硅藻检验对水中尸体死因判断的动物试验研究

目的:研究溺死不同时间内家兔肺、肝、肾、骨髓组织中硅藻的检出率及其与溺死地水域中硅藻形态的同原性认定。方法:应用强酸消融法处理溺死动物的各类标本,并对各类组织脏器的硅藻检出率进行统计学分析。结果:肺组织检出率达96.43%、骨髓的检出率为71.43%,肝、肾组织在溺死后1h检出率为75.00%。实验动物标本中检出的硅藻形态、藻目类型基本一致。结论:肺、肝、肾、骨髓中的硅藻检测可确定生前溺死情况。     

实验性溺死兔气管及肺组织扫描电镜形态学观察

应用光镜和扫描电镜对溺死家兔气管及肺组织进行对比实验观察．结果表明：①扫描电镜下溺死实验兔气管及肺组织具有溺死特有的形态学改变，即气管纤毛大片状倒伏、排列紊乱和部分缺失；肺组织有清晰可见的肺泡扩张、肺泡壁断裂、出血及肺泡腔内纤维蛋白网形成．该特征对于生前溺死和死后入水的法医学鉴别诊断具有十分重要的意义．②扫描电镜下肺内检见的硅藻具有表面立体感强和细微结构清晰的特点，有助于硅藻的准确分类，对落水点的推测具有一定价值．     

叶绿素A检验对溺死诊断的实验研究

目的 量化性研究SD大鼠溺死和死后抛入水中尸体内脏组织中叶绿素A（ChlA,chlorophyll A）检出率.方法 应用紫外-可见分光光度计检验单纯脑外伤死亡、脑外伤死后入水和不同水深溺死组大鼠肺、肝、肾及脑内ChlA含量.结果 死后入水组,除1例肺内观察到少量ChlA 外,其余均未检测出ChlA ;溺死组肺内均检测到ChlA ,其余脏器部分检测阴性,不同深度溺死组内脏ChlA 含量存在差别（P〈0.05）,溺死组肾组织ChlA 含量高于肺组织（P〈0.01）.结论 检测内脏组织ChlA 可为能一种较简便、灵敏的溺死诊断方法.     

溺死相关硅藻rbcL基因检测技术研究

目的：筛选硅藻叶绿体核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶大亚基（large subunit of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase oxyge－nase,rbcL）基因的特异性引物,建立溺死尸体组织内硅藻rbcL基因的聚合酶链式反应-毛细管电泳（polymerase chain reaction-capillary electrophoresis,PCR-CE）检测方法,探讨在溺死诊断中的应用价值。方法：采用荧光标记引物扩增硅藻rbcL基因,对21种标准藻株、5种浮游水生标准菌株、3种人体共生标准菌株和人类DNA扩增产物进行PCR-CE检测,验证引物特异性和灵敏度。检测溺死尸体组织样本中硅藻,并比对微波消解-真空抽滤-自动扫描电镜法（microwave digestion-vacuum filtration-automated scanning electron microscopy,MD-VF-Auto SEM）检测结果。结果：使用引物ND-rbcL对21种标准藻株、5种浮游水生标准菌株、3种人体共生标准菌株和人类DNA进行扩增,其中舟形藻、菱形藻、小环藻、变异直链藻、针杆藻和骨条藻6种硅藻的CE检测结果为阳性,DNA片段为197 bp,其他为阴性。6种硅藻DNA检测阳性的灵敏度分别为0.502、0.117、0.029、0.042、0.275和0.215 ng（20 μL扩增体系）。PCR-CE方法检测35例尸体（3例陆地正常死亡尸体,2例水中发现非溺死尸体,30例溺死尸体）的组织样本,肺脏、肝脏和肾脏硅藻检出率分别为100%、63.3%和53.3%,检测总阳性率为83.3%。当溺水死亡尸体脏器组织内硅藻含量>10个/10 g时,使用MD-VF-Auto SEM方法检测,其检测总阳性率为100%,PCR-CE方法检测,其检测总阳性率为92.6%,两者对检测溺死尸体脏器中硅藻阳性率无统计学差异（ ?字2=2.077,P=0.491）;当硅藻含量<10个/10 g时,PCR-CE方法检测为阴性,与MD-VF-Auto SEM方法检测溺死尸体各种脏器中硅藻阳性率具有统计学差异（P<0.05）。结论：基于ND-rbcL引物建立的PCR-CE法能快速检测硅藻rbcL基因,所需检材量小,易于推广,在溺死诊断中有较好地应用前景。     

硅藻COX-Ⅰ区种属特异性PCR用于法医学溺死诊断

目的:对KEint2F和KEintR这一对COX-Ⅰ区特异性PCR引物应用于法医学溺死诊断的有效性进行研究。方法:取12例溺死尸体和5例非水中尸体的肺、肝组织,以及取落水区域水样及双蒸水,通过硝酸消化镜检法(镜检法)和种属特异性PCR检验法(PCR法)两种方法进行硅藻检验,对其硅藻的检出率进行对比。结果:PCR法比镜检法具有更高的硅藻检出率。结论:KEint2F和KEintR可作为法医学硅藻检验的特异性PCR引物用于法医学溺死的诊断。     

PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因:溺死诊断方法

目的 建立嗜水气单胞菌gyrB和16SrRNA基因PCR毛细管电泳检测方法,探讨它们在淡水溺死诊断中的应用价值.方法 提取人、18种浮游生物(白色念珠菌、嗜水气单胞菌及16种藻类),以及经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测过的30例尸体(其中生前淡水溺死28例,陆地自然死亡2例)的组织样本的DNA(肺、肝、肾各1份例),分别使用引物AH(gyrB基因)及引物Ah(16SrRNA基因)进行扩增,扩增产物用毛细管电泳法检测.结果 人、白色念珠菌、16种藻类DNA扩增后毛细管电泳检测结果均为阴性,而嗜水气单胞菌结果均为阳性,其产物大小分别为195 bp,350bp.分别利用引物AH和Ah对28例淡水溺死尸体样本肺、肝、肾进行PCR毛细管法进行检测,嗜水气单胞菌的检出率:AH分别为96.4％,71.4％,60.7％;Ah分别为75.0％,42.9％,32.1％,计算得到溺死者的体循环脏器中嗜水气单胞菌检验的总阳性率分别为82.1％,53.6％,2例陆地自然死亡案件尸体样本检测结果均为阴性.两对引物AH与Ah对嗜水气单胞菌检出率有显著性差异(P＜0.05).结论 PCR毛细管电泳法检测嗜水气单胞菌gyrB基因用于诊断淡水溺死灵敏度较高,可作为诊断的辅助性方法;联用16SrRNA基因可提高该菌的检出率,增强MD-VF-Auto SEM法诊断淡水溺死的证据力.     

检测藻类16SrDNA特异性片段在溺死诊断中的应用

目的建立藻类16SrDNA特异性片段扩增方法,探讨其在溺死诊断中的应用价值。方法35只实验兔随机分组：生前入水
组（溺死组）15只,死后入水组（空气栓塞致死后入水）15只,对照组（空气栓塞死后不作处理）5只;微波消解-真空抽滤-电镜扫描
法检测过的20例水中尸体肝脏样本20份（硅藻阳性14份,阴性6份）。7种已知藻（直链藻、菱形藻、针杆藻、舟形藻,铜绿微囊
藻,小环藻,小球藻）作为对照。提取组织样本及藻类DNA,扩增产物银染显带。结果生前入水组肺、肝、肾检出率分别为
100%,86%,86%;死后入水组肺、肝、肾检出率分别为13%,0%,0%。对照组肺、肝、肾藻类未检出。生前入水组与死后入水组各
种脏器中藻类检出率差异显著（P<0.05）。20份经微波消解-真空抽滤-电镜扫描法检测的水中尸体肝脏样本中,使用本方法15
份样本结果为阳性（包括1份硅藻阴性样本）。7种藻类DNA扩增结果为阳性。结论本文所建立的PCR法检测藻类16SrDNA
灵敏度高,可对多种溺死藻类同时检测,有较好的应用前景。
     

生前硅藻空气源性吸入肺最大值在溺死鉴定中的应用

目的：测定人体生前硅藻空气源性吸人肺脏之最大值，并探讨其在溺死鉴定中的应用。方法：收集100例非水中尸体案例，分别在尸检时，取肺脏边缘组织测定硅藻含量，在排出检验过程污染的条件下，其最大值即为人体生前硅藻空气源性吸入肺脏之最大值。借助8例鉴定结论为溺死之案例，以检验上述最大值在溺死鉴定中的应用价值。结果：测得空气源性吸人肺脏之最大值为2个／5g，仅就硅藻检验而言，该值可作为溺死鉴定的界定参考值，即：（1）如水中尸体肺脏硅藻检验结果明显大于2个／5g（本文溺死组7例9～311个／5g），可鉴定为溺死；若稍大于2个／5g，尚需考虑抛尸入水或干性溺死；（2）如≤2个／5g，提示溺液中无硅藻或干性溺死或抛尸入水，需结合尸检发现及案情鉴别，作出最终鉴定。结论：人体生前硅藻空气源性吸入肺脏之最大值在溺死鉴定中有一定应用价值。     

过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE、IL-4的表达及其法医学意义

【目的】寻找法医学鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。【方法】利用组织芯片技术采用免疫组化方法（SP法）检测35只过敏性休克豚鼠（实验组28只，对照组7只）死后0、6、12、24h4个时间点的心、肝、肺、肾、脾、胃、肠、气管及扁桃体组织中的ISE及IL-4的表达情况。【结果】ISE的表达：实验组肺及气管组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；脾组织呈弱阳性表达。各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。IL-4的表达：实验组肺、气管及胃组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；肠组织呈弱阳性表达，各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。【结论】免疫组化方法检测ISE、IL-4的表达，可望作为鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。     

过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE、IL-4的表达及其法医学意义

 【目的】寻找法医学鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。【方法】利用组织芯片技术采用免疫组化方法（SP法）检测35只过敏性休克豚鼠（实验组28只，对照组7只）死后0、6、12、24h4个时间点的心、肝、肺、肾、脾、胃、肠、气管及扁桃体组织中的ISE及IL-4的表达情况。【结果】ISE的表达：实验组肺及气管组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；脾组织呈弱阳性表达。各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。IL-4的表达：实验组肺、气管及胃组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；肠组织呈弱阳性表达，各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。【结论】免疫组化方法检测ISE、IL-4的表达，可望作为鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。