低剂量地西他滨联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用

 目的　研究低剂量地西他滨（DAC）联合伊马替尼（IM）对K562细胞株的增殖抑制作用及对bcr-abl表达的影响。方法　单药及两药联合后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察药物对K562细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物对K562细胞株早期凋亡率及细胞周期,巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测药物对K562细胞株bcr-abl mRNA表达。结果　DAC与IM单药对K562细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性。两药联合用药抑制作用较单药组明显（F＝43.947、165.580、321.193、296.101,均P＜0.05）,24、 48、72 h各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（F＝202.759、168.457、417.538,均P＜0.05）。DAC及IM单药作用药物对K562细胞株均使G1期细胞明显增多,IM 0.2 μmol／L作用于K562细胞株48 h可见6.7 %早期凋亡细胞,IM 0.2 μmol／L联合DAC 4 μmol／L早期凋亡细胞增加至8.4 %。bcr-abl mRNA表达水平降低,DAC 4 μmol／L作用48 h后可降低K562细胞中bcr-abl mRNA表达（约14 %）,IM 0.2 μmol／L降低约40 %,联合用药表达量明显降低（约60 %）。联合用药组与单药组比较差异有统计学意义（F＝71.981,P＜0.05）。结论　DAC 对K562细胞的增殖抑制作用与细胞周期阻滞、诱导凋亡及降低bcr-abl mRNA表达有关,两药联合可显著抑制K562细胞增殖。     

三氧化二砷联合伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病急变期五例

 目的 探讨三氧化二砷（As2O3）联合伊马替尼（STI571）治疗慢性粒细胞白血病（CML）急变期的临床疗效。方法 回顾性分析2003年12月至2006年2月采用As2O3联合STI571治疗5例CML急变期疗效及毒副反应。结果 5例患者治疗后4例获完全血液学反应（CHR）,其中1例获主要细胞遗传学反应（MCR）,1例未缓解（NR）。结论 As2O3联合STI571治疗CML急变期疗效较为显著。     

伊马替尼对慢性粒细胞白血病患者生育及生殖的影响

伊马替尼对慢性粒细胞白血病的分子靶向性治疗获得了极大的成功,病人的生存时间延长,生活质量接近正常人。由于伊马替尼可能导致畸形,通常建议患者服药治疗期间避免妊娠。近年来,伊马替尼治疗的患者中选择妊娠及合并妊娠、成功分娩的个案多有报告,但尚无流行病学的大样本研究结果支持伊马替尼治疗的患者可以选择生育,对伊马替尼治疗影响生育和生殖的研究也仅停留于动物实验。本文就伊马替尼对慢性粒细胞白血病患者生育和生殖的影响作一综述。     

干扰素联合化疗与伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病的疗效比较分析

目的比较分析干扰素联合化疗与伊马替尼治疗慢性粒细胞白血病(CML)的临床疗效。方法 72例新诊断的Ph染色体阳性CML慢性期患者根据治疗方案的不同随机分为干扰素联合化疗组和伊马替尼组,并比较2组临床疗效。结果 2组总有效率比较差异无统计学意义(P>0.05);伊马替尼组完全血液学缓解率、完全细胞遗传学缓解率、完全分子学效应率、5 a总生存率均明显高于干扰素联合化疗组(P<0.05)。结论干扰素联合化疗和伊马替尼均可作为CML慢性期的有效治疗方法。     

伊马替尼联合造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病

 目的 研究伊马替尼（商品名：格列卫）对异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）和自体外周血造血干细胞移植（APBSCT）的影响。方法 18例慢性粒细胞白血病（CML）分为2组：①al-lo-HSCT组14例,其中10例为CML加速期（AP）和急变期（BP）,4例为CML慢性期（CP）,移植之前格列卫疗程中位数为25（7～60）d,供受者HLA完全相合,亲缘相关供者9例、非亲缘供者5例,预处理方案为TBI+Cy+VP16或Bu／Cy±ATG,GVHD预防按常规方案进行;②APBSC动员4例,均为CML-CP患者,格列卫治疗的中位数疗程5.5（4～26）个月,动员前反复IFISH-bcr／abl阳性率0～2%,动员方案CAE+G-CSF,其中3例经TBI+Cy+VP16预处理后进行了APBSCT。结果 4例患者经G-CSF动员第5天分离自体外周血干细胞（APBSC）1次,得CD+34细胞的中位数6.8（3.9～9.6）×106／kg,动员产品中IFISH-bcr／abl阳性细胞比例高于动员前骨髓细胞（2.8 %∶0.8 %）,4例动员PBSC的患者中3例进行了APBSCT,移植后随访中位时间24（18～28）个月,2例复发,1例持续IFISH-bcr／abl阴性。14例allo-HSCT患者中位随访8（4～20）个月,造血重建需要8～21 d,发生GVHD 8例,白血病复发2例,移植相关并发症死亡2例,复发死亡1例,无病生存9例。结论 格列卫治疗后对CML患者造血干细胞的动员、移植结果无明显影响。     

