Akt抑制剂哌立福新通过减少乳酸生成抑制胃癌细胞增殖与迁移

摘　要：［目的］ 探究Akt抑制剂哌立福新对胃癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及其可能机制。［方法］ 采用不同浓度哌立福新处理胃癌MGC803和SGC7901细胞。细胞增殖采用磺酰罗丹明B法检测,流式细胞仪Annexin V-/PI双染法检测细胞凋亡,细胞迁移和侵袭分别采用细胞划痕实验法和Transwell小室实验检测,乳酸含量的测定采用ELISA法,以蛋白印迹法检测糖酵解通路相关蛋白水平的变化。［结果］ 哌立福新在2.0 μmol/L浓度剂量时即能有效抑制胃癌细胞MGC803和SGC7901细胞增殖。经哌立福新低中高剂量（2.0、10.0、20.0 μmol/L）处理后,MGC803细胞凋亡明显增加（P<0.05）。划痕间距分别为407.2±34.4 μm,657.2± 49.2μm和910.8±51.4.1μm,与对照组240.3±27.8 μm相比均有显著性差异（P<0.05）,且呈量效关系。Transwell小室实验显示每个视野下侵袭的MGC803细胞数对照组为2584±228个,而经哌立福新低中高剂量处理后分别为2052±158 (P<0.05),1410±105(P<0.01) 和887±87 (P<0.01),与对照组相比均有显著性差异,并呈剂量依赖性。不同剂量哌立福新均可显著性降低培养基和细胞中乳酸含量,同时,蛋白质印迹结果提示哌立福新显著性抑制与糖酵解乳酸生成相关的乳酸脱氢酶-A,葡萄糖转运蛋白（Glucose transporter,GLUT）1,GLUT4和IGF-1的表达（P<0.05）,且呈剂量依赖性。［结论］ 哌立福新能有效抑制MGC803细胞迁移与侵袭,其机制与降低糖酵解从而减少乳酸生成相关。     

二甲双胍对人胰腺癌细胞株PANC-1生长侵袭影响及其机制的探讨

目的:研究二甲双胍对人胰腺癌细胞株PANC-1增殖、凋亡及侵袭的影响,并初步探讨其可能机制。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1,给予不同浓度二甲双胍进行干预作为实验组,无药物组作为对照组。MTT法检测二甲双胍对PANC-1细胞存活率的影响;流式细胞仪检测二甲双胍对PANC-1细胞周期及细胞凋亡的影响;Transwell小室侵袭实验观察细胞侵袭能力;RT-PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、Cyclin D1、MMP-2和MMP-9mRNA的表达。结果:与对照组相比,用药组细胞增殖活性明显下降,F值分别为70.318、327.201和654.196,P<0.01,且呈时间-浓度依赖性。流式细胞仪检测细胞周期结果显示,随着二甲双胍浓度的增加,G0/G1期细胞所占百分率逐渐增加,S期和G2/M期细胞所占百分率逐渐下降,F值分别为208.365、195.308和48.87,P<0.01;流式细胞仪分析对照组与实验组早期和晚期细胞凋亡率差异无统计学意义,F值分别为0.123和0.298,P>0.05。侵袭实验结果显示,随着二甲双胍浓度的增加,细胞侵袭能力逐渐下降,F=66.131,P<0.01。RT-PCR示,二甲双胍干预组Cyclin D1、MMP-2和MMP-9mRNA表达明显降低,t值分别为6.789、13.452和25.72,P<0.01;Bax、Bcl-2和Caspase-3mRNA与对照组相比差异无统计学意义,t值分别为-0.683、-1.567和0.78,P>0.05。结论:二甲双胍能显著抑制人胰腺癌细胞株PANC-1的增殖和侵袭,机制主要与其阻滞细胞周期以及影响相关基因表达有关;二甲双胍对PANC-1细胞的凋亡无明显诱导作用。     

