乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响

目的　研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响。方法　通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙肝、 14例慢性重型乙肝和 34例肝硬化患者的血清HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量 ,通过荧光定量PCR技术检测血清HBVDNA含量。结果　 (1)中度和重度慢性乙型肝炎 (CH)患者CP双变异 (nt176 2A→T和 176 4G→A)的发生率同轻度CH组比较显著升高 (分别为 6 1 3%和 6 1 1%VS 2 3 1% ) ;肝硬化组患者CP双变异发生率同CH组比较显著升高(76 5 %VS 4 8 0 % )。前C基因终止变异 (nt1896G→A)在重型乙型肝炎患者中的发生率显著升高 (71 4 % )。 (2 )双变异组和终止变异组患者HBeAg含量均显著下降 ,但后者下降更明显。双变异组的HBeAb阳性率和对照组比较无明显差异 ,但终止变异组的HBeAb阳性率同双变异组和对照组比较差异显著。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。 (3)双变异组和对照组患者HBVDNA含量间无明显差异。结论　CP双变异和前C基因终止变异均影响HBeAg表达 ,但后者影响更大 ;在对病情影响上 ,前者与肝硬化发病有关 ,后者则与重型乙肝发病有关。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA与HBeAg、HBeAb含量的关系

目的 :检测乙型肝炎 (乙肝 )患者血清HBVDNA与HBeAg、HBeAb含量的变化 ,以探讨两者的相关性。方法 :对 2 0 7例乙肝患者采用微粒子免疫荧光法 (MEIA)检测血清HBV标志物 (HBV M ) ,定量PCR法检测血清HBVDNA。结果 :HBeAg阳性组的HBVDNA为 10 6 .53± 1 .0 7copies·ml- 1 ;e系统双阳组的e抗原均为低水平 ,HBVDNA含量为 10 4 .89± 1 .0 3copies·ml- 1 ,与前组比较有显著性差异 ;82例HBeAg阴性患者有 5 3 .7%HBVDNA为阳性 ,与前两组比较均有显著性差异。结论 :HBeAg含量与HBVDNA含量成正比 ;e系统双阳组e抗原与HBVDNA含量均明显降低 ,提示抗原抗体正处于转换期 ;有部分HBeAg阴性患者的HBVDNA呈低水平复制 ,具有一定传染性 ;少数HBeAg阴性和e系统双阳者HBVDNA呈高水平提示可能与病毒变异有关     

HBV 1762/1764联合突变检测的临床价值

目的　研究乙型肝炎病毒C基因启动子区T 176 2 /T 176 4联合突变的临床价值。方法　采用PCR———微孔板杂交及内对照竞争PCR———微流芯片对 4 0例HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性 ,6 5例HB sAg、HBeAb、HBcAb阳性并且HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者进行HBV 176 2 / 176 4双变异及HBVDNA定量测定。结果　HBeAg阳性者中HBV 176 2 / 176 4变异阳性率显著低于HBeAg阴性者 (2 5 .0 %、83.1%、P<0 .0 1) ;HBeAg阳性、HBeAg阴性者组中HBV 176 2 / 176 4阳性者HBVDNA含量显著高于HBV 176 2 /176 4阴性者 (P <0 .0 1)。结论　HBeAg阴性者HBV 176 2 / 176 4阳性率较高 ;HBV 176 2 / 176 4阳性并不能完全阻断HBeAg表达 ;HBV 176 2 / 176 4变异导致HBV复制加强     