反义ras基因增强足叶乙甙对白血病K562细胞的诱导凋亡作用

目的 研究ras p21蛋白在bcr-abl p210蛋白抗凋亡信号传导通路中的作用。方法 应用逆转录病毒载体pLXSN将反义N－ras1 cDNA转导到K562细胞系中后，通过足叶乙甙对细胞进行诱导凋亡。结果 转导反义N－ras1 cDNA的K562细胞内N－ras p21表达下降。反义N－ras转民细胞较对照细胞K562易发生凋亡，对药物的敏感性显著增高。结论 ras p21蛋白是bcr-abl p210蛋白介导抗凋亡信号的重要的下游蛋白，阻断该蛋白的功能有可能成为治疗人类慢性髓性白血病的1个选择点。     

药物蛋白核苷酸多态性对靶向药物伊马替尼敏感性的影响

作为第一代酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors,TKIs）,伊马替尼是临床上用于治疗慢性粒细胞白血病（chronicmyelogenous leukemia,CML）的一线药物。然而在临床治疗中,部分患者口服伊马替尼后疗效并不理想,出现伊马替尼耐药的情况。伊马替尼耐药机制比较复杂,除了TKIs的突变,国内外研究还发现ABC家族转运蛋白（ATP-binding cassette transporters,ABC）,有机阴离子转运体及有机阳离子转运体对伊马替尼药代动力学与药效学具有影响。本文主要从影响伊马替尼疗效的药物转运体基因多态性对伊马替尼治疗CML患者个体疗效差异予以综述,为进一步的临床研究提供参考依据。      

超声体外诱导白血病细胞K562凋亡的研究

 目的 研究超声对诱导白血病细胞K562凋亡的作用,为超声治疗的临床应用提供实验依据。方法 以人慢性粒细胞白血病急变细胞株K562为研究对象,用频率为1.8 MHz的超声波辐照白血病细胞K562,用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 超声辐照K562细胞后24 h,8 mV×5 min组及8 mV×10 min组细胞凋亡率分别为2.3 %和8.28 %;10 mV×5 min及10 mV×10 min组细胞凋亡率分别为9.36 %和21.46 %。电压为7mV时,超声辐照K562细胞后0.5 h,1 h,3 h,5 h细胞凋亡率分别为1.9 %,3.6 %,5.7 %,7.7 %。同时光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变。结论 超声可以诱导白血病K562细胞凋亡。     

伊马替尼治疗小儿CML及对BCR-ABL融合基因转归的影响

目的 分析应用伊马替尼治疗小儿慢性粒细胞白血病(CML)及对BCR-ABL融合基因转归的影响。方法选取CML患儿86例，按随机数字表法分为研究组(n=43)和对照组(n=43),对照组予以第一代伊马替尼，研究组予以第二代伊马替尼。对比两组血液学疗效、BCR-ABL融合基因转归情况、血液学不良反应发生率、非血液学不良反应发生率、2年生存率。结果 研究组总缓解率[88.37%(38/43)]较对照组[65.12%(28/43)]高(P<0.05);研究组BCR-ABL^IS≤10%达标率[95.35%(41/43)]、BCR-ABL^IS≤0.0032%达标率[51.16%(22/43)]较对照组[67.44%(29/43)]、[20.93%(9/43)]高(P<0.05);研究组血液学不良反应发生率[6.98%(3/43)]与对照组[11.63%(5/43)]对比无显著差异(P>0.05);研究组非血液学不良反应发生率[4.65%(2/43)]与对照组[16.28%(7/43)]对比无显著差异(P>0.05);研究组2年生存...     

