中华(上海)骨髓库江浙沪汉族人群HLA基因多态性调查

目的 调查中华(上海)骨髓库江浙沪汉族人群HLA—A、B、DR的基因多态。方法 应用PCR—SSP技术、结合上海自行设计的基因分型格局,检测中华(上海)骨髓库江浙沪汉族人群HLA-A、B、DR基因多态性及其频率分布特征。结果 调查中共检出A位点抗原26种,B位点抗原54种,DR位点20余种,其中最常见抗原包括A2、A11、A24、A30、A33、B13、B46、B51、B58、B60、B61、B62、DR3、DR4、DR7、DR9、DR15、DR16等。结论 中华(上海)骨髓库江浙沪汉族人群HLA基因多态性的分布有自身特点,其分布格局频率介于南、北汉族之间。     

河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

背景：2009年开始,中华骨髓库加大HLA高分检测的力度,可缩短配型检索周期,提高配型成功率。目的：统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性。方法：河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3874人份,志愿捐献静脉血,EDTA抗凝。采用SSOHD荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法,对3874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测,用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题。等位基因计数法计算等位基因的基因频率。结果与结论：共检出A34个,B84个,DRB150个,A位点基因频率处于前5位的有A＊0201（0.1609）、A＊1101（0.1627）、A＊2402（0.1602）、A＊3001（0.0808）、A＊3303（0.0789）;B位点处于前5位的是B＊1302（0.0777）、B＊4001（0.0722）、B＊5101（0.0628）、B＊4601（0.0612）和B＊0702（0.0507）;DRB1位点处于前5位的是DRB1＊1501（0.1469）、DRB1＊0901（0.1318）、DRB1＊0701（0.1211）、DRB1＊1202（0.0612）、DRB1＊0405（0.0582）。     

青岛骨髓库HLA基因多态性研究

目的研究青岛骨髓库汉族人群HLAA、B、DRB1基因多态性分布。方法采用序列特异性引物PCR方法(SSPPCR)对1383名自愿骨髓捐献汉族进行HLAA、B、DRB1位点分型检测(低分辨率)。结果共检出HLA表型特异性A位点16个;B位点39个;DRB1位点14个,分别占各位点可检出表型特异性数的76%、91%和100%。用表型估算法对各位点的等位基因频率和双位点单型频率进行计算并进行有效的统计学处理。结论获得青岛骨髓库汉族人群HLAA、B、DRB1位点基因多态性资料。该库HLA多态性分布更接近中国北方汉族人群分布规律。     

河南省骨髓库汉族捐献者HLA-A、B、DR高分辨基因多态性调查分析

背景:2009年开始,中华骨髓库加大HLA高分检测的力度,可缩短配型检索周期,提高配型成功率.目的:统计分析河南省骨髓捐献者HLA-A、B、DRB1高分辨基因多态性.方法:河南省汉族造血干细胞志愿捐献者血样3 874人份,志愿捐献静脉血,EDTA抗凝.采用SSO HD 荧光微珠流式高分辨HLA-A、B、DRB1基因分型检测方法,对3 874份骨髓捐献志愿者血样进行高分辨分型检测,用PCR-SSP高分辨检测、SBT检测解决存在的模棱两可问题.等位基因计数法计算等位基因的基因频率.结果与结论:共检出A 34个,B 84个,DRB1 50个,A位点基因频率处于前5位的有A*0201(0.160 9)、A*1101(0.162 7)、A*2402(0.160 2)、A*3001(0.080 8)、A*3303(0.078 9);B位点处于前5位的是B*1302(0.077 7)、B*4001(0.072 2)、B*5101(0.062 8)、B*4601(0.061 2)和B*0702(0.050 7);DRB1位点处于前5位的是DRB1*1501(0.146 9)、DRB1*0901(0.131 8)、DRB1*0701(0.121 1)、DRB1*1202(0.061 2)、DRB1*0405(0.058 2).     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨等位基因频率分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1 5位点在高分辨基因分型水平上的等位基因频率特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用直接计数法计算各位点基因频率。结果在718名捐献志愿者中,共检出28个HLA-A等位基因、61个HLA-B等位基因、30个HLA-C等位基因、40个HLA-DRB1等位基因、18个HLA-DQB1等位基因;其中HLA-A位点最常见等位基因为A*1101(21.66%)、A*2402(16.37%)、A*0201(13.79%);HLA-B位点最常见等位基因为B*4001(11.49%)、B*4601(9.54%);HLA-C位点最常见等位基因为Cw*0702(15.74%)、Cw*0102(15.32%)、Cw*0304(11.56%);HLA-DRB1位点最常见等位基因为DRB1*0901(14.69%)、DRB1*1501(12.40%)、DRB1*0701(9.89%);HLA-DQB1位点最常见等位基因为DQB1*0301(20.54%)、DQB1*0303(15.81%)、DQB1*0601(10.79%)。结论本研究在高分辨基因分型水平提供了一套有关中国人群HLA-A,-B,-C,-DRB1和-DQB1 5位点基因频率数据。     

