糖氧剥夺/再灌注损伤对人正常肝L02细胞自噬水平的影响

目的 探讨糖氧剥夺/再灌注损伤(OGD/R)对人正常肝L02细胞自噬水平的影响.方法 体外培养人正常肝L02细胞,制备OGD/R模型,模拟临床的肝脏缺血再灌注损伤.分为5组:正常对照组、OGD 6 h/R 1、3、6、12 h组.随后在倒置显微镜下观察L02细胞形态;采用MTT比色法检测L02细胞的相对增殖情况;Western blot法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1和p62的表达变化.结果 与正常对照组相比,随着再灌注时间的延长,OGD/R组处理L02细胞的形态损伤逐渐加剧,增殖活性逐渐降低,呈时间依赖性.自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在OGD 6 h/R 1 h即有所增高,随着再灌注时间的延长,LC3的表达量逐渐增高并于再灌注6 h时大量增加,于再灌注12 h时达到最大值(P<0.01);Beclin-1蛋白的表达量随再灌注时间的延长逐渐增加于6 h和12 h急剧增加(P<0.01);p62蛋白于OGD 6 h/R 1 h时和3 h无明显变化,而在再灌注6 h时开始急剧增加,于12 h达到最大值(P<0.01).结论 OGD/R可诱导人正常肝L02细胞自噬水平上调,并且导致细胞的自噬性死亡.     

七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧损伤及自噬的影响

目的 探讨七氟烷后处理对原代海马神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤、氧化应激及自噬的影响。方法 取(18±0.5)d孕鼠子宫内胎鼠海马组织,收集海马神经元进行培养,7d后培养的海马神经元随机分为3组：正常对照组(CON组)、氧糖剥夺/复氧组(OGD/R组)、七氟烷后处理组(OGD/R+SEVO组)。CON组正常培养;OGD/R组：氧糖剥夺1.5 h,复氧复糖24 h,建立OGD/R损伤模型;OGD/R+SEVO组经氧糖剥夺后即刻予2.4%七氟烷后处理1 h,复氧复糖23 h。处理结束后,比色法检测各组乳酸脱氢酶(LDH)的活性,原位末端标记法(TUNEL)检测各组神经元凋亡变化,免疫荧光法检测各组神经元线粒体活性氧和微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的表达,Western blot检测丝氨酸/苏氨酸激酶(PINK1)、E3泛素连接酶(Parkin)的表达。结果 与CON组比较,OGD/R组LDH释放增加(P<0.01),神经元凋亡增加,线粒体活性氧和自噬标志性蛋白LC3B表达增加(P<0.01), PINK1蛋白和Parkin蛋白表达上调(P<0.001,P<...     

桃红四物汤促进自噬抑制氧糖剥夺诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨桃红四物汤(TST)对氧糖剥夺(OGD)诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用。 方法 将H9C2心肌细胞分为5组(n=3)：对照组、OGD模型组、OGD +TST含药血清处理组、OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组、OGD +TST含药血清+氯奎处理组。四唑盐(MTT)比色法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹法(western blot)检测自噬相关蛋白(LC3、p62)和凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2)的表达。结果 与对照组相比,OGD模型组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞凋亡显著增多(P<0.05),LC3II/LC3I比值和促凋亡蛋白Bax显著增多,p62和抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。与OGD模型组相比,OGD +TST含药血清处理组的细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡明显减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达增多,p62和Bax蛋白表达减少。与OGD +TST含药血清处理组相比,OGD +TST含药血清+雷帕霉素处理组的细胞活力进一步升高(P<0.05),细胞凋亡比例进一步减少(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达进一步增多,p62和Bax蛋白表达进一步减少;而氯奎处理桃红四物汤治疗组的细胞活力下降(P<0.05),凋亡细胞比例升高(P<0.05),LC3II/LC3I比值、Bcl-2表达减少,p62和Bax蛋白表达增多。结论 桃红四物汤促进氧糖剥夺H9C2心肌细胞自噬,抑制心肌细胞凋亡,对心肌缺血起保护作用。     

