circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨circ_0001361靶向miR-486-3p对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。［方法］ 通过集落形成实验、流式细胞术、CCK-8法评估circ_0001361和miR-486-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞克隆、凋亡以及细胞活力的影响。双荧光素酶检测circ_0001361与miR-486-3p的相互作用。［结果］ 干扰circ_0001361表达显著性促进细胞凋亡（7.16%±0.65% vs 25.27%±2.32%,P<0.001）、上调miR-486-3p表达（0.96±0.06 vs 3.08±0.29,P<0.001）、降低细胞光密度值（0.82±0.07 vs 0.44±0.04,P<0.001）和克隆形成数（84.47±7.23 vs 39.69±3.76,P<0.001）。过表达circ_0001361显著性下调miR-486-3p表达（1.00±0.00 vs 0.45±0.05,P<0.001）、促进细胞凋亡（7.36%±0.66% vs 20.44%±2.17%,P<0.001）、降低细胞细胞光密度值（0.86±0.06 vs 0.51±0.05,P<0.001）和克隆形成数（89.62±7.35 vs 45.81±4.48,P<0.001）。circ_0001361与miR-486-3p直接结合。下调miR-486-3p表达显著性减弱干扰circ_0001361对MDA-MB-231细胞克隆形成数、凋亡率和细胞光密度值的影响（P<0.001）。［结论］ 干扰circ_0001361通过促进miR-486-3p表达来诱导乳腺癌细胞凋亡,并抑制其增殖。     

miR-629对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

摘 要：［目的］ 探讨miR-629在胰腺癌组织中的表达及其对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响。［方法］ 选取手术切除的胰腺癌组织及其癌旁组织各72例,采用RT-PCR检测miR-629的mRNA表达水平。构建NC-shRNA和miR-629-shRNA慢病毒稳定细胞系,采用CCK-8法检测miR-629对细胞增殖的影响;采用Transwell检测miR-629对细胞迁移的影响;采用双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-629与SIRT3的靶向关系。［结果］ 与癌旁组织（0.40±0.04）比较,胰腺癌组织中miR-629的mRNA相对表达水平（1.71±0.15）显著增加（t=3.901,P<0.001）;与NC-shRNA细胞比较,miR-629-shRNA细胞的增殖能力均显著下降（F=2.719,P<0.001）;与NC-shRNA细胞（140.22±19.37）比较,miR-629-shRNA细胞的迁移能力（63.91±7.44）显著下降（t=4.612,P<0.001）;荧光素酶报告基因显示,转染SIRT3-WT后,miR-629-shRNA细胞的相对荧光素酶活性（0.33±0.05）较NC-shRNA细胞（1.25±0.12）显著增加（t=4.109,P<0.001）;western blot结果表明miR-629-shRNA细胞中SIRT3的蛋白表达水平（0.44±0.03）较NC-shRNA细胞（1.31±0.11）明显增加（t=3.692,P<0.001）。［结论］ miR-629在胰腺癌组织中高表达,可能通过靶向下调SIRT3的表达促进胰腺癌细胞的增殖和迁移,有望为胰腺癌的临床诊疗提供新的思路。     

miR-150-5p在甲状腺癌中的表达及其生物学功能研究

摘 要：［目的］ 探讨微小RNA-150-5p（miR-150-5p）在甲状腺癌组织中的表达水平及其通过PI3K/Akt信号通路对甲状腺癌细胞增殖和凋亡能力的影响。［方法］ qRT-PCR检测68例甲状腺癌患者病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。将miR-150-5p抑制剂和阴性对照转染至人甲状腺癌TPC-1细胞株,以空脂质体作为对照,qRT-PCR检测转染结果,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan 预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、p-Akt蛋白的表达。［结果］ 68例甲状腺癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为0.96±0.06和1.66±0.11,差异有统计学意义（P＜0.05）;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为0.12±0.02,明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组24、48和72h细胞增殖率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p抑制剂组24、48和72h细胞增殖率分别为9.56%±1.38%、24.36%±4.66%和33.63%±5.32%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.05）。空白对照组和阴性对照组48h细胞凋亡率的差异无统计学意义（P＞0.05）,而miR-150-5p 抑制剂组的细胞凋亡率为16.25%±2.98%,明显高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）。TargerScan网站预测结果显示,miR-150-5p可与PI3K互补结合,荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。空白对照组和阴性对照组间PI3K、p-Akt和Cleaved caspase3蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）,miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组（P＜0.01）,3组间Akt蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。［结论］ miR-150-5p在甲状腺癌组织中表达异常升高,干扰miR-150-5p表达能够抑制甲状腺癌TPC-1细胞株的增殖,并通过上调Cleaved caspase-3促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