二甲双胍抑制人MDA-MB-231细胞增殖及迁移的体外实验研究

目的： 研究二甲双胍对体外培养的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响。方法： MTT实验分为4个处理组,分别为RPMI 1640培养基对照组,浓度为1、2、4 mmol/L的二甲双胍处理组,在作用48、72 h后测定各组的细胞活力并进行统计学分析;倒置相差显微镜下观察药物处理72 h后人乳腺癌MDA-MB-231细胞与对照组相比的形态变化;Giemsa染色观察4 mmol/L二甲双胍作用48 h后的细胞形态;采用细胞划痕实验和Transwell实验,检测二甲双胍（2、4 mmol/L）作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后,对细胞迁移能力的影响。结果： MTT实验结果显示4 mmol/L二甲双胍作用72 h可显著抑制MDA-MB-231细胞的活力,抑制率为（29.83±2.25）％,与对照组相比,细胞活力降低（P<0.05）。倒置相差显微镜下形态学观察发现,与对照组相比,4 mmol/L二甲双胍处理组细胞密度降低,变圆的细胞数量增加,细胞与细胞之间的联系减少。Giemsa染色结果显示4 mmol/L二甲双胍作用48 h后,部分细胞出现凋亡细胞核碎裂形态。划痕实验结果表明,2、4 mmol/L二甲双胍作用24 h后细胞汇合度明显低于对照组,其中4 mmol/L处理组的划痕愈合率为（52.67±4.48）%,与对照组间的差异显著（P<0.01）;Transwell实验结果表明,2、4 mmol/L二甲双胍作用细胞24 h后穿膜细胞数量减少,穿膜细胞数量分别为（61.6±1.6）、（51.3±2.6）个,均低于对照组的（99.3±18.9）个（P<0.05）。结论： 二甲双胍在体外可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖及迁移。     

miRNA-145抑制肺癌细胞系A549迁移侵袭的研究

摘 要：［目的］ 观察miRNA-145对肺癌细胞系A549迁移、侵袭和克隆形成的影响,探讨其潜在的应用价值。［方法］ 采用miRNA-145过表达的慢病毒载体上调A549细胞中miRNA-145的表达量,Transwell迁移及侵袭实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外迁移、侵袭能力,平板克隆形成实验分析miRNA-145表达上调前后A549细胞的体外增殖能力。［结果］ RT-PCR结果表明,侵染了miRNA-145过表达载体的A549细胞中miRNA-145水平明显高于阴性对照组及空白对照组,差异有统计学意义（P<0.01）;Transwell迁移和侵袭实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞过膜数少于阴性对照及空白对照组,差异有统计学意义(P<0.01);平板克隆形成实验结果表明,过表达miRNA-145的A549细胞平板克隆形成能力明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。［结论］ miRNA-145的过表达能够抑制肺癌细胞系A549的迁移、侵袭和克隆形成,由此提示miRNA-145有可能成为肺癌治疗的潜在靶点。     

二甲双胍抑制胰腺癌干细胞生长的实验研究

摘 要：［目的］ 探讨二甲双胍对胰腺癌干细胞的生长抑制作用。［方法］ 利用无血清培养基的超低粘附培养方法获得干细胞球样胰腺癌PANC1细胞,然后通过定量PCR检测干细胞球样PANC1细胞中CD133及PDX-1的表达情况,验证胰腺癌干细胞;利用干细胞球样PANC1细胞的MTT实验、流式周期检测实验、Annexin-Ⅴ细胞凋亡实验、定量PCR凋亡因子检测实验,研究二甲双胍对干细胞球样PANC1细胞增殖、周期及凋亡的影响;借助干细胞球样PANC1胰腺癌细胞构建鼠移植瘤模型,观察二甲双胍对肿瘤生长的影响。［结果］ 二甲双胍能够明显抑制干细胞球样胰腺癌PANC1细胞增殖,且具有浓度依赖性,最大抑制率为81.3%,半数有效抑制浓度IC50为（11.94±1.43）mmol/L;二甲双胍对干细胞球样PANC1细胞的G0/G1期有阻滞作用;二甲双胍可以诱导干细胞球样PANC1细胞凋亡,与空白对照组比较,二甲双胍组干细胞球样PANC1细胞的Bcl-2 mRNA减少,而Bad、Bax mRNA的表达增加;干细胞球样PANC1细胞接种至裸鼠皮下均能成瘤,且二甲双胍能够明显抑制移植瘤的生长。［结论］ 二甲双胍能够抑制胰腺癌干细胞增殖,阻滞G0/G1期,并诱导胰腺癌干细胞凋亡,发挥抗胰腺癌干细胞生长的作用。     