ADAR1 shRNA对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响

目的:探讨ADAR1 shRNA对人白血病细胞株K562细胞增殖的影响。方法:利用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitative real time PCR,qRT-PCR）和蛋白质印记法（Western-blot）检测ADAR1在慢性粒细胞白血病(急变期)患者和正常成人中的表达。培养人白血病细胞株K562细胞,用慢病毒介导的siRNA转染K562细胞,建立稳定的敲减ADAR1的K562细胞株（shADAR1）,qRT-PCR和Western-blot方法检测K562细胞和shADAR1细胞中ADAR1的mRNA和蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖情况。结果:ADAR1的mRNA表达和蛋白水平在慢性粒细胞白血病(急变期)患者中的表达明显高于正常成人（P＜0.05）。shADAR1细胞中ADAR1的mRNA和蛋白表达明显低于K562细胞（P＜0.05）。shADAR1细胞增殖率明显低于K562细胞（P＜0.05）。 结论:ADAR1在慢性粒细胞白血病(急变期)患者中表达增加,通过siRNA抑制ADAR1的表达能明显抑制人白血病细胞株K562细胞增殖,ADAR1基因可能成为治疗慢性粒细胞白血病的新靶点。     

喷他脒增强K562细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导凋亡敏感性

背景与目的：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种理想的抗肿瘤药物，但许多肿瘤细胞常对TRAIL。诱导凋亡耐受。本研究探讨了喷他脒增强白血病K562细胞对TRAIL。诱导凋亡敏感性方法：利用光镜彤态学和Annexin V FITC／PI双标记凋亡细胞的流式细胞仪（FACS）测定两种方法观察喷他脒预处胛K562细胞并继用TRAIL后凋亡的发生，应用蛋白印迹方法观察此过程中半胱氯酸一天冬氨酸蛋白酶（Caspase）-3，-8和聚ADP核糖聚合酶（PARP）等3种蛋白的蛋白剪切与X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）蛋白表达的改变，结果：在10μg／ml喷他脒作用K562细胞20h，K562细胞未发生凋亡，继用200ng／ml TRAIL。作用4h后，光镜和Annexin V FITC／PI双标记流式细胞仪方法均观察到细胞发生明显凋亡，井出现了Caspase-3，-8和PARP蛋白剪切．两者单独作用则无明显细胞凋亡发生．另外，喷他脒明显降低了XlAP表达结论：喷他眯联合TRAIL可能成为肿瘤治疗的一种新策略。     

伊马替尼对K562细胞内SHIP基因表达的影响及促凋亡作用

目的:观察甲磺酸伊马替尼干预K562细胞后SHIP、caspase-1、caspase-3、caspase-9及bcl-2基因表达的变化,初步探讨伊马替尼促凋亡的作用途径。方法:将不同浓度甲磺酸伊马替尼与K562细胞在体外共培养,于不同时段留取标本,采用实时定量PCR方法检测SHIP基因表达水平的变化,并用半定量逆转录PCR方法检测抗凋亡基因bcl-2及促凋亡基因caspase-1、caspase-3、caspase-9表达水平的变化,用MTT法观察伊替尼对细胞增殖的抑制作用,用膜联蛋白Ⅴ/碘化丙锭(AnnexinⅤ/PI)双标记法分析细胞凋亡。结果:甲磺酸伊马替尼可使K562细胞内SHIP基因表达水平升高,且与剂量和作用时间有关;caspase-9表达水平亦升高并与SHIP基因表达水平有直线相关关系;而caspase-1、caspase-3和bcl-2表达水平无显著变化;伊马替尼可使细胞增殖率降低、凋亡率增加,并可见到明显的形态学变化。结论:甲磺酸伊马替尼可使K562细胞内SHIP及caspase-9基因表达水平升高且可促进细胞凋亡,其促凋亡作用机制可能与上调SHIP和caspase-9基因表达有关。     

Hsp90抑制剂新生霉素诱导K562细胞凋亡的机制

目的研究Hsp90抑制剂新生霉素（novobiocin,NB）诱导K562细胞凋亡的作用,探讨该作用与线粒体凋亡途径的关系,并进一步研究NB对Hsp90客户蛋白（client protein）AKT和ERK功能的影响。方法细胞用NB处理后,采用AO／EB双染后检测细胞凋亡,分光光度法检测Caspase-9和Caspase-3的活性,用蛋白免疫印迹法检测细胞色素C的含量,以及procaspase-3、p-AKT和p-ERK的蛋白水平。结果NB能显著抑制K562细胞增殖,IC50是0．4353mM;NB能促进细胞色素C释放入胞浆,激活caspase-3／9的活性,触发K562细胞凋亡;NB能抑制AKT和ERK的功能,使细胞内p-AKT和p-ERK的蛋白含量减少。结论NB可通过线粒体途径诱导K562细胞凋亡,还可干扰Hsp90伴侣功能阻断增殖信号通路,抑制K562细胞生长。     

