PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达。设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率。每组实验重复3次。结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P<0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)%和(70.42±1.18)%;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞 D₀、D_q、N和SF₂值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P<0.01),放射增敏比(SER)为1.27。流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G₂/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P<0.01),经10 Gy X射线照射,G₂/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P<0.01)。两者联合使用后G₂/M期阻滞更加明显。siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P<0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(t=9.42、65.21,P<0.01)。结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关。     

放射诱导大鼠脑神经元和胶质细胞凋亡及敏感性的比较研究

目的　探讨X射线照射对大鼠脑神经元和胶质细胞凋亡的影响。方法　大白鼠分对照组及 2 ,4 ,6 ,8GyX射线照射组 ,照射后 1,2 ,4 ,6 ,12 ,2 4h分别取材进行光镜、电镜及DNA电泳观察 ,并用双标法计数凋亡的神经元数、胶质细胞数。结果　照射后鼠脑细胞系 2种细胞均产生凋亡的改变 ,胶质细胞凋亡率较神经元升高显著 (P <0 0 0 0 1) ,随着剂量的增高细胞凋亡率逐渐增多。结论　X射线能诱导鼠脑神经元和胶质细胞凋亡 ,凋亡率有剂量依赖性和时间规律性 ,其中胶质细胞最敏感。     

凋亡素2配体对射线诱导的肺腺癌H1975细胞凋亡的影响

目的 探讨凋亡素2配体(Apo-2L)对射线诱导的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药的肺腺癌H1975细胞凋亡作用的影响。方法 将肺腺癌H1975细胞分为空白对照组(未经任何处理)、药物组(凋亡素2配体组)、单纯照射组和药物联合照射组(凋亡素2配体+照射组),4组。同时,不同浓度的凋亡素2配体(200和228 ng/ml)作用于H1975细胞24 h后,均接受不同剂量的照射(照射剂量分别为1、1.5、2、2.5、3、3.5和4 Gy)。24 h后流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定H1975细胞的抑制率。结果 MTT结果显示腺癌H1975抑制率随凋亡素2配体浓度增加而升高(χ²=136.17,P<0.05),凋亡率随凋亡素2配体浓度及照射剂量增加而增加(不同浓度t=5.12、6.38、7.89、9.27、11.77、14.12,P<0.05;不同剂量F=5.89、6.97,P<0.05)。放射增敏作用与放射剂量和药物浓度呈正比(不同浓度t=1.37、1.45、1.67、1.90、2.34、3.72,P<0.05;不同剂量F=26.74,P<0.05)。流式细胞仪检测各组的凋亡率,结果显示药物联合照射组凋亡率明显增加,差异有统计学意义(χ²=78.02,P<0.05)。结论 凋亡素2配体对体外培养的腺癌H1975细胞有抑制增殖和促进凋亡作用,且联合射线能明显提高腺癌H1975细胞的凋亡率。     

环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察

目的 观察作用于环氧合酶2(COX-2)mRNA的发卡状COX-2(COX-2 shRNA)真核表达质粒对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计靶向COX-2基因的RNA干扰序列,构建COX-2 shRNA表达载体,用阳离子脂质体Lipofectamine 2000转染体外培养的HepG2细胞.半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA表达水平的变化,筛选有效抑制COX-2基因表达的序列.采用CCK-8细胞计数法检测COX-2 shRNA对细胞增殖的影响,流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting检测细胞内COX-2和Bcl-2蛋白表达水平.结果 测序结果显示成功构建了2个表达COX-2shRNA的质粒载体,转染HepG2细胞后COX-2 mRNA表达下降至阴性对照组的41.66％和77.79％.选择沉默效率较佳者转染细胞并经G418筛选,获得稳定表达COX-2 shRNA的细胞,胞内COX-2 mRNA表达水平下降了75.30％,细胞增殖活性下降了 29.33％.在稳定表达COX-2 shRNA、错义序列以及未转染的细胞中,细胞凋亡率分别为17.83％、4.63％和4.47％,G0/G1期细胞比例分别为73.93％、61.2％和57.630％,而S期细胞比例分别为13.43％、26.03％和26.90％.Westernblotting检测显示,表达COX-2 shRNA的HepG2细胞内COX-2蛋白水平下降至表达错义序列组的31.25％(P＜0.01),Bcl-2蛋白水平下降至表达错义序列组的54.93％(P＜0.01),而转染错义质粒组与未转染组之间比较差异无统计学意义.结论 构建的真核表达载体pSilencer 2.1-U6-COX-2 shRNA能有效沉默人肝癌HepG2细胞内COX-2基因的表达,并具有抑制细胞增殖、促进细胞凋亡和细胞周期阻滞、降低胞内抗凋亡蛋白(H)Bcl-2水平的作用.     