沉默泛素结合酶E2O对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

  目的  研究泛素结合酶E2O（ubiquitin-conjugating enzyme E2O,UBE2O）蛋白在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。  方法  通过慢病毒介导的shRNA靶向抑制人NSCLC细胞株A549中UBE2O基因的表达,应用CCK-8法、流式细胞术分别检测UBE2O对A549细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,应用Transwell实验检测下调UBE2O表达后对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）两种标志分子E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白和PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量的变化。  结果  下调UBE2O表达后,A549细胞UBE2O mRNA和蛋白表达均下调（均P < 0.01）,CCK-8实验结果显示沉默UBE2O可以抑制A549的增殖（P < 0.001）,Transwell实验显示下调UBE2O的表达能够抑制A549细胞的迁移、侵袭（均P < 0.001）。Western blot结果表明下调UBE2O的表达可使A549细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高、p-Akt蛋白表达水平下降。  结论  UBE2O蛋白能够促进NSCLC细胞侵袭和迁移,作用机制可能是通过诱导肺癌细胞发生EMT和促进pI3K-Akt信号通路的激活。      

马钱子碱抑制非小细胞肺癌A549细胞生长并增强顺铂敏感性

摘 要：［目的］ 评估马钱子碱对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、侵袭和迁移的影响,并探讨其增强化疗敏感性。［方法］ 采用NSCLC细胞系A549为研究对象,分别采用CCK-8法、集落形成实验和细胞侵袭、迁移实验检测马钱子碱对A549细胞活力、侵袭和迁移的影响;应用Western blot检测马钱子碱对PTEN、Akt和p-Akt蛋白表达影响。［结果］ 马钱子碱或顺铂单独有效抑制细胞生长、细胞集落的发育以及细胞的侵袭和迁移（P<0.05）,并且马钱子碱和DDP联合处理对细胞的抑制作用强于单独的化合物（P<0.05）。Western blot分析结果显示,在A549细胞中,马钱子碱（20μg/ml）处理增加PTEN蛋白的表达（P<0.05）减少了p-Akt蛋白表达（P<0.05）,并且hsa-miR-21 minic可部分抑制马钱子碱对PTEN蛋白表达的促进作用。［结论］ 马钱子碱可抑制肺癌的进展,增强抗癌药物顺铂对肺癌细胞的作用。     

姜黄素通过PI3K/AKT/mTOR通路抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞上皮间质转化

摘 要：［目的］ 探讨姜黄素对TGF-β诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化、侵袭转移的影响及其可能的机制。［方法］ 通过转化生长因子TGF-β1诱导肺癌细胞株A549发生上皮间质转化;利用不同浓度姜黄素干预由TGF-β1诱导的肺癌 A549细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,细胞划痕实验、Transwell 侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,Western blot法检测上皮表型标记蛋白E-cadherin和间质表型标记蛋白N-cadherin、Vimentin的表达及PI3K/AKT/mTOR信号通路中AKT、mTOR磷酸化的情况,并利用PI3K抑制剂LY290004、mTOR抑制剂Rapamycin通过上述方法对姜黄素的作用进行印证。［结果］ 与对照组相比,姜黄素显著增加A549细胞E-cadherin的表达,抑制N-cadherin和Vimentin蛋白及TGF-β1刺激p-AKT和p-mTOR的表达,且呈明显的剂量—时间依赖关系;同时抑制TGF-β诱导的侵袭迁移。［结论］ 姜黄素可通过PI3K/AKT/mTOR通路明显抑制TGF-β1诱导的肺癌A549细胞上皮间质转化,降低其侵袭迁移能力。     