乙酰左旋肉碱对大鼠缺血性损伤及氧糖剥夺细胞模型的保护作用

目的：观察乙酰左旋肉碱（acetyl-L-carnitine,ALC）对大鼠缺血性脑损伤和氧糖剥夺细胞模型的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法：采用随机数字表法,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组和ALC组,制备大鼠脑缺血模型。术前24 h ALC组腹腔注射ALC,模型组和假手术组注射等量磷酸缓冲液。术后6 h进行氯化三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色,评价ALC对大鼠缺血性损伤的影响。体外培养PC12细胞,将细胞随机分为正常组、模型组和ALC组,建立体外氧糖剥夺模型。建模前24 h在ALC组加入ALC。建模后3 h分别通过ＭＴＴ法、TUNEL法、SYTOX染色检测细胞活力与细胞的凋亡、坏死情况;同时检测各组细胞超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、三磷酸腺苷酶（adenosine triphosphatase,ATPase）活性和丙二醛（maleic dialdehyde,MDA）含量的改变。结果：ALC预处理后,大鼠的TTC染色梗死灶面积较模型组明显减小（P<0.05）;细胞活力与氧糖剥夺模型组相比显著增加,坏死与凋亡的细胞数明显下降,SOD、ATPase活性增高,MDA含量下降（P<0.05）。结论：ALC预处理可以保护大鼠缺血性脑损伤,提高氧糖剥夺条件下的细胞活力,其机制可能与增强细胞抗氧化能力、改善细胞的能量代谢、减少细胞凋亡与坏死有关。     

miR-486-5p/PINK1通路调控线粒体自噬拮抗SK-N-SH细胞氧糖剥夺/复糖复氧损伤

目的 探究微RNA-486-5p/PTEN诱导激酶1(miR-486-5p/PINK1)通路调控线粒体自噬对SK-N-SH细胞糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤的影响及机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测45例缺血性卒中(IS)患者和45例健康体检者血清miR-486-5p表达。双荧光素酶报告基因验证SK-N-SH细胞中miR-486-5p对PINK1的靶向关系。取对数生长期SK-N-SH细胞分为：Control、OGD/R、OGD/R+miR-486-5p mimic、OGD/R+miR-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-NC、OGD/R+miR-486-5p mimic+OE-PINK1组。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,RT-qPCR检测miR-486-5p、PINK1、帕金蛋白(Parkin) mRNA表达,Western blot检测PINK1、Parkin、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62、Beclin1、半胱氨酰天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素C(CytC)蛋白表达,流式细胞术...     

不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用

目的 探讨不同浓度臭氧对大鼠离体脑片氧糖剥夺及再灌注损伤模型的保护作用.方法 制备SD大鼠脑片,室温下保存在人工脑脊液(ACSF)中,根据实验分组情况选择性经过下列程序:恢复期60 min、平衡期30 min、氧糖剥夺(OGD)期30 min及再灌注期90 min.对照组(CTRL)不经过OGD期;模型组不施加臭氧干预(OGD/R);实验组于再灌注期分别给予10,20,30,40,50 μg/mL的臭氧,并且根据ACSF中是否含有人血白蛋白(HSA)分成2个亚组.再灌注期结束后分别测定各组ACSF中谷氨酸(Glu)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果 OGD 30 min后给予90 min的再灌注,模型组与对照组比较Glu和LDH释放增加(P＜0.01).不同浓度的臭氧在不同程度上拮抗了Glu和LDH的释放,其中40 μg/mL的臭氧效应最明显,低浓度(10～30μg/mL)或高浓度(50 μg/mL)臭氧组与OGD/R组比较效应不明显(P＞0.05);在含有HAS组与不合HAS组比较,给予臭氧(40μg/mL)干预能明显减少Glu和LDH的释放(P＜0.05).结论 40 μg/mL臭氧气体对大鼠离体脑缺血再灌注损伤模型中的神经细胞具有保护作用,并且HSA能增强臭氧的保护作用.     

