高效液相色谱法测定大鼠血浆中大麦芽碱的研究

目的：利用高效液相色谱法（HPLC）建立大鼠血浆中大麦芽碱（Hordenine）浓度的测定方法。方法：色谱柱为Thermo Hypersil GOLD C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）,保护柱为Thermo Hypersil GOLD C₁₈（10 mm×4.6 mm,5 μm）,以酪胺（Tyramine）为内标,流动相为甲醇-0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾（三乙胺调节pH 7.10）（5：95,V：V）,流速1.0 mL·min^-1,等度洗脱,紫外检测波长226 nm,柱温25℃,进样量20 μL,甲醇沉淀蛋白法处理血浆样品,取上清液进样分析检测。结果：大鼠血浆中大麦芽碱在6.25~800 μg·mL^-1的范围内呈良好的线性关系,回归方程为：Y=0.005 6X+0.016 9（r=0.998 0）,定量下限为6.25 μg·mL^-1。日内精密度在2.94%~8.15%之间,日间精密度在4.30%~7.23%之间,提取回收率大于80%,血浆样品稳定性符合生物样品方法学验证要求。结论：HPLC方法用途广、操作简便、速度快、重复性高、线性范围广、结果准确,可用于测定大鼠血浆中大麦芽碱的血药浓度。     

高效液相色谱法测定血浆甲硝唑浓度

［摘要］目的建立血浆甲硝唑浓度的高效液相色谱（HPLC）测定方法。 方法采用HPLC UV方法，以法舒地尔为内标；色谱柱为Hypersil C18柱（5 μm，4.6 mm×200 mm）；流速：1.0 mL·min 1；柱温：30 ℃；流动相：0.02 mol·L 1磷酸二氢钠溶液（用1 mol·L 1磷酸溶液调节pH值=3.00）：甲醇=80：20，紫外检测波长319 nm。 结果甲硝唑的血药浓度在0.25～20.00 mg·L 1范围内与峰面积比有良好的线性关系，定量下限为0.25 mg·L 1。方法的平均回收率为（98.24±1.30）%，日内、日间相对标准差（RSD）均＜10%。 结论该方法简单、方便、准确，是血浆甲硝唑浓度检测较好的分析方法。     

HPLC-MS/MS法测定老年糖尿病患者血浆中苯甲酸阿格列汀浓度

目的： 采用HPLC-MS/MS法测定老年糖尿病患者血浆中苯甲酸阿格列汀的浓度方法： 采用蛋白沉淀的方法处理样品,色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),使用乙腈-0.1%甲酸溶液作为流动相,进行梯度洗脱,流速0.6 mL·min-1,柱温30 ℃,进样量10 μL。采用电喷雾离子源,正离子模式对血浆样品中的苯甲酸阿格列汀浓度进行定量检测,阿格列汀和西格列汀的检测离子对分别为 m/z 340.0→116.0和m/z 408.0→235.0结果： 人血浆中苯甲酸阿格列汀在1~200 ng·mL-1浓度范围线性关系良好,定量下限为1 ng·mL-1,批内、批间准确度分别为99.1%~108.5%、102.4%~109.2%,批内和批间的精密度RSD均＜8.9%,平均提取回收率为86.4%~95.6%,基质效应为95.1%~106.7%结论： 本试验建立的方法简单,灵敏度和准确性高,适用于苯甲酸阿格列汀在老年糖尿病患者血浆中的含量测定。     

HPLC法同时测定代代花中柚皮苷、橙皮苷、 新橙皮苷和辛弗林的含量

目的：建立HPLC法同时测定代代花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的含量。方法：采用Poroshell 120 EC-C18柱（4.6×150 mm,4.0 μm）;流动相A为乙腈,流动相B为20%乙腈水溶液（含0.08%十二烷基硫酸钠的2.4%冰醋酸）,梯度洗脱;流量为1.0 mL·min-1;检测波长柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为283 nm、辛弗林为275 nm;柱温为30 ℃。结果：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的线性范围分别为5.035～1007 μg·mL-1、0.525～104.9 μg·mL-1、14.7～2940 μg·mL-1和0.502～100.3 μg·mL-1（r≥0.999 8）。4种成分的平均回收率在93.9%~98.7%。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可用于测定代代花4种成分的含量。     

