过表达IL-18 抑制人结直肠癌细胞HCT-116的增殖

目的：研究过表达IL-18 基因对人结直肠癌（colorectal cancer,CRC）HCT-116 细胞体内外增殖的影响及其可能的机制。方法：构建含人IL-18 基因片段的载体,采用慢病毒转染法获得稳定过表达人IL-18 的CRC HCT-116 细胞株HCT-116/IL-18,CCK-8 法检测HCT-116/IL-18 细胞与野生型HCT-116 细胞的增殖,Western blotting 检测两组细胞内IL-18、Cyclin D1、增殖细胞核抗原（PCNA）、DNA损伤修复酶（PARP）蛋白的表达。将HCT-116、HCT-116/IL-18 细胞分别接种于裸鼠左右两侧腋下,观察成瘤性及移植瘤的生长情况,免疫组化法检测移植瘤组织中IL-18 及PCNA的表达。结果：IL-18 基因在HCT-116 细胞内过表达,可延缓HCT-116 的增殖（P<0.05 或P<0.01）;与HCT-116 细胞相比,HCT-116/IL-18 细胞内PARP表达明显增强,PCNA、Cyclin D1 表达减弱（P<0.01）。HCT-116/IL-18 细胞系在裸鼠体内成瘤率明显降低,成瘤率为43%,与对照组比较其移植瘤成瘤时间晚、生长慢、肿块小,且HCT-116 / IL-18 异种移植瘤PCNA蛋白表达下调（P<0.01）。结论：过表达IL-18 基因对HCT-116 细胞生长增殖具有抑制作用,其机制可能与IL-18调控细胞周期和促进DNA损伤有关。     

lncRNA LINC00460在结直肠癌组织中的表达及其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00460在结直肠癌组织中的表达及对结直肠癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:GEPIA在线数据库和实时荧光定量PCR(qPCR)分析检测lncRNA LINC00460在结直肠癌组织、结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、SW620)及结直肠黏膜上皮细胞NCM460中的表达,进一步分析LINC00460表达与结直肠癌患者临床病理特征的关系。将LINC00460过表达质粒及阴性对照(pcDNA3.1-LINC00460和pcDNA3.1-NC)转染HCT-8细胞,将LINC00460小干扰RNA及阴性对照(si-LINC00460和si-NC)转染SW620细胞,分别采用CCK-8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖能力和侵袭迁移能力,采用Western blot实验检测cyclin D1、p21、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白的表达。结果:与癌旁组织和NCM460细胞相比较,LINC00460在结直肠癌组织及结直肠癌细胞株(HCT-8、HCT-116、SW480、S...     

FBXW7过表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移并促进细胞凋亡

目的:探讨F框/WD-40域蛋白7(F-box and WD-40 domain protein 7,FBXW 7)基因过表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、周期和凋亡的影响。方法:构建FBXW 7过表达的重组载体pEZ-M02-FBXW7质粒,并将其转染乳腺癌MCF-7细胞,应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测pEZ-M02-FBXW7转染后MCF-7细胞中FBXW7 mRNA和蛋白的表达,CCK-8和Transwell法检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,FCM法检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果:pEZ-M02-FBXW7转染后,乳腺癌MCF-7细胞中FBXW7 mRNA和蛋白的表达水平高于阴性对照组(将空载体pEZ-M02质粒转染至MCF-7细胞)和空白对照组(未进行转染的MCF-7细胞)(P值均<0.01),MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力均明显下降(P值均<0.05),MCF-7细胞被阻滞于G0/G1期(P<0.05),且细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论:FBXW7高表达可抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖、侵袭和迁移,并可促进细胞凋亡。     

茯苓酸通过调控AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为

目的：探究茯苓酸（PA）是否通过AKT/MDM2/p53通路影响结直肠癌HCT116细胞的恶性生物学行为。方法：常规培养HCT116细胞,并将其分为对照组、MK-2206(AKT抑制剂)组、PA低浓度（PA-L）组、PA高浓度（PA-H）组、PA-H+SC79(AKT激活剂)组。CCK-8法、细胞克隆形成实验、流式细胞术、Transwell、qPCR法和WB法实验分别检测各组HCT116细胞的增殖活力,克隆形成能力,细胞凋亡,迁移、侵袭能力,E-cadherin、N-cadherin和vimentin mRNA表达以及AKT/MDM2/p53通路相关蛋白的表达。结果：PA可明显抑制HCT116细胞的增殖活力（P<0.05）、克隆形成能力（P<0.05）、迁移和侵袭能力（P<0.05）,诱导其凋亡（P<0.05）,抑制N-cadherin、vimentin mRNA的表达（P<0.05）,促进E-cadherin mRNA的表达（P<0.05）,抑制AKT、MDM2的磷酸化水平（P<0.05）,促进p53蛋白的表达（P<0.05）;AKT抑...     

