5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的 研究5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对人正常上皮特异-1基因(NES1)及人胃癌裸鼠移植瘤的作用,探讨其抗肿瘤效应及可能机制,寻求胃癌治疗的新途径.方法 建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,用5-aza-CdR处理裸鼠,观察移植瘤生长情况,并用MSP及免疫组织化学技术检测NES1基因的甲基化状态及蛋白表达情况.结果 5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组与对照组相比,其抑瘤率为57.44%,移植瘤体积有显著差异(P＜0.01);5-aza-CdR作用后,可使NES1基因exon3去甲基化,且能使NES1蛋白表达增加.结论 5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为它能使因甲基化而失活的抑癌基因NES1再转录,并诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖.     

5-杂氮-2'-脱氧胞苷对人胃癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用

目的研究5-氮-2＇-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对人正常上皮特异-1基因（NES1）及人胃癌裸鼠移植瘤的作用,探讨其抗肿瘤效应及可能机制,寻求胃癌治疗的新途径。方法建立人胃癌移植瘤裸鼠模型,用5-aza-CdR处理裸鼠,观察移植瘤生长情况,并用MSP及免疫组织化学技术检测NES1基因的甲基化状态及蛋白表达情况。结果5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的生长有明显的抑制作用,用药组与对照组相比,其抑瘤率为57.44%,移植瘤体积有显著差异（P〈0.01）;5-aza-CdR作用后,可使NES1基因exon3去甲基化,且能使NES1蛋白表达增加。结论5-aza-CdR对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用可能是因为它能使因甲基化而失活的抑癌基因NES1再转录,并诱导该基因的表达,从而抑制肿瘤细胞的生长和增殖。     

5-杂氮-2’-脱氧胞苷对BGC823胃癌细胞株RIZ1基因去甲基化转录调控作用

目的:探讨5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdB)对人胃癌细胞系BGC823细胞株RIZ1基因的去甲基化转录调控作用及对细胞株生长增殖的影响,寻找胃癌治疗的新靶点.方法:使用3种不同浓度5-Aza-CdR干预胃癌BGc823细胞,甲基化特异性PCR(MSP)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCB)检测药物干预前后RIZ1基因的甲基化状态和RIZ1 mBNA的表达;MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡的改变.结果:未经5-Aza-CAR处理的BGC823细胞中MZ1基因启动子区域cpG岛高甲基化,且RIZ1 mRNA不表达,经2,5,10 μmol/L 5-Aza-CdB处理48 h后,RIZ1基因启动子区域高甲基化得到逆转,细胞中均有RIZ1 mRNA表达,相对定量值分别为0.509,0.716,0.831;3种浓度5-Aza-CdR处理BGC823细胞后,与对照组比较,细胞增殖速度出现不同程度减慢(P<0.05),随着浓度的增加其抑制作用增强;并显著抑制BGC823细胞生长周期,与对照组相比,G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,细胞凋亡率明显升高(P<0.05).结论:5-Aza-CdR能有效逆转胃癌BGC823细胞RIZ1基因的异常甲基化,从而激活因高甲基化导致RIZ1基因沉默的再转录,诱导该基因的表达,抑制肿瘤细胞生长.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肿瘤的机制研究进展

恶性肿瘤目前已成为我国慢性病中死亡率最高的疾病,因为其发生机制复杂,对其抑制的药物也一直处于研究状态。随着国内外研究的不断进展,发现诸多肿瘤抑制剂,但是作为广谱的抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷的效果虽已被初步证实,但是具体的机制仍在研究之中,从目前最新的研究进展出发,重点阐述5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肿瘤的关键抑制机制,为后续研究提供思路和依据。     

