白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡及其作用机制

目的：探讨Bc l-2、Fas基因在白毛藤总苷诱导人肝癌Bel7402细胞凋亡中的作用。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡作用情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤总苷诱导Bel7402细胞凋亡,并且上调Fas和降低Bcl-2表达。结论：白毛藤总苷能促进Bel7402细胞凋亡,其机制可能与激活Fas、抑制Bcl-2表达有关。     

威灵仙对人肝癌细胞株Bel7402增殖及Bcl-2和Bcl-xl蛋白表达的影响

目的观察威灵仙对人肝癌Bel7402增殖及Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达的影响。方法将人肝癌Bel7402分为空白对照组、阳性对照组和威灵仙组,分别用普通培养液、氟尿嘧啶培养液、威灵仙培养液进行培养。采用四甲基偶氮唑盐比色法测定威灵仙对人肝癌细胞Bel7402的体外生长抑制率,并用免疫组化法检测三组细胞的Bcl-xl、Bcl-2蛋白表达量。结果威灵仙对人肝癌Bel7402细胞有显著增殖抑制作用,威灵仙组与空白对照组比较有统计学意义(P<0.01);威灵仙可抑制Bcl-xl、Bcl-2蛋白的表达,威灵仙组与空白对照组比较有统计学意义(P<0.01)。结论威灵仙可抑制Bel7402的生长,其机制可能与抑制Bcl-xl和Bcl-2蛋白的表达有关。     

bcl—xl和p53在人肝癌Bel7402细胞中的表达及中药的干预作用

目的：从基因水平探讨白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel7402细胞凋亡诱导的作用及机制。方法：水提醇沉法提取白花蛇舌草多糖，人肝癌Bel7402细胞常规体外细胞培养，设定空白对照组、5-氟尿嘧啶阳性对照组、白花蛇舌草多糖组。HE染色法光镜下观察细胞形态改变，计算凋亡指数，采用MTT法检测白花蛇舌草多糖对癌细胞的生长抑制作用，RT—PCR法检测原癌基因bcl—xl、抑癌基因p53基因mRNA表达的变化。结果：白花蛇舌草多糖体外抑制人肝癌Bel7402细胞生长、促进细胞凋亡，凋亡指数达16．97％，以MTT显色法检测细胞抑制率达到61．5％，以RT—PCR半定量法检测，上调p53基因mRNA表达，降低bcl—xl基因mRNA表达，以上各指标与空白对照组相比均有显著差异。结论：白花蛇舌草多糖抑制人肝癌Bel7402细胞增长，诱导细胞凋亡，其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因bcl—xl基因表达有关。     

Bcl-2和Fas在人食管癌细胞Ec-9706细胞中表达及中药干预作用

目的：研究白毛藤诱导人食管癌细胞凋亡的作用及其机制。方法：荧光显微镜观察不同浓度白毛藤诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果：白毛藤具有诱导Ec-9706细胞凋亡的作用,并且上调Fas基因、降低Bcl-2基因的表达。结论：白毛藤促进Ec-9706细胞凋亡,其机制可能与激活Fas基因、抑制Bcl-2基因表达有关。     

3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:观察糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸对肝癌Bel7402细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测3-溴丙酮酸对Bel7402细胞的增殖抑制效应,PI单染流式细胞术检测不同浓度3-溴丙酮酸（0、50、100、200 μmol/L）对Bel7402细胞凋亡的影响,ATP检测试剂盒分析细胞内ATP水平,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:3-溴丙酮酸可浓度和时间依赖性地抑制Bel7402细胞的增殖（P<0.01）,作用24、48、72 h的IC₅₀值分别为422.9、143.9、85.0 μmol/L。3-溴丙酮酸可诱导Bel7402细胞发生明显的细胞凋亡,50、100、200 μmol/L 3-溴丙酮酸作用24 h的细胞凋亡率均明显高于对照组（P<0.01）。ATP水平检测结果表明,3-溴丙酮酸可明显降低Bel7402细胞内的ATP水平（P<0.01）。Western blot结果显示,3-溴丙酮酸可下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,并上调凋亡诱导蛋白Bax的表达。结论:3-溴丙酮酸具有诱导肝癌Bel7402细胞凋亡的作用,其机制可能是通过引起细胞内ATP降低、调节细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。     

Survivin在威灵仙多糖诱导人胃癌BGC－823细胞凋亡中的基因表达

目的：研究威灵仙多糖诱导人胃癌BGC－823细胞凋亡的作用及其机制。方法：应用荧光显微镜观察不同浓度威灵仙多糖诱导BGC－823细胞凋亡的作用,应用RT－PCR技术检测Survivin表达量的变化。结果：威灵仙多糖具有诱导BGC－823细胞凋亡的作用,降低Survivin基因的表达。结论：威灵仙多糖促进BGC－823细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

