大黄素联合吉西他滨抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖能力的研究

目的:验证大黄素联合吉西他滨(gemcitabine,GEM)抑制胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖的作用,探讨大黄素促PANC-1细胞凋亡的抗肿瘤作用机制.方法:MTT方法检测大黄素单药以及与吉西他滨联合应用对PANC-1细胞增殖能力的影响.ELISA方法测定细胞上清IL-6水平.RT-PCR方法检测大黄素处理后PANC-1细胞内侵袭相关基因MMP-9的表达情况.Western blot方法分别检测大黄素以及吉西他滨处理PANC-1后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达水平.结果:MTT检测结果显示,加药处理细胞72h后,大黄素组(40 μmol/l)PANC-1细胞抑制率为31％,GEM组(20μmol/l)的抑制率为35％,联合用药组的抑制率为49％,与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).IL-6浓度大黄素组为(22.41±2.27) ng/ml,联合用药组为(15.44±3.91) ng/ml.实验组均显著低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).大黄素组、联合用药组MMP-9 mRNA表达水平显著低于对照组,GEM组较对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).大黄素组、GEM组、联合用药组Bax表达水平上调,但Bcl-2差异无统计学意义.大黄素组、GEM组、联合用药组的Bax/Bcl-2分别为2.71 ±0.25,4.73---0.17,5.72 ±0.36,均显著高于对照组1.14 ±0.15,结论:体外研究结果显示大黄素能够抑制肿瘤PANC-1细胞增殖,具有促细胞凋亡的作用,与吉西他滨联合应用具有协同效应.     

吉西他滨与LY294002对人类胰腺癌细胞BxPc-3及MiaPaCa-2的影响

 目的　探讨吉西他滨与LY294002单药或联合应用对人类胰腺癌细胞BxPc-3和MiaPaCa-2增殖和凋亡的影响。方法　MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡。结果　吉西他滨与LY294002对两株细胞增殖均有抑制作用,且作用随药物浓度增加而增强,各组用药剂量的对数值与细胞生存率之间呈负相关（r＜-0.95, P＜0.01）;吉西他滨与LY294002对BxPc-3细胞的抑制作用明显强于对MiaPaCa-2细胞作用（P＜0.05）。BxPc-3和MiaPaCa-2细胞对吉西他滨的IC50分别为（10.07±1.83）、（36.45±2.71）μmol／L（P＜0.05）,对LY294002的IC50分别为（7.84±1.48）、（17.89±1.98）μmol／L（P＜0.05）。吉西他滨与LY294002可诱导两株细胞凋亡（P＜0.01）,吉西他滨与LY294002同时或序贯应用,均表现出对两株细胞凋亡的促进作用,其中以LY294002和吉西他滨同时给药组作用最为显著（P＜0.05）,序贯组药物应用的先后顺序并未对细胞凋亡率产生影响（P＞0.05）。结论　吉西他滨和LY294002体外可显著抑制胰腺癌细胞增殖,二者同时应用能显著促进其凋亡。     

PDCD4促进吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究程序性细胞死亡因子4（programmed cell death 4,PDCD4）在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡中的作用。方法:用吉西他滨处理胰腺癌细胞PANC-1,荧光定量PCR和Western blot分别检测胰腺癌细胞中PDCD4的表达变化。PANC-1细胞感染PDCD4-pGC-Fu-GFP重组慢病毒和对照pGC-Fu-GFP重组慢病毒,荧光定量PCR和Western blot检测过表达效果。用吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞,MTT测定细胞增殖,克隆形成实验测定细胞克隆能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot检测细胞中剪切的Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、剪切的Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平和胞浆、线粒体中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平。结果:吉西他滨处理后的PANC-1细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平均明显升高。吉西他滨处理和过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖、克隆形成能力明显降低,细胞凋亡率明显升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平也升高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平降低。吉西他滨处理过表达PDCD4的PANC-1细胞增殖能力、克隆形成能力降低更多,细胞凋亡率更高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也更高,胞浆中Cytochrome C蛋白水平更高,线粒体中Cytochrome C蛋白水平更低。结论:吉西他滨通过上调PDCD4表达水平激活线粒体途径诱导胰腺癌细胞凋亡。     

IRF-2对胰腺癌细胞生物学特性及化疗敏感性的影响

目的 探讨干扰素调控因子2(interferon regulatory factor 2,IRF-2)在胰腺癌细胞中的生物学特性及其对吉西他滨化疗敏感性的影响.方法 Western blot检测IRF-2基因在胰腺癌细胞株PANC-1及MIAPaCa-2中的表达水平,采用MTT检测吉西他滨对PANC-1及MIAPaCa-2的半数有效浓度(IC50),选择较为耐药的PANC-1细胞进行IRF-2基因干扰表达,并采用MTT检测吉西他滨对PANC-1及干扰IRF-2表达的PANC-1 si1#的半数有效浓度(IC50).结果 PANC-1及MIAPaCa-2中细胞中均存在IRF-2基因的表达,且PANC-1细胞中表达水平比MIAPaCa-2高.吉西他滨对PANC-1细胞的IC50显著高于MIAPaCa-2细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);干扰IRF-2表达的PANC-1 si1#细胞其IC50值显著低于PANC-1对照细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IRF-2基因可作为影响胰腺癌对吉西他滨化疗敏感性的基因之一,干扰IRF-2基因能够有效地提升胰腺癌细胞对吉西他滨化疗的敏感性.     

