人脐血红系祖细胞体外培养观察

<正>脐血代替骨髓移植重建造血的成功,已引起人们对脐血造血功能研究的兴趣。笔者等曾在国内首先报告了脐血粒—单核系祖细胞(CFU-GM)体外培养观察,证实人脐血富含粒单核细胞系造血干/祖细胞。通过进一步以体外甲基纤维素法培养人脐血的红系祖细胞,包括红系集落形成单位(CFU-E)和爆式红系形成单位(BFU-E),笔者观察了人脐血红系祖细胞造血情况,现将结果报告如下。     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞,并具有免疫原性低,无肿瘤细胞污染,来源广泛,获取容易等优点,使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干祖细胞(HSPC)数不足以满足成人移植的需要,在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题,并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

脐血单个核细胞与骨髓间充质干细胞滋养层的共培养

背景:骨髓间充质干细胞具有维持骨髓正常造血功能,在造血调控中发挥重要的作用。目的:观察骨髓间充质干细胞的生物学性状和多向分化能力,并检测其在体外支持造血的能力。方法:利用密度梯度培养法分离骨髓单个核细胞进行培养,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表型;接种脐血单个核细胞于骨髓间充质干细胞滋养层培养板上共培养,观察粒-单系祖细胞集落变化。结果与结论:骨髓间充质干细胞呈典型的成纤维样细胞形态,强表达CD44,CD29,不表达CD34和CD106。可促进脐血单个核细胞扩增并形成造血祖细胞集落。提示骨髓间充质干细具有造血支持作用。     

对脐血CD34~ CD38~-细胞的研究揭示脐血移植成人的可能性

通过在生长因子依赖的长期培养体系中加入转化生长因子β1(TGF-β1)的反义核酸或抗TGF-β1抗体以阻断TGF-β1的抑制作用,比较了脐血和骨髓的CD34~ CD38~-及CD34~ CD38~ 亚群在长期培养中的增殖反应以及产生早期造血前体细胞的能力。结果显示:脐血中CD34~ CD38~-细胞占CD34~ 的比例为4％,比骨髓多4倍;和成人骨髓移植平均所需的骨髓标本相比,一份常规脐血标本含有的CD34~ CD38~-细胞所产生的CFU-GEMM和骨髓相当,CFU-GM为骨髓的2倍,BFU-E为骨髓的3倍;由脐血产生的集落明显大于由骨髓产生的集落。提示脐血更富含造血干细胞并具有较高的增殖潜能。脐血中晚期祖细胞量低于骨髓。以上研究结果提示脐血可用于成人进行造血细胞移植。     

人脐血粒单系造血祖细胞冻存研究

在低温下有效地长期保存移植用造血干细胞,对实现骨髓造血重建具有重要意义。脐血作为骨髓替代物实现造血重建已完全获得成功。我们着重观察了在不同温区保存脐血时粒单系造血祖细胞损伤的表现,并讨论了损伤的可能原因。     

脐血造血干祖细胞体外扩增的研究进展

脐带血富含造血干细胞，并具有免疫原性低，无肿瘤细胞污染，来源广泛，获取容易等优点，使得脐血成为骨髓及外周血造血干细胞的极佳替代来源。但是单份脐带血所含有的造血干粗细胞（HSPC）数不足以满足成人移植的需要，在体外对脐血造血干祖细胞进行体外扩增有望解决这一难题，并成为近年来研究的热点。本文就脐血造血干祖细胞的生物学特点及扩增研究的进展进行综述。     

脐带血造血干细胞移植

异基因骨髓移植或外周血干细胞移植(AlloBMT,Allo-PBSCT)是当前根治造血系统恶性肿瘤、骨髓衰竭性疾病、部分遗传性疾病疗效最好的方法．但最大的问题是HLA相符供体来源困难,使临床应用受到限制。脐血因含“高质量”造血干、祖细胞,故已成为良好的干、祖细胞供源来替代骨髓进行造血干细胞移植。随着对脐血基础研究的不断深入,脐血造血干细胞移植(Cord Blood Transplantaon．CBT)的临床应用也在不断地扩大。     

