共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植胰腺存活的影响

目的探讨共刺激阻断剂PD-L1Ig与雷帕霉素(rapamycin,RPM)联合应用对大鼠移植胰腺存活的影响。方法以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,各40只。Lewis大鼠先注射链脲佐菌素制备成糖尿病模型,随后建立原位胰腺移植模型。随机分为移植组、PD-L1Ig治疗组(PD-L1Ig组)、RPM治疗组(RPM组)和PD-L1Ig RPM组(联合组),观察各组术后血糖和移植胰腺病理改变、移植胰腺存活时间。移植后第7天各组处死2只大鼠,取受体与供体脾细胞做混合淋巴细胞反应(MLR)。结果移植后第1天血糖恢复正常,第7天移植组血糖较各治疗组明显升高(P<0.01),各治疗组中以联合组降糖效果最显著。PD-L1Ig组、RPM组的移植胰腺平均存活时间分别为(9.1±1.3)d和(12.5±1.2)d,较移植组的存活时间(5.2±0.7)d明显延长(P<0.01);联合组的存活时间则长达(23.9±1.8)d,与其他各组差异显著(P<0.01)。移植后7d,PD-L1Ig组、RPM组移植胰腺有较多淋巴细胞浸润,联合组移植胰腺淋巴细胞浸润很少。结论PD-L1Ig与RPM联合应用可有效抑制细胞免疫应答,干预排斥反应,显著延长大鼠移植胰腺存活时间。     

五指山小型猪胰岛对糖尿病大鼠的治疗作用

目的:探讨小型猪胰岛治疗糖尿病大鼠的作用和功效.方法:成年健康♂五指山小型猪和普通家猪作为胰岛供体.胰腺获取后经胶原酶消化后进行胰岛提取纯化,纯化后的胰岛通过门静脉移植到糖尿病SPF大鼠的肝内,术后每天肌注环孢菌素(20mg/kg)作为免疫抑制剂,并通过检测糖尿病大鼠的血糖变化和肝脏组织学检查来判定胰岛移植后的存活情况和纠正胰岛移植的效果.结果:五指山小型猪胰腺消化后胰岛产量为4608 IEQ/g±593 IEQ/g,纯化后为3820 IEQ/g±718 IEQ/g,纯度为85%,取自屠宰场猪胰岛产量为纯化前为3500 IEQ/g±625 IEQ/g,纯化后为2720 IEQ/g±435 IEQ/g,纯度为80%.两组84.6%糖尿病大鼠在移植术后第1天,血糖降至正常.维持时间:小型猪胰岛术后存活时间为3-5d(中位存活时间:4.5d),普通家猪胰岛存活时间为2-4d(中位存活时间:3.7d).经Kaplan-Meier分析,两组胰岛存活时间无差别.结论:封闭群五指山小型猪分离纯化后的胰岛产量高,功能良好,可以纠正糖尿病大鼠的高血糖,适合作为异种胰岛移植的理想供体.     

联合应用供体未成熟树突状细胞与CD40L mAb诱导大鼠小肠移植免疫耐受

目的:研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(imDC)联合CD40L mAbi诱导大鼠小肠移植免疫耐受.方法:体外培养供体大鼠树突状细胞(DC),实验动物分为3组,受体于手术前分别预处理后进行小肠移植.A组(n=15):注射生理盐水;B组(n=15):注射供体来源的imDC;C组(n=151:同时注射供体来源的imDC CD40L mAb.观察受体存活时间(n=6),移植小肠病理学检查,用ELISA法检测受体血清IL-2、INF-γ和IL-10水平(n=5).结果:C组受体动物存活时间明显长于A、B两组,统计学有显著差异(22.67±7.09 d vs7.17±1.47 d,11.00±2.61 d,P＜0.01),C组移植小肠炎性细胞浸润、黏膜结构破坏程度、血清IL-2、INF-γ水平均明显低于A、B组,有统计学差异(IL-2:225.4±48.7 ng/Lvs 374.1±13.2 ng/L,353.6±10.4 ng/L;INF-γ:56.9±2.6 ng/Lvs 229.2±20.6,125.4±18.5 ng/L,P＜0.05),血清IL-10水平C组明显高于A、B组,有统计学意义(186.4±10.6 ng/Lvs 91.7±5.4,162.2±8.1 ng/L,P＜0.05).结论:联合应用CD40L mAb和imDC可抑制小肠移植后的排斥反应,诱导受体产生免疫耐受.     