过表达miR-7对结肠癌HCT-116细胞生物学行为的影响

 目的 探讨上调microRNA-7（miR-7）表达对结肠癌HCT-116细胞生物学行为的影响及可能机制。方法 HCT-116转染后分成miR-7 mimics组、Scramble（阴性对照）组和空白对照组。实时荧光定量PCR（RT-Fq-PCR）检测转染48 h后各组细胞中miR-7表达水平，CCK-8法检测转染72 h后各组细胞的增殖抑制情况，Transwell实验观察转染24 h后细胞侵袭能力，流式细胞仪行细胞周期和细胞凋亡检测。Western blot检测PI3K（p110）、p-Akt及p-mTOR的蛋白表达。结果 miR-7 mimics组miR-7表达水平明显上调，与其余两组比较差异有统计学意义（P<0.05）；与阴性对照组和空白对照组相比，miR-7 mimics组细胞增殖抑制率升高，侵袭能力降低，细胞周期分析提示G₀/G₁期的细胞比例增高，S期细胞明显减少，细胞凋亡率明显增加， 且PI 3K、p-Akt及p-mTOR的蛋白水平明显降低（P<0.05）。结论 上调结肠癌HCT-116细胞中miR-7表达能抑制肿瘤细胞的增殖与侵袭，其机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

USP7在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（ubiquitin specific protease 7,USP7）在结直肠癌组织中的表达及其通过调控Wnt/PCP通路对结直肠癌细胞SW480增殖、凋亡的影响和机制研究。方法:免疫组织化学法检测USP7在结直肠癌组织中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中的表达;qRT-PCR和Western blotting检测沉默USP7在SW480细胞中的表达;细胞克隆形成实验检测SW480细胞增殖能力;Transwell迁移实验检测SW480细胞迁移能力;流式细胞术检测SW480细胞的凋亡情况;Western blotting检测Wnt/PCP通路相关蛋白的表达。结果:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达（P＜0.05）;沉默USP7使SW480细胞中USP7的表达降低（P＜0.001）,细胞的增殖和迁移能力下降（P＜0.001）,细胞凋亡率增加（P＜0.001）;与shNC组相比,沉默USP7使Wnt7a蛋白和RhoA蛋白的表达水平显著下调（P＜0.001,P＜0.001）,JNK蛋白磷酸化程度显著降低（P＜0.01）。结论:USP7在结直肠癌组织和结直肠癌细胞系中高表达。沉默USP7抑制SW480细胞增殖、迁移并诱导细胞凋亡,可能与Wnt/PCP通路有关。     

miR-618抑制结直肠癌生长转移的机制探讨

目的:探讨miR-618在结直肠癌发生发展中的作用。方法:Real-time PCR法检测结直肠癌组织及Caco-2细胞中miR-618表达情况,改变结直肠癌细胞中miR-618表达,应用平板克隆实验检测转染后的结直肠癌细胞克隆能力,创伤愈合实验检测转染后的结直肠癌细胞迁移能力,Transwell小室实验检测转染后的结直肠癌细胞侵袭能力,Western Blotting法检测结直肠癌组织、细胞中SMAD4蛋白的表达变化情况及改变结直肠癌细胞中miR-618表达对SMAD4蛋白的影响。结果:结直肠癌组织及Caco-2细胞中miR-618表达较正常癌旁组织及FHC细胞明显下降（P＜0.05）,但SMAD4蛋白的表达增高（P＜0.05）。上调Caco-2细胞中miR-618表达后,Caco-2细胞的克隆、迁移及侵袭能力均减弱（P＜0.05）,但SMAD4蛋白表达下降（P＜0.05）。结论:miR-618通过下调SMAD4蛋白表达抑制结直肠癌生长转移。     

PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨PI3K抑制剂ZSTK-474对结直肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用不同浓度（0、1、2、4、6、8和10 μmol/L）ZSTK-474处理结直肠癌HT-29和HCT-116细胞24 h和48 h,CCK8法检测细胞增殖活性并计算出ZSTK-474在两株结直肠癌细胞中的半数抑制浓度（IC50）。根据IC50的值选用浓度为4 μmol/L的ZSTK-474作用HT-29和HCT-116细胞24 h,同时设置加入等量的0.1%DMSO为对照。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,qRT-PCR检测细胞PI3K、Akt的mRNA水平,Western blot 检测细胞PI3K、Akt的蛋白水平。结果:ZSTK-474可明显抑制HT-29和HCT-116细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性。ZSTK-474可抑制HT-29和HCT-116细胞的侵袭能力,但不影响其凋亡。ZSTK-474处理HT-29和HCT-116细胞24 h后,PI3K和Akt的mRNA和蛋白表达水平均显著下降。结论:ZSTK-474能够抑制结直肠癌细胞增殖,并且能抑制其侵袭。     

PHF1在结直肠癌中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:探讨PHF1在结直肠癌(CRC)中的表达以及对结直肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将SW480和HCT 116细胞分别分为阴性对照组(si-PHF1-NC组,转染si-PHF1-NC)和实验组(si-PHF1组,转染si-PHF1),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测CRC组织和细胞中PHF1的mRNA水平;免疫组化法检测CRC组织中PHF1蛋白表达;MTT法检测CRC细胞增殖活性;克隆形成实验检测CRC细胞克隆数量;流式细胞术检测CRC细胞凋亡;Transwell小室法检测CRC细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(Western blot)检测CRC细胞EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin的表达。结果:与癌旁组织相比,CRC组织中PHF1的mRNA水平和阳性细胞数均显著升高(P<0.05);与正常细胞NCM460相比,CRC细胞SW480和HCT 116中PHF1的mRNA水平也显著升高(P<0.05);与si-PHF1-NC组相比,si-PHF1组SW480和HCT 116细胞存活率、迁移...     

长链非编码RNA MT1JP通过FBXW7调控口腔鳞癌细胞生物学活性

目的:探讨长链非编码RNA-MT1JP(long non-coding RNA-MT1JP，LncRNA-MT1JP)通过FBXW7对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭等生物学活性的影响。方法:qRT-PCR检测LncRNA-MT1JP在Cal-27、SCC-4、TSCCA口腔鳞癌细胞系和正常口腔上皮细胞系HOK中的表达，将TSCCA细胞系分成LncRNA-MT1JP基因沉默组和对照组，随后采用LipofectamineTM 2000分别转染LncRNA-MT1JP-shRNA及对照序列LncRNA-MT1JP-NC；MTT法检测两组TSCCA细胞增殖；Transwell小室实验检测两组TSCCA细胞系迁移、侵袭能力；流式细胞仪检测两组TSCCA细胞系凋亡能力；Western blot法检测FBXW7基因蛋白的表达。结果:与正常口腔上皮细胞系HOK比较，LncRNA-MT1JP的相对表达量在口腔鳞癌细胞系Cal-27、SCC-4及TSCCA中显著增高(P<0.01)。TSCCA细胞系在转染24及48 h后，MT1JP基因沉默组与对照组比较OD值无显著的统计学差异(P>0.05)；但在72及96 h后OD值显著降低（P<0.05）。与对照组比较，MT1JP基因沉默组TSCCA细胞迁移与侵袭数目显著降低（P<0.01）、凋亡率以及FBXW7基因蛋白相对表达量均显著升高（P<0.05）。结论:LncRNA-MT1JP在口腔鳞癌细胞系呈高表达，MT1JP基因沉默有效抑制了TSCCA细胞系的增殖、迁移、侵袭，促进其凋亡，该作用可能与MT1JP基因沉默后上调抑癌基因FBXW7的表达有关。     

circ_0001821靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌A431细胞的增殖、凋 亡、迁移和侵袭