中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因多态性分析

目的检测中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因型,了解其基因多态性分布特点。方法采用序列特异性寡核苷酸探针聚合酶链反应(PCR-SSOP)技术对分库1 013名汉族志愿者进行HLA-DRB1高分辨分型。结果共检出HLA-DRB1基因型(低分辨型)12个,检出基因亚型(高分辨型)37个,其中前5位依次为DRB1*0901、DRB1*1501、DRB1*0803、DRB1*1202、DRB1*0401,其基因频率分布与中国台湾慈济脐血库、日本、东欧裔美国人比较,存在统计学差异。结论中华骨髓库湖北分库汉族志愿者HLA-DRB1高分辨基因频率分布相对集中,其基因多态性与中国台湾、日本、东欧裔美国人存在显著性差异。     

河南省造血干细胞资料库汉族捐献者HLA基因多态性调查

目的了解河南造血干细胞资料库捐献者人类白胞抗原HLAA、B、DRB1等位基因多态性。方法按《中国造血干细胞捐献者资料库,组织配型实验室规程》(以下简称规程)的要求,采用国际通用的序列特异性引物聚合酶链反应(PCRSSP),检测1626名造血干细胞捐献者的部分等位基因,计算各等位基因的频率,分析并与国内外不同地区汉族人群的调查结果对比。结果检出HLAA等位基因17个,基因频率较高的有A2/0.2947、A11/0.1593、A24/0.1544、A33/0.1193;B位点共检出等位基因41个,高频基因为B13/0.1004、B51/0.0791、B46/0.0632、B40(60)/0.0741、B40(61)/0.0629、B35(0.0510)、B15/62(0.0694);DRB1高频基因为DR07/0.1377、DR04/0.1076、DR09/0.1270、DR12/0.1038、DR15/0.1715;未检出的等位基因有A36、A74、B4005、B15/70、B82。结论河南造血干细胞库汉族HLA基因多态性分布符合其种族、地区特点。     

中华(内蒙古)骨髓库蒙古族人群HLA-A、B、DRB1等位基因多态性分析

目的了解中华(内蒙古)骨髓库蒙古族人群HLA-A、B、DRB1位点基因多态性的特点。方法采用PCR-反向序列特异性寡核苷酸探针(PCR-RSSOP)杂交方法对蒙古族志愿者的HLA-A、B、DRB1位点上的等位基因作中低分辨基因分型,计算HLA-A、B、DRB1的基因频率,获取该库蒙古族HLA-Ⅰ、Ⅱ类等位基因多态性分布的初布资料。结果该库蒙古族志愿者HLA-A位点共检出16种等位基因,基因频率较高的是A*02,A*24和A*11,分别为0.5521,0.2703,0.2278;而A*25,A*69的频率最低,均为0.0039;HLA-B位点检出28种等位基因,基因频率较高的是B*40,B*15和B*13分别为0.2703,0.2162和0.1931,频率较低的是B*45,B*59均为0.0039;DRB1位点检出13种等位基因,基因频率较高的是DRB1*15,DRB1*7,DRB1*12,分别为0.2780,0.2741,0.2162,而DRB1*10的频率最低为0.0348。结论内蒙古骨髓库族志愿者HLA-DRB1等位基因频率具有内蒙地区蒙古族人群共有的遗传特征,但也有其自身的分布特点。     

中华骨髓库造血干细胞捐献志愿者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB1高分辨单体型频率初步分析