二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨二甲双胍对急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）NB4细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。方法：二甲双胍单独或联合多柔比星处理NB4细胞后,采用MTT法检测NB4细胞的增殖,采用流式细胞术检测细胞的凋亡,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白caspase-9及caspase-3的活化。结果：二甲双胍可剂量（r=0952,P<0.01）和时间（r=0.967,P<0.01）依赖性抑制NB4细胞的增殖,处理72 h后,其对NB4细胞的IC50值为（6.39±037）mmol/L。二甲双胍可增加NB4细胞对多柔比星的化疗敏感性,0.625 mmol/L二甲双胍联合0.02 μmol/L的多柔比星对NB4细胞的增殖抑制率明显高于单用多柔比星组\[（29.84±0.21）% vs （10.68±0.45）%,P<0.05\]。5 mmol/L二甲双胍处理48 h后,NB4细胞的凋亡率明显高于未处理对照组\[（43.95±0.29）% vs （7.12±0.29）%,P<0.01\];二甲双胍处理NB4细胞后,凋亡蛋白caspase-3、caspase-9活化片段表达上调。结论：二甲双胍能够有效抑制APL细胞株NB4的增殖、促进其凋亡,并能增强其对多柔比星的化疗敏感性,caspase-3和caspese-9凋亡蛋白可能参与二甲双胍诱导NB4细胞凋亡的过程。     

miRNA-145在卵巢癌组织中的表达及其对增殖、迁移与侵袭的影响

摘 要：［目的］ 检测不同卵巢组织中miRNA-145的表达,并探讨miRNA-145在卵巢细胞SKOV-3增殖、迁移与侵袭的作用。［方法］ 采用定量聚合酶链反应（qPCR）测定正常卵巢组织、卵巢癌旁组织与卵巢癌卵巢组织的miRNA-145表达水平,随机将SKOV-3细胞分为正常对照组、空白病毒组和病毒转染组,分别采用MTT法测定各组细胞的增殖情况,采用qPCR测定miRNA-145的表达水平,采用划痕实验测定迁移能力,采用Transwell小室法测定侵袭能力。［结果］ 卵巢癌组织miRNA-145表达水平为0.56±0.23,较卵巢癌旁组织和正常卵巢组织显著性降低（P<0.05）。卵巢癌组织miRNA-145表达水平与患者国际妇产科联合会分期和组织分化程度相关（P<0.05）,但与年龄无关（P >0.05）。病毒转染组细胞的miRNA-145表达水平为4.63±0.47,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增加（P<0.05）。病毒转染组细胞在培养24h、48h和72h时OD值分别为0.68±0.15、1.17±0.23和1.62±0.26,均较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。病毒转染组细胞的划痕宽度为675±46μm,较正常对照组和空白病毒对照组显著性增大（P<0.05）。病毒转染组穿膜细胞数量为36±6个,较正常对照组和空白病毒对照组显著性降低（P<0.05）。［结论］ miRNA-145低表达可能与卵巢癌的发生发展有关,过表达miRNA-145能够抑制卵巢癌细胞株的增殖、迁移和侵袭。miRNA-145可以作为治疗卵巢癌的新作用靶点。     

