跑台运动训练对脑缺血大鼠轴突导向因子Netrin-4及其受体DCC蛋白表达的影响

目的观察跑台运动训练对脑缺血大鼠脑组织中轴突导向因子Netrin-4及其受体结直肠癌缺失（DCC）蛋白表达的影响,旨在探讨运动训练促进脑缺血后神经功能恢复的相关机制。 方法取成年雄性SD大鼠63只,按随机数字表法分为假手术组（n=9）、模型组（n=27）和运动组（n=27）。模型组和运动组大鼠采用改良的Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血模型,假手术组大鼠手术方法同模型组和运动组,但是不插入线栓。运动组于造模成功后24h采用跑台训练器进行运动训练,其余2组则不进行运动训练。采用修正的神经行为学评分方法（mNSS）评价模型组和运动组大鼠造模后第3、7、14天的神经功能,并断头取脑,采用Western blot法以及免疫荧光法检测脑缺血区组织中Netrin-4、DCC蛋白的表达情况。 结果造模后第3、7、14天,运动组和模型组的mNSS评分与假手术组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）;造模后第7、14天,运动组的mNSS评分分别为（6.89±1.27）分和（5.22±1.09）分,低于模型组同时间点,差异均有统计学意义（P<0.05）;造模后第7、14天,运动组的Netrin-4、DCC蛋白表达均较模型组增强（P<0.05）;造模后第14天,经免疫荧光法检测发现,Netrin-4主要在脑缺血区的血管和星形胶质细胞中表达,而DCC蛋白主要在脑缺血区的神经元轴突和星形胶质细胞中表达。 结论跑台运动训练可促进脑缺血大鼠神经功能恢复,其机制可能与上调脑缺血区组织中Netrin-4、DCC蛋白的表达,进而增强了神经、血管的再生和重建有关。     

运动训练对脑缺血大鼠PI3/Akt抗凋亡信号转导通路的影响

目的观察运动训练对脑缺血大鼠磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）抗凋亡信号转导通路的影响，探讨运动训练促进脑缺血后神经功能恢复可能的信号通路。 方法成年雄性SD大鼠24只，随机分成运动组、对照组和假手术组，每组8只。用大脑中动脉闭塞法造模24 h后，运动组给予Treadmill跑台训练，每天30 min，连续训练2周，对照组及假手术组不进行运动干预。采用Western blot方法定量检测PI3K/Akt通路的磷酸化水平，并定量测定凋亡相关蛋白Bax的表达。 结果2周后，运动组PI3K/Akt通路中p-PI3K、p-Akt的磷酸化水平明显高于对照组（P＜0.05），而凋亡相关蛋白Bax的表达则明显低于对照组（P＜0.05）。 结论运动训练能促进脑缺血大鼠神经功能恢复，这种改变可能与PI3K/Akt抗凋亡通路激活增加有关。     

跑台运动训练对脑缺血损伤大鼠胰岛素样生长因子-1及其受体表达的影响

目的探讨跑台运动训练对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复和脑缺血组织中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其受体（IGF-1R）表达的影响。 方法42只清洁级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组（n=6）、模型组(n=18)和运动组(n=18)。模型组、运动组大鼠采用改良的Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血模型。运动组于造模成功后24 h采用跑台训练器进行运动训练, 每周6 d,共4周;其余2组则置于普通笼内饲养, 期间可自由活动、进食。采用修正的神经行为学评分方法评价模型组和运动组大鼠MCAO术后第7,14,28天的神经功能,并断头取脑,采用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）法和免疫组织化学方法检测脑缺血组织中IGF-1、IGF-1R的表达。 结果运动组大鼠术后14,28 d神经功能评分均明显优于模型组（P<0.01和P<0.05）;运动组大鼠术后7,14,28 d,IGF-1、IGF-1R表达较模型组明显增强（P<0.05或P<0.01）。 结论运动训练可促进脑缺血大鼠神经功能恢复,其机制可能与上调脑缺血组织中IGF-1、IGF-1R表达有关。     