目的分析中华骨髓库造血干细胞捐献者HLA-A、-B、-C、-DRB1、-DQB15位点在高分辨基因分型水平上的单体型频率及连锁不平衡特征。方法根据718名中华骨髓库捐献者HLA5位点高分辨分型数据,运用Arle-quin3.1软件以最大似然法分析单体型频率。结果双座位连锁不平衡分析显示,HLA-C与HLA-B、HLA-DRB1与HLA-DQB1呈现较为显著的连锁不平衡;多位点单体型频率分析结果显示,最常见的2、3、4、5位点单体型分别为:A*0207-B*4601(7.34%)、Cw*0102-B*4601(8.71%)、B*1302-DRB1*0701(6.19%)、DRB1*0901-DQB1*0303(14.27%)、A*3001-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、A*0207-B*4601-Cw*0102(7.06%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701(5.36%)、Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(6.12%)、A*3001-Cw*0602-B*1302-DRB1*0701-DQB1*0202(5.29%)。结论本研究提供了中华骨髓库718名捐献者HLA5位点高分辨单体型频率遗传学数据,将为临床寻找HLA匹配的无关供者、法医学鉴定、HLA与疾病相关研究等提供分子遗传学参考。     

基因组DNA高通量提取技术及其在骨髓库捐献者样本HLA基因分型中的应用

本研究旨在建立从全血EDTA抗凝样本中高通量提取基因组DNA的有效方法,以常规应用于Luminex rSSO HLA流式磁珠基因分型。使用2ml深孔板和TECAN DNA全自动工作站,从288份骨髓捐献者样本中提取基因组DNA提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,并采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性;DNA样本用One lambda rSSO HLA—A、B和DRB1基因分型试剂盒进行PCR扩增、分子杂交和Luminex流式磁珠分析仪检测,统计分析每一DNA样本HLA—A、B和DRB1基因扩增产物经DNA探针分子杂交后的阳性磁珠和阴性磁珠的荧光信号强度。结果表明：从400μl全血中提取了基因组DNA,288份样本的DNA产量平均为3．217±0．715μg,A260／A280值平均为1．710±0．103,A260-A320／A280-A320值平均为1．761±0．151;用琼脂糖凝胶电泳法测得DNA的分子量均大于15kb;每一样本mA—A、-B和-DRB1杂交后的阳性磁珠的荧光信号强度均〉600RFU,而阴性磁珠的荧光信号强度〈50RFU。结论：本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得的基因组DNA适用于高通量中华骨髓捐献者样本的HLA流式磁珠基因分型等下游的移植免疫学与分子生物学实验。     

在中华骨髓库找到HLA匹配无关供者的概率

目的 计算在中华骨髓库(CMDP)找到HLA匹配无关供者的概率,探讨骨髓库最佳库容量.方法 根据HLA表型频率计算找到HLA匹配供者概率.结果 在中华骨髓库248 978名HLA等位基因分型供者中,找到至少1例HLA-A,-B,-DRB1等位基因6/6匹配、HLA-A,-B,-C,-DRB1等位基因8/8匹配、HLA-A,-B,-C,-DRB1,-DQB1等位基因10/10匹配供者的概率,分别为0.358 1、0.2749、和0.234 7.根据籍贯将供者分为北方和南方2大群体,在114 767名北方供者群体和114 767名南方供者群体中,找到至少1例6/6、8/8、10/10匹配供者的概率分别为0.2405和0.3383,0.1807和0.262 8,0.155 0和0.2225.结论 CMDP供者南北群体之间存在遗传学差异,北方供者HLA多态性高于南方供者.选择性增加特定籍贯供者,可提高该籍贯患者找到HLA匹配供者的概率.     

PCR-SBT技术在山东骨髓分库HLA高分辨分型工作中的初步应用

目的将基于测序分型(SBT)技术应用于中华骨髓库山东分库建设的探讨。方法使用ABI 3730 xlDNA测序仪,采用SBT直接测序法,对山东地区的3 500份志愿者血液标本进行DNA测序,其中HLAⅠ类基因对第2、3和4外显子双向测序,Ⅱ类基因对第2外显子双向测序,以得到其HLA高分辨分型结果;对部分呈现中分辨分型结果的标本,通过SSSP技术确认。结果 HLA-A、B、DRB1位点分别有48.23%、42.86%和76.91%得到高分辨结果。此3个位点均获得高分结果的比例为15.91%。在随机增选的760例中分辨标本中,659例(86.71%)经SSSP技术后,获得高分辨结果。结论 SBT技术是骨髓分库开展HLA高分辨分型工作的有力工具。     

中华骨髓库HLA实验室工作流程表格化管理

中华骨髓库目前已有40万的库容，已经而且正在为救治急需移植的白血病患者提供机会。中华骨髓库的捐献者数据信息，由实验室传到各省分库再到国家管理中心（中华骨髓库国家总库），有一套计算机数据传输系统。各实验室的检测结果可以从网上传到省级分库，再由分库传到国家管理中心。而实验室内部的数据信息管理目前还没有一个统一的标准和管理系统，随着检测数量的增加，建立一套适合实验室工作流程的管理系统显得十分重要，笔者在这方面做了一些尝试，采用书面表格和电子表格进行数据信息管理，报告如下。     