EZH2和Ki67蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达及意义

目的研究EZH2和Ki67蛋白在膀胱癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法对72例膀胱癌患者癌组织中的EZH2和Ki67蛋白进行测定。结果膀胱癌组织中EZH2及Ki67蛋白阳性率显著高于膀胱正常黏膜组织,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 EZH2蛋白表达增高与膀胱癌的临床分期,复发密切相关,并与Ki67正相关。联合检测EZH2及Ki67可以作为反映膀胱癌预后的生物学因子。     

龙葵碱对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响

目的 研究龙葵碱对骨肉瘤细胞放射敏感性的影响。方法 用龙葵碱处理骨肉瘤细胞,同时给予6 MV X射线照射,噻唑蓝（MTT）方法测定细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot检测细胞中Ki-67、PCNA、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平,JC-1法检测线粒体膜电位,DCFH-DA法检测细胞中ROS水平,平板克隆实验测定放射敏感性。结果 与未经龙葵碱和照射后的细胞比较,龙葵碱或照射处理后骨肉瘤细胞增殖能力和Ki-67、PCNA蛋白水平均降低（F=55.165、50.667、23.389,P<0.05）,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平均升高（F=54.588、42.924、51.541,P<0.05）,线粒体膜电位下降（F=40.762,P<0.05）,细胞中ROS水平升高（F=79.055,P<0.05）。与龙葵碱或单纯照射的细胞比较,龙葵碱联合照射处理后的骨肉瘤细胞增殖能力和Ki-67、PCNA蛋白水平降低（F=55.165、50.667、23.389,P<0.05）,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3水平升高（F=54.588、42.924、51.541,P<0.05）,线粒体膜电位降低（F=40.762,P<0.05）,ROS水平升高（F=79.055,P<0.05）。龙葵碱对骨肉瘤细胞的放射增敏比为1.786。结论 龙葵碱抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导凋亡,提高骨肉瘤细胞放射敏感性。     

肺腺癌EZH2蛋白的表达及其与表皮生长因子受体突变的关系

 目的 分析肺腺癌中EZH2蛋白的表达,寻找更有效的肺腺癌治疗方法和为降低表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制药(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)耐药性提供理论依据。方法 免疫组织化学染色方法检测肺组织中EZH2蛋白表达情况,实时荧光PCR法检测肺腺癌EGFR基因突变状况。比较EZH2蛋白在腺癌、正常肺组织和肺良性病变组织中的表达差异,分析EZH2的表达与EGFR基因突变的相关性。结果 EZH2在腺癌组织中的表达率(84.00%)明显高于正常肺组织(12.00%)和肺良性病变组织(11.11%),差异均有统计学意义(P<0.05)。腺癌中EZH2的表达程度与患者的性别、年龄无关;与肿瘤的大小,组织学亚型及T分期有关(P<0.05);与EGFR基因突变无关。结论 EZH2可能参与肺腺癌的发生发展,其表达与EGFR基因突变无关,有可能成为肺腺癌治疗的新靶点。     