跑台运动训练对脑缺血损伤大鼠热休克蛋白70及C-MYC表达的影响

目的探讨跑台运动训练对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复和脑缺血组织中热休克蛋白70（HSP70）及C-MYC表达的影响。 方法将42只清洁级成年雄性SD大鼠分为假手术组6只、模型组18只、运动组18只。模型组、运动组大鼠采用改良的Longa线栓法制备大脑中动脉闭塞（MCAO）脑缺血模型,运动组于造模成功后24 h采用跑台训练器进行运动训练,每周6 d,共2周,其余2组则置于普通笼内饲养,期间可自由活动、进食。采用修正的神经行为学评分方法评价模型组和运动组大鼠MCAO脑缺血后第3,7,14天的神经功能,并断头取脑,采用逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法、免疫组织化学和Western blot法检测脑缺血组织中HSP70、C-MYC的表达。 结果运动组大鼠脑缺血第7,14天神经功能评分均明显优于模型组（P<0.05或0.01）;运动组大鼠脑缺血第7,14天HSP70和C-MYC表达较模型组增强（P<0.05或0.01）。 结论运动训练可促进脑缺血大鼠神经功能恢复,其机制可能与上调脑缺血组织中HSP70及C-MYC表达有关。     

TGF-β1 siRNA对肝星状细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响

【目的】观察表达转化生长因子(TGF)小干扰RNA(siRNAs)的siTGF质粒,对肝星状细胞激活信号的影响。【方法】通过构建表达TGF之siRNAs的siTGF质粒,将6μg siTGF转染HSC-T6细胞质粒后,分别在d1,d3,d5提取细胞总mRNA,并收集细胞上清液,采用RT-PCR检测其Smad3、Smad7的mRNA的表达变化,放射免疫法测上清液Ⅲ型前胶原含量变化。【结果】smad3s、mad7的mRNA在d1,d3,d5分别下调为0%、61%、70%和0%、15%、16%,上清液Ⅲ型前胶原含量为0%、(42±5)%(、55±7)%。【结论】TGF-β1siRNA下调肝星状细胞激活信号,减少胶原合成,表明TGF-β1siRNA有望成为抗肝纤维化新的手段。     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化

【目的】探讨转化生长因子（TGF-β1）诱导HL-60细胞凋亡后Smads蛋白的变化。【方法】用不同浓度的TGF-131处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测Smads蛋白。【结果ITGF-β1对HL-60细胞有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性,10．4ng／mL TGF-β1增殖抑制作用较为明显;在细胞凋亡过程中,Smad3、Smad7表达呈逐渐升高趋势（P〈0．05）,而Smad2、Smad4则无明显变化。【结论】TGF-β1可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性;Smad3、Smad7可能参与TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡过程,其变化与HL-60细胞凋亡密切相关。     

TGF-β1/Smad4信号通路在SD大鼠胚胎心脏发育中的作用及意义

目的:观察E11-E19 SD大鼠胚胎心脏形态变化及TGF-β1、Smad4的表达,并探讨其与大鼠胚胎心脏发育间的相互关系和作用机制.方法:HE染色观察SD大鼠胚胎心脏发育变化;半定量PCR法检测TGF-β1、Smad4在E11-E19心脏中的表达情况.结果:E11-E19 SD大鼠心脏由原始心管状发育成为形态和功能都较成熟心脏.TGF-β1和Smad4表达由弱到强再减弱;TGF-β1表达高峰出现在E14,Smad4高峰出现在E17.结论:对SD大鼠心脏E11至E19连续观察为了解胚胎心脏发育过程提供了有价值的参考依据,TGF-β1/Smad4信号通路在SD大鼠胚胎心脏发育不同期间发挥着不同的作用.E11-E12主要起促进细胞增殖的作用;在E13-E15过程中主要发挥诱导细胞分化的功能,E16-E19起到维持细胞增殖和分化作用.     