乙型肝炎肝硬化病人的乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异及其对e抗原系统的影响

目的研究乙型肝炎肝硬化病人血清的乙型肝炎病毒（HBV）C基因启动子（CP）和前C基因变异。方法通过DNA扩增、基因序列分析检测34例活动性肝硬化和75例慢性乙肝病人血清的HBV CP和前C基因序列,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量,及通过荧光定量PCR技术定量检测血清中的HBV DNA。结果（1）CP双变异（nt 1762A→T和1764G→A）在肝硬化（LC）组的发生率显著高于慢性乙型肝炎（CH）组（76．5％vs48．0％）;前C终止变异（nt1896G→A）则在LC组和CH组的发生率无显著差异（35.3％vs26．7％）。（2）CP双变异虽使HBeAg表达显著下降,但幅度较小;与对照组相比,CP双变异组的HBeAb阳性率也无明显升高;前C终止变异则大幅度影响HBeAg表达,显著增高HBeAg／HBeAb转换率;终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。（3）HBeAb阳性LC组的前C终止变异的发生率显著高于HBeAb阴性LC组（75．0％vs5．6％）;而CP双变异则在两组LC中无明显差异（75．0％vs77．8％）。结论CP双变异可能与乙型肝炎肝硬化发病机制有关;前C终止变异则与肝硬化病人的HBeAg／HBeAb转换有关。     

乙型肝炎患者HBV-DNA与HBV-M及HBV-DNA前C/C区变异的对比研究

目的:探讨乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒血清学标志(HBVM)与HBVDNA及HBVDNA前C/C区变异检测结果的相关性与临床意义。方法:对359例乙型肝炎患者血清的HBVM和HBVDNA及HBVDNA前C区1896/1814位变异检测结果进行比较;HBVM用ELISA定性分析法检测;HBVDNA用PCR荧光定量法检测;HBVDNA前C/C区用基因芯片显色法检测。结果:急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化HBVDNA检出率分别为81.8%、62.4%、44.7%,三组进行组间比较,差异均有显著性(P<0.01);HBsAg与HBeAg均阳性组HBVDNA检出率显著高于HBsAg与抗HBe均阳性组(P<0.01);HBsAg与抗HBe均阳性组的变异率高达50.7%,显著高于HBsAg与HBeAg均阳性组(P<0.01)。结论:HBVDNA是评价HBV活动最理想的标志;HBVDNA前C/C区变异在我国乙型肝炎患者中普遍存在,对抗HBe阳性患者的临床意义更大;抗HBe的出现不能作为HBV复制停止的指标;HBVDNA量的变化可作为临床评价病毒复制和抗病毒疗效的参考指标。     

乙型肝炎病毒核心基因启动子变异与血清HBeAg及病毒载量关系的探讨

目的研究乙型肝炎病毒（HBV）核心基因启动子（BCP）变异与e抗原（HBeAg）及病毒载量的关系。方法（1）研究对象为176例HBV慢性感染者（轻、中、重度慢性乙型病毒性肝炎,肝炎肝硬化,慢性重型肝炎和原发性肝癌）。（2）研究方法：①采用PCR微板核酸杂交结合ELISA检测显示技术,对患者血清进行检测HBVBCP区核苷酸（nt）1762碱基A→T和1764G→A联合突变。②采用PCR结合荧光探针检测技术,检测患者血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）含量.③采用ELISA检测技术,检测患者血清HBV标志物（HBsAg、HBeAg、抗-HBs、抗-HBe及抗-HBc）。结果（1）在176例HBV慢性感染者中检出HBVBCP区T1762A1764变异者73例,HBVBCP变异的阳性率为41．5％。HBV BCP变异在HBeAg阴性病例的阳性率为49．4％（44／89）,显著高于HBeAg阳性病例的阳性率33．3％（29／87）（P=0．03）。（2）HBV BCP变异阳性组的HBV DNA含量显著高于HBV BCP变异阴性组的含量（P=0．000）。BCP阳性组HBV DNA含量在HBeAg阳性病例及HBeAg阴性病例中均较BCP阴性组高（P=0．000）。结论（1）HBV BCP变异可引起HBV感染者的HBeAg阴转。（2）HBV BCP变异可使HBV致病力增强,病毒复制水平提高。（3）对HBsAg 阳性／HBeAg阴性患者需要进一步检测HBV DNA,以免由于基因变异导致将HBeAg阴性者误认为病毒的免疫清除或静息而延误抗病毒治疗时机。     