目的：探讨circ_0001821通过靶向miR-203调控皮肤鳞状细胞癌（cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC）A431细胞 增殖、凋亡、迁移及侵袭的分子机制。方法：选取2018年2月至2019年8月海南医学院第二附属医院收治的39例CSCC患者的癌 及配对癌旁组织,以及人CSCC细胞系A431,用qPCR法检测CSCC癌和癌旁组织中circ_0001821的表达水平。利用脂质体转染技 术,分别将si-circ_0001821、si-NC、miR-203 mimic、miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-NC、si-circ_0001821与anti-miR-203转染至 A431细胞,用qPCR法检测转染细胞中circ_0001821和miR-203的表达水平,MTT法、流式细胞术和Transwell实验分别检测A431 细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力,WB法检测细胞中增殖、凋亡、迁移及侵袭相关蛋白的表达水平。通过Circinteractome数据库 预测circ_0001821与miR-203存在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证circ_0001821与miR-203的靶向关系。结果：CSCC组 织中circ_0001821的表达水平显著高于癌旁组织（P<0.01）。转染 si-circ_0001821 可显著降低细胞中circ_0001821的表达水平（P<0.01）,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实,circ_0001821可 靶向结合miR-203。转染miR-203 mimic可显著降低A431细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）,提高细胞凋亡率（P<0.01）。共转染si-circ_0001821与anti-miR-203 可明显逆转下调circ_0001821 表达对 A431 细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论： circ_0001821通过靶向miR-203调控CSCC细胞A431的增殖、迁移、侵袭能力及细胞凋亡。     

LASP1基因对人结直肠癌LOVO细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的 探讨LASP1基因表达对人结肠癌（LOVO）细胞增殖、迁移以及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 分别构建LASP1过表达质粒和LASP1干扰质粒转染LOVO细胞，qRT-PCR验证LASP1mRNA转染结果。MTT法、Tunel染色分别检测细胞增殖活性和细胞的凋亡情况，细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。Westernblot测定细胞LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达。结果 质粒转染成功。LASP1过表达的LOVO细胞的增殖、迁移和侵袭能力增加，细胞凋亡率降低，细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达升高（P<0.01）。而敲减LOVO细胞中LASP1的表达后，细胞增殖、迁移和侵袭能力减弱，细胞凋亡率增加，细胞中LASP1、p-FAK/FAK、p-AKT/AKT蛋白表达降低（P<0.01）。结论 LASP1可正向调控FAK/AKT信号通路，促进LOVO细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

沉默ACY-1基因表达对结直肠癌细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的:初步探索氨基酰化酶1（ACY-1）与结直肠癌SW480细胞增殖、凋亡、侵袭的关系以及作用机制。方法:小干扰RNA（siRNA）技术沉默结直肠癌细胞中ACY-1基因的表达,转染至SW480细胞中,分为对照组、si-NC组、si-ACY-1组,荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和免疫印迹试验（Western Blot）检测转染效果;用四甲基偶氮唑盐微量（MTT）实验检测干扰ACY-1基因表达对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell法检测细胞的侵袭,Western Blot检测Ki-67、Caspase-3、β-连环蛋白（β-catenin）、c-Myc、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）的蛋白水平。结果:Western Blot检测结果显示si-ACY-1组细胞中ACY-1蛋白的表达量显著低于对照组（P<0.05）。干扰ACY-1表达显著抑制细胞的增殖（P<0.05）和Ki-67蛋白水平,促进其凋亡（P<0.05）,增加Caspase-3蛋白水平,降低细胞的侵袭能力（P<0.05）。si-ACY-1组细胞中β-catenin、c-Myc、Cyclin D1的蛋白水平显著降低（P<0.05）。结论:沉默ACY-1抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭,诱导其凋亡,其作用与Wnt/β-catenin信号通路及其下游靶基因的激活有关,为结直肠癌的治疗提供新的治疗靶点。     

PRL-3对结直肠癌细胞迁移、侵袭能力的影响

目的:构建肝再生磷酸酶-3（phosphatase of regenerating liver-3,PRL-3）基因过表达的重组慢病毒载体,研究其对结直肠癌细胞系HCT116迁移、侵袭能力的影响。方法:PCR扩增PRL-3基因并克隆至pcDH载体,构建成pcDH-PRL-3过表达载体,再将其与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装成Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,并感染结直肠癌细胞系HCT116。利用qPCR、Western分别从mRNA、蛋白水平检测PRL-3表达情况;通过划痕实验、Transwell实验研究过表达PRL-3对结直肠癌细胞系HCT116侵袭能力的影响。结果:成功构建Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,并在结直肠癌细胞系HCT116过表达。划痕实验、Transwell实验结果表明过表达PRL-3能够促进HCT116细胞的迁移、侵袭。结论:构建Lenti-PRL-3重组慢病毒载体,在结直肠癌细胞系HCT116过表达PRL-3后能增加细胞的迁移、侵袭能力。     