超短波通过上调SPCA1的表达减轻N2a细胞氧糖剥夺复氧后的损伤

目的：研究发现给予脑缺血再灌注损伤大鼠超短波(ultrashort wave,USW)治疗,可抑制高尔基体应激的重要参与分子——分泌途径衍生钙离子转运ATP酶1(secretory pathway Ca²⁺-ATPase 1,SPCA1)表达的下降,减少高尔基体等细胞器的破坏和神经元细胞的凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤。本研究旨在从细胞水平探讨USW对小鼠N2a细胞氧糖剥夺复氧(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤及SPCA1表达的影响。方法：将N2a细胞随机分为对照(Con)组、模型(OGD/R)组、USW组。Con组细胞正常培养,OGD/R组给予OGD/R处理,USW组给予OGD/R后用USW进行处理。在倒置光学相差显微镜下观察细胞形态;采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活性,双染法流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测SPCA1的表达。结果：Con组细胞多数呈梭形,轮廓清晰,贴壁良好;OGD/R组细胞皱缩,轮廓模糊,贴壁性变差,出现较多悬浮死细胞;与...     

氧糖剥夺条件下神经细胞损伤机制研究进展

氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation,OGD）通过对细胞培养条件的改变,模拟细胞在缺血/缺氧情况下的损伤,是在细胞层面上模拟缺血/缺氧常用的一种刺激模型。神经系统的细胞主要由神经元和神经胶质细胞组成,缺血缺氧后细胞会产生坏死、凋亡、自噬等现象,中枢神经系统的OGD往往导致不可逆的、毁灭性的后果,最终导致神经功能受损。OGD诱导的神经细胞损伤机制非常复杂,主要有细胞凋亡、钙离子超载、氧化应激、兴奋性氨基酸增多、能量代谢障碍等,这些要素并不是独立的,而是相互影响、互为因果的。因此,该文拟对OGD条件下神经细胞损伤机制研究进展进行综述。     

低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响.方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000 kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况.以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化.结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P＜0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P＜0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10 kU/L.结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用.     

5-脂氧酶/半胱氨酰白三烯途径不参与大鼠C6胶质瘤细胞缺氧缺糖损伤

目的:观察缺氧缺糖(OGD)是否损伤大鼠C6胶质瘤细 胞,以及5-脂氧酶(5-LOX)/半胱氨酰白三烯(CysLT)途经是否参与OGD损伤. 方法:在OGD处理并恢复不同时间后,观察C6细胞活性变化,以及5-LOX抑制剂和Cy sLT受体拮抗剂的影响;以免疫细胞化学法观察5-LOX蛋白的细胞内分布;以RT-PCR法检测 CysLT1和CysLT2受体mRNA表达;并观察白三烯D4(LTD4)对C6细胞的作用.结果:OGD 4～8 h并恢复24～72 h后,可诱导C6细胞损伤;5-LOX 抑制剂和CysLT受体拮抗剂对OGD损伤无明显作用.OGD未诱导5-LOX的核膜移位.C6细胞高 表达CysLT2受体,但CysLT1受体表达很微弱,OGD不影响它们的表达.此外,L TD4对C6细胞没有明显作用.结论:OGD可诱导C6细胞损伤,但5-LOX /CysLT途径不参与OGD诱导的损伤.     

血栓通胶囊对氧糖剥夺/复氧致HUVEC细胞紧密连接损伤的改善作用

目的采用氧糖剥夺(OGD)致HUVEC细胞损伤模型,考察三七总皂苷(PNS)及其单体Rg1、Rb1对氧糖剥夺致血管内皮紧密连接损伤的保护作用。方法 HUVEC细胞接种于Transwell细胞小室,待细胞融合后,设立实验组别:正常对照组、模型组、PNS 10、20、40 mg/L组以及Rb1 13.52 mg/L、Rg1 12.44 mg/L组,于缺氧同时进行药物干预,氧糖剥夺6 h复氧24 h后,检测HUVEC内皮细胞电阻值以及内皮渗透性的变化;采用激光共聚焦显微镜,免疫荧光法检测HUVEC细胞ZO-1、claudin-5蛋白表达的变化。结果与正常对照组相比,HUVEC细胞缺氧6 h复氧24 h后内皮细胞间紧密连接电阻显著降低,细胞渗透性显著升高(P0.05)。PNS 20、40 mg/L组能够显著抑制模型组紧密连接电阻的降低,抑制HUVEC细胞渗透性的升高(P0.05)。人参皂苷Rb1能够显著升高OGD 6 h复氧24 h后内皮紧密连接电阻,降低HUVEC细胞渗透性(P0.05)。免疫荧光检测结果显示,正常对照组HUVEC细胞的ZO-1及claudin-5蛋白主要分布于细胞膜周围,排列连续,显示出内皮细胞的典型铺路石排列。缺氧6 h复氧24 h损伤后,模型组细胞边缘的紧密连接蛋白显著减少,环形结构断裂,甚至消失,细胞核内紧密连接蛋白呈增加趋势。PNS 20、40 mg/L及Rb1 13.52 mg/L可观察到细胞间紧密连接局部恢复,呈铺路石样结构。结论 PNS对缺血致血管内皮细胞间紧密连接损伤有保护作用。     