蛋白激酶C对人胰腺癌细胞放射敏感性的影响及其机制

目的 研究蛋白激酶C对人胰腺癌细胞Panc-1体外放射敏感性的影响并探讨其机制。方法 应用蛋白激酶C激活剂PMA和抑制剂CH分别观察其对Panc-1细胞存活分数的影响。采用多靶单击数学模型拟合细胞剂量存活曲线,明确CH对人胰腺癌细胞Panc-1的放射增敏效应。采用Annexin Ⅴ/PI法流式细胞仪检测CH对细胞凋亡的影响。采用免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达的变化。结果 单纯照射组、PMA处理组和CH处理组细胞SF₂值分别为0.78±0.02、0.92±0.11和0.19±0.20。浓度为0.5、2和8μmol/L 的CH作用4h后,放射增敏比分别为1.05、1.24和1.77,呈药物浓度依赖性。流式细胞仪检测显示PMA可使照射后肿瘤细胞凋亡指数降低,而CH则使凋亡指数增加。CH作用后,肿瘤细胞Bax蛋白表达水平增加,Bcl-2蛋白表达水平无明显变化,但Bax/Bcl-2值增大。结论 蛋白激酶C通过改变肿瘤细胞的凋亡水平实现对人胰腺癌细胞Panc-1放射敏感性的调控。     

沉默食管癌ECA109细胞H2AX基因对裸鼠移植瘤放射敏感性的影响

目的 研究受照前后沉默H2AX基因对裸鼠移植瘤的影响.方法 将60只裸鼠按随机数字表法分为空白组、照射组、空载体组、空载体照射组、沉默(H2AX)组和沉默(H2AX)照射组,每组10只.于裸鼠皮下接种相应细胞,制备裸鼠模型.接种21 d后,给予6 MV X射线15 Gy单次照射,受照后48 h每组处死5只裸鼠,将肿瘤标本按Western blot、RT-PCR及流式细胞分析要求处理,检测蛋白水平、RNA水平及细胞周期的改变.结果 沉默组肿瘤体积为(42.76±4.40) mm³,明显小于空白组(73.18±8.80) mm³和空载体组(71.27±8.40) mm³(F=67.8,P<0.01).沉默组组织中H2AX蛋白表达(0.12±0.03)明显低于空白组(1.12±0.11)和空载体组(1.16±0.08,F=34.27, P<0.01).沉默组RNA水平(0.85±0.31)明显低于空白组(1.86±0.26)和空载体组(1.82±0.24,F=39.45, P<0.01).组织的免疫共沉淀显示,照射使γ-H2AX与MDC1、53BP1发生明显相互作用.沉默H2AX后,其相互作用减弱.受照后各组肿瘤体积在分组之间总体存在差异(F=13.56,P<0.01).沉默照射组凋亡率为(24.15±2.25)%,较照射组(13.26±1.54)%和空载体照射组(12.78±1.47)%明显增高(F=54.33,P<0.01).照射后引起G₂/M期阻滞,沉默照射组较照射组阻滞减轻(F=10.21,P<0.01).结论 体内研究显示沉默H2AX基因可以提高食管癌放射敏感性.     

Lp-THAE诱导兔VX2肝癌细胞凋亡

目的 研究Lp-THAE诱导兔肝VX2肿瘤细胞凋亡.方法 27只新西兰大白兔种植性VX2肝癌,均分成Lp-THAE组、THAI组和对照组,处理后2～5 d处死动物,在肿瘤中央部位、外周部位和非瘤肝区正常组织取材.采用HE染色光镜观察典型凋亡细胞、计算凋亡指数,FTTC-Annexin V/PI双染色双变量流式细胞术分析凋亡细胞百分率.结果 THAE组肿瘤中央与外周部位的凋亡指数分别为(17.769±2.417)%.(4.129±1.172)%,P＜0.01,凋亡细胞百分率分别为(16.483±1.404)%,(9.478±0.964)%,P＜0.01,坏死细胞百分率分别为(43.559±5.053)%,(33.460±1.840)%,P=0.093.凋亡细胞与坏死细胞百分率总和分别为(60.042±13.979)%,(42.938±8.979)%,P＜0.01.THAE组的肿瘤细胞凋亡指数、凋亡细胞百分率和坏死细胞百分率都显著大于THAI组和对照组(P＜0.01),肿瘤中央部位的细胞凋亡指数、凋亡细胞百分率都显著大于肿瘤外周部位(P＜0.01).结论 Lp-THAE诱导肿瘤细胞凋亡和引起肿瘤细胞坏死是其作用机制的两种形式.     

