FAM联合化疗和α-干扰素联用抑制肝癌生长的研究

我们利用人肝细胞癌裸鼠移植瘤模型 ,研究α 干扰素与ＦＡＭ 5 氟脲嘧啶 (5 Ｆｕ) +丝列霉素 (ＭＭＣ) +阿霉素(ＡＤＭ) ,联合化疗方案应用对肝癌生长的影响。一、材料与方法1 .实验材料 :人肝细胞癌Ｈ91 0 1瘤株由厦门大学抗癌研究中心提供。ＢＡＬＣ/Ｃ裸小鼠 5～ 6周龄 ,雌性 ,体重1 8～ 2 0 ｇ ,由厦门大学抗癌研究中心提供 ,饲养于ＳＰＦ级无菌饲养室。脱氧核苷末端转移酶介导的缺口末端标记法(ＴＵＮＥＬ法 )原位细胞凋亡检测试剂盒采用德国宝灵曼公司的ＩｎＳｉｔｕＣｅｌｌＤｅ ｔｅｃｔｉｏｎＫｉｐ,ＡＰ试剂盒。2 .人肝细胞癌裸鼠…     

人肝细胞系生物功能筛选测定

生物人工肝利用原代肝细胞或人肝细胞系提供肝功能支持［１～４］。我国是世界上最早建立人肝细胞系的国家之一［５］。本研究收集国内的９株人肝细胞系,从中筛选出分化程度高者,测定其生物功能,以备作为人工肝的生物材料。材料与方法１．材料９株人肝细胞系由中国科学院上海细胞生物学研究所提供,编号为细胞系１～９（ＣＬ１～９）。原代肝细胞取自５月胎龄水囊引产的人胚胎肝组织。Ｌ－１５培养基为Ｇｉｂｃｏ产品。Ｌ－谷氨酰胺为Ｓｉｇｍａ产品。ＦＡＣＳ　４４０流式细胞仪为美国Ｂｅｃｔｏｎ　Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品。２．方…     

应用旋转生物反应器和微载体技术体外大规模扩增人骨髓间充质干细胞

骨髓间充质干细胞 (ＭＳＣｓ)因其自身所具有的特殊性而日益受到关注[1,2 ] 。我们采用微载体技术在旋转生物反应器内扩增人骨髓间充质干细胞。一、材料与方法1.试剂 :细胞培养基ＤＭＥＭ购自美国Ｇｉｂｃｏ公司 ;旋转生物反应器购自美国Ｓｙｎｔｈｅｃｏｎ公司。2 .ＭＳＣｓ的分离与培养 :骨髓来源于正常献髓者 ,将人骨髓经ＤＭＥＭ稀释后用一种细胞分离液Ｐｅｒｃｏｌｌ分离 ,Ｐｅｒｃｏｌｌ分离液的比重为 10 73 ｇ/Ｌ。分离后收获单个核细胞 ,ＤＭＥＭ洗 2次 ,接种于 2 4孔板内 ,浓度为 2 .0× 10 5个 /ｃｍ2 ,各孔内加入 10 %胎牛血清 …     

大鼠肝细胞的微载体粘附培养

为探讨简便、实用、长期培养肝细胞的有效方法，以Ｃｙｔｏｄｅｘ ３为材料，对Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝细胞进行微载体粘附培养。     

混合型生物人工肝治疗急性肝衰犬的研究

我们在成功构建生物反应器 ,完成体外灌流实验基础上[1 ] ,建立混合型生物人工肝支持系统 (ＨＢＬＳ) ,对急性肝衰犬模型进行实验性治疗 ,以测试其效能。一、材料与方法1.实验动物 :杂种犬 7条 ,体重 15～18ｋｇ ,行门腔静脉吻合 ,肝蒂预置套带后关腹 ;48ｈ后再阻断肝蒂 1ｈ做成肝衰模型。 4条用ＨＢＬＳ治疗 ,另 3条空舱转流作为对照。2 .生物反应器的构成 :宁波亚泰Ⅱ级血浆分离器 (分子量截留为 75 0 0 0Ｄａｌｔｏｎｓ ,双醋酸纤维 ) ,纤维外间隙容积为 15 0ｍｌ ,内置 1.2× 10 9的数量级微载体培养Ｌ 0 2人肝细胞[2 ] 。3 .ＨＢＬＳ构…     