Fas配体阳性睾丸Sertoli细胞对异种胰岛细胞移植的影响

目的探讨睾丸Sertoli细胞预防异种胰岛移植排斥反应的效果。方法分对照组、1×106细胞组、2×106细胞组、4×106细胞组,每组8只糖尿病大鼠,分离纯化猪胰岛细胞,植入糖尿病大鼠肾被膜下,观察胰岛的有功能存活及排斥反应情况。结果术后胰岛有功能存活时间分别为(6.0±0.6)d、(21.6±5.7)d、(35.7±8.9)d、(48.9±12.7)d,共移植组有功能存活时间较对照组明显延长(P<0.01),移植物存活时间与睾丸Sertoli细胞数量呈剂量依赖,术后第5天移植肾脏免疫组化检查显示4×106睾丸Sertoli细胞移植组有更多的大量结构完整猪胰岛细胞存活,浸润淋巴细胞被诱导凋亡。结论Fas配体阳性表达的SC细胞共移植能明显有效地抑制异种胰岛细胞移植的排斥反应,诱导局部淋巴细胞凋亡。     

间充质干细胞对大鼠心脏移植免疫的调节作用

目的:观察骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠心脏移植的免疫调节作用.方法:实验共分3组,同种同系移植组(Ⅰ组),供受体均为SD大鼠;同种异系非给药组(Ⅱ组),供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠;同种异系给药组(Ⅲ组),供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠.建立大鼠心脏移植动物模型,贴壁法分离培养大鼠MSC,由Ⅲ组受体颈外静脉注入.观察3组移植后大鼠的存活时间,苏木精-伊红染色观察移植心脏淋巴细胞浸润程度.结果:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组的平均存活时间分别为(20.8±4.8)d、(6.6±0.9)d、(7.0±1.2)d,Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);但Ⅱ组与Ⅲ组间比较差异无统计学意义.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组移植心脏病理学分级评分分别为(0.24±0.27)、(3.10±0.55)、(3.00±0.61),Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅰ组比较,均差异有统计学意义(P<0.05);但Ⅱ组与Ⅲ组间比较差异无统计学意义.结论:MSC在体外混合淋巴细胞反应中能够抑制T细胞增殖,但是在体内实验中对移植物的存活时间无明显的延长及对移植物的淋巴细胞浸润无明显抑制作用.     

阻断可诱导共刺激分子刺激通路抑制大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验观察

目的 通过RNA干扰并阻断可诱导共刺激分子(ICOS)刺激通路,观察对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的抑制作用.方法 成年Wistar、SD大鼠各27只,按体质量将大鼠随机分为排斥组、对照组、干扰组.每组9例.大鼠肢体移植采用改良法.将Wistar大鼠(供体)右下肢体移植到SD大鼠(受体)左下肢体上.移植术后排斥组不给予特殊处置;对照组阴茎背静脉注射梭华-Sofast-pSileneer 4.1空载体复合物;干扰组注射梭华-Sofagt-pSileneer 4.1-ICOSshRNA干扰质粒复合物.术后8 d每组处死SD大鼠3只,取移植肢体皮肤、肌肉及骨骼进行病理学检查;流式细胞仪及RT-PCR检测淋巴细胞表面ICOS和基因mRNA表达:分别用Wistar、Lewis大鼠脾细胞刺激,进行单向混合淋巴细胞培养,计算细胞刺激指数;ELISA双抗体夹心法检测大鼠血清细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4);另6只大鼠观察生存情况及肢体存活时间.结果 排斥组大鼠肢体平均存活时间(11.34±1.21)d,对照组平均存活时间(11.14±1.32)d,干扰组平均存活时间(16.85±1.73)d,组间比较差异有统计学意义(F=8.72,P<0.05).排斥组和对照组病理学结果提示,肢体出现了中、重度急性排斥反应,干扰组急性排斥反应轻微.光镜下排斥组和对照组皮肤出现表皮坏死、大泡形成伴有血管周围炎及大量淋巴细胞浸润,肌肉组织有弥散性淋巴细胞浸润,间质水肿同时伴有肌细胞坏死.脾淋巴细胞ICOS基因mRNA表达显示,干扰组(18.75%)明显低于排斥组(100%)和对照组(98.51%),组间比较差异有统计学意义(X2=13.57,P<0.01).淋巴细胞表面ICOS表达荧光强度,干扰组为45.59±12.87,排斥组为103.72±21.76,对照组为93.47±29.55,组间比较差异有统计学意义(F=6.89,P<0.05).单向混合淋巴细胞反应刺激指数(SI),排斥组(5.26±0.42、5.18±0.29)和对照组(5.37±0.27、4.93±0.44)明显高于干扰组(2.37±0.35、4.87±0.36),组间比较差异有(无)统计学意义(F=7.29,P<0.05;F=6.19,P0.05).IFN-γ和IL-4表达.干扰组(230.17±38.47、160.32±59.13)较排斥组(490.73±51.48、230.67±45.21)和对照组(480.15±43.96、240.53±47.36)均降低,组间比较差异有统计学意义(F值分别是7.23、6.75,P<0.05).结论 体内转染pSilencer4.1-ICOSshRNA干扰质粒能有效阻断T细胞共刺激通路,抑制急性排斥反应,延长移植肢体存活时间.     