靶向激活蛋白激酶PKR诱导白血病K562细胞凋亡

目的: 采用双链RNA能激活细胞内蛋白激酶PKR引起细胞凋亡的策略,研究重组慢性粒细胞白血病独特的bcr/ab1 b3a2型外源反义RNA诱导白血病K562细胞的凋亡及其作用机制.方法: 用含bcr/abl融合基因序列40 bp的反转录病毒载体RV-40AS作用于白血病K562细胞,以光学显微镜、电子显微镜、FCM法和DNA梯状条带法检测细胞凋亡情况,化学比色法检测caspase-8和caspase-9活性变化,RT-PCR法检测Bax、Bcl-2 mRNA表达变化,并以Western印迹法检测双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)、磷酸化PKR(p-PKR)、Bax和Bcl-2的蛋白变化.结果: RV-40AS作用K562细胞组在光学显微镜下出现胞体皱缩、染色质浓集以及折光性减弱,电子显微镜下可见细胞质电子密度增大、核固缩和出现凋亡小体;FCM法检测到凋亡细胞占(22.70±1.42)%[未处理组(3.24±0.66)%],DNA电泳出现典型的梯状条带;caspase-8和caspase-9活性升高,PKR蛋白无明显变化,但p-PKR水平升高;Bax的mRNA和蛋白表达均升高,而Bcl-2mRNA和蛋白表达水平没有明显变化.对照组和PKR抑制剂处理组均未发生上述改变.结论: bcr/abl反义RNA反转录病毒载体RV-40AS可特异性激活PKR,从而诱导白血病K562细胞发生凋亡,其可能的机制是PKR活化激活了凋亡反应的上游分子caspase-8,并通过上调Bax表达水平、降低Bcl-2/Bax的比值,导致线粒体膜稳定性被破坏,促使凋亡小体形成和caspase-9活化,最终激活其他凋亡分子使细胞发生凋亡.     

淫羊藿苷促进白血病K562细胞凋亡的研究

目的：探讨淫羊藿苷对人慢性粒细胞白血病K562细胞的作用及其机制。方法将对数生长期K562细胞分成对照组和淫羊藿苷处理组。对照组细胞常规培养,淫羊藿苷处理组加入8μmol／L淫羊藿苷培养。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测K562细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞p85、Akt mRNA的表达,Western blot检测p85、Akt、p-p85、p-Akt、cleavage-caspase-3、caspase-3蛋白表达的变化。结果与对照组比较,淫羊藿苷处理组K562细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,K562细胞凋亡率和p85、Akt、cleavage-caspase-3蛋白表达均明显升高（均P＜0.05）, p85 mRNA、Akt mRNA、caspase-3蛋白表达水平差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论淫羊藿苷能抑制K562细胞增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过激活PI3K-Akt信号转导通路实现的。     

紫草素诱导人白血病细胞K562的凋亡

目的: 研究紫草素对人白血病细胞株K562增殖抑制和诱导凋亡作用.方法: 四氮甲唑蓝(MTT)观察细胞的生长状况,应用彗星分析法、TUNEL技术和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果: 紫草素在(1-9)×10-5mol/L浓度范围内能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度依赖性,9 X 10-5mol/L紫草素作用72h的K562细胞株A值最低;彗星分析法显示经紫草素作用的K562细胞出现长的彗尾条带;原位细胞凋亡可见细胞变小,核固缩为一个或多个染色质团块;流式细胞仪检测细胞凋亡主要发生在G1/S期.结论: 紫草素在体外一定浓度范围内能抑制K562细胞增殖,诱导凋亡.     