吉西他滨对胰腺癌PC-2细胞体外生长及基因表达的影响

目的:探讨吉西他滨对胰腺癌PC-2细胞体外生长及基因表达的影响.方法:体外培养胰腺癌PC-2细胞,MTT法检测不同浓度吉西他滨(空白组,10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml,50μg/ml,60μg/ml,70μg/ml,80μg/ml,90μg/ml及100μg/ml吉西他滨组)对PC-2细胞体外生长的影响.流式细胞仪检测吉西他滨(40μg/ml组,60μg/ml组)对胰腺癌细胞周期及凋亡影响.Human 1A 基因表达谱芯片分析2组间基因谱差异表达.结果:胰腺癌PC-2细胞的凋亡分数与吉西他滨的浓度呈剂量依赖关系,加药组G1期细胞百分比与对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),且随浓度增大,G1期细胞比例逐渐增多,而S期细胞则相反.40μg/ml吉西他滨组胰腺癌细胞24h凋亡率是10.86 %,且以早期凋亡细胞为主;60μg/ml吉西他滨组胰腺癌细胞24h凋亡率是32.14 %,也以早期凋亡细胞为主,但晚期凋亡细胞明显较40μg/ml组增多(P＜0.05).随时间增加细胞凋亡水平增高.细胞表达谱芯片结果显示,差异表达基因(差异表达两倍以上)共702条.其中主要包括表达上调的基因406个,下调基因296个.结论:吉西他滨通过诱导胰腺癌PC-2细胞凋亡和抑制其增殖来发挥抗肿瘤作用;吉西他滨对PC-2细胞株的作用涉及原癌基因、抑癌基因等多种相关基因的变化,吉西他滨可能主要通过上调Fas/FasL基因表达,同时通过下调bcl-2基因表达诱导PC-2细胞凋亡.     

吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及分子机制研究

目的 探讨吡格列酮对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法 体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,分别以吡格列酮（0 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L、50 μmol/L）和吉西他滨（50 μmol/L）作用0 h、12 h、24 h、48 h、72 h后,采用CCK-8检测各时间点的细胞增殖情况,流式细胞仪检测72 h细胞周期及凋亡情况,4,6-联脒-2-苯基吲哚（DAPI）染色检测48 h细胞凋亡形态学变化,Western blot检测48 h细胞凋亡相关蛋白及MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达。结果 与0 μmol/L吡格列酮相比,吉西他滨及各剂量吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均降低（P＜0.05）;48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均升高（P＜0.05）,而S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达降低（P＜0.05）,且细胞逐渐收缩,细胞核逐渐碎裂。与50 μmol/L吉西他滨组相比,10 μmol/L吡格列酮组细胞作用24 h、48 h、72 h的OD值均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞作用48 h 的G0/G1期细胞比例、细胞凋亡率、Bax及caspase-3、p-ERK蛋白表达均降低（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均升高（P＜0.05）;10 μmol/L吡格列酮组细胞48 h 的S期细胞比例、Bcl-2蛋白表达均升高（P＜0.05）,而50 μmol/L吡格列酮组均降低（P＜0.05）。结论 吡格列酮能抑制人胰腺癌细胞株PANC-1增殖,诱导其凋亡,可能通过上调MAPK/ERK通路实现。     

p53正向凋亡调控因子在吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡过程中的作用

目的:研究吉西他滨对人胰腺癌AsPC-1细胞体外生长的作用机制.方法:用脂质体转染法将含有p53正向凋亡调控因子(p53 upregulated modulator of apoptosis,PUMA)反义核酸的真核表达载体pcDNA3.1-PUMAAS和空载体pcDNA3.1导入AsPC-1细胞,G418筛选阳性细胞,获得稳定转染的阳性克隆.将转染载体的AsPC-1阳性克隆细胞和未转染载体的AsPC-1细胞分别暴露于浓度为1、5、10和15 μmol/L的吉西他滨溶液中作用72 h.RT-PCR和Western印迹法检测不同组细胞经吉西他滨作用72 h后的PUMA表达水平,MTT检测细胞生长抑制情况, FCM、Hoechst 33258荧光染色和TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:吉西他滨促进AsPC-1细胞凋亡,抑制细胞生长,并有明显的剂量依赖性,在细胞凋亡的同时伴有PUMA表达的上调;当细胞转染PUMA反义核酸抑制PUMA表达后,受吉西他滨作用的细胞中PUMA蛋白表达明显降低,同时伴有细胞凋亡的抑制及细胞增殖明显增加.结论:吉西他滨促进体外AsPC-1细胞凋亡,并抑制细胞生长,其诱导细胞凋亡与上调PUMA表达有关.     