5-氮杂-2′-脱氧胞苷对胃癌细胞中HLA-C表达的影响

目的：研究5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）对胃癌细胞中人白细胞抗原C（HLA-C）表达的影响及其与DNA甲基转移酶1（DNMT1）的关系。方法：用终浓度为10μmol/L的5-Aza-CdR处理培养胃癌细胞（实验组）,以未处理细胞作为对照;HLA-C和DNMT1基因的转录表达使用半定量RT-PCR检测;HLA-C的甲基化状态使用甲基化特异性PCR（MSP）检测。结果：5-Aza-CdR处理降低了BGC823细胞中DNMT1基因在转录水平的表达;HLA-C CpG岛的甲基化水平降低;HLA-C mRNA表达量明显上调,对电泳条带的半定量分析显示实验组和对照组之间的差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：5-Aza-CdR通过抑制DNMT1的表达,改变胃癌细胞中HLA-C基因的异常甲基化状态,进而上调HLA-C的表达。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对前列腺癌PC3细胞系生长以及抑癌基因GSTP1、RASSF1A转录的影响

目的:观察DNA去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-CdR）对前列腺癌细胞株PC3抑癌基因GSTP1和RASSF1A 转录改变以及细胞增殖活性的影响。方法:用不同浓度5-aza-CdR(2、5、10 μmol/L)处理前列腺癌细胞株PC3,利用甲基化特异性PCR（MSP）法检测用药前PC3细胞株GSTP1、RASSF1A启动子甲基化状态;采用实时荧光定量RT-PCR法检测用药过程中GSTP1和RASSF1A mRNA转录改变;用MTT法和流式细胞术检测用药前后PC3肿瘤细胞增殖活性改变。结果: GSTP1、RASSF1A启动子区域出现甲基化现象。与对照组相比,药物组培养24 h后 GSTP1和RASSF1A mRNA表达未发生明显改变;培养48 h后5、10 μmol/L药物组GSTP1和RASSF1A mRNA表达出现上调;72 h后各浓度药物组均检测出两基因mRNA表达升高(P<0.05)。药物组培养24和48 h未出现明显的细胞增殖抑制现象和细胞周期改变;培养72 h后,药物组细胞增殖抑制显著(P<0.05),细胞周期改变明显(P<0.05),阻滞于G0/G1期。结论:GSTP1和RASSF1A基因在PC3前列腺癌细胞系中的失表达可能与其启动子CpG岛高甲基化有关;5-aza-CdR能在一定程度上抑制PC3细胞增殖,干扰细胞周期,提高GSTP1和RASSF1A的转录水平。     

三氧化二砷对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的作用机制

目的:探讨不同剂量As203对人胃癌细胞株SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的体内抑瘤作用及作用机制.方法:建立人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为实验组即As203低(1.0 mg/kg)中(2.5 mg/kg)高(5.0 mg/kg)剂量组、空白对照生理盐水组及阳性对照5-FU组(20 mg/kg),腹腔连续给药10 d,计算抑瘤率,检测用药后裸鼠的肝肾功能及血常规,观察用药前后裸鼠体重改变,实时定量RT-PCR检测移植瘤内caspase-3基因相对表达量.结果:低剂量As203组及5-FU组抑瘤率分别为60.6%和78.2%,与生理盐水组比较有统计学差异(P＜0.05),中高剂量组及5-FU组差异无统计学意义(P＞0.05).用药后低剂量As203组caspase-3的基因表达显著增高,与生理盐水组比较有统计学意义(P＜0.05),中高剂量组在数值上caspase-3表达增高,但无统计学差异(P＞0.05).各剂量组均出现白细胞抑制,但较5-FU组轻,肝肾功能未见异常.结论:低剂量As203表现出抑制肿瘤生长的作用,其机制可能与上调caspase-3基因的表达有关;As203对肝肾无明显毒性.     