HPLC法同时测定代代花中柚皮苷、橙皮苷、 新橙皮苷和辛弗林的含量

目的：建立HPLC法同时测定代代花中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的含量。方法：采用Poroshell 120 EC-C18柱（4.6×150 mm,4.0 μm）;流动相A为乙腈,流动相B为20%乙腈水溶液（含0.08%十二烷基硫酸钠的2.4%冰醋酸）,梯度洗脱;流量为1.0 mL·min-1;检测波长柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷为283 nm、辛弗林为275 nm;柱温为30 ℃。结果：柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的线性范围分别为5.035～1007 μg·mL-1、0.525～104.9 μg·mL-1、14.7～2940 μg·mL-1和0.502～100.3 μg·mL-1（r≥0.999 8）。4种成分的平均回收率在93.9%~98.7%。结论：该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可用于测定代代花4种成分的含量。     

RP-HPLC法测定血浆中碘海醇浓度及在肾小球滤过率评估中的应用

目的：建立RP-HPLC法测定血浆中碘海醇（IOX）浓度,通过估算IOX血浆清除率评估患者肾小球滤过率（GFR）。方法：100 μL血浆样本加入蛋白沉淀剂,振荡离心后取上清液20 μL进样。色谱柱为Zorbax Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm i.d,5 μm);流动相：磷酸二氢钠缓冲液（50 mmol·L-1,pH 3.0）-甲醇（v/v,90∶10）;柱温：35 ℃;流速：1 mL·min-1;检测波长：254 nm。建立的方法分析37位患者给予IOX 5 mL后2 h与5 h血浆标本,估算清除率。结果：IOX在10.7~1078 μg·mL-1范围内线性良好（r2>0.999）,方法提取回收率>80%,相对回收率为94.2%~109.6%。日内、日间精密度RSD%均＜10%。37位患者的IOX清除率为（45.9±18.0） mL·min-1,与血清肌酐水平、肌酐清除率及胱氨酸蛋白酶抑制剂水平的相关系数分别为0.209、0.814与0.543。结论：所建方法操作方便、结果准确可靠,可用于GFR估算,为肾功能评估提供一种可靠的手段。     

人血浆中枸橼酸HPLC测定方法建立及其在连续性肾脏替代疗法患者行局部枸橼酸钠抗凝中的应用

目的 建立测定人血浆中枸橼酸浓度的 HPLC 方法,探讨连续性肾脏替代疗法(CRRT)患者行局部枸橼酸钠抗凝(RCA)中滤器前、滤器后和滤过液血浆中枸橼酸浓度相关性。方法 血浆样品用甲醇沉淀蛋白,测定枸橼酸的条件:色谱柱为 Eclipse Plus C₁₈柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为 0.1% 磷酸水溶液-甲醇(98:2);柱温:35℃;进样体积:20 μL;体积流量:0.6 mL·min^-1;检测波长:215 nm。采用建立的 HPLC 方法对 40 例使用 RCA 的 CRRT 患者的滤器前、滤器后和滤过液血浆中的枸橼酸浓度进行测定。采用 Pearson 相关性分析对滤器前、滤器后和滤过液血浆中枸橼酸浓度进行相关性分析,记录每位患者枸橼酸泵速,观察滤器的凝血程度,根据血液净化治疗后透析器和管路的凝血情况进行分级。结果 建立的 HPLC 方法检测血浆中枸橼酸浓度的专属性良好,基质效应为 90.25%~101.23%,回收率在 89.90%~97.00%,日内精密度RSD在2.60%~8.94%,日间精密度RSD在2.48%~7.31%,样品在室温下放置0、12、24 h及4℃下放置1、2、3、4周,稳定性均良好。滤器前血浆枸橼酸浓度为(2.93±0.97) mmol·L^-1,滤器后血浆枸橼酸浓度为(2.42±0.77) mmol·L^-1,滤过液血浆中枸橼酸浓度为(2.89±0.81) mmol·L^-1;滤过液血浆中枸橼酸浓度与滤器前、滤器后血浆枸橼酸浓度的 Pearson 相关系数分别为 0.672(P=0.00)、0.734(P=0.00)。40 例患者滤器凝血情况:0~1 级 32 例,2 级 7 例,3 级 1 例。结论 建立的HPLC 分析方法符合生物样品含量测定要求,可用于血浆中枸橼酸的浓度检测。在 RCA 应用于 CRRT 患者时,滤过液血浆枸橼酸浓度可代替滤器后血浆枸橼酸浓度评价滤器抗凝效果,减少反复检测导致的诊断性失血。     