EZH2蛋白在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及其机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白在非小细胞肺癌对顺铂耐药中的作用及其调控机制。方法采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP中EZH2、P21、Puma和Bad的mRNA表达差异。采用RNA干扰技术抑制细胞中的EZH2蛋白表达。通过细胞毒性实验检测细胞耐药性的改变。qRT-PCR检测抑制EZH2蛋白表达后A549/DDP细胞中P21、Puma和Bad的表达变化。流式细胞仪检测细胞周期的分布和变化。结果EZH2在A549/DDP中呈高表达。抑制EZH2蛋白表达后,顺铂对A549/DDP的IC50由（34.57±3.70）μmol/L降低至（18.91±2.07）μmol/L（P<0.05）;抑制EZH2蛋白表达后,A549/DDP中P21、Puma和Bad的mRNA表达均上调;抑制A549/DDP细胞EZH2蛋白表达后,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞增多(P<0.05),细胞发生G2/M期阻滞。结论EZH2蛋白参与介导了A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过调控与细胞凋亡相关基因相关的凋亡通路诱导A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过抑制P21表达、促进细胞周期进展及肿瘤增殖能力,诱导非小细胞肺癌对顺铂产生耐药。     

食管癌患者放疗前系统免疫炎症指数对长期生存的影响分析

目的:分析系统免疫炎症指数(SII)对接受根治性放疗的食管癌患者长期生存的影响。方法:回顾性分析2011年至2017年于河北医科大学第四医院接受根治性放疗的303例食管癌患者的临床资料,依据放疗前SII将患者分为高SII组(SII>648)和低SII组(SII≤648),采用Kaplan-Meier法计算总生存率(OS...     

西妥昔单抗对人舌癌细胞系Tca8113的放射增敏作用

目的 探讨西妥昔单抗( C225)对人舌癌Tca8113细胞系的放射增敏作用.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞系,C225组用西妥昔单抗(C225) 100 nmol/L处理后,6MVX射线不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)照射C225组和单纯照射组,照射后用细胞计数法及四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率,集落形成实验计算克隆数,采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡.结果 不同照射剂量时C225+照射组的细胞生长抑制率均高于单纯照射组(t=-15.6～-3.0,P ＜0.05);C225+照射组的放射生物学参数值(D0、Dq、N、SF2)较单纯照射组低.C225+照射组的SER为1.353;C225+照射组的G0/G1期细胞比例在4、6、8 Gy时均高于单纯照射组(t=-7.64、-7.89、-4.78,P＜0.05).随着照射剂量升高,C225+照射组和单纯照射组的细胞早期凋亡率皆先升高后下降,4 Gy时两组差异最大[(7.96±0.36)％和(4.13±0.29)％,t- 12.75,P＜0.01].结论 C225对人舌癌Tca8113细胞系具有放射增敏作用.C225可能通过Go/G.期阻滞和诱导凋亡来增加人舌癌Tca8113细胞系的放射敏感性.     