不同强度跑台运动对脑缺血大鼠学习记忆及细胞周期蛋白表达的影响

目的:探讨不同强度跑台运动预处理对脑缺血大鼠学习记忆及细胞周期蛋白表达的影响。方法:将80只健康雄性SD大鼠随机分为正常组(n=20)、模型组(n=20)、强度Ⅰ组(n=20)和强度Ⅱ组(n=20)。造模前2周开始对强度Ⅰ和强度Ⅱ组大鼠进行跑台运动训练,其中强度Ⅰ组设置为20m/min*30min,强度Ⅱ组使大鼠运动强度递增,在3min内由10m/min的速度提高到预定的19.3m/min的速度,保持速度直到力竭。用四血管阻断法(Pulsinelli 4VO法)制备全脑缺血模型,分别在建模后3h、6h、24h、48h进行HE染色法观察各组大鼠脑组织神经元细胞形态的变化情况,免疫组织化学染色法检测各组大鼠脑组织海马区细胞周期蛋白A(CyclinA)和细胞周期蛋白E(CyclinE)的表达情况。建模后48h大鼠在处死前采用水迷宫检测各组大鼠学习记忆功能。结果:与正常组比较,其他三组神经元存活数目显著减少,逃避潜伏期明显延长,穿台次数明显减少,差异均有显著性意义(P0.05)。其中,模型组神经元存活数目、穿台次数明显少于强度Ⅰ组(P0.05),显著高于强度Ⅱ组(P0.05),逃避潜伏期明显长于强度Ⅰ组(P0.05),显著短于强度Ⅱ组(P0.05)。与正常组比较,模型组各时间点CyclinA、CyclinE的表达水平明显增加(P0.05)。这两个因子的表达在模型组中多于强度Ⅰ组(P0.05),但明显少于强度Ⅱ组(P0.05)。结论:中强度的跑台运动可保护脑组织,改善全脑缺血大鼠学习记忆功能,但高强度的运动会产生不良反应,可能与调控全脑缺血再灌注大鼠细胞周期蛋白的表达有关。     

小鼠急性脑缺血再灌注后转化生长因子β1对细胞凋亡的保护机制

目的：探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响。方法：用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型，立体定向侧脑室内注入转化生长因子β1，观察不同剂量TGF-β1对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡的影响。结果：TGF-β1小、高剂量治疗组细胞凋亡较对照组均明显降低，神经功能缺损评分亦明显下降，小剂量与高剂量组间比较无明显差异。结论：TGF-β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，且与剂量无明显关系；其机制可能为抑制神经细胞凋亡。     

缺血预处理对大鼠局灶性脑缺血bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的观察缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法将SD大鼠分为两组:缺血预处理组(PI)及单纯缺血组(CI),采用尼龙线栓法制作了大鼠局灶性脑缺血模型,通过免疫组化染色技术及原位末端标记技术(TUNEL)检测大鼠大脑皮质bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡情况。结果PI组较CI组缺血皮层bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01)。PI组缺血皮层凋亡细胞较CI组明显减少(P<0.05)。结论缺血预处理使缺血脑组织bcl-2蛋白表达增强,抑制凋亡细胞产生,说明缺血预处理对再次脑缺血有保护作用。     

运动训练对大鼠局灶性脑缺血后微血管新生的影响

目的：探讨运动训练对局灶性脑缺血后微血管新生的影响。方法：55只SD大鼠随机分为假手术对照组、模型组、康复组；模型组和康复组动物以线栓法制成大鼠左侧大脑中动脉梗死模型，康复组术后1天开始进行运动训练．每周5天，共4周；其余两组常规饲养。以免疫组织化学法检测血管内皮生长因子（VEGF）、因子表达，测定微血管密度。结果：大鼠大脑中动脉栓塞后，缺血区神经元变性、坏死，VEGF和因子在缺血周边区表达明显增加．经运动训练干预后，VEGF和因子表达大量增加，做血管数目明显增加。结论：运动训练可通过促VEGF表达上调．促进微血管新生。     

小鼠急性脑缺血再灌注后转化生长因子β1对细胞凋亡的保护机制

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响.方法用线栓法建立局灶脑缺血再灌注模型,立体定向侧脑室内注入转化生长因子β1,观察不同剂量TGF-β1对局灶脑缺血再灌注损伤及对细胞凋亡的影响.结果TGF-β1小、高剂量治疗组细胞凋亡较对照组均明显降低,神经功能缺损评分亦明显下降,小剂量与高剂量组间比较无明显差异.结论TGF-β1对脑缺血再灌注损伤具有保护作用,且与剂量无明显关系;其机制可能为抑制神经细胞凋亡.     