过表达miR-497靶向细胞周期蛋白E1抑制肺癌A549细胞的上皮间质转化

目的：探讨过表达 miR-497 靶向细胞周期蛋白 E1（cyclin E1,CCNE1）对肺癌 A549 细胞上皮间质转化（epithelialmesenchymal transition,EMT）的影响。方法：常规培养人肺癌A549细胞,细胞实验分为正常组（不加干预）、对照组（转染miR497 mimics-NC）、实验组（转染miR-497 mimics）。采用Transwell小室实验、免疫荧光染色、qPCR、Western blotting法分别检测各组细胞迁移和侵袭能力、蛋白间质标志物α-SMA和上皮标志物E-cadherin的表达、miR-497和CCNE1的表达水平,荧光素酶基因基因报告实验验证miR-497和CCNE1的靶向关系。结果：与对照组和正常组相比,实验组A549细胞迁移和侵袭的数量明显减少（均P<0.05）,细胞的间质标志物α-SMA的绿色荧光强度明显减弱（[ 36.95±5.81）vs（98.69±2.36）、（97.94±2.63）,均P<0.05],上皮标志物E-cadherin的绿色荧光强度明显增强（[ 388.41±10.93）vs（100.95±6.37）、（102.55±3.18）,均P<0.05],miR-497 的表达明显升高（均P<0.05）,CCNE1的表达均明显下降（均P<0.05）。miR-497能够靶向调控CCNE1的表达。结论：在肺癌A549细胞中miR-497能够靶向调控CCNE1的表达,上调miR-497的表达后能明显抑制A549细胞迁移和侵袭能力,影响EMT相关蛋白的表达。     

谷氨酰胺对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α和NF-κB表达的影响

摘 要：［目的］ 探讨谷氨酰胺（glutamine,Gln）对肺腺癌A549细胞增殖、迁移及TNF-α、NF-κB表达的影响。［方法］ 体外培养肺腺癌A549细胞株,CCK-8法检测不同浓度Gln（2、4、8、16、32、64 mmol/L）对A549细胞的增殖影响,筛选适宜浓度。Transwell 实验检测细胞迁移能力,ELISA法和Western Bolt法分别检测TNF-α、NF-κB p65蛋白表达。［结果］ （1） Gln对A549细胞的作用与干预浓度有关,缺乏Gln时细胞生长受限;低浓度Gln（2、4、8mmol/L）对细胞增殖无明显抑制作用;高浓度Gln（16、32、64mmol/L）作用下抑制作用明显（P<0.01）并呈时间依赖性,且32mmol/L和64mmol/L两组作用无明显差异（P>0.05）。（2）与对照组相比,Gln组明显降低A549细胞迁移数;高浓度Gln组明显降低TNF-α、NF-κB p65蛋白的表达（P<0.01）,但32mmol/L和64mmol/L组之间无统计学差异（TNF-α分别为14.671±0.842pg/ml、14.867±1.21pg/ml,NF-κB p65分别为0.548±0.042、0.474±0.077）（P>0.05）。［结论］ Gln对肺腺癌A549细胞的作用与浓度有关,32mmol/L可能为最适抑制浓度。Gln可能通过下调TNF-α和NF-κB p65蛋白表达并抑制A549细胞的迁移发挥抗肺腺癌作用。     

沉默 ABCE1 基因对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响

目的：探讨电转法沉默ATP结合盒转运子E1（ATP-binding cassette protein E1, ABCE1 ）基因的表达对人食管癌EC109细胞凋亡、增殖、侵袭及迁移的影响。方法：合成靶向 ABCE1 的siRNA序列（ABCE1-siRNA）以及阴性对照序列（NC-siRNA）,电转法转染至EC109细胞,分别形成ABCE1-EC109、NC-siRNA-EC109细胞。RT-PCR、Western blotting检测转染后EC109细胞中 ABCE1 mRNA与蛋白的表达情况,流式细胞术检测EC109细胞周期及凋亡,CCK-8法、划痕愈合实验、Transwell法分别检测EC109细胞的增殖、迁移以及侵袭的能力。结果： ABCE1-EC109细胞中 ABCE1 mRNA和蛋白表达较NC-siRNA-EC109细胞明显降低\[(0.47±0.04) vs (0.67±0.05),(0.63±0.09) vs (0.86±0.11);均P<0.05\]。与NC-siRNA-EC109细胞相比,ABCE1-EC109细胞的增殖速度明显减慢\[（2.20±0.10） vs （2.91±0.13）,P<0.05\],细胞周期阻滞在G0/G1期细胞数目明显增多\[（76.5±3.1)% vs (56.1±2.7)%, P<0.05）\];细胞的凋亡率明显升高\[（15 .46±3.12）% vs (0.54±024）%,P<001\],迁移、侵袭能力均显著下降\[迁移：（8.12±0.23） vs （1.91±0.11）μm,P<0.05;侵袭：（42.56±4.68） vs (68.78±6.98)个,P<001\]。结论：电转法沉默 ABCE1 基因的表达可促进食管癌EC109细胞的凋亡,抑制其体外增殖、侵袭及迁移。     