白毛藤诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡作用及其机制研究

目的研究白毛藤水提液抑制BGC-823细胞增殖及诱导其细胞凋亡情况及其机制。方法不同浓度白毛藤水提液作用于BGC-823细胞,荧光显微镜观察BGC-823细胞凋亡情况,RT-PCR检测Bcl-2、Fas基因表达量的变化。结果白毛藤水提液具有抑制BGC-823细胞增殖活性,能诱导BGC-823细胞凋亡,上调Fas基因、降低Bcl-2基因mRNA的表达,实验组与对照组比较有显著性差异（P〈0.01）。结论白毛藤具有抑制胃癌细胞增殖活性,能促进BGC-823细胞凋亡,其机制可能与调控Fas基因、Bcl-2基因表达有关。     

树舌多糖GF抑制小鼠HepA瘤生长机制的初步研究

目的 该研究主要初步探讨树舌多糖(Ganoderm applanatum polysaccharide,GAP)GF抑制小鼠HepA瘤的生长机制.方法 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,通过测定瘤体的质量计算树舌多糖抑瘤率,通过电镜观察HepA细胞的超微结构,通过TUNEL法检测凋亡细胞,通过Western-blot检测Fas、caspase-3、Bcl-2的表达.结果 树舌多糖GF注射到HepA小鼠后,GAPGF的抑瘤率为51.82%;电镜下观察到HepA细胞核固缩、染色质浓缩及凋亡小体形成等典型的细胞凋亡特征;TUNEL分析显示GAPGF能明显诱导HepA细胞凋亡;Western blot分析显示GAPGF可使Fas与cmpase-3表达上调,Bcl-2表达降低.结论 GAPGF通过诱导HepA细胞凋亡抑制小鼠HepA瘤的生长,其分子机制可能与Fas的激活、caspase-3表达的上调以及Bcl-2表达的降低有关.     

人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

目的观察人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响,并初步研究其机制。方法将Bel-7402细胞与人参皂苷Rh(2200、100和50μg/mL)共同培养48 h。MTT法检测人参皂苷Rh2对Bel-7402细胞增殖的影响;流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数;TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响;Western blotting法检测Bel-7402细胞中Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果 MTT结果显示,人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞的生长;流式细胞检测显示,人参皂苷Rh2能使细胞停滞于G1期;TUNEL结果显示,人参皂苷Rh2能有效诱导Bel-7402细胞凋亡;Western blotting结果显示,人参皂苷Rh2能上调Bel-7402细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达。上述结果均在一定程度上呈量效关系。结论人参皂苷Rh2能抑制Bel-7402细胞生长并促进其凋亡,其作用机制可能为上调Bax和下调Bcl-2。     

粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响

目的：通过观察粉防己碱（Tetrandrine）对人肝癌7402细胞株增殖与凋亡的影响，初步探讨粉防己碱对肝癌的体外抗肿瘤效应。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、集落形成实验观察粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应，利用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳、细胞凋亡荧光染色法及流式细胞术检测粉防己碱诱导肿瘤细胞凋亡的作用，以免疫细胞化学法检测粉防己碱对Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响。结果：MTT比色法、集落形成实验显示，粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖有抑制作用，其抑制效应具有剂量依赖的特点，细胞凋亡荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术表明，粉防己碱可诱导7402细胞凋亡，免疫细胞化学法显示，粉防己碱上调Bax蛋白表达，下调Bcl-2蛋白表达。结论：粉防己碱对人肝癌7402细胞株增殖的抑制效应具有剂量依赖性，并可诱导细胞凋亡，其抗肿瘤效应可能与凋亡相关基因表达的调控有关。     

健脾化瘀方对肝癌bel-7402／5-FU细胞表面耐药蛋白影响的研究

目的初步明确健脾化瘀方对肝癌细胞表面多药耐药蛋白表达的影响,并探讨可能机制。方法选择肝癌细胞bel-7402、肝癌耐药细胞bel-7402／5-FU做为实验细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞表面P～糖蛋白（P-gP）、MDR相关蛋白（MRPl）的表达率及细胞内罗丹明123（Rho123）的蓄积浓度。以MTT比色法测定不同浓度健脾化瘀方对bel-7402／5-FU细胞增殖的抑制。FCM检测复方作用后bel-7402／5-FU细胞表面P-gP的表达率及Rho123的蓄积浓度。结果bel-7402／5-FU细胞表面P-gP的表达高于亲本bel-7402细胞,细胞内Rho123蓄积浓度低于亲本细胞。健脾化瘀方可显著抑制细胞生长,并呈量效关系。浓度0．5mg·mL。的健脾化瘀方作用bel-7402／5-Fu细胞48h后,细胞表面P-gP的表达率明显下降,细胞内Rho123蓄积浓度升高。结论健脾化瘀方可能具有逆转肝癌耐药细胞多药耐药的作用,途径可能是通过降低P-gP的表达而实现的。     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402细胞Ca~(2+)浓度的影响

目的:研究甲胎蛋白(alpha-fetoproteinAFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响。方法:采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化。结果:在AFP作用4min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10min时降到正常水平。结论:AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Bel7402细胞内信息传递。     

甲胎蛋白对人肝癌Bel7402 细胞 Ca2+浓度的影响

目的研究甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)对人肝癌细胞信息传递物质Ca2+浓度的影响.方法采用由脐带血血清中提纯的AFP作用于体外培养的人肝癌Bel7402细胞,通过共聚焦显微镜扫描,观察不同时间细胞内Ca2+浓度的变化.结果在AFP作用4 min时能显著提高Bel7402细胞内Ca2+浓度,与对照组比较升高204.1%,随后缓慢下降,到作用10 min时降到正常水平.结论AFP能通过改变细胞Ca2+浓度从而调节人肝癌Be17402细胞内信息传递.     