5-杂氮-2''''-脱氧胞苷对前列腺癌PC3细胞系生长以及抑癌基因GSTP1、RASSF1A转录的影响

目的:观察DNA去甲基化药物5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对前列腺癌细胞株PC3抑癌基因GSTP1和RASSF1A 转录改变以及细胞增殖活性的影响.方法:用不同浓度5-aza-CdR(2、5、10 μmol/L)处理前列腺癌细胞株PC3,利用甲基化特异性PCR(MSP)法检测用药前PC3细胞株GSTP1、RASSF1A启动子甲基化状态;采用实时荧光定量RT-PCR法检测用药过程中GSTP1和RASSF1A mRNA转录改变;用MTT法和流式细胞术检测用药前后PC3肿瘤细胞增殖活性改变.结果: GSTP1、RASSF1A启动子区域出现甲基化现象.与对照组相比,药物组培养24 h后 GSTP1和RASSF1A mRNA表达未发生明显改变;培养48 h后5、10 μmol/L药物组GSTP1和RASSF1A mRNA表达出现上调;72 h后各浓度药物组均检测出两基因mRNA表达升高(P<0.05).药物组培养24和48 h未出现明显的细胞增殖抑制现象和细胞周期改变;培养72 h后,药物组细胞增殖抑制显著(P<0.05),细胞周期改变明显(P<0.05),阻滞于G0/G1期.结论:GSTP1和RASSF1A基因在PC3前列腺癌细胞系中的失表达可能与其启动子CpG岛高甲基化有关;5-aza-CdR能在一定程度上抑制PC3细胞增殖,干扰细胞周期,提高GSTP1和RASSF1A的转录水平.     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷调控RASSF1A基因表达对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR）对人子宫内膜癌（Hu－manendometrialcancer,HEC）-1-B细胞增殖和凋亡的作用及其可能机制。方法：应用不同浓度的5-Aza-CdR处理HEC-1-B细胞,甲基化特异PCR（Methylation-specificpolymerasechainreaction,MSP）法检测处理前后RAS相关域家族1A（RASassociationdomainfamily1A,RASSF1A）基因甲基化状态,应用RT-PCR方法检测RASSF1A基因mRNA表达,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：HEC-1-B细胞RASSF1A基因启动子区呈高甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后,RASSF1A基因启动子区呈去甲基化状态,其mRNA重新表达,细胞生长受到抑制,细胞凋亡增加。结论：5-Aza-CdR能够逆转RASSF1A基因甲基化状态,调控RASSF1A基因表达,并能有效地抑制HEC-1-B细胞的增殖和诱导细胞调亡。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性:流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态.结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因肩动子区域高甲基化,经10-5 mol/L 5-Aza-CdR处理72 h后γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转.结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡.     

芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及机制研究

目的 研究芒柄花黄素对人胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠模型的抑制作用及作用机制.方法 建立人胃癌MKN-45细胞荷瘤裸鼠癌症模型,经环磷酰胺(20 mg/kg)和芒柄花黄素(10、20、40mg/kg)干预14 d,观察荷瘤重量变化及应用TUNEL染色评估荷瘤组织中细胞凋亡数量,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测荷瘤内源性p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)及细胞周期蛋白(CyclinD)表达.结果 与模型对照组比较,芒柄花黄素明显抑制胃癌细胞MKN-45荷瘤裸鼠肿瘤的生长(P＜0.01),并且肿瘤组织中细胞凋亡计数增加(P＜0.01).同时,芒柄花黄素干预组肿瘤组织中的p38MAPK蛋白表达增加,CyclinD蛋白水平减少(P＜0.01).结论 芒柄花黄素具有明显抑制胃癌细胞MKN-45增殖作用,其机制与激活细胞内MAPK信号转导通路而诱导细胞凋亡有关.     

丙泊酚对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 探讨丙泊酚对人胃癌裸鼠移植瘤生长的影响,及其可能的作用机制。方法 培养人胃癌 细胞株SGC7901,复制裸鼠移植瘤模型30 只,随机分为对照组、生理盐水组和丙泊酚组,每组10 只。对照 组未做任何处理;生理盐水组腹腔注射生理盐水1.5 ml/kg ;丙泊酚组腹腔注射丙泊酚20 mg/kg,1 次/d,连 续2 周。观察各组裸鼠给药前后一般情况的变化,给药后每3 d 用游标卡尺测量移植瘤的长径和短径,计算移 植瘤体积。第15 天时将裸鼠脱臼处死,剥离瘤体。采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot 检测各组 裸鼠移植瘤组织中核因子E2 相关因子2（Nrf2）、NAD（P）H 醌氧化还原酶1（NQO1）、血红素加氧酶-1 （HO-1）、B 淋巴细胞瘤（Bcl-2）、Bcl-2 相关X 蛋白（Bax）基因和蛋白的表达。结果 丙泊酚组裸鼠给药 后3、6、9、12 和15 d 的移植瘤体积小于对照组和生理盐水组（P <0.05）。与对照组和生理盐水组相比,丙 泊酚组裸鼠移植瘤体质量降低,而抑瘤率升高（P <0.05）。与对照组和生理盐水组相比,丙泊酚组裸鼠移植瘤 组织中Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA 和蛋白相对表达量降低,而Bax mRNA 和蛋白相对表达量升高 （P <0.05）。结论 丙泊酚可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与抑制Nrf2/ARE 信号通路,从而促 进细胞凋亡有关。     