二甲双胍对子宫内膜癌Ishikawa细胞生物学行为的影响

目的:研究二甲双胍（Met）对体外培养子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、迁移的影响并探讨其机制。方法:Ishikawa细胞经Met 作用后,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞法检测细胞凋亡及周期分布;划痕法和Transwell法检测细胞迁移及侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测胰岛素生长因子-1（IGF-1）的表达水平。结果:经Met处理后,Ishikawa细胞增殖、迁移和侵袭能力受到明显抑制,凋亡率显著增高;随着Met浓度地升高,IGF-1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05,P＜0.01）。结论:Met可通过下调IGF-1蛋白的表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞产生抑制增殖、诱导凋亡和降低迁移及侵袭等作用。     

RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响

目的：应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达,探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法：构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug,与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-time PCR和Western blotting验证转染后Slug mRNA和蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果：成功构建pGPU6-GFP-Neo-Slug载体并转染A549细胞,转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比,pSlug-shRNA组A549细胞中Slug mRNA\[（0.23±0.01）vs（0.97±0.08）、（1.0±0.09）,P＜0.05\]和蛋白\[（0.20±0.09 ）vs（1.0±0.32）、（1.13±0.26）,P＜0.05\]表达量显著降低;细胞增殖抑制率明显上升\[（35.3±5.4）% vs（1.5±0.2）%、（3.3±0.7）%,均P< 0.01\];细胞增殖指数显著降低 \[（32.92±0.69）% vs（48.19±0.71）%、（42.88±0.75）%,均P<0.05\],并且处于G1期细胞数明显增多\[（67.08±092）% vs（52.81±0.78）%、（56.12±0.73）%,均P<0.05\];细胞侵袭能力显著降低\[穿透基底膜细胞数：（55±9）vs（169±12）、（173±15）,均P<0.01\]。结论: pGPU6-GFP-Neo-Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达,从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G1期。     

川芎嗪对人肺腺癌 A549细胞增殖、迁移和侵袭的作用与机制

目的：探讨川芎嗪（tetramethylpyrazine,TMP）对人肺腺癌 A549细胞增殖及侵袭的影响。方法：川芎嗪治疗组分别用0.1μg/ ml、1μg/ ml、10μg/ ml、100μg/ ml、250μg/ ml 浓度的川芎嗪干预 A549细胞,同时设无药的阴性对照组及加顺铂的阳性对照组。24、48、72、96小时后,MTT 法检测川芎嗪对 A549细胞株增殖的抑制作用,划痕实验和 Transwell 法观测川芎嗪对 A549细胞株迁移侵袭能力的影响,采用细胞流式术检测川芎嗪对 A549细胞周期和凋亡的干预作用。结果：川芎嗪显著抑制 A549细胞的增殖,抑制 A549的迁移和侵袭,流式细胞术显示川芎嗪诱导 A549细胞发生 G1期阻滞和早期凋亡（P <0.05）。结论：川芎嗪对非小细胞肺癌A549细胞的抑制作用可能是通过诱导 G1期细胞阻滞和早期凋亡引起的。     