慢性乙肝患者e抗原血清转换与HBV基因变异的关系

目的 :了解慢性乙肝患者e抗原血清转换中HBV -DNA前C基因及C基因启动子变异的关系。方法 :HBV -DNA阳性且e抗原 /或e抗体阳性的慢性乙型肝炎患者各 30例 ,以PCR结合微板核酸杂交 -ELISA方法检测乙肝病毒前C基因 (nt 1896、nt 1899)及其基本核心启动子 (BCP ,nt 176 2、nt 176 4)变异。结果 :不论前C基因还是BCP变异 ,均与e抗原血清转换相关 (P <0 .0 5 ) ;不论e抗体阳性组还是e抗原阳性组 ,BCP变异均高于前C基因变异 (P <0 .0 5 ) ,但二者均不相关 (P >0 .0 5 )。结论 :乙肝病毒C基因启动子与前C基因的变异是随机的 ,都可下调HBeAg的表达 ,前者更易于发生变异。     

慢性乙肝病毒B亚型感染儿童不同HBeAg状态下 CP基因变异测定

目的:了解HBV基因型B/adw2型的慢性HBV感染儿童不同血清HBeAg状态下HBV C区启动子基因的变异.方法:选择HBV基因型为B型/血清型adw2的慢性HBV感染儿童64例,按血清HBeAg不同状态分为血清e抗体阳性组(n=34)和e抗原阳性组(n=30)2组,以HBV DNA为模板行PCR反应扩增S区序列(确定HBV基因型)及C区启动子(CP)基因片断,CP基因片断经胶回收纯化后,应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-CP,经蓝白斑筛选,阳性克隆以凝胶电泳、双酶切及PCR验证后将鉴定正确的克隆测序,将测序结果与Entrez database中血清亚型及基因型相同的HBV序列相比较并进行分析.结果:S区基因测序结果证实64例儿童感染的HBV基因型均为B型/血清型adw2.CP基因测序结果证实2组均有CP基因变异,血清e抗体阳性组CP变异率(29.41%)高于e抗原阳性组(6.67%)(P＜0.05).e抗体阳性组有4个变异热点,而e抗原阳性组无变异热点.结论:慢性乙肝病毒B亚型感染儿童存在CP基因变异,且可能与e抗原血清转换有关.     

持续感染乙肝病毒e抗原血清转换与基因变异的关系

目的：了解乙肝病毒慢性持续感染e抗原血清转换中前C基因及C基因启动子变异的关系。方法：HBV－DNA阳性且e抗原／或e抗体阳性的慢性乙型肝炎患者各30例，以PCR结合微板核酸杂交－ELISA方法检测乙肝病毒前C基因（nt1896,nt1899)及其基本核心启动子（BCP，nt1762,nt1764)变异。结果：不论前C基因还是BCP变异，均与e抗原血清转换相关（P＜0．05）；不论e抗体阳性组还是e抗原阳性组，BCP变异均高于前C基因变异（P＜0．05），但二者均不相关（P＞0．05）。结论：乙肝病毒C基因启动子与前C基因的变异是随机的，都可下调HBeAg的表达，前者更易于发生变异。     

乙型肝炎患者血清HBV DNA与HBV-M检测比较分析

目的：探讨不同免疫标志物的乙型肝炎（乙肝）患血清HBVDNA阳性率及其临床意义。方法：用PCR方法检测乙肝患血清HBVDNA，用ELISA方法检测乙肝五项标志物即HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb。结果：212例HBsAg,HBeAg,HBcAb均阳性的标本HBVDNA也全部阳性，阳性率为100%；158例HBsAg,HBeAb,HBcAb均阳性的标本，HBVDNA62例阳性，阳性率为39.2%,HBsAg,HBcAb阳性标本55例。其中30例HBVDNA阳性，阳性率为54.5%; 三抗体HBsAb,HBeAb,HBcAb阳性标本40例，其中5例HBVDNA阳性，阳性率为12.5%。结论：PCR方法更灵敏。只有检测HBVDNA才能确证HBV的真实感染和得制情况。     