那法瑞林对人乳腺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用

目的：观察促性腺激素释放激素(LHRH)高效类似物那法瑞林对人乳腺癌BCaP-37细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其作用机制。方法：那法瑞林用药分为移植瘤接种后次日给药组及接种后2周给药组,每组各设3个剂量,均连续皮下给药4周。使用他莫昔芬和另一LHRH激动剂D-Trp6 LHRH作为阳性对照。用药结束后,分别测定移植瘤、双侧卵巢、子宫质量和血清雌二醇(E2)含量;进行病理检查(包括电镜);测定移植瘤细胞DNA指数(DI);观察瘤细胞增殖周期比例的变化。结果：(1)在以上不同的两用药组中,那法瑞林剂量在500和1000μg/kg时,可以显著抑制移植瘤的生长,移植瘤的DI值明显下降,通过电镜观察到瘤组织内存在凋亡的瘤细胞。同时,动物的卵巢质量和血清E2含量显著下降。(2)他莫昔芬30mg/kg对移植瘤生长无显著影响,与D-Trp6 LHRH 抑制移植瘤生长的作用相比亦无显著差别。结论：那法瑞林长期皮下给药对BCaP-37移植瘤生长有显著的抑制作用。     

基质金属蛋白酶抑制剂Marimastat抑制胃癌生长和转移的作用

目的:观察基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂Marimastat对人胃癌在裸鼠体内生长和转移的抑制作用。方法:人胃腺癌细胞株SGC-7901完整组织块裸鼠原位种植,建立类似于临床的胃癌转移模型。移植7 d后,治疗组开始腹腔内注射Mari-mastat,隔天1次,剂量为10、30、60 mg/kg,每个剂量组13只裸鼠,对照组13只裸鼠给予相同量的生理盐水,8周后处死动物,测量原位肿瘤大小,计算抑瘤率,免疫组织化学法检测肿瘤微血管密度(MVD)、MMP-9的表达率,并观察肿瘤转移情况。结果:对照组和治疗组Marimastat剂量为10、30、60mg/kg时,原位肿瘤质量分别为(1.63±0.53)、(0.71±0.28)、(0.33±0.17)、(0.14±0.09)g;抑瘤率分别为0、56.4％、79.8％、91.4％;MVD分别为(1.36±4.56)、(8.74±2.22)、(3.25±1.29)、(0.92±0.76);MMP-9的表达率分别为81.8％、38.5％、23.1％、0;腹膜转移率分别为81.8％、30.8％、15.4％、0;肝脏转移率分别为90.9％、38.5％、23.1％、0。治疗组与对照组相比,胃癌的生长和转移受到明显抑制(P<0.05),且与Marimastat的剂量呈正相关。结论:Marimastat对体内胃癌的生长及转移均有抑制作用。     