LKB1 协同二甲双胍影响宫颈癌HeLa细胞的增殖与凋亡及其可能的机制

目的： 探索肝脏激酶B1 (liver kinase B1, LKB1 或serine-threonine kinase 11, S TK11 )基因协同二甲双胍对人宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响及其可能的机制。 方法： 构建含有 LKB1 基因的重组质粒LKB1-pEGFP-n1并转染HeLa细胞,MTT检测 LKB1 基因对经二甲双胍处理的HeLa细胞增殖的影响,流式细胞术检测对细胞周期和凋亡的影响,Western blotting检测对LKB1-AMPK信号通路相关蛋白AMPK、ACC和Rb磷酸化水平的影响。 结果： LKB1-pEGFP-n1和空载体pEGFP-n1成功转染HeLa细胞,LKB1-pEGFP-n1转染细胞内稳定表达LKB1。二甲双胍处理LKB1-pEGFP-n1转染细胞的IC50显著低于pEGFP-n1转染细胞\[(2.9±0.4) vs (7.8±1.3) mmol/L;t=-6.9921,P=0.002 2\]及野生型HeLa细胞\[(2.9±0.4) vs (9.6±1.5) mmol/L;t=-7.527 1,P=0.001 7\]。经二甲双胍处理后,LKB1-pEGFP-n1转染细胞周期阻滞于G1期,而pEGFP-n1转染和野生型细胞周期无显著变化。二甲双胍作用剂量为15 mmol/L时,LKB1-pEGFP-n1转染细胞凋亡率较pEGFP-n1转染及野生型HeLa细胞显著增多\[（28.6±2.3）% vs （9.6±1.6）%、（17.8±1.9）%,均P＜0.05\]。LKB1-pEGFP-n1转染细胞内AMPKα和ACC的磷酸化水平较pEGFP-n1转染和野生型细胞升高,Rb磷酸化水平降低。 结论： LKB1 能够协同二甲双胍影响HeLa细胞的增殖与凋亡,其可能通过LKB1-AMPK信号通路发挥作用。     

二甲双胍通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭和迁移

目的:探究二甲双胍是否通过巨噬细胞抑制食管癌TE-1细胞的侵袭迁移及其可能的分子机制。方法:100 ng/mL PMA诱导THP-1巨噬细胞。取对数生长期TE-1细胞和巨噬细胞,分别用最终浓度为0.5 mmol/L、1 mmol/L和2 mmol/L二甲双胍处理,Western blot检测MMP9、VEGF蛋白表达水平,ELISA检测细胞TNF-α和IL-8浓度,筛选二甲双胍最佳作用浓度（2 mmol/L）。分别用100 ng/mL LPS、2 mmol/L二甲双胍、100 ng/mL LPS+2 mmol/L二甲双胍处理巨噬细胞制备条件培养基。将TE-1细胞分为4组:对照组、LPS-条件培养基组（LPS组）、二甲双胍-条件培养基组（Met组）和LPS+二甲双胍-条件培养基组（LPS+Met组）。划痕实验观察各组细胞迁移能力。Transwell小室检测细胞侵袭能力。Western blot检测各组细胞VEGF、E-cad、Vimentin和NEDD9的表达。ELISA检测各组细胞TNF-α和IL-8浓度。结果:与对照组相比,二甲双胍可显著降低TE-1细胞和巨噬细胞中MMP9、VEGF、TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。二甲双胍可显著抑制TE-1细胞迁移和侵袭（P＜0.05）,显著抑制VEGF、Vimentin和NEDD9蛋白表达（P＜0.05）,促进E-cad蛋白表达（P＜0.05）;显著降低TE-1细胞中TNF-α和IL-8水平（P＜0.05）。结论:二甲双胍可通过巨噬细胞降低食管癌TE-1细胞NEDD9的表达,抑制食管癌细胞侵袭迁移。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。