肝脏疾病进展与乙型肝炎病毒前 C／C 区突变

目的：研究慢性乙型肝炎患者前C/C区突变位点与肝脏疾病进展的临床意义。方法应用实时荧光定量PCR及直接测序法检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎30例、HBeAg阳性慢性乙型肝炎20例,分析前C/C区变异位点与患者病情进展的相关性。结果肝硬化组前C/C区变异位点T1762/A1764、A1896发生率（86.3％,54.5％）明显高于慢性肝炎组（32.1％,35.7％）,差异均有统计学意义（ P ＜0.05）。慢性肝炎组与肝硬化组HBV载量差异无统计学意义（ P ＞0.05）;HBeAg阴性患者T1762/A1764,T1766/A1768,A1896变异位点发生率较HBeAg阳性患者显著增高（ P ＜0.05）。结论 T1762/A1764,A1896突变率的增加会促使肝脏疾病进展至肝硬化;HBeAg阴患者T1762/A1764,T1766/A1768,A1896变异位点的频率增加会促进肝脏疾病的进展。     

慢性乙型肝炎病毒C区基因突变株对干扰素治疗的应答反应

[目的 ]探讨慢性乙型肝炎病毒C区基因突变株对干扰素治疗的应答反应 .[方法 ]对 5 8例慢性乙型肝炎患者用重组干扰素 α(总用量 5 2 2× 10 6U)治疗 .前C区基因停止密码 2 8的突变株由限定酶断片长短的多形性测定 .C区基因的变异是用增殖各患者的 5种乙型肝炎病毒DNA克隆的方法检测 .[结果 ]干扰素疗程结束 6个月后 ,前C区变异株 2 3例中 14例 (6 0 % )乙型肝炎病毒e抗原阴转 ,无变异的野生型 35例中 15例 (4 3 % )乙型肝炎病毒e抗原阴转 ,二组无显著性差异 ,而前C区野生型 35例中C区基因 5个克隆全变异组 (2 4例 )的乙型肝炎病毒e抗原阴转率高于C区基因 5克隆中至少 1个克隆未变异组 (11例 ) (5 8%与 9% ) .[结论 ]感染乙型肝炎病毒变异株的乙型肝炎病毒e抗原阳性患者对干扰素应答良好 ,但这种变异株并不一定非在前C区 ,而C区基因的变异株亦可通过干扰乙型肝炎病毒e抗原的合成和分泌 ,从而影响干扰素的应答反应     

基因芯片检测慢性乙肝患者HBV-DNA变异的临床研究

目的应用新型基因芯片研究乙肝病毒多点基因变异在慢性乙肝患者中的意义，为临床诊断和治疗提供依据。方法对132例慢性乙肝患者采用DNA芯片技术，检测HBV—DNA基因6个位点的变异。结果132例慢性乙型肝炎患者均存在HBV—DNA位点的变异，其中前C区1896G—A变异率为23．5％。e抗原阳性者占4．O％（4／74）。e抗体阳性者占48．3％（28／58），后者变异株显著高于前者，此突变有助于HBV逃避免疫攻击而形成慢性感染状态；前C区1814变异率为3．8％；C区启动子1762变异率为56．1％，1764变异率为53．8％，且两种变异常同时出现，与重型肝炎、肝硬化和肝癌的发生相关；P区528变异率为9．8％，552M—I变异率38．6％，552M—V变异率为10．6％，552变异与核苷类似物耐药相关。结论HBV—DNA位点变异对于判定疾病的稳定与进展有重要作用。     