C-myc反义寡核苷酸联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用的研究

目的探讨C-myc反义寡核苷酸（ASODN）联合5-FU对胃癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法将30只裸鼠建立人胃癌MKN-45细胞移植瘤动物模型。成瘤后动物随机平均分为6组,分别由皮下瘤体内注射脂质体（lipofectin,Lip）、正义寡核苷酸（SODN/Lip）、反义寡核苷酸（ASODN/Lip）、5-FU、5-FU＋SODN/Lip和5-FU＋ASODN/Lip,每周1次,共3次。观察肿瘤抑制率、肿瘤体积和动物存活情况。RT-PCR及免疫组化法检测各组肿瘤的c-myc蛋白表达情况。结果ASODN/Lip组和5-FU组肿瘤体积明显减少,肿瘤生长抑制,抑瘤率达41.5%和36.8%,5-FU＋C-mycASOND/Lip组抑制作用更为显著,抑瘤率达46.7%;ASODN/Lip组裸鼠生存期较SODN/Lip组和Lip对照组延长明显（P〈0.05）;RT-PCR及免疫组化显示ASODN和5-FU均使C-myc mRNA和蛋白表达下降。结论C-myc基因反义寡核苷酸联合5-FU可以有效抑制人胃癌裸鼠皮下肿瘤的生长,延长动物生存期,下调C-myc基因表达,为胃癌的治疗提供新的思路。     

激光捕获显微切割技术研究胃癌hMSH2基因突变与蛋白表达的关系

目的 通过对胃癌组织中错配修复基因hMSH2基因蛋白表达、hMSH2基因突变关系的研究,探讨错配修复基因hMSH2基因与胃癌临床病理特征的关系和意义及其导致胃癌的可能机制.方法 (1)应用免疫组织化学SP法检测45例胃癌组织hMSH2基因蛋白表达情况.(2)激光捕获显微切割设备直接获取胃癌细胞.(3)应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)-银染技术,分别检测45例胃癌组织中5个外显子hMSH2基因突变的情况.结果 (1)45例胃癌组织中hMSH2基因蛋白表达阴性9例(20.00%),阳性36例(80.00%).hMSH2基因蛋白表达阴性率与患者的年龄、性别、发生部位、有无淋巴     

冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨冬凌草甲素对雄激素非依赖性前列腺癌(AIPCa)裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制。方法雄性裸小鼠20只,皮下接种DU145细胞,随机分成用药组和对照组。于癌细胞种植第2天起,对照组每天喂饲0.9%氯化钠溶液,用药组每天喂饲冬凌草甲素15mg·kg-1·d-1。记录用药第2～7周末时移植瘤的平均体积。7周后处死小鼠,取肿瘤组织,采用反转录聚合酶链反应检测细胞周期的p16基因、细胞增殖转化相关因子白细胞介素(IL)-6、免疫逃逸相关因子吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的mRNA表达水平。结果用药组裸小鼠移植瘤的生长明显受到抑制,第3周末至第7周末的移植瘤体积均显著小于对照组(P值均<0.001)。第7周结束时与对照组比较,用药组的生长抑制率达到58.12%。7周后,对照组p16mRNA的平均相对表达量为0.46,低于用药组的0.95;对照组IL-6mRNA的平均相对表达量为0.33,高于用药组的0.02;对照组IDOmRNA的平均相对表达量为0.08,而用药组均无明显条带,无法计算相对表达量。结论冬凌草甲素可以显著抑制DU145肿瘤的生长,提示该药对AIPCa有抗癌活性。冬凌草甲素可能是通过阻滞细胞周期,减少其免疫逃逸,以及下调IL-6等抑制AIPCa的生长。     

sTRAIL真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨可溶性肿瘤坏死因子相关捌亡诱导配体(soluble tumor necrosis factor.related apoptosis inducing lig-and,sTRAIL)真核表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用. 方法 建立胃癌细胞株BGC-823裸鼠移植瘤模型,成瘤后于瘤内多点注射重组真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL,并设pBud-EGFP组和生理盐水组为对照,观察并记录肿瘤的生长情况.Western blot和RT-PCR检测sTRAIL mRNA和蛋白表达情况,HE染色观察肿瘤组织病理改变,TUNEL法及电镜技术观测肿瘤组织细胞凋亡情况.结果注射pBud-EGFP-TRAIL组的sTRAIL mRNA和蛋白为阳性,其瘤休大小明显小于pBud-EGFP组和生理盐水组.差异有统计学意义(P<0.05).HE染色示pBud-EGFP-TRAIL组肿瘤细胞大量死亡,电镜下可见到典型凋亡细胞,TUNEL法显示其凋亡细胞明显增多. 结论 sTRAIL真核表达质粒pBud-EGFP-TRAIL瘤内注射对人胃癌裸鼠移植瘤有抑制作用.