雌激素受体阴性乳癌细胞株中Cyclin D1和Ki-67表达与细胞凋亡的关系

本研究应用雌激素受体 (ＥＲ)阴性乳癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ 435ｓ探讨在ＥＲ阴性乳癌细胞中ＣｙｃｌｉｎＤ1及Ｋｉ 67表达与细胞凋亡的关系。1　材料与方法1 .1　材料ＥＲ阴性乳癌细胞株ＭＤＡ ＭＢ 435购于中科院上海细胞生物研究所 ,凋亡检测试剂盒、ＣｙｃｌｉｎＤ1单抗及Ｋｉ 67单抗购于ＭａｘｉｍＢｉｏｔｅｃｈ公司 ,ＵＳＡ。1 .2　检测指标及方法1 .2 .1　细胞周期和凋亡率测定　将 2× 1 0 5个 /ｍｌ浓度的ＭＤＡ ＭＢ 435ｓ细胞接种于 2 4孔板中 ,再将 1 0 - 8ｍｏｌ/Ｌ的 1 ,2 5(ＯＨ) 2 Ｄ3加入 2 4孔板中 ,于 1、2、3、4、5天作流…     

丙肝病毒核心基因的克隆及其在胆管癌细胞中的表达

我们采用基因重组技术克隆丙型肝炎病毒 (ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ,ＨＣＶ)核心基因并导入胆管癌细胞株 ,为进一步探讨ＨＣＶ感染在胆管癌中的致癌机理提供实验基础。材料和方法一、材料1.质粒和菌种 :ＰＢＫ ＨＣＶ质粒由浙江大学传染病研究所陈智教授构建并惠赠 ,为ＰＢＫ ＣＭＶ载体插入ＨＣＶ结构区基因片段 16 90ｂｐ(330 2 0 2 0ｎｔ) ,酶切位点为ＰｓｔⅠ和ＥｃｏＲⅠ ,基因型为ＨＣＶⅡ型。真核表达载体ＰＢＫ ＣＭＶ(含有新霉素、卡那霉素抗性基因 ) ,购自Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ公司 (美国 )。宿主菌ＪＭ10 9,为本室保存。2…     

肝细胞癌中金属硫蛋白的表达及其临床意义

本研究旨在通过免疫组织化学ＡＢＣ法测定人肝细胞癌(ＨＣＣ)及其癌旁肝组织和正常肝组织中金属硫蛋白(ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓ,ＭＴｓ)的表达情况,探讨其在国人ＨＣＣ中表达的生物学及临床意义。一、材料与方法1.ＨＣＣ组织和癌旁肝组织　湖南医科大学附属湘雅医院普外科和湖南省肿瘤医院外科1997年12月～1999年1月手术切除的ＨＣＣ标本35例。全部病理切片重新检查均证实为ＨＣＣ。所有病例术前均未接受其他治疗。其中男33例,女2例,年龄31～71岁,平均49岁。按Ｅｄｍｏｎｓｏｎ病理分级:Ⅰ级5例、Ⅱ级16例、Ⅲ～Ⅳ级共14例。全部…     