miR-888在肝癌细胞中的表达水平及作用机制

目的:检测miR-888在肝癌细胞中的表达情况,并进一步在分子水平研究其相关作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测肝癌细胞系中miR-888的表达情况;细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测miR-888对Huh7细胞活性的影响;平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、Transwell实验检测miR-888对Huh7细胞集落形成、细胞凋亡、迁移和侵袭能力的影响;荧光素酶报告检测miR-888与候选基因RB1的靶向关系,qRT-PCR 和免疫印迹实验（Western blotting）检测RB1 mRNA 和pRB蛋白水平的改变。结果:肝癌细胞中miR-888的表达高于正常肝细胞;CCK-8法显示转染miR-888 inhibitors后Huh7细胞在72 h后增殖能力明显低于miR-NC组（P<0.05）;平板克隆形成实验、Transwell实验（迁移和侵袭）显示转染miR-888 inhibitors后Huh7细胞的克隆形成能力、迁移及侵袭能力明显低于miR-NC组（P<0.05）;细胞凋亡实验显示转染miR-888 inhibitors后Huh7细胞的凋亡能力明显高于miR-NC组（P<0.05）;荧光素酶报告实验证实 miR-888可以抑制含有其结合位点的荧光报告基因的活性,而对突变体质粒没有影响。过表达或抑制 miR-888 对 RB1 mRNA 水平无明显影响,但却对其蛋白水平有负性调节作用。结论:miR-888在肝癌细胞中表达升高,可能通过下调RB1表达促进肝癌细胞侵袭和迁移。     

MicroRNA-375表达对大肠癌细胞生物学特性的影响

目的:研究构建miRNA-375慢病毒表达载体并转染结直肠癌细胞,探讨其对结直肠癌细胞生物学特性的影响.方法:采用qRT-PCR法检测结直肠癌细胞株中miRNA-375表达水平.构建FUA-ZMCS-EF1-EGFP-miR-375/inhibitor慢病毒表达载体,建立稳定过表达miRNA-375及其抑制剂的HCT-116亚细胞系,体外观察细胞生长速度并绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡率,划痕实验检测miRNA-375对HCT-116细胞迁移能力的影响,Western blot法检测miRNA-375对细胞内ERK磷酸化水平的影响.结果:结直肠癌细胞株中miRNA-375低表达不但能促进细胞生长、抑制细胞凋亡,而且能促进细胞内ERK磷酸化水平、增加细胞迁移力和侵袭力.结论:结直肠癌miRNA-375发挥抑癌基因的作用,为miRNA-375在结直肠癌基因诊断及治疗中的应用提供了实验依据.     

Bcl-3表达对结直肠癌组织和HCT 116细胞恶性生物学行为的影响

目的：探讨Bcl-3蛋白在人结直肠癌组织中的表达以及沉默Bcl-3基因后对结肠癌HCT 116细胞增殖与凋亡的影响。方法：选取2012年1月至2015年12月于江苏大学附属昆山医院行结直肠癌根治术的86例患者结直肠癌组织及相对应的癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达。将HCT 116细胞分为3组：空白对照组、Control siRNA组和Bcl-3 siRNA组,按分组转染Bcl-3 siRNA和Control siRNA,Western blotting法检测各组Bcl-3表达量以鉴定转染效率;MTT法、平板克隆实验、流式细胞术分别检测各组增殖能力、克隆形成能力、细胞周期分布及细胞凋亡率的变化。结果： Bcl-3蛋白在结直肠癌组织明显高于相应癌旁组织阳性表达率（72.09% vs 48.84%,P<0.05）。结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关（P<0.05）。转染48 h后,空白对照组、Control siRNA组Bcl-3相对蛋白量表达水平明显高于Bcl-3 siRNA组（P<0.05）。MTT实验中可见Bcl-3siRNA组光密度（D）值在转染24、48、72、96 h时均明显低于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）,Bcl-3 siRNA组克隆形成率明显低于其他2组（P<005）。流式细胞术显示,Bcl-3 siRNA组G2期细胞比例及凋亡率高于空白对照组和Control siRNA组（P<0.05）。结论： 结直肠癌组织中Bcl-3蛋白的高表达与组织学分级、淋巴结转移及Dukes分期有关;沉默Bcl-3可能导致结肠癌HCT 116细胞的细胞周期停滞在G2期,抑制细胞增殖能力及克隆形成能力,并促进细胞凋亡。     