miRNA-95在宫颈癌放疗敏感性中的作用及其机制研究

目的 研究miRNA-95在不同放射敏感性的宫颈癌患者肿瘤组织和宫颈癌细胞株中的表达情况及其调控表达后对宫颈癌细胞放射敏感性的影响。方法 分别利用Real-time PCR方法检测放疗敏感患者组20例、放疗耐受患者组20例的宫颈癌肿瘤组织和辐射抵抗宫颈癌细胞株（HeLa、SiHa）、辐射敏感宫颈癌细胞株（Me180）中miRNA-95的表达情况。利用脂质体2000将miRNA-95 mimics和miRNA-95 inhibitions转染至辐射抵抗的HeLa、SiHa细胞中,分别为miRNA-95mimics组和miRNA-95 inhibition组,同时设置miRNA-NC组为对照。CCk-8方法检测在0、2、4、6、8、10 Gy剂量⁶⁰Co γ射线照射下各组宫颈癌细胞的增殖情况;平板单克隆实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞单克隆形成能力;流式细胞术检测4 Gy照射后各组宫颈癌细胞凋亡变化;双荧光素酶活性实验检测miRNA-95在宫颈癌细胞中的靶向基因;裸鼠实验检测4 Gy照射后各组宫颈癌裸鼠成瘤的变化。结果 miRNA-95在放疗耐受患者组宫颈癌肿瘤组织中表达显著高于放疗敏感组（t=12.279,P<0.05）;miRNA-95在HeLa、SiHa细胞中表达量显著,与Me180细胞比较,差异有统计学意义（t=5.162、7.114,P<0.05）;与miRNA-NC组相比,miRNA-95 inhibition组HeLa、SiHa细胞株中miRNA-95表达水平显著下降（t=9.284、8.036,P<0.05）,而细胞增殖率显著下降（t=8.273、11.354、13.489、15.396和6.197、9.185、10.994、12.442,P<0.05）;单克隆形成率显著下降（t=8.378、7.931,P<0.05）;细胞凋亡率显著上升（t=10.265、8.386,P<0.05）; miRNA-95 inhibition组裸鼠成瘤重量显著降低（t=8.881、10.037,P<0.05）。结论 miRNA-95在放疗敏感的宫颈癌肿瘤组织和辐照敏感的宫颈癌细胞中均呈低表达,而抑制miRNA-95表达水平能够显著提高宫颈癌细胞的辐射敏感性,并通过靶向SGPP1基因从而发挥作用。     

射线照射对胰腺癌细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的影响

目的研究不同剂量的γ射线对人胰腺癌细胞凋亡及bcl2,bax基因表达的影响。方法利用不同剂量的γ射线对体外培养的胰腺癌Panc1细胞进行照射,采用PI和AnnexinⅤPI法定量检测细胞凋亡,流式细胞仪检测照射后胰腺癌细胞Panc1的Bcl2、Bax基因表达水平。结果胰腺癌panc1细胞凋亡百分率在一定剂量范围内(≤15Gy)随着照射剂量的提高而增大,在一定时间范围内(≤24h),随着时间的延长而增大。照射组细胞凋亡相关基因Bcl2表达较对照组明显降低,两组相比差异有统计学意义(P<005);照射组bax基因的表达较对照组明显升高,两组相比差异有统计学意义(P<005)。结论γ射线诱导胰腺癌panc1细胞凋亡具有剂量依赖性和时间相关性,bcl2和bax在胰腺癌细胞凋亡调节过程中起着重要作用,不同剂量γ射线照射胰腺癌细胞时Bcl2和Bax表达水平也不相同,通过降低bcl2的表达及提高bax表达来诱导胰腺癌细胞发生凋亡有可能是γ射线杀伤肿瘤细胞的机制之一。     

C-erbB-2在鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌组织中的表达及其意义

目的：分析人表皮生长因子受体-2（C-erbB-2）在鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌（鼻鳞癌）组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学及RT-PCR方法检测C-erbB-2在62例鼻鳞癌组织、30例鼻息肉组织以及25例正常鼻腔黏膜组织中的表达水平,并分析鼻鳞癌组织中C-erbB-2表达与患者临床病理学特征的相互关系。结果在鼻鳞癌组织中,C-erbB-2的阳性表达率明显高于鼻息肉组织及正常鼻腔黏膜组织（P＜0．05）。同时,鼻鳞癌组织中C-erbB-2的阳性表达率与临床分期、分化程度及有无淋巴结转移等临床病理因素有关（P＜0．05）。结论 C-erbB-2与鼻鳞癌的生长、迁移和侵袭有关,可作为鼻鳞癌辅助诊断及预后判断的指标,有望成为鼻鳞癌临床治疗的新靶点。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对亚砷酸钠诱导的内皮细胞凋亡的防治作用