HBV前C区1896位点变异与HBV感染者肝功能损害程度的关系

了解ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异与乙型肝炎病毒感染者肝功能损害程度的关系。方法：用ＰＣＲ技术，通过改变引物３’端的方法，检测ＨＢＶ感染者的前Ｃ区第１８９６位点变异株。结果：１０５例ＨＥＶ感染者中的ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点变异株总检出率为５６．２％；男性与女性患者的检出率分别为５７．０％与５００％；≤３０岁组，３１－５９岁组，≥６０岁年龄组的检率分别为６０．０％，５６．６％，２８．６％；无黄疸组，轻～中度黄疸组，重度黄疸组的检出率分别为５３．２％，６５．１％，４０．０％；在ＨＢＶ携带者、慢性肝炎（包括轻、中、重庆），重症肝炎及肝硬化患者中的检出率分别为６０．０％，５７．４％，３３．３％，７０．０％。结论：ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位点突变株广泛存在于ＨＢＶ感染者中，而且其检出率与患者性别、年龄、ＨＢＶ感染时间长短及肝功能损害程度并无明显联系。     

慢性HBV感染者血清HBeAg、抗-HBe与HBV DNA含量的关系及临床意义

目的：探讨慢性HBV感染者血清HBeAg、抗－HBe与HBV DNA检测结果的关系及其临床意义。方法：对41例慢性乙肝与36例乙肝后肝硬化患者进行定量测定HBeAg、抗－HBe及HBV DNA量。结果：慢性乙肝与乙肝后肝硬化患者HBV DNA量无显著性差异（P＞0．05），而它们间的HBeAg及抗－HBe阳性率，抗－HBe量存在明显的差异（P＜0．05），肝硬化患者的抗－HBe较高；77例患者中HBeAg阳性组与抗－HBe阳性组间HBV DNA量无显著性差异（P＞0．05）。结论：HBV复制是否活跃不同类型慢性HBV感染病期无明显关系，慢性乙肝患者发生HBeAg向抗－HBe转化并非均提示病情好转，反而有可能是预示向肝硬化发展的一个前期的危险信号。     

慢性HBV感染患者bcp/pc区点突变模式、pres区缺失及其临床意义

目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的 DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。结果 Bcp/pc区点突变包括nt1753、nt1762、nt1764、nt1776、nt1803、nt1846、nt1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1%及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。     

Detection of pre－C region mutants of hepatitis B virus from HBeAg negative patients in Xi＇an area of China

Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｐｒｅ－ＣｒｅｇｉｏｎｍｕｔａｎｔｓｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓｆｒｏｍＨＢｅＡｇｎｅｇａｔｉｖｅｐａｔｉｅｎｔｓｉｎＸｉ＇ａｎａｒｅａｏｆＣｈｉｎａＨａｎＪｉｅ（韩捷）；ＹａｎＹａｎ（阎岩）；ＤｉｎｇＺｈｅｎｒｕｏ（丁振...     

地高辛标记寡核苷酸探针对慢性乙肝患者前C基因突变的检测

目的　研究慢性乙肝患者乙肝病毒（ＨＢＶ）前Ｃ区突变情况。方法　用多聚酶链反应（ＰＣＲ）结合地高辛标记的寡核苷酸探针Ｍ０（野毒株）、Ｍ１（１８９８位变异株）、Ｍ２（１８９８／１９０１位变异株）对１６５例慢性乙肝患者前Ｃ区突变情况进行检测。结果　其中１２例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（＋）,抗ＨＢｅ（－）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ阳性率为１００％,突变株检出率为８．３％。１５３例ＨＢｓＡｇ（＋）,ＨＢｅＡｇ（－）,抗ＨＢｅ（＋）,抗ＨＢｃ（＋）患者,ＨＢＶＤＮＡ总阳性率为１６．３％,突变株总检出率为８４％。结论　前Ｃ基因突变株主要存在于抗ＨＢｅ阳性的慢性乙肝患者体内,ＰＣＲ结合地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术,操作简便快捷,利于临床推广应用。