异位性皮炎患者HLA—DRB基因多态性分析

目的：探讨异位性皮炎与HLA－DRB基因多态性的相关性。方法：用引物序列特异性聚合酶链反应（PCR－SSP）扩增HLA－DRB等位基因。结果：HLA－DR3基因频率在异位性皮炎患者组为14．89％，对照组为3．75％（P＜0．01）。而DR6基因频率在患者组为0，对照组为8．75％（P＜0．01），患者组较对照组明显为低。结论：我们推测DR3基因位点是天津地区汉族异位性皮炎的易感基因，DR6基因位点是天津地区汉族异位性皮炎的抗性基因。     

江西地区1927例骨髓捐献人群HLA-A、B、DRB1的多态性探讨

目的：分析江西地区骨髓捐献人群人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)A、B、DRBl等位基因的多态性分布特征。方法应用流式-序列特异性寡核苷酸探针方法(Flow-SSO)与直接测序法(SBT)检测江西地区1927例骨髓捐献者的HLA-A、B、DRBl基因座位,采用Arlequin3．5软件计算HLA等位基因频率、单倍型频率和连锁不平衡参数等。结果低分辨状态下3个基因座分别检出17、29和12个等位基因,3个座位分布频率最高的等位基因分别是HLA-A*02(0.3064)、HLA-B*40(0．1889)和HLA-DRBl*9(0．1917),最常见的单倍型为HLA-A*02-B*46-DRBl*09(0．0721)。该人群HLA-A、B、DRBl等位基因在高分辨检测情况下分布不符合Hardy-Weinherg平衡(P＜0.05)。结论江西地区骨髓捐献人群HLA-A、B、DRBl等位基因和单倍型具有较高的遗传多态性。     

西安骨髓库北方汉族人群HLA-DRB1高分辨多态性

目的了解西安骨髓库北方汉族人群HLA-DRB1基因高分辨多态性分布特点。方法从11755名北方汉族造血干细胞捐献者中随机抽取167名,采用PCR-SSP方法进行高分辨HLA-DRB1基因分型。结果共检出36种等位基因,DRB1*03、DRB1*07、DRB1*09、DRB1*16等未检出多态性,DRB1*03全部表现为0301,DRB1*07全部表现为0701,DRB1*09全部表现为090102,DRB1*16全部表现为160201。等位基因频率最高的前三位是DRB1*15(0.1677)、DRB1*09(0.1407)和DRB1*04(0.1317),等位基因高度集中,DRB1*15多态性以1501为主(87.5%),DRB1*04最具多态性,但很集中,27.27%表现为0405,36.36%表现为0406。结论西安骨髓库北方汉族人群中HLA-DRB1等位基因分布相对集中,多态性分布与白种人和黑人存在差异。     

江苏骨髓分库汉族造血干细胞捐献志愿者HLA-A、B、DRB1基因多态性和单倍型研究

目的分析中国造血干细胞捐献者资料库(简称江苏分库)汉族人群中HLA-A,B,DRB1基因多态性和单倍型的分布特征。方法用PCR-SSP和PCR-SSOP基因分型技术对江苏分库20 248名无关志愿者作HLA-A、B、DRB1低分辨基因分型,以直接计数法计算等位基因频率,应用Arlequin 3.01软件以最大似然法分析单倍型频率。结果江苏分库汉族志愿者HLA抗原频率分布符合Hardy-Weinberg平衡;共检出HLA-A位点等位基因18个,B位点等位基因34个,DRB1位点等位基因13个;A位点频率最高的是A*02(29.6%),B位点频率最高的是B*15(14.4%),DRB1位点频率最高的是DRB1*09(16.2%);频率最高的HLA-A,-B,-DRB1单倍型是A*30-B*13-DRB1*07(6.92%),频率最高的HLA-A、B单倍型是A*30-B*13(8.04%),频率最高的HLA-B,DRB1单倍型是B*13-DRB1*07(8.07%),频率最高的HLA-A、DRB1单倍型是A*02-DRB1*09(7.70%)。结论对江苏分库汉族人群HLA的分布状况的了解,有助于指导临床寻找HLA匹配的无关骨髓供者,为HLA与疾病相关研究和我国人群群体遗传学研究等提供了有意义的基础性资料。     