跑台运动对骨质疏松大鼠骨组织Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 研究跑台运动对骨质疏松大鼠骨代谢的影响以及Wnt/β-catenin信号通路在运动影响骨代谢中的调节作用。 方法 选取2月龄SD雌性大鼠32只,按随机数字表法分为假手术安静组（S组）、去卵巢安静组（O组）、假手术运动组（ST组）和去卵巢运动组（OT组）,每组大鼠8只。采用去卵巢手术制造大鼠绝经后骨质疏松模型,O组和OT组均摘除卵巢,S组和ST组大鼠的手术只进行到找到卵巢,但并不摘除卵巢。造模成功后,S组和O组大鼠在饲养笼中自由活动,ST组和OT组大鼠除在饲养笼中自由活动外,每日还进行跑台训练。于ST组和OT组最后1次运动结束24 h后（入组10周后）处死4组大鼠,分别采用双能X线骨密度仪测定大鼠股骨骨密度（BMD）,全自动生化分析仪检测血清钙（Ca）、磷（P）、碱性磷酸酶（ALP）含量,放射免疫法检测血清骨钙素（BGP）活性,三点弯曲试验检测股骨生物力学指标,Western blot测定骨组织Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。 结果 入组10周后,O组大鼠BMD显著低于S组大鼠,ST组大鼠BMD显著高于S组大鼠,OT组大鼠BMD显著高于O组大鼠BMD,组间差异均有统计学意义（P<0.05）;ST组大鼠Wnt/β-catenin信号通路蛋白P-GSK-3β的相对表达量为（0.51±0.06）,显著低于S组的（0.80±0.05）,组间差异有统计学意义（P<0.05）,而ST组大鼠β-catenin和cyclin D1的相对表达量均显著高于S组,组间差异均有统计学意义（P<0.05）;OT组大鼠Wnt/β-catenin信号通路蛋白P-GSK-3β的相对表达量显著低于O组,而β-catenin和cyclin D1的相对表达量则显著高于O组,组间差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 跑台运动可显著改善骨质疏松大鼠的骨代谢,其机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关。     

运动训练对脑缺血大鼠神经功能及梗死边缘区细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨运动训练对急性脑缺血大鼠神经功能及脑皮质梗死边缘区细胞增殖与凋亡的影响.方法:采用改良Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,将大鼠随机分成运动训练组(n=15)、对照组(n=15)和假手术组(n=9).运动训练组大鼠从术后1d开始每天予以跑笼运动训练;对照组和假手术组大鼠置于普通笼内饲养,不予以任何针对性训练.3组大鼠在造模术后1d、8d和15d分别进行神经功能评分(mMSS),并采用Ki67免疫荧光、TUNEL法分别观察脑皮质梗死边缘区细胞增殖、凋亡,以Western印迹法检测Bcl-2与Bax蛋白表达的情况.结果:在造模术后8d和15d,训练组大鼠的神经功能评分(mNSS)均明显优于对照组,差异有显著性意义(P＜0.05);免疫荧光结果显示,训练组大鼠脑皮质梗死边缘区Ki67阳性细胞增加,且以造模术后8d最明显,与对照组相比,差异有显著性意义(P＜0.05);在造模术后8d和15d,训练组TUNEL阳性细胞数较对照组明显减少,同时,训练组梗死边缘区Bcl-2的表达高于对照组,Bax的表达低于对照组.结论:运动训练能够促进急性脑梗死大鼠神经功能的恢复,其机制可能与促进皮质梗死边缘区细胞增殖、减少细胞凋亡有关.     

跑台运动训练对脊髓损伤大鼠肺功能及HMGB-1表达的影响

目的:探讨跑台运动训练对脊髓损伤(SCI)后大鼠肺功能及高迁移率族蛋白B1 (HMGB1)表达的影响.方法:选取96只SD雌鼠,随机分成4组,即正常组、假手术组、脊髓损伤非训练组、脊髓损伤训练组.脊髓损伤训练组大鼠于术后第3天开始进行跑台运动训练.分别在术后第3天、术后第14天检测4组大鼠动脉血气分析,肺组织湿/干重比...     

火把花根对系膜增殖性肾炎大鼠TGF-β1和Smad3表达的影响

目的探讨火把花根对MsPGN大鼠TGF-β1和Smad3表达的影响。方法将Wistar大鼠随机分为正常对照组、MsPGN肾炎非治疗组(模型组)和MsPGN肾炎火把花根治疗组。用抗胸腺细胞血清诱发造模。于给药14d后,测量24h尿蛋白,处死大鼠,用PAS染色观察肾脏病理变化;RT-PCR检测肾组织中TGP-β1和Smad3的mRNA表达。采用Western blot检测TGF-β1和Smad3蛋白定量的表达。结果与正常组相比,MsPGN肾炎大鼠24h尿蛋白排出增加;肾小球ECM明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1和Smad3 mRNA表达上调;TGF-β1和Smad3蛋白的表达明显增加。火把花根治疗后上述指标明显减轻。结论TGF-β/Smad通路在MsPGN肾炎时是激活的,火把花根治疗可延缓肾脏损害。     