三氧化二砷对肝癌细胞株BEL-7404、SMMC-7721 和肝癌裸鼠移植瘤模型的作用

砒霜主要成分为三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3) ,用于治疗急性早幼粒细胞白血病效果良好 ,且毒副作用较低[1] 。本研究旨在观察Ａｓ2 Ｏ3对人肝癌细胞株ＢＥＬ 740 4,ＳＭＭＣ 772 1和肝癌裸鼠移植瘤模型的影响 ,探讨Ａｓ2 Ｏ3对原发性肝癌的作用及其机制 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.药物和试剂 :0 .1%Ａｓ2 Ｏ3溶液购自哈尔滨医科大学第一附属医院 ;噻唑蓝 (ＭＴＴ)购自美国Ｓｉｇｍａ公司 ;细胞凋亡原位检测试剂盒为德国ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。小鼠抗增殖细胞核抗原多克隆抗体为美国Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司产…     

中晚期大肝癌的二期手术切除治疗

随着经导管肝动脉化疗栓塞 (ｔｒａｎｓｃａｔｈｅｔｅｒａｒ ｔｅｒｉａｌｃｈｅｍｏｅｍｂｏｌｉｚａｔｉｏｎ ,ＴＡＣＥ)技术的普遍应用 ,使一部分原先不能切除的原发性肝细胞癌 (ｈｅｐａｔｏ ｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ ,ＨＣＣ)缩小后可二期手术切除 ,并有可能获得根治。 1997年 1月至 2 0 0 0年 6月我院共行ＴＡＣＥ治疗ＨＣＣ病人 2 4 1例 ,其中 15例肝脏肿瘤缩小后行二期手术切除。资料与方法1.临床资料 :15例均为男性 ,年龄 30～ 6 3岁 ,平均 4 8 8岁。均为ＨＢｓＡｇ阳性。 6例ＡＦＰ正常 ,9例ＡＦＰ升高 (136～ 80 0…     

血管抑素K(1～3)基因片段的克隆与序列测定

我们用自己设计的一对引物,应用ＰＣＲ法成功获得血管抑素(ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ)Ｋ(1～3)基因片段,为进一步研究其表达和实体瘤抗血管生成治疗创造条件,现将结果报道如下。一、材料和方法1.菌种、载体及模板:大肠杆菌Ｅ.ＣｏｌｉＤＨ5α,基因型ｓｕｐＥ44,ｈｓｄＲ17ｒｅｃＡｌｅｎｄＡｌｇｙｒＡ96ｔｈｉ1ｒｅｌＡ1,载体ｐＧＥＭ3Ｚｆ( )为本室保存;人白细胞ｃＤＮＡ文库购自美国Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。2.引物设计　克隆血管抑素Ｋ(1～3)Ｎ端功能区的引物如下,在其末端引入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点,引物由上海生物工程公司合成。…     

肝脏炎性假瘤诊治体会三例

自 1990年 1月至 2 0 0 1年 1月 ,我们对 3例肝脏炎性假瘤病人进行诊治观察 ,1例手术治疗 ,2例非手术治疗 ,均获痊愈 ,现报告如下。例 1:王某 ,女 ,5 4岁 ,于 1996年 5月因右上腹不适伴右肝区隐痛 1个月 ,患有乙肝病史。化验 :ＨＢＶＭ (+) ,ＨＣＶＭ (- ) ,ＡＬＴ正常 ,ＴＢＩＬ <17 1μｍｏｌ/Ｌ ,ＣＥＡ 6ｎｇ/ｍｌ,ＡＦＰ <2 5ｎｇ/ｍｌ,ＷＢＣ 11 0× 10 9/Ｌ。Ｂ超 :右肝前叶可探及 3 0ｃｍ较均匀 ,边界清楚的低密度团块。ＣＴ :增强后周边可见一晕环。同年 6月 ,在Ｂ超引导下经皮肝穿刺活检 (ＦＮＡ) ,经解放军总医院病理报告 :镜下…     