骨髓间充质干细胞分化的成骨细胞支持脐血造血干祖细胞的研究

本研究利用骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞构建二维培养体系,探讨其体外支持脐血干/祖细胞生存的作用.体外进行人骨髓间充质干细胞（MSC）原代培养后诱导为成骨细胞,构建二维培养体系.将免疫磁珠分选的CD34^＋脐血干/祖细胞接种于其中,在无外源性细胞因子情况下进行体外培养,进行CFU,HPP-CFU和LTC-IC测定并将其分别与MSC、成骨细胞,MSC/成骨细胞（1：2）作为饲养细胞的二维培养体系实验结果相比较.结果发现：在所构建的造血干/祖细胞（HSPC）二维培养体系中,骨髓MSC诱导成骨细胞对于脐血造血干/祖细胞培养的支持作用显著优于其他各组培养体系,尤其对长期造血干细胞（long term-HSC）体外生存有更为明显地支持作用.结论：骨髓间充质干细胞诱导成骨细胞构建的二维体系对于脐血干/祖细胞体外培养具有支持作用,进一步证实成骨细胞对造血干细胞生存与增殖具有重要调控作用.     

单核巨噬细胞与血发生

巨噬细胞在血发生过程中扮演着一个十分令人注目的角色。有实验证明,巨噬细胞通过细胞分泌,作用于造血干细胞和所有四系造血祖细胞。最近Richard提供了电镜下巨噬细胞和拟造血干细胞之间存在相嵌连接这一重要形态学依据。单核巨噬细胞在红系造血调控中起着刺激和抑制两方面的作用。实验证明,适量的单核巨噬细胞或其培养上清液可以促进红系祖细胞(BFU-E,CFU-E)生长,但单核巨噬细胞或其上清液过多,则BFU-E和CFU-E生长明显受抑。以巨噬细胞为中心的红细胞岛,无论在骨髓或在脾脏、在体内或是在体外培养中,均较常见。提示红细胞的发生依赖于巨噬细胞的存在。对于巨噬细胞在红细胞     

人脐血清对粒－单系祖细胞体外培养初步观察

人脐血清对粒－单系祖细胞体外培养初步观察５１０１２０中山医科大学孙逸仙纪念医院侯玲玉，黄绍良，李文益我们曾报道过人脐血中富含扩增潜能更强、可维持长期造血重建的早期造血干细胞群［１，２］。在临床输注脐血时发现脐血对再生障碍性贫血患者有刺激造血、改善血象...     

同种异基因脐血移植小鼠模型的建立

探讨胎鼠及新生鼠外周血（FNPB）移植特性。建立同种异基因脐血移植小鼠模型。采用体外集落培养和流式细胞术的方法，检测FNPB与骨髓（BM）造血干/祖细胞含量与特性，给致死量环磷酰胺预处理的BALB/c（H-2^d)小鼠经尾静脉输注C57BL/6（H-2^b)小鼠FNPB，移植后动态观察受鼠存活状况，植入水平，造血与免疫功能恢复及移植物抗宿主病（GVHD）发生情况。结果显示：FNPB中早期红系祖细胞（BFU-E）和CD34^ 细胞含量与BM相近，粒单系祖细胞（CFU-GM）（14天），多向祖细胞（CFU-GEMM）及Sca-1^ CD34^ 细胞亚群明显高于BM，FNPB源造血干细胞占27.94%。结论：FNPB富含造血干/祖细胞，国内首次成功建立同种异基因脐血移植小鼠模型。     