三结构域家族蛋白22在宫颈癌中的表达及其对高危型人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨三结构域家族蛋白22（tripartite motif protein 22,TRIM22）在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。［方法］ 收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白。实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒（pUNO1-hTRIM22a）和对照表达质粒（pUNO1）稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组。实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated AKT,p-AKT）蛋白表达。［结果］ TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达（0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P<0.001）和蛋白水平（0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P<0.001）均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达（0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P<0.001）和蛋白水平（0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=3.86,P<0.001）均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织。TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关（1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=3.15,P=0.003）,与肿瘤大小、临床分期无明显相关（P>0.05）。pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组（P<0.001）,细胞增殖、侵袭数量（CaSki细胞：31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P<0.001;HeLa细胞：27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P<0.001）、处于G2~M期的细胞比例（CaSki细胞：2.04%±0.36% vs 12.72%±1.98% vs 12.40%±1.62%,F=57.82,P<0.001;HeLa细胞：3.07%±1.08% vs 8.26%±2.98% vs 10.92%±3.56%,F=22.82,P<0.001）、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组（CaSki细胞：11.90%±2.78% vs 5.27% ±1.78% vs 6.64%±1.19%,F=16.78,P<0.001;HeLa细胞：18.79%±4.64% vs 6.78%±1.03% vs 5.23%±1.09%,F=27.91,P<0.001）。［结论］ TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关。上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡。     

硼替佐米联合5-氮杂胞苷对甲状腺未分化癌细胞增殖、侵袭能力及miR-124、miR-7、IL-11表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨硼替佐米联合5-氮杂胞苷对甲状腺未分化癌细胞增殖、侵袭能力及miR-124、miR-7、白细胞介素-11（IL-11）水平的影响。［方法］ 计算硼替佐米和5-氮杂胞苷的IC50值,检测硼替佐米（Bor组）和5-氮杂胞苷（5-Aza组）单独和联合使用（5-Aza+Bor组）对甲状腺未分化癌细胞ARO细胞活力、凋亡率、迁移和侵袭能力的影响,并检测各组miR-124、miR-7、IL-11水平。采用CCK-8和流式细胞术检测细胞凋亡情况。采用细胞划痕实验和Transwell法分析细胞迁移和侵袭情况,采用qPCR法检测miRNA和mRNA水平,WB法检测蛋白的相对表达水平。［结果］ 硼替佐米和5-氮杂胞苷的IC50值分别为110ng/ml和5.5μmol/L。培养24h后Bor组和5-Aza组的细胞活力显著低于Control组,而细胞凋亡率显著高于Control组,且5-Aza+Bor组细胞活力（0.44±0.08）显著低于Bor组和5-Aza组（F=5.142,4.456;P均<0.001）,而凋亡率（19.78%±1.67%）显著高于Bor组和5-Aza组（F=6.664,6.582;P均<0.001）。作用24h后,5-Aza+Bor组的迁移（31.78%±2.28%）（F=10.455,9.832;P均<0.001）和侵袭率（28.74%±2.15%）（F=11.135,10.739;P均<0.001）均显著低于Bor组和5-Aza组。5-Aza+ Bor组的miR-124、miR-7水平显著高于Bor组和5-Aza组（P<0.01）,Bor组和5-Aza组IL-11显著低Control组（P<0.01）,5-Aza+ Bor组的IL-11显著低于Bor组和5-Aza组（P<0.01）。［结论］ 硼替佐米与5-氮杂胞苷联合使用与单独使用相比,可进一步的抑制甲状腺未分化癌细胞增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡,可能与其可上调miR-124、miR-7水平和抑制IL-11的表达有关。     