RNA干扰供体大鼠库普弗细胞B7分子表达对受体大鼠淋巴细胞激活的影响

目的:观察RNA干扰供体Lewis大鼠库普弗细胞(KC)B7分子表达对受体BN大鼠淋巴细胞增殖和生成IL-2的影响.方法:分离培养供体Lewis大鼠KC, 设计大鼠B7分子的干扰片段, 构建并鉴定含B7干扰片段的RNA干扰载体Psilencer 3.1H1-Neo-B7, 将RNA干扰载体转染供体大鼠的KC, 转染后采用RT-PCR方法检测KC上B7分子表达的变化. 将转染后的KC分为3组, 对照组(A); 空载体组(B); RNA干扰B7表达组(C). 分离培养受体BN大鼠的淋巴细胞, 将以上各组细胞分别与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 采用MTT法检测各组淋巴细胞的增殖情况. 采用ELISA方法检测各组培养上清中IL-2的含量.结果: 分离培养的供体Lewis大鼠KC得率为5×107, 活率大于98%. 构建的RNA干扰载体经酶切和测序鉴定正确. RNA干扰KC后其B7的表达降低了22%(P<0.01). 将干扰B7表达的KC与BN大鼠的淋巴细胞进行共培养, 与对照组相比, 受体BN大鼠的淋巴细胞增殖降低了49%(P<0.01), 细胞培养上清中IL-2的分泌量下降了67%(P<0.01).结论:RNA干扰供体Lewis大鼠KC B7分子的表达可明显抑制受体BN大鼠淋巴细胞的增殖和IL-2的产生.     

TGF-β1基因修饰的脾细胞对大鼠肝脏移植免疫耐受的实验研究

目的研究TGF-β1修饰的供者脾细胞特异性输注对大鼠移植肝脏耐受的诱导及效果。方法每组选10只雄性SD大鼠为供体,10只雄性Wistar大鼠为受体建立大鼠原位肝脏移植模型,于移植前7天分别经尾静脉输注TGF-β1基因修饰的脾细胞(5×106/mL)1mL、脾细胞(5×106/mL)1 mL、空质粒1 mL、生理盐水1 mL。观察TGF-β1修饰的脾细胞输注组、脾细胞输注组、空质粒输注组、肝移植组存活天数和病理改变及凋亡情况。结果 TGF-β1修饰的脾细胞特异性输注可明显延长移植肝脏存活时间(36.4±4.16)d,与脾细胞输注组(20.0±4.00)d、空质粒输注(7.8±0.84)d、肝移植组(8.4±1.4)d比较,差异有统计学意义(P<0.05);而且可明显减轻移植肝脏的病理损伤。结论输注TGF-β1基因修饰的供体脾细胞可诱导大鼠移植肝脏的耐受产生。     

