中HIF-2α及MDR1蛋白及mRNA的表达均呈正相关(P均<0.05)。在缺氧组,随着缺氧时间的延长MCF-7细胞中MDR1的表达均逐渐增高,且MDR1的表达升高与HIF-2α的表达呈同步化改变。结论缺氧可通过核转录因子HIF-2α上调乳腺癌细胞内MDR1的表达,从而使乳腺癌细胞获得多药耐药性。HIF-2α和MDR1将可能成为逆转乳腺癌耐药的新的分子靶点。     

缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在骨关节炎软骨细胞中的表达

目的 探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)在骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达.方法 新西兰大白兔随机分为正常对照组和模型组,分别对关节软骨病理切片后采用Safranin O染色,进行Mankin评分;免疫组织化学染色,并利用图像分析测定HIF-1α、VEGF表达的阳性指数.实时荧光定量PCR检测HIF-1α mRNA 、VEGF mRNA在各组的表达.结果 正常对照组的Mankin评分与模型组差异显著(P＜0.01),模型组HIF-1α、VEGF染色阳性指数与正常对照组比较,差异显著(P＜0.01).模型组HIF-1α mRNA 和VEGF mRNA表达较正常对照组明显升高,差异显著(P＜0.05).结论 OA中HIF-1α和VEGF表达密切相关,HIF-1α表达增强可能是促进VEGF表达增强的重要途径之一.     

低氧诱导因子-1α减轻七氟烷处理小鼠心肌缺血再灌注损伤中的研究

目的:探究HIF-1α对于使用七氟烷后处理的小鼠减轻其心肌缺血/再灌注损伤的相关机制。方法:将8周龄小鼠随机分为四组分别进行假手术,心肌缺血/再灌注, HIF-1α稳定剂+心肌缺血/再灌注,HIF-1α抑制剂+心肌缺血/再灌注。对心肌缺血/再灌注模型采取经典的结扎冠状动脉左前降支,之后对小鼠进行七氟烷后处理。分别检测四组大鼠的心肌组织中HIF-1α,NF-κB,TLR4,SOD的蛋白表达水平以及相关mRNA水平,凋亡相关蛋白Bax,BCL2的表达水平,心肌组织MPO活性等。结果:在进行处理之前,四组小鼠的AAR/LV以及An/AAR差异无统计学意义(P0.05);经过处理后,I/R组小鼠的AAR/LV以及An/AAR均显著高于对照组(P0.001),DMOG+I/R组相比I/R组,AAR/LV以及An/AAR均发生了显著降低(P0.001),YC-1+I/R组相比I/R组,AAR/LV以及An/AAR又均发生了显著升高(P0.01);当小鼠发生心肌缺血/再灌注时,小鼠体内的HIF-1α蛋白水平显著下调,炎症因子NF-κB和TLR4显著上升,抗氧化蛋白SOD显著下降,促凋亡蛋白Bax显著升高,抗凋亡蛋白BCL2水平显著下降;而当在此基础上加入HIF-1α增强剂DMOG时,可以使炎症因子NF-κB和TLR4显著下调,抗氧化蛋白SOD显著上升,促凋亡蛋白Bax显著下降,抗凋亡蛋白BCL2水平显著升高,加入HIF-1α抑制剂YC-1现象相反;I/R组小鼠的NF-κB和TLR4水平显著升高(t=4.687,5.124,P0.05),DMOG+I/R组相比I/R组,其NF-κB和TLR4水平发生显著下降(t=4.112,4.197,P0.05),YC-1+I/R组相比I/R组,其NF-κB和TLR4水平发生显著回升(t=2.335,2.138,P0.05);经过处理之后,对照组小鼠的MPO活性为(0.28±0.54),I/R组小鼠的为(1.45±0.31),显著升高(t=3.875,P0.05),DMOG+I/R组的为(0.88±0.23),相比I/R组发生了显著降低(t=3.224,P0.05);而YC-1+I/R组的为(1.98±0.39),相比I/R组发生了显著回升(t=3.015,P0.05)。结论:HIF-1α可有效减轻大鼠在心肌损伤/再灌注所致的炎性损伤并避免心肌细胞凋亡,对心肌细胞起到良好的保护作用。     

人双突变型低氧诱导因子α促进骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的 探讨人双突变型低氧诱导因子1α(HIF-1α)基因(HIF-1α-402-564)对与心肌细胞共培养的骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化的影响.方法 实验分为4组:HIF-1α组(MSC+心肌细胞+Ad-HIF-1α)、LacZ组(MSC+心肌细胞+Ad-Lacz)、Sham组[MSC+心肌细胞+胎牛血清(PBS)]、MSC+HIF-1α组(MSC+Ad-HIF-1α),前三组中MSC与心肌细胞按1:2比例共同培养,各组细胞培养24 h后分别感染不同病毒(MOI=100)或加入PBS液.病毒感染后7 d,免疫细胞化学分析共培养的MSC表达心肌细胞特异性标志物心肌肌钙蛋白T(cTnT)的情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析各组细胞HIF-1α、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad4、NKx2.5、GATA结合蛋白4(GATA-4)的mRNA表达量.结果 HIF-1α组MSc心肌细胞分化率为(32.68±6.52)%,显著高于LacZ组[(8.28±0.09)%]和Sham组[(10.25±2.20)%],P均<0.05,MSC±HIF-1α组仅为(0.32±0.05)%.LacZ组和Sham组间差异无统计学意义.MSC+HIF-1α组与Sham组比较,差异有统计学意义(P<0.05).HIF-1α组TGFβ1及Smad4 mRNA表达水平明显高于其余各组,P均<0.05.HIF-1α组NKx2.5和GATA-4 mRNA表达水平明显高于Sham组,P均<0.05.结论 HIF-1α能够促进与心肌细胞共培养的MSC向心肌细胞分化,TGF-β1/Smad4信号通路参与了该过程.