miR-372-3p 在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的：检测miR-372-3p 在膀胱癌组织和转染miR-372-3p mimics 膀胱癌细胞中的表达,研究miR-372-3p 对膀胱癌5637 和T24 细胞增殖、迁移与侵袭的影响。方法：采集2016 年3 月至2017 年1 月武汉中心医院收治的6 例膀胱癌患者癌及癌旁组织（距离肿瘤边缘>5 cm）,qPCR检测膀胱癌及癌旁组织miR-372-3p 表达。采用脂质体转染法将miR-372-3p mimics 或者miRNC转入膀胱癌5637 和T24 细胞。用qPCR和Western blotting 检测转染miR-372-3p mimics 和miR-NC膀胱癌细胞miR-372-3p 和ATAD2 mRNA和蛋白E-cadherin、N-cadherin 蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期分布,MTT法和集落形成实验检测细胞增殖和集落形成能力,划痕实验和Transwell 侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：膀胱癌组织miR-372-3p mRNA的表达显著低于癌旁组织（0.65±0.56 vs 1.76±0.34,P<0.01）。和转染miR-NC膀胱癌细胞相比,转染miR-372-3p mimics 膀胱癌细胞的miR-372-3p mRNA表达显著增加,ATAD2 mRNA和蛋白的表达显著降低,E-cadherin 蛋白表达上调,N-cadherin 蛋白表达下调,细胞周期明显阻滞,细胞集落形成和增殖能力显著降低,细胞迁移数和侵袭数减少。结论：miR-372-3p 的低表达可能与膀胱癌的发生发展有关,其通过靶向调控ATAD2 抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能成为膀胱癌生物治疗的新靶标。     

MiR-1271靶向ZEB1抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖和转移

摘 要：［目的］ 探讨miR-1271对甲状腺乳头状癌细胞增殖和转移的影响及其作用机制。［方法］ 收集20例手术切除甲状腺乳头状癌患者的癌组织和对应的癌旁组织标本。采用RT-qPCR检测组织和细胞系中miR-1271和ZEB1的表达水平;CCK-8检测K1细胞增殖活力;Transwell检测K1细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测蛋白的表达水平;双荧光素酶报告基因验证miR-1271与ZEB1的靶向关系。［结果］ miR-1271在甲状腺乳头状癌组织中的表达水平低于癌旁组织组织（1.175±0.534 vs 3.918±0.512,P<0.001)。与人甲状腺滤泡上皮正常细胞（0.985±0.062）相比,miR-1271在癌细胞系（TPC-1：0.752±0.052,K1：0.318±0.042,BCPAP：0.584±0.045）中的表达水平明显下调(P均<0.05),且在K1细胞中表达最低（P=0.016）。双荧光素酶报告基因结果显示,miR-1271通过结合ZEB1基因的3′UTR,进而抑制其表达水平。过表达ZEB1可明显缓解miR-1271对K1细胞增殖和转移的抑制作用。［结论］ miR-1271通过靶向下调ZEB1的表达,进而抑制K1细胞增殖、侵袭、迁移和EMT。     

MiR-124靶向调控PKM2基因表达抑制乳腺癌细胞的增殖和转移

摘 要：［目的］ 探讨miR-124对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和转移的影响。［方法］ 运用实时荧光定量PCR法、免疫印迹实验检测25例乳腺癌乳腺癌组织及对应癌旁组织中的miR-124、丙酮酸激酶同工酶（PKM2）相对表达量。将pre-miR-124、抗miR-124转染至乳腺癌MDA-MB231细胞中,同时设置阴性对照组,检测三组细胞中miR-124、PKM2基因及蛋白表达量。运用CCK-8法及克隆形成实验检测转染后的MDA-MB231细胞增殖和转移。［结果］ 乳腺癌组织中miR-124（0.92±0.24）的相对表达量显著性少于癌旁组织（1.55±0.28）,PKM2的相对表达量更高（0.69±0.18）。pre-miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124过表达（0.37±0.08）,且其可以反向调控PKM2基因（0.52±0.11）及蛋白表达量（0.19±0.04）,抑制细胞的增殖与转移能力。抗miR-124转染MDA-MB231细胞呈现miR-124抑制表达（0.06±0.03）,其PKM2基因（2.09±0.08）及蛋白表达量（0.47±0.10）显著性上升,促进细胞增殖与转移（P＜0.05）. ［结论］ miR-124可以通过下调PKM2基因的表达,从而抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和转移。     

MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

摘 要：［目的］ 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用，并进一步探讨其机制。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平，Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化，用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡，并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。［结果］ 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比，乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高（P<0.001），PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低（P<0.001），而p-AKT蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.001），并促进其凋亡的发生（P<0.001），降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平（P<0.001）的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9（P<0.001）。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路，miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低（P<0.001），而miR-374a抑制剂处理后，PTEN蛋白水平显著性升高（P<0.001），p-AKT表达降低（P<0.001）。［结论］ miR-374a在乳腺癌细胞高表达，并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖，促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。