多聚四氟乙烯膜高密度培养肝细胞的可行性及其对培养肝细胞代谢功能影响的研究

肝移植已在急性肝功能衰竭 (ＡＨＦ)的治疗中取得了满意的疗效 ,但其医疗费用昂贵 ,存在着严重的免疫排斥反应 ,且供肝来源受限[1] 。为此 ,我们对多聚四氟乙烯 (ＰＴＦＥ)膜用作生物人工肝材料高密度培养肝细胞的可行性及其对培养肝细胞代谢功能的影响进行了研究。1 材料与方法 :取非编织型同心圆状排列的ＰＴＦＥ膜 10 0ｃｍ2 高温消毒 ,Ｈａｎｋｓ液洗涤备用。 6～ 8周Ｗｉｓｔａｒ大鼠 ,采用改良Ｓｅｌｇｅｎ法 (胶原酶灌注 )分离肝细胞 ,台盼篮拒染试验检测肝细胞活性 ,85 %以上成活者用于实验。取含 3× 10 9肝细胞悬液稀释于 70 0ｍ…     

乳猪肝细胞分离方法的建立

生物性人工肝作为暴发性肝衰竭的一种治疗手段正在不断的发展 ,理想的具有完整代谢活性的肝细胞是其关键的组成部分。我们在以往研究的基础上[1,2 ] ,建立起一种乳猪肝细胞的分离方法 ,现报道如下。一、材料和方法1.液体的配制 :(1)细胞分离液配制 :Ａ液 :含ＮａＣｌ 12 0ｍｍｏｌ/Ｌ、ＮａＨＣＯ32 5ｍｍｏｌ/Ｌ、ＫＣｌ 4.8ｍｍｏｌ/Ｌ、ＭｇＳＯ4 1.2ｍｍｏｌ/Ｌ、ＫＨ2 ＰＯ4 1.2ｍｍｏｌ/Ｌ。Ｂ液 :含ＣａＣｌ2 1.3 3ｍｍｏｌ/Ｌ、体积分数为 1.6%牛血清白蛋白的Ａ液。Ｃ液 :含葡萄糖5 .6ｍｍｏｌ/Ｌ、乙二胺四乙酸二钠 0 .5ｍｍｏｌ/…     

黑色素瘤抗原基因在肝细胞癌细胞株中的表达

黑色素瘤抗原基因 (ＭＡＧＥ)是ｖａｎｄｅｒＢｒｕｇｇｅｎ等[1] 于 1991年发现的重要的肿瘤相关基因 ,在肝癌标本中ＭＡＧＥ 1表达率达 80 %左右 ,应用ＭＡＧＥ抗原肽对手术、化疗等常规方法治疗效果差的肝细胞肝癌 (ＨＣＣ)进行免疫治疗有一定的应用价值和可行性[2 ,3 ] 。应用ＭＡＧＥ抗原肽对ＨＣＣ进行免疫治疗的体外研究的关键是 ,诱导出对带有ＭＡＧＥ抗原的靶细胞具有特异性杀伤性能力的细胞毒淋巴细胞 (ＣＴＬ)。本实验对 8种ＨＣＣ细胞株ＭＡＧＥ基因的表达和人类白细胞抗原一类抗原 (ＨＬＡⅠ类抗原 )类型进行了研究 ,筛选出相…     

黑色素瘤抗原-3基因在肝细胞癌中的研究

目的 检测黑色素瘤抗原－３（ｍｅｌａｎｏｍａ ａｎｔｉｎｅｇ－３,ＭＡＧＥ－３）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,探计用ＭＡＧＥ－３基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗在理论上的可行性。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ方法对４５例ＨＣＣ患者癌组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－３ ｍＲＮＡ表达情况进行研究,对３例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物中目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定     