丹参酮对原代大鼠海马神经元细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的观察缺氧缺糖对大鼠海马神经元细胞的影响及丹参酮的保护作用。方法取体外培养12天的海马神经元细胞随机分为正常对照组、缺氧缺糖组、丹参酮20μmol／L组、丹参酮40μmol／L组、丹参酮80μmol／L组（后3组缺氧缺糖前24h,加入丹参酮预处理）。缺氧缺糖组、各浓度丹参酮组在缺氧缺糖环境中培养2、4、24及36h后,收集其各个时间点的培养液,测定培养液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果缺氧缺糖后,缺氧缺糖组各个时间点LDH渗出量明显高于正常对照组,经丹参酮预处理的神经元损伤有不同程度的减轻,各个时间点LDH渗出量明显低于对应的缺氧缺糖组。结论缺氧缺糖可引起海马神经元损伤,丹参酮对海马神经元细胞损伤具有保护作用。     

氧糖剥夺损伤后细胞上清中IL-1促进正常血管平滑肌细胞增殖及迁移

血管平滑肌细胞(VSMC)的过度增殖和迁移是多种心血管疾病共同的病理基础。VSMC不仅具有调节血管收缩的作用,同时还参与细胞外基质的合成与分泌,进而影响血管功能[1-2]。     

Cbl-b and PI3K/Akt pathway are differently involved in oxygen-glucose deprivation preconditioning in PC12 cells

Background Transient sublethal ischemia is known as ischemic preconditioning, which enables cells and tissues to survive subsequent prolonged lethal ischemic injury. Ischemic preconditioning exerts neuroprotection through phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/Akt pathway. Cbl-b belongs to the Casitas B-lineage lymphoma （Cbl） family, and it can regulate the cell signal transduction.The roles of ubiquitin ligase Cbl-b and PI3K/Akt pathway and the relationship between them in oxygen-glucose deprivation preconditioninq （OGDPC） in PC12 cells were investiaated in the ore.~e.nt study     

表皮生长因子对缺氧缺糖模型大鼠骨骼肌细胞氧化损伤的保护作用

目的：构建体外骨骼肌L6细胞缺氧缺糖（OGD）模型,在体外水平上探讨表皮生长因子（EGF）对压疮深部组织损伤（DTI）的保护机制。方法：将对数生长期大鼠骨骼肌L6成肌细胞分为5组,即正常对照组、OGD组、5 μg·L^-1 EGF+OGD组、10 μg·L^-1EGF+OGD组和20 μg·L^-1EGF+OGD组。MTT法检测各组细胞生存率,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,DCFH-DA法检测各组L6成肌骨骼肌细胞中活性氧（ROS）水平,Rhodamine 123检测线粒体膜电势,Western blotting法检测各组骨骼肌细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,OGD组OGD24 h时骨骼肌细胞生存率明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,ROS水平升高（P<0.01）,线粒体膜电势下降（P<0.01）,Bcl-2/Bax比值明显下降（P<0.01）。与OGD组比较,不同浓度EGF组细胞存活率明显升高,细胞凋亡率降低,其中10和20 μg·L^-1EGF组差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;不同浓度EGF组骨骼肌细胞中ROS水平呈浓度依赖性降低,线粒体膜电势明显增加,10和20 μg·L^-1 EGF组差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;Bcl-2/Bax比值明显下降,并具有浓度依赖性,其中10和20 μg·L^-1EGF组差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。结论：EGF通过降低细胞内ROS水平保护线粒体功能,改善OGD诱导的大鼠骨骼肌细胞损伤,并具有浓度依赖性。     