目的　全身炎症反应综合征时内皮细胞 (ECs)凋亡是许多继发性损伤发生、发展的重要环节 ,观察N -乙酰 -L -半胱氨酸 (NAC)对ECs凋亡的防治作用。　方法　采用亚砷酸钠(Ars)在体外诱导ECs凋亡 ,应用流式细胞术测定凋亡细胞比例、细胞间黏附分子ICAM - 1表达和细胞内氧化状态水平 ,以及NAC处理后上述指标的改变。　结果　 80 μmol LArs及 16 0 μmol LArs浓度时应用NAC可以使凋亡细胞百分率分别从 (2 5 .7± 2 .0 ) %、(5 4.4± 11.1) %降低至 (2 0 .4±1.3) %、(33 .1± 6 .5 ) % (P <0 .0 5 ) ,同时使ICAM - 1表达下降 ,40 μmol LArs及 80 μmol LArs浓度时应用NAC可以使细胞内氧化状态恢复到对照水平。　结论　NAC可以显著防治Ars诱导的内皮细胞凋亡 ,其防治作用可能与调节ICAM - 1表达及改变内皮细胞内氧化状态有关     

干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

 目的 探讨干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法 选择FoxM1高表达食管癌细胞株,构建FoxM1-shRNA干扰质粒转染食管癌细胞,观察干预FoxM1表达对食管癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果 成功转染后细胞中FoxM1蛋白水平表达明显降低(t=13.17, P<0.01),细胞增殖明显受抑并呈时间依赖性,72 h抑制效果最显著(68.0%±6.4%,P<0.05);干预组细胞增殖周期发生G₁期阻滞(59.14%±1.69% vs 40.51%±1.45%,t=14.23,P<0.01)、细胞凋亡增加(2.48%±0.49% vs 35.37%±0.56%,t=76.56,P<0.01)。结论 干预FoxM1表达使细胞周期发生G1期阻滞并能促进细胞凋亡,从而抑制TE1细胞增殖,FoxM1可能是食管癌基因治疗潜在的有效靶点。     

siRNA共转染沉默bcl-2和XIAP基因对UMSCC12细胞放射增敏作用的实验研究

目的 探讨同时沉默bcl-2和XIAP基因对头颈部鳞癌UMSCC12细胞放射敏感性的影响.方法 实验分为4组:对照siRNA转染组、siRNA-bcl-2转染组、siRNA-XIAP转染组和siRNA-bcl-2与siRNA-XIAP共转染组.采用siRNA bcl-2和siRNA-XIAP共转染头颈鳞癌细胞株UMSCC12,Western blot检测蛋白水平基因沉默的效果.以caspase-3和caspase-9活性检测自发和放疗诱导的凋亡,最后以克隆形成实验评价放射增敏效果.结果 共转染siRNA-bcl-2和siRNA-XIAP有效沉默了UMSCC12细胞bcl-2和XIAP的蛋白表达.caspase-3和caspase-9活性检测提示,单独沉默XIAP未增加细胞自发和放射诱导的凋亡.单独沉默bcl-2使放射诱导的凋亡增加,与对照siRNA转染组照射后相比,caspase-3和caspase-9的活性差异有统计学意义(t=5.32、6.27,P＜0.05),但未增加细胞自发的凋亡.共转染后的caspase-3和caspase-9活性在未照射时比对照siRNA转染组分别提高至1.36和1.34倍(t=11.47、6.22,P＜0.05),照射后分别提高至1.72和1.98倍(f=12.02、20.14,P＜0.05).克隆形成实验显示,与对照siRNA转染组比较,siRNA-XIAP的放射增敏比(SER)为1.06,siRNA-bcl-2的放射增敏比为1.15,siRNA-bcl-2与siRNA-XIAP共转染组的放射增敏比为1.41,比其他组显著升高.结论 与单独沉默bcl-2和XIAP相比,同时沉默bcl-2和XIAP增加了UMSCC12细胞的放射敏感性,其机制可能与增加了UNSCC12细胞自发和放射诱导的凋亡有关.