L-精氨酸诱导实验性慢性胰腺炎大鼠模型的可行性分析

目的 初步探讨L-精氨酸诱导慢性胰腺炎大鼠动物模型的可行性.方法 将实验动物按完全随机法分为对照组及精氨酸12、24 h和7 d组,每组10只,间隔1 h分两次腹腔内注射L-精氨酸溶液造模.造模后相应时间点检测血淀粉酶、血糖水平,对胰腺组织进行病理评分,Van Gieson法对胰腺胶原纤维染色.结果 对照组及精氨酸12、24 h和7 d组的血淀粉酶水平分别为(1 634±890)U/L、(3 872±2 676)U/L、(3 307±2 197)U/L和(1 561±304)U/L,精氨酸7 d组血淀粉酶水平显著低于12 h和24 h组(P＜0.05),恢复到对照组水平.各组间血糖水平无明显差异.对照组及精氨酸12、24 h和7 d组胰腺的病理分值分别为0.8±0.4、5.1±2.6、6.5±2.2和4.5±1.6,精氨酸7 d组胰腺病理评分显著低于24 h组(P＜0.05),但仍显著高于对照组(P＜0.05).精氨酸7 d组胶原染色范围明显增加,其他各组未见明显胶原染色.结论 L-精氨酸腹腔注射后7 d可引起胰腺组织纤维化及管状复合结构增生,可用于探索慢性胰腺炎大鼠模型.     

重组腺病毒Ad-PD-L1转染供体小鼠树突状细胞对受体小鼠淋巴细胞激活的影响

目的:观察重组腺病毒载体Ad-PD-L1转染供体C57BL/6(H-2b)小鼠树突状细胞(DC)对受体DBA/2(H-2d)小鼠淋巴细胞增殖和激活的影响.方法:构建腺病毒穿梭质粒pShuttle-GFPCMV(-)-PD-L1和腺病毒骨架质粒pAdxsi-GFP-CMV-PD-L1,重组腺病毒Ad-PD-L1进行包装、扩增和纯化.分离培养供体C57BL/6小鼠的DC,分为3组:腺病毒载体Ad-PD-L1转染组(A组),空载体转染组(B组)和对照组(C组).Western blot检测转染后各组细胞PD-L1的表达.分离受体DBA/2小鼠的淋巴细胞,用羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,将供体C57BL/6小鼠的DC和受体DBA/2小鼠淋巴细胞混合培养,流式细胞仪观察淋巴细胞的增殖情况.结果:酶切及测序证实含PD-L1的重组腺病毒载体Ad-PD-L1构建成功.转染供体C57BL/6小鼠的DC后其PD-L1的表达升高37% (P<0.05),将转染了PD-L1的DC与受体DBA/2小鼠的淋巴细胞进行共培养.与对照组相比,PD-L1表达升高后,明显地抑制了淋巴细胞的增殖和活化.受体DBA/2小鼠的淋巴细胞增殖降低41% (P<0.01).结论:转染供体C57BL/6小鼠DC后通过共刺激通路PD-1/PD-L1抑制了受体DBA/2小鼠淋巴细胞的增殖和激活.     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP     

Lack of correlation of degree of villous atrophy with severity of clinical presentation of coeliac disease

BACKGROUND AND AIM: Both the clinical presentation and the degree of mucosal damage in coeliac disease vary greatly. In view of conflicting information as to whether the mode of presentation correlates with the degree of villous atrophy, we reviewed a large cohort of patients with coeliac disease. PATIENTS AND METHODS: We correlated mode of presentation (classical, diarrhoea predominant or atypical/silent) with histology of duodenal biopsies and examined their trends over time. RESULTS: The cohort consisted of 499 adults, mean age 44.1 years, 68% females. The majority had silent coeliac disease (56%) and total villous atrophy (65%). There was no correlation of mode of presentation with the degree of villous atrophy (p=0.25). Sixty-eight percent of females and 58% of males had a severe villous atrophy (p=0.052). There was a significant trend over time for a greater proportion of patients presenting as atypical/silent coeliac disease and having partial villous atrophy, though the majority still had total villous atrophy. CONCLUSIONS: Among our patients the degree of villous atrophy in duodenal biopsies did not correlate with the mode of presentation, indicating that factors other than the degree of villous atrophy must account for diarrhoea in coeliac disease.