脐血造血干/祖细胞部分归巢受体功能缺陷的研究

本研究旨在了解来源于脐血造血干细胞表面部分归巢受体(homing receptor)的功能缺陷并探讨体外干预的效果和可行性。用流式细胞术对来源于脐血的CD34+造血干/祖细胞表面的P、E选择蛋白配体活性基团表达、CD26的表达及活性进行检测,同时检测骨髓和外周血作为对照。采用岩藻糖基转移酶体外处理脐血CD34+造血干/祖细胞并检测其表面选择蛋白配体活性基团的表达水平。结果表明,CD26在脐血、骨髓及外周血的CD34+造血干/祖细胞表面的表达率分别为:(7.62±0.63)%,(6.35±0.89)%和(6.18±0.91)%(p0.05),其活性分别为:67.15U/1 000个细胞(1U=1pmol/min),26.85U/1 000个细胞和20.95U/1 000个细胞,脐血CD34+造血干/祖细胞表面CD26的活性明显高于其它两者(p0.001)。P选择蛋白配体活性基团在脐血、骨髓和外周血CD34+造血干/祖细胞表面的表达率分别为:(83.46±6.33)%,(15.65±0.89)%和(80.17±6.85)%;E选择蛋白配体活性基团的表达率为:(25.31±1.03)%,(26.34±0.89)%和(29.79±1.78)%(p0.05)。脐血CD34+细胞体外行岩藻糖基化工程后,E选择蛋白配体活性基团表达率由(25.31±1.03)%提高至(63.23±1.08)%。结论:3种不同来源CD34+造血干/祖细胞表面的CD26分子表达无明显差别,但其活性不一,脐血的CD34+造血干/祖细胞CD26活性最高,骨髓的次之,外周血的最低。P选择蛋白配体活性基团在脐血及外周血CD34+造血干/祖细胞表面的表达无明显差别,但在骨髓干细胞表面表达偏低。体外经岩藻糖基化工程处理的脐血CD34+造血干/祖细胞可明显上调其表面E选择蛋白配体活性基团的表达。     

脐血造血干/祖细胞免疫表型的流式细胞术双标法分析及其意义

目的比较脐血和骨髓中造血干/祖细胞(HSPC)的免疫表型差异.方法使用流式细胞术(FCM)双标法对38份脐血及10份骨髓HSPC进行免疫表型分析.结果①脐血有核细胞中CD34+细胞所占比例与骨髓中相近,约为0.5%;②脐血CD34+细胞中CD34+CD38-[(17.C4±5.37)%]、CD34+HLA-DR-[(32.65±10.71)%]及CD34+H-CAM+(CD44+)[(77.84±7.69)%]亚群含量均高于骨髓[含量分别为(8.26±3.19)%、(14.05±1.67)%和(70.02±6.40)%],CD34+CD13+、CD34+CD19+亚群比例低于骨髓.结论脐血与骨髓CD34+细胞比例相近,但前者较原始的干细胞含量更高,故脐血是极具潜力的HSPC来源;而脐血CD34+细胞中髓系及淋系祖细胞含量低于骨髓,可能是脐血移植后造血及免疫重建缓慢的原因之一.     

脐血中造血刺激因子的研究进展

人脐带血是造血干/祖细胞的丰富来源,脐血移植在治疗许多血液系统疾病方面已经展现出良好的应用前景。然而脐血移植中仍存在单份脐血中造血干/祖细胞的绝对量少和脐血干/祖细胞再植率低等问题,了解脐血细胞在体内所处的微环境将会对这些问题的解决有所帮助。本文就脐血中造血刺激因子的分布及其来源做一综述。     

人类脐血CD34^＋细胞的研究进展

本文综述了近年来对脐血ＣＤ３４＾＋细胞（即造血干／祖细胞）的研究进展，表明虽脐血ＣＤ３４＾＋细胞水平低于正常成人骨髓，但其干细胞比例较高且造血功能较强，有利于移植后长期造血的重建。     

脐血移植近况

脐血移植在当今已渐成为医学界中一个新课题,许多学者研究提示,脐血中含有较丰富的造血干细胞,脐血移植明显优于骨髓和外周血,它为临床造血干细胞移植开辟了一条新途径,并具有广泛的应用前景。现将近年来国内外学者对这方面的研究作一综述。 1 脐血中含有较丰富的造血细胞 60年代Bames等人在动物实验中发现,胎鼠和新生鼠血中含有丰富的造血细胞,明显超过成年鼠的外周血。70年代Kuntgon等人研究证实,人类胎血和脐血中也含有较丰富的造血细胞,单位容积脐血中集落刺激因子-GM(CFU-GM),BFU-E的含量比成人外周血高。Laver还证实足月新生儿脐血中CSF-GM和CSF-G的含量远高于成人外周血,表明脐血中含有较丰富的造血刺激因子。产后获得脐血量一般为60～100ml,其所含干细胞量足够一40公斤的儿童,甚至一成年人的所需量。     