表没食子儿茶素没食子酸酯诱导肝癌细胞凋亡并伴随端粒酶活性下调

目的 :探讨表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCG)对肝癌细胞凋亡和端粒酶活性的影响。方法 :用MTT法测定EGCG的细胞毒 ,以荧光显微镜、流式细胞仪研究细胞凋亡 ,PCR -ELISA法测定细胞端粒酶活性。结果 :EGCG作用Bel- 74 0 2肝癌细胞后 ,荧光显微镜观察到细胞凋亡现象。在一定时间、一定剂量范围内 ,EGCG诱导细胞凋亡呈现浓度和时间依赖性 ,而端粒酶活性随EGCG诱导Bel - 74 0 2细胞凋亡的发生而逐渐降低。结论 :EGCG可通过下调端粒酶活性诱导BEL - 74 0 2细胞凋亡 ,这可能是茶叶有效成分抗肿瘤的重要机制之一。     

Hepsin蛋白对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨Hepsin蛋白对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法:运用RT-PCR技术检测肝癌组织样品肝癌细胞系中Hepsin基因的表达水平,并从原发性肝癌患者的癌组织中扩增Hepsin基因编码区序列,该序列被克隆并构建pCMV-tag-HS表达质粒。将pCMV-tag-HS表达质粒转染人肝癌细胞系HepG2细胞、Bel-7402细胞,观察Hepsin蛋白对肝癌细胞的增殖能力和细胞凋亡效应的影响。结果:Hepsin基因在临床肝癌组织和人正常肝细胞L-02细胞中高表达,在人肝癌细胞系Bel-7402细胞、HepG2细胞和临床肝癌癌旁组织不表达或低表达,Hepsin蛋白可以增强肝癌细胞系的增殖能力,同时抑制肝癌细胞凋亡。结论:Hepsin蛋白促进肝癌细胞生长并抑制肝癌细胞凋亡。     

紫杉醇、5-氟脲嘧啶抑制肝癌细胞BEL-7402生长和诱导凋亡的比较

OBJECTIVE: To investigate the effect of paclitaxel and 5-flurouracil (5-Fu) on growth inhibition and apoptosis of human hepatoma BEL-7402 cells. METHODS: Growth inhibition of BEL-7402 cells treated with paclitaxel and 5-Fu, respectively, was measured by ATP-tumor chemosensitivity assay (ATP-TCA), and the cell cycle kinetics and apoptosis were analyzed by flow cytometry and microscopic examination. RESULTS: BEL-7402 cells were highly sensitive to paclitaxel with growth inhibition observed in both dose- and time-dependent manners (IC(50)=5.58 x 10(-7) mol/L). Paclitaxel induced significantly higher rate of cell apoptosis than the control group (P<0.05) but significantly lower rate than that induced by 5-Fu (P<0.01). Necrosis was observed predominantly in paclitaxel-treated cells whereas 5-Fu caused mainly cell apoptosis (P<0.05). Levels of apoptosis increased in proportion to the decrement of paclitaxel concentration but directly proportional to increment of 5-Fu concentration. CONCLUSIONS: Paclitaxel and 5-Fu are effective in inducing growth inhibition and apoptosis of BEL-7402 cells. While 5-Fu causes mainly apoptosis in hepatoma cells, the anticancer mechanism of paclitaxel is predominantly through induction of necrosis.     

生长抑素作用Cmet抑制肝细胞癌生长的研究

目的　观察生长抑素 (Somatostatin ,SST)对Bel74 0 2肝癌细胞株以及裸鼠种植瘤生长的影响 ,同时探索SST的抑瘤机制。方法　以裸鼠人肝癌转移模型为材料 ,观察SST对种植瘤生长的影响。以MTT法测量SST对Bel74 0 2细胞增殖的影响 ,光镜下观察细胞形态的变化。以细胞迁移实验和粘附实验观察细胞侵袭和粘附能力的影响。以流式细胞仪测量细胞周期及细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet表达的影响 ,以及检测细胞表面生长抑素受体 2 (somatostatinreceptor 2 ,SSTR2 )的阳性率。 结果　SST治疗可以明显抑制裸鼠人肝癌种植瘤的生长 ,但SST处理的 74 0 2细胞增殖能力和细胞形态无明显改变 ,细胞的侵袭和粘附能力可见明显下降 ,细胞生长静止期 (G0 /G1)的比例显著增加 (0 .4 80± 0 .0 32vs 0 .5 77± 0 .0 0 9) ,但未见凋亡峰 ,细胞表面可见SSTR2的表达 ,SST可使细胞Cmet的表达明显受抑。结论　SST能通过与SSTR结合抑制肝癌的生长 ,减少Cmet的表达可能是抑瘤的一个重要机制 ,而并非直接杀死肝癌细胞和诱导凋亡。