双荧光素染色检测5-氟尿嘧啶及羟基喜树碱诱导的肝癌SMMC-7721细胞凋亡的研究

我们用 5 氟尿嘧啶 (5 Ｆｕ)、羟基喜树碱 (ＨＣＰＴ )在体外诱导人肝癌细胞ＳＭＭＣ 772 1产生凋亡 ,并用双荧光染料吖啶橙 /溴乙锭 (ＡＯ/ＥＢ)染色结合ＤＮＡ电泳法进行观察 ,结果报道如下。一、材料与方法将 1× 10 8/ＬＳＳＣ 772 1细胞 (中国科学院上海细胞学研究所 )接种于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭＩ 164 0培养液中 ,于 3 7℃ ,体积分数 5 %ＣＯ2培养 2 4ｈ ,细胞铺满瓶底 ,呈对数生长时加入 5 Ｆｕ、ＨＣＰＴ使二者终浓度分别为75ｍｇ/Ｌ、1ｍｇ/Ｌ ,再继续孵育 ,分别于6、12、2 4、48ｈ观察结果。细胞孵育至特定时间 …     

慢性肝病和肝癌上皮钙粘合素系统的表达及意义

应用ＡＢＣ免疫组化研究慢性肝病(ＣＬＤｓ)和肝癌 (ＰＨＣ)组织中上皮钙粘合素 (Ｅ ｃａｄｈｅｒｉｎ ,Ｅ ｃｄ)、α 连环素 (α ｃａｔｅｎｉｎ ,α Ｃ)和 β 连环素 (β Ｃ)表达及其意义。一、材料与方法1.标本及临床病理资料 :收集近 10年我院及娄底中心医院手术切除或穿刺活检的ＣＬＤｓ和ＰＨＣ病例标本 ,石蜡包埋切片 ,厚 4μｍ。 (1)ＣＬＤｓ:5 6例 ,血清学检查ＨＢｓＡｇ( ) ,男性 35例 ,女性2 1例 ,年龄范围 14～ 6 2岁 ,平均年龄(38 5± 12 4 )岁 ;病理类型包括ＣＰＨ 2 4例、ＣＡＨ 19例和肝炎后肝硬化 (ＬＣ) 13例。 (2 )ＰＨ…     

肝脏炎性假瘤三例

例 1　女 ,5 4岁 ,于 1996年 5月因右上腹不适伴右肝区隐痛 1个月住院 ,患有乙肝病史。化验 :ＨＢＶＭ (+) ,ＨＣＶＭ(- ) ,ＡＬＴ正常 ,ＴＢＩＬ <17 1μｍｏｌ/Ｌ ,ＣＥＡ6ｎｇ/ｍｌ,ＡＦＰ <2 5ｎｇ/ｍｌ,ＷＢＣ 11 0× 10 9/Ｌ。Ｂ超 :右肝前叶可探及 3 0ｃｍ较均匀 ,边界清楚的低密度团块。ＣＴ :增强后周边可见一晕环。同年 6月 ,在Ｂ超引导下经皮肝穿刺活检 (ＦＮＡ) ,经解放军总医院病理报告 :镜下可见大量淋巴细胞及浆细胞浸润 ,确诊为肝脏炎性假瘤。给予猪苓多糖 4 0ｍｇ肌注 ,1/ｄ ,2 0ｄ为 1个疗程 ,间隔 10ｄ后进行第二疗程 ,…     

地塞米松对三维培养大鼠肝细胞分泌的影响

三维培养是近年发展起的技术 ,能够模仿体内的结构特点[1 ] 。肝细胞三维培养主要应用于人工生物肝研究及肝细胞疾病基础研究中 ,我们利用该技术研究地塞米松 (ｄｅｘ)对肝细胞形态的影响并探讨其机制。一、材料和方法1.肝细胞球状体 (ＨＳ)的制备 :成年雄性Ｆ344大鼠 ,6周龄 ,15 0～ 2 5 0 ｇ ,采用Ｓｅｇｌｅｎ两步灌注法[2 ] 灌注肝脏 ,以Ｐｅｒｃｏｌｌ溶液梯度离心获取肝细胞 ,将其以2 .5× 10 2 个细胞 ｍｍ2 密度、无血清Ｗｉｌｌａｍｓ’Ｅ培养基培养于一次性培养皿上 ,5 %ＣＯ2 3 7℃下孵育 3～ 4ｄ后ＨＳ形成。2 .ＨＳ的三维培养[…