人类脐血CD_(34)~+细胞的研究进展

本文综述了近年来对脐血CD_(34)~+细胞(即造血干/祖细胞)的研究进展,表明虽脐血CD_(34)~+细胞水平低于正常成人骨髓,但其干细胞比例较高且造血功能较强,有利于移植后长期造血的重建。     

脐血干/祖细胞的生物学特点

脐血是一重要的造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)来源 ,可用作临床干细胞移植 ,目前有关脐血的研究主要集中于ＨＳＰＣ的比例、细胞亚群的划分、对造血因子刺激的反应能力、增殖 /扩增潜能的控制及ＨＳＰＣ体外扩增的条件等。研究表明 ,脐血和成人骨髓来源的ＨＳＰＣ功能有显著不同 ,我们力图在细胞和分子水平论述其生物学特点。1　脐血中ＨＳＰＣ的比例　研究表明 ,1ｍｌ脐血中大约有原始红系祖细胞 (ＢＦＵ Ｅ) 80 0 0个 ,髓系祖细胞 (ＣＦＵ ＧＭ) 130 0 0～2 40 0 0 ,多能祖细胞 (ＣＦＵ ＧＥＭＭ) 10 0 0～ 10 0 0 0。由于培养条件的不同 ,各…     

化疗对造血微环境的影响及化疗后回输自体骨髓基质细胞对造血功能恢复的作用

目的观察化疗对造血祖细胞、造血微环境的影响,化疗后回输体外扩增的自体骨髓基质细胞(ABMSC)对造血功能恢复的作用.方法对化疗患者进行骨髓CFU-GM、CFU-E、BFU-E及基质细胞集落(CFU-F)培养、长期骨髓培养,观察基质层融合情况,计算基质层覆盖率及完全融合时间.长期化疗的10例患者进行自身前后对照,在同一化疗方案下,单纯化疗与化疗后回输体外扩增的ABMSC[(1.1～8.7)×103/次]作对比,观察两者造血恢复情况.结果①长期化疗组的CFU-GM、BFU-E、CFU-E、CFU-F显著低于正常对照组及短期化疗组,后两组差异无显著性;②三组基质层覆盖率及完全融合时间差异无显著性;③长期化疗组ABMSC输注后的CFU-GM、CFU-E、BFU-E、CFU-F显著高于未输注组;④输注ABMSC后白细胞计数及血小板计数降至最低点的值显著高于未输注组,前者白细胞计数及血小板计数恢复正常时间较后者明显缩短;⑤基质细胞回输过程及输后临床观察无不良反应.结论长期化疗明显损伤造血祖细胞、基质祖细胞,但对骨髓基质细胞融合功能无明显影响,化疗后给予ABMSC可加速造血功能的恢复.     

siRNA干扰p27基因表达对脐血CD34+细胞体外扩增影响的初步研究

造血干/祖细胞是一类被定义为具有自我更新和潜在重建造血能力的细胞.脐血是造血干/祖细胞的重要来源.通常人们应用高浓度的细胞因子刺激扩增脐血造血干/祖细胞,但导致其多向分化潜能及移植后造血重建能力下降.近来,Cheng等研究造血干/祖细胞的增殖周期特性发现,两种不同的Cip/Kip家族成员p21和p27可分别特异性地负向调控造血干/祖细胞增殖池的大小,p21可阻滞干细胞进入增殖周期,而p27可限制祖细胞的增殖周期.这为体外操纵造血干/祖细胞的增殖提供了良好途径.我们以pSilencer1.0-U6构建p27 siRNA表达载体转染脐血CD34＋细胞,以去除p27对造血祖细胞的增殖抑制作用,以一种不同于既往细胞因子刺激的方式,试图为体外扩增脐血CD34^＋细胞提供一种新的策略.