骨髓库和脐血库中的HLA分型技术和策略

造血干细胞移植要求供者和患者的人类白细胞抗原(HLA)有最大程度的配合.供者来源包括HLA配合的患者亲属以及无亲缘关系的个体或脐带血.为了找到HLA配合的无亲缘关系供者,自20世纪80年代末起,在世界范围内建立了各种骨髓供者登记(以下简称骨髓库)和脐血库.根据世界骨髓供者联网(BMDW)的统计,目前已有37个国家或地区的48个骨髓库和15个国家的23个脐血库参加该组织.到2001年3月止,登记在册的骨髓供者和脐血总数已超过700万例(http:/www.bmdw.org).在建立骨髓库和脐血库中,都涉及HLA分型的问题.特别是在目前HLA分型技术转向DNA方法的过渡阶段,究竟采用什么样的HLA分型策略显得格外重要.本文将综述目前国际上通用的HLA分型标准,为制定中国骨髓库和脐血库的HLA分型策略提供依据. 1 HLA-DNA分型已取代血清学分型 血清学方法是HLA分型的经典技术,它需要有活力的T和B淋巴细胞,以及特异性明确的HLA分型标准血清.由于HLA抗血清本身的交叉反应,弱反应以及额外反应等特性,造成HLA血清学分型错误率高.美国国家骨髓库(NMDP)在一项大规模研究中,比较了42160例骨髓供者的HLA-AB血清学分型和DNA分型结果,发现血清学方法错误率HLA-A为8%,HLA-B为13%,HLA-A和B为3%,总错误率达24%[1].此外由于淋巴细胞的保存相对比较困难,以及高质量的单价HLA分型血清,特别HLA-DR分型血清来源有限,这些因素导致血清学方法被淘汰.自1996年第12届国际组织相容性讨论会后,以DNA为基础的HLA基因分型技术日趋成熟,并逐渐取代血清学方法.HLA血清学也不再被列入以后的国际组织相容性讨论.     

吉林骨髓库汉族造血干细胞捐献者HLA-A、B、DRB1基因分布和单体型分析

目的了解中国造血干细胞捐献者资料库吉林分库HLA基因及单体型分布特征。方法采用PCR-SSP、PCR-SSO和PCR-SBT法对吉林分库内10 120份吉林籍汉族捐献者HLA-A、B、DRB1基因低分辨分型,用Excel软件计算HLA基因频率、单倍型频率及其连锁不平衡参数。结果吉林分库内汉族捐献者的HLA-A、B、DRB1基因(含血清学特异性)分别有21、45、13种,频率高的基因是:A*02、A*24、A*11、A*30,B*13、B*60、B*61、B*62、B*35、B*46、B*51,DR*01、DR*03、DR*04、DR*07、DR*09、DR*12、DR*15。HLA单体型分布,两座位连锁频率较高的有:A30-B13、A02-B46、A02-B61、A02-B58,B13-DR07、B13-DR12、B46-DR09、B61-DR09,A2-DR09、A30-DR07、A02-DR12、A02-DR15;三座位连锁频率较高的是:A30-B13-DR07、A02-B46-DR09、A02-B13-DR12、A02-B61-DR09。结论为临床造血干细胞移植寻找合适匹配的供受对,以及吉林地区汉族人群HLA基因多态性与HLA相关疾病的研究提供了有意义的参照数据。     

重庆造血干细胞捐献者资料分库HLA单倍型研究

目的了解重庆造血干细胞捐献者资料分库HLA-A、B、DRB1基因多态性,分析其中HLA-A、B、DRB1单倍型频率的分布特征。方法采用PCR-SSP方法对中国造血干细胞捐献者资料库重庆分库(简称重庆分库)的3957名无血缘关系的捐献者进行基因分型,计算HLA基因频率和单倍型频率。结果在重庆分库的人群中,最常见的A-B单倍型是A2-B46、A11-B60和A33-B58,占单倍型频率总数的22.2%;最常见的A-DR单型是A2-DR9、A11-DR12和A11-DR15,占单倍型频率总数的18.6%;最常见的B-DR单倍型是B46-DR9、B58-DR17和B75-DR12,占单倍型频率总数的13.6%。A2-B46、A33-B58和A30-B13为重庆分库最常见、连锁不平衡最显著的单倍型。结论重庆分库的HLA单倍型分布特征与南方汉族人群相近,但也有其自身特点。