实验性大鼠急性脑缺血细胞凋亡与相关蛋白表达的关系

目的：研究大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡及p53，Bcl-2蛋白家族表达的变化，并探讨它们在细胞凋亡中的作用。方法：实验在华北煤炭医学院形态实验室完成。54只大鼠用随机数字表法随机分成3组：脑缺血组(42只)、假手术组(6只)和正常组(6只)。脑缺血组又分为7组：即缺血2h再灌注1，3，6，12，24，48和72h组(n=6)。采用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型，用TUNEL法检测细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测p53，Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。结果：①缺血2h再灌注1h皮质区可见凋亡细胞[(7．83&;#177;1．72)个／高倍视野]，24～48h达高峰[(43．33&;#177;5．20)个／高倍视野，(48．50&;#177;6．25)个／高倍视野]，72h开始下降[(26．67&;#177;3．56)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见p53蛋白阳性细胞[(14．35&;#177;1．92)个／高倍视野]，24h达高峰[(48．00&;#177;6．42)个／高倍视野]，48h后开始下降[(31．00&;#177;6．60)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bcl-2蛋白阳性细胞[(28．62&;#177;6．80)个／高倍视野]，3h达高峰[(56．50&;#177;7．87)个／高倍视野]，6h后开始下降[(45．00&;#177;6．63)个／高倍视野](P&;lt;0．01)；缺血2h再灌注1h皮质区可见Bax蛋白阳性细胞[(45．83&;#177;4．07)个／高倍视野]，24h达高峰[(61．00&;#177;8．88)个／高倍视野]，48h开始逐渐下降[(45．83&;#177;6．49)个／高倍视野](P&;lt;0．05，P&;lt;0．01)。②缺血再灌注后不同时间点细胞凋亡数与p53及Bax蛋白的阳性表达数呈正相关(r=0．843，P&;lt;0．001；r=0．840，P&;lt;0．001)，与Bcl-2蛋白的阳性表达数呈负相关(r=-0．387，P&;lt;0．05)。结论：大鼠脑缺血再灌注后，缺血周边区发生明显的细胞凋亡，同时伴有p53及Bax蛋白表达增加及Bcl-2表达降低，p53及Bax蛋白表达对细胞凋亡起促进作用，而Bcl-2蛋白表达则对细胞凋亡起抑制作用。     

pHGF对脑缺血再灌注大鼠Caspase-3表达的影响

目的:研究促肝细胞生长因子(pHGF)对脑缺血再灌注损伤神经元的抗凋亡作用及Caspase-3表达的影响。方法:48只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组和pHGF治疗组。采用血管内线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,应用TTC染色检测脑梗死体积、TUNEL法和免疫组化法检测神经元凋亡、Caspase-3蛋白表达。结果:与模型组相比,pHGF治疗组脑组织脑梗死体积、凋亡细胞数和Caspase-3表达减少(P<0.05)。结论:pHGF可减少脑梗死体积,减少脑缺血再灌注神经元Caspase-3表达,抑制神经元凋亡的作用。     

TREK-1通道活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响

目的:观察双孔钾通道TREK-1活性改变对大鼠局灶性脑缺血后细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法:45只大鼠随机分为假手术组(10只)、对照组(10只)和干预组(25只)。建立大鼠光化学脑缺血模型,假手术组不注射玫瑰红,干预组侧脑室注射不同浓度(100μmol/L、250μmol/L、500μmol/L、1 mmol/L)亚麻酸(LIN),对照组注射等量生理盐水。应用免疫荧光双标法观察正常生理情况下TREK-1在大脑神经细胞中的表达,TUNEL及DAPI双标法检测缺血边缘区细胞凋亡,Western blot法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-erk)表达。结果:正常生理情况下,TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。与假手术组相比,对照组大量细胞凋亡,Bcl-2/Bax值下降,p-erk蛋白增加(P<0.05);与对照组比较,干预组细胞凋亡显著减少,Bcl-2/Bax值上升,p-erk蛋白降低(P<0.05)。结论:TREK-1在神经元和星形胶质细胞中均有表达。TREK-1激动剂LIN可显著抑制脑缺血后细胞凋亡,上调Bcl-2与Bax比值,抑制erk磷酸化。