miR-429通过下调PTEN并激活PI3K/AKT信号通路促进胰腺癌PANC-1细胞对卡培他滨耐药

目的:探讨miR-429 靶向PTEN并通过PI3K/AKT信号通路调控胰腺癌PANC-1 细胞对卡培他滨的耐药性及其作用机制。方法：建立胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP后,采用qRT-PCR和Western blotting 实验检测miR-429 和PTEN在胰腺癌细胞中的表达情况,平板克隆形成实验、CCK-8 法和Annexin V-FITC/PI 双染流式细胞术检测敲降miR-429 对胰腺癌卡培他滨耐药细胞株PANC-1/CAP 细胞增殖、凋亡和卡培他滨耐药性的影响,双荧光素酶报告基因验证miR-429 与PTEN 的靶向关系,Western blotting 实验进一步检测miR-429 对PTEN-PI3K/AKT信号通路的调控作用。结果：miR-429 在胰腺癌PANC-1 细胞和PANC-1/CAP细胞中的表达水平高于人胰腺导管上皮细胞（HPDE6-C7）（P<0.05 或P<0.01）,敲降miR-429 可显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力、促进细胞凋亡及下调细胞卡培他滨耐药性,且双荧光素酶报告基因证实miR-429 靶向作用PTEN并下调其表达水平（P<0.05 或P<0.01）;敲降miR-429 可通过靶向上调PTEN并阻断PI3K/AKT信号通路进而显著抑制PANC-1/CAP细胞增殖活力,从而下调PANC-1/CAP细胞对卡培他滨的耐药性（P<0.05 或P<0.01）。结论：miR-429/PTEN-PI3K、AKT信号通路与胰腺癌卡培他滨耐药性存在调控关系,且敲降miR-429 可逆转PANC-1/CAP对卡培他滨的耐药性。     

RGD偶联吉西他滨白蛋白纳米粒对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响

背景与目的:吉西他滨作为目前临床胰腺癌一线用药,由于其化疗耐药性,化疗效果较差。本研究通过制备RGD偶联吉西他滨白蛋白纳米粒,通过增加其靶向性,探讨其对胰腺癌细胞株BxPC-3和PANC-1细胞周期和凋亡的影响。方法:以人胰腺癌细胞株BxPC-3(高表达αvβ3受体)和PANC-1(低表达αvβ3受体)为研究对象,各分为6个给药组:对照组、BSANP(白蛋白纳米粒)、RGD-BSANP组、BSANP-GEM组、GEM原药组(吉西他滨)、RGD-BSANP-GEM组。运用PI单染检测给药后24 h细胞周期的变化,Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡。结果:在BxPC-3细胞株中,与BSANP-GEM组及GEM组相比,RGD-BSANP-GEM组S期细胞比例明显下降,G0/G1期细胞比例明显增多,且在RGD-BSANP-GEM组凋亡率最高;而在PANC-1细胞中,RGD-BSANP-GEM组G0/G1期细胞阻滞的比例和凋亡率低于BxPC-3细胞株。结论:RGD环肽能够增加BSANP-GEM对高表达αvβ3胰腺癌BxPC-3细胞G0/G1期阻滞及细胞凋亡。     

吉西他滨对膀胱癌细胞系增殖、细胞周期、凋亡的影响

背景与目的：吉西他滨（gemcitabine，GEM）单药或与顺铂合用在晚期膀胱癌治疗中显示了较高的反应率，已成为晚期膀胱癌化疗的一线药物，然而其在膀胱癌效应机制方面的研究却不多见。本研究探讨占西他滨体外对人膀胱移行上皮癌细胞系增殖、细胞凋亡以及p53、Bax、Bcl-2和Caspase3基因表达的影响。方法：体外培养膀胱移行细胞癌细胞系BIU-87、5637、T24、EJ细胞，用MTT法检测吉西他滨对各类癌细胞生长抑制的影响，用流式细胞技术（碘化丙啶）检测吉西他滨对癌细胞周期影响，流式细胞仪Annexin—V法测定细胞凋亡率，流式免疫荧光检测用药前后p53、Bax、Bcl-2、和Caspase3基因表达变化。结果：吉西他滨对体外培养的膀胱移行细胞癌细胞系均有抑制作用，具有时间和浓度依赖性，低分化肿瘤和倍增时间短的细胞系对吉西他滨敏感性高。吉西他滨1μg/ml作用5637和EJ细胞24h，导致细胞G1期83．94％与85．46％的阻滞；作用于5637细胞12、24和48h，凋亡率分别为4．8％、11．7％及23．3％。免疫荧光显示p53、Bcl-2表达没有显著性变化，而Bax、Caspase3却随吉西他滨作用时间延长表达升高。结论：吉西他滨对膀胱移行细胞癌具有抑制作用，细胞分化低、倍增时间短的癌细胞系对吉西他滨更敏感。吉西他滨阻滞细胞于G1，诱导Bax表达上调可能是产生膀胱癌细胞凋亡的原因之一。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...