多核糖核苷酸核苷转移酶1在氧糖剥夺诱导心肌细胞凋亡损伤中的作用

目的 探讨多核糖核苷酸核苷转移酶1 (PNPT1)对氧糖剥夺（OGD）诱导心房肌细胞凋亡的影响和作用机制。方法 体外培养HL-1心房肌细胞,PNPT1-siRNA转染HL-1细胞。实验分组为：正常组（Control）、OGD组、NC-siRNA组（转染乱码RNA）、PNPT1- siRNA组、OGD+NC-siRNA组和OGD+PNPT1- siRNA组。通过CCK-8检测细胞存活率,qPCR检测ACTB mRNA和TUBA mRNA的含量,Western blot检测PNPT1蛋白水平,流式细胞术检测HL-1细胞凋亡率,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,透射电镜观察线粒体形态。结果 随OGD诱导时间延长,HL-1细胞质中PNPT1的蛋白表达水平呈上升趋势（P<0.05）。与NCsiRNA相比,PNPT1-siRNA明显减少细胞内PNPT1表达。OGD条件下,ACTB mRNA和TUBA mRNA降解增加（P<0.05）,HL-1心房肌细胞凋亡率增加（P<0.05）;相反地,PNPT1-siRNA则抑制ACTB mRNA和TUBA mRNA降解（P<0.05）,同时降低HL-1心房肌细胞凋亡率（P<0.05）,并且改善线粒体膜电位以及线粒体形态。结论 抑制PNPT1可改善线粒体损伤并减少凋亡相关mRNA的降解,从而减轻OGD诱导的HL-1心房肌细胞凋亡损伤。     

不同氧糖剥夺时间和不同介质对N9 小胶质细胞活力的影响

目的研究不同氧糖剥夺(OGD)时间和不同介质对N9小胶质细胞活力的影响,以建立体外小胶质细胞的OGD模型。方法以平衡盐溶液(BSS)和无糖DMEM作为OGD介质,OGD 10、30和60 min并复氧复糖24 h后,倒置相差显微镜下观察N9小胶质细胞形态变化,四氮唑盐复合物(XTT)比色法检测细胞活力变化,比较分析不同OGD持续时间和不同介质产生的结果差异。结果氧糖剥夺/复氧复糖后,各OGD处理组不规则细胞比例增多,部分细胞发生皱缩,细胞轮廓不清,折光度较差,细胞密度减小。各BSS介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01)。各OGD处理组相比,OGD 30 min组和OGD 60 min组细胞活力低于OGD 10 min组,差别有统计学意义(P<0.01)。各无糖DMEM介质的OGD处理组与对照组相比,N9小胶质细胞的活力产生不同程度降低,差别均有统计学意义(P<0.01),且随着OGD处理时间的延长,细胞活力逐渐减小,各OGD处理组间细胞活力差别有统计学意义(P<0.05)。OGD 10 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力比BSS介质组细胞活力高(P<0.01),OGD 30 min处理后,无糖DMEM介质组细胞活力仍比BSS介质组细胞活力高(P<0.05),OGD 60 min处理后,2组间差别无统计学意义(P>0.05)。结论 OGD处理后,N9小胶质细胞形态发生改变,细胞活力与OGD持续时间呈负相关,体外小胶质细胞的OGD模型制备成功。模型中,2种OGD介质对细胞活力影响的差别随着OGD处理时间的延长逐渐缩小并最终消失。     

自噬参与6-羟基多巴胺诱导多巴胺能神经元死亡的实验观察

目的 观察自噬在6-9基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导的大鼠多巴胺能神经元中的激活,初步探讨自噬在多巴胺能神经元死亡中的作用.方法 用脑立体定位黑质致密部给药法建立6-OHDA介导帕金森病大鼠模型,用透射电镜法观察多巴胺能神经元中自噬激活,免疫荧光法检测6-OHDA对多巴胺能神经元中LC3表达的影响.结果 透射电镜显示,6-OHDA注射后6h至24h,被损伤大鼠黑质致密部神经元内溶酶体被激活,自噬小体形成.免疫荧光法显示模型大鼠与对照组相比,黑质多巴胺能神经元受损,TH阳性细胞明显减少,LC3表达量显著增加.结论 自噬参与6-OHDA介导的多巴胺能神经元死亡过程.