敲低错配修复基因MSH6抑制结直肠癌细胞上皮间充质转化及其增殖

目的:探究错配修复基因MSH6对结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及可能发生的机制。方法:根据美国国家生物信息技术中心(NCBI)中MSH6的基因序列构建靶向敲低MSH6的序列shMSH6-1、shMSH6-2和shMSH6-3,采用细胞转染技术敲低结直肠癌细胞中MSH6的表达,通过实时荧光定量 PCR 检测敲低效率并进行慢病毒包装,应用Western blot在细胞系中筛选MSH6高表达细胞系进行后续实验,应用CCK8检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞集落形成能力,伤口愈合和Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力,通过Western blot方法检测上皮间充质相关蛋白的表达变化。结果:MSH6在结直肠癌细胞系中表达上调,其中RKO、SW620、LOVO细胞系上调明显,敲低MSH6明显限制了结直肠肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,同时导致E-cadherin 蛋白水平增加,N-cadherin和Vimentin蛋白表达下降。结论:MSH6在结直肠癌中表达上调,敲低MSH6可抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞发生凋亡并能够逆转EMT的发生。     

miR-20 b对大肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究

目的：探讨miR-20b对大肠癌（ CRC）细胞增殖凋亡的影响及机制。方法将miR-20b模拟物转染CRC细胞株HCT-116,qRT-PCR检测转染后miR-20b的表达,分别应用CCK-8实验及流式细胞仪检测转染后细胞增殖和凋亡情况。 qRT-PCR和western blot检测转染后Bcl-w mRNA和蛋白的表达情况。结果转染miR-20b模拟物后,HCT-116细胞中miR-20b表达水平明显上调,HCT-116细胞增殖减弱（P＜0．05）,凋亡增强（P＜0．05）。 miR-20b可作用于Bcl-w mRNA的3′-UTR,使海肾荧光素酶活性显著降低。转染后Bcl-w mRNA及蛋白表达水平明显下调,差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论上调HCT-116细胞中miR-20b表达水平,可抑制其靶基因Bcl-w的表达,发挥抑制细胞增殖、增加凋亡的作用。     

siRNA敲减NEK2表达可提高结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性

目的：探讨敲减中心体相关激酶2（never in mitosis A-related kinase 2,NEK2）对结直肠癌细胞5-FU化疗敏感性的影响及其可能的机制。方法：采用 qPCR 和 Western blotting 检测结直肠癌细胞中 NEK2 mRNA 及蛋白的表达水平。构建针对NEK2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染至结直肠癌细胞HCT116及SW620,实验分为阳性干扰组1（转染NEK2 siRNA1）、阳性干扰组2（转染NEK2 siRNA2）和阴性对照组（转染si-NC）,均用5-FU处理。采用CCK-8实验、V-FICT/PI Annexin双染色流式细胞术实验观察敲减NEK2基因对5-FU作用下结肠癌细胞的增殖、周期分布及凋亡的影响,采用Western blotting检测敲减NEK2基因对5-FU作用下结直肠癌细胞内Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达的影响。结果：NEK2蛋白及mRNA在结直肠癌细胞HCT116、SW620中均呈高表达（P<0.05或P<0.01）,转染NEK2 siRNA可高效抑制HCT116、SW620细胞中NEK2蛋白及mRNA表达（均P<0.01）。经不同浓度5-FU作用后,阳性干扰组1和阳性干扰组2的细胞存活率和IC50均显著低于阴性对照组（均P<0.01）,细胞发生G0/G1期阻滞且凋亡率显著升高（均 P<0.01）,胞核 β-catenin、c-myc 和 cyclin D1 表达水平显著下降而胞质β-catenin表达水平升高（均P<0.01）。结论：敲减NEK2基因可有效提高人结直肠癌细胞对5-FU的化疗敏感性,该作用可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达来实现的。