DNA damage response in imatinib resistant chronic myeloid leukemia K562 cells

Abstract Resistance to imatinib in patients with chronic myeloid leukemia can lead to advanced disease and blast crisis. Conventional chemotherapy with DNA damaging agents is then used, alone or in combination with other tyrosine kinase inhibitors (TKIs). Our aim was to assess whether imatinib resistant K562 cells were also resistant to DNA damaging agents. After treatment with H(2)O(2) and doxorubicin, but not camptothecin, cell survival was higher in imatinib resistant cells compared to parental cells. DNA damage, measured by comet and γ-H2AX assays, was lower in imatinib resistant cells. mRNA expression levels of 50 genes of the DNA damage response pathway showed increased expression of the base excision repair (BER) genes MBD4 and NTHL1. Knockdown of MBD4 and NTHL1 expression in resistant cells using siRNA decreased cell survival after treatment with H(2)O(2) and doxorubicin. Our results indicate that imatinib resistant cells display cross-resistance to oxidative agents, partly through up-regulation of BER genes. Expression of these genes in imatinib resistant patients was not significantly different compared to sensitive patients. However, the strategy followed in this study could help identify chemotherapeutic agents that are more effective as alternative agents in cases of resistance to TKIs.     

miR-153 sensitized the K562 cells to As2O3-induced apoptosis

Relapse remains the biggest hurdle of leukemia therapy, while elucidating the molecular mechanism holds promise for the solution. Recently, microRNAs are emerging as an important regulator of cell function. In this study, we for the first time found that miR-153 was downregulated in As2O3-induced drug-resistant K562 cells. In the CD34+ K562 subpopulation, which is characteristic of leukemia stem cell and resembles the drug-resistant subgroup, miR-153 expression level was also much lower than that in the bulk. Forced expression of miR-153 only in K562 cells has no significant effects on cell growth and apoptosis. However, when cells were additionally treated with As2O3, significant greater apoptosis was observed in the miR-153 overexpressed group. Our data here suggest that strategies increasing the endogenous miR-153 might hold promise for an alternative adjuvant therapy of leukemia.     

PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究PI3K/Akt抑制剂渥曼青霉素对白血病细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法: 以不同浓度的渥曼青霉素作用于人类髓细胞白血病细胞K562,采用MTT法检测细胞增殖活性,单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA损伤形成的“彗星”样拖尾现象,Annexin VFITC/PI双标法检测细胞凋亡,Western blotting、RTPCR检测渥曼青霉素作用K562细胞后总Akt和磷酸化Akt以及NFκB基因及蛋白表达水平的变化。结果: 渥曼青霉素以时间剂量依赖性方式抑制K562细胞的增殖,其24 h的IC50是25 nmol/L。渥曼青霉素诱导K562细胞发生凋亡,其作用呈明显剂量依赖性增强。渥曼青霉素作用后K562细胞DNA链断裂,呈现“彗星”拖尾现象,其尾长与拖尾率显著高于对照组(P<0.01)。渥曼青霉素能同时在蛋白和基因水平,以剂量依赖性方式抑制磷酸化Akt以及NFκB表达,但对总Akt蛋白没有明显影响。结论: 渥曼青霉素以时间和剂量依赖方式明显抑制K562细胞的增殖及诱导其凋亡,其机制可能与其下调磷酸化PI3K/Akt信号通路以及NFκB蛋白表达有关。     

慢病毒介导的 HO-1基因沉默对人白血病K562细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究沉默血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)基因对人慢性粒细胞性白血病(chronic myelogenous leu-kemia,CML)K562细胞增殖与凋亡的影响。方法:构建靶向HO-1基因的重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,将其感染K562细胞,荧光显微镜检测其最适感染复数(multipliciy of infection,MOI)。Western blotting检测Lv-siRNA-HO-1感染组、空载体Lv-Ctrl感染组及未感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达,CCK-8法、流式细胞术分别检测各感染组K562细胞的增殖与凋亡。结果:成功构建靶向HO-1基因的干扰表达载体PSIH1-HO-1-siRNA,包装后形成重组慢病毒Lv-siRNA-HO-1,其有效感染K562细胞MOI值为6。与未感染组相比,Lv-siRNA-HO-1感染组K562细胞中HO-1蛋白的表达显著降低[(0.16±0.02)vs(0.70±0.02),P<0.01],K562细胞增殖活性也明显下降[(1.36±0.12)vs(2.02±0.17),P<0.01)],而K562细胞凋亡率则显著增加[(62.77±4.39)%vs(14.19±1.6)%,P<0.01]。结论:慢病毒介导的HO-1基因沉默能抑制人白血病K562细胞增殖和诱导其凋亡。