反相高效液相色谱 荧光检测法测定 人血浆佐米曲普坦浓度

［摘要］目的建立人血浆佐米曲普坦浓度的高效液相色谱 荧光（HPLC FLD）检测方法。方法色谱柱：Agilent Zorbax SB C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；柱温：30 ℃；流动相为乙腈：水（11：89，含0.04%三乙胺，磷酸调节pH值 2.5）；流速：1.0 mL·min 1；荧光激发波长235 nm，发射波长360 nm。以利扎曲普坦为内标，含药血浆处理采用碱化，有机溶剂萃取法。结果血浆内源性杂质对样品测定无干扰。佐米曲普坦定量下限为0.2 μg·L 1，在0.2～40.0 μg·L 1范围内线性关系良好（r＝0.999 7）。佐米曲普坦的日内、日间RSD均＜10%，样品经3次冻融及提取后在12 h内稳定性良好。结论该方法灵敏度高，操作简便、准确，可用于人体血浆佐米曲普坦浓度测定及其药动学研究。［关键词］ 佐米曲普坦；色谱法，高压液相；光谱法，荧光；血药浓度；利扎曲普坦     

HPLC测定大鼠微透析液和血浆中苦参碱的浓度

目的 建立大鼠微透析液和血浆中苦参碱的反相高效液相检测方法。方法 色谱柱为Diamonsil C₁₈柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸(用三乙胺调pH至7.6~7.7)(微透析液测定：35∶65;血浆测定：30∶70);流速1.0 mL·min^-1;检测波长220 nm;柱温35 ℃;进样量20 μL。结果 本方法测定苦参碱线性范围微透析液为0.10~25.00 μg·mL^-1,血浆为0.32~81.80 μg·mL^-1,相关系数均为1。微透析液的日内、日间精密度RSD≤6.95 %,血浆RSD≤10.75 %。微透析液的平均回收率为94.7~105.9 %,血浆为98.6~107.9 %,稳定性良好。结论 本方法准确、简单、专属性强,适用于苦参碱大鼠体内药动学研究中微透析液和血浆中药物浓度的测定。     

LC-MS/MS法测定老年房颤患者血浆中利伐沙班的浓度

目的：建立LC-MS/MS法检测老年房颤患者血浆中利伐沙班血药浓度,用于患者服用利伐沙班后血药浓度监测及药动学研究。方法：血浆样品经含内标利伐沙班-D4乙腈沉淀蛋白,使用色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18柱（2.1 mm × 100 mm,3.5 μm）,流动相为0.1%甲酸水（A）∶甲醇（B）,采用梯度洗脱分离,流速0.3 mL·min-1,柱温为40 ℃。采用电喷雾离子化电离源（ESI）,正离子方式检测,利伐沙班和内标的离子对分别为m/z 436.4→m/z 145.2和m/z 440.7→m/z 145.3。结果：血浆中利伐沙班在5~500 ng·mL-1范围内线性关系良好（r=0.999 7）。最低检测浓度为5 ng·mL-1,提取回收率与基质效应分别为90.8%~101.3%和95.2%~103.3%。质控样本日内和日间准确度分别为98.6%~112.8%和99.7%~112.9%,相对标准差（RSD）均<10%。样本稳定性符合要求。结论：本研究建立的方法快速、准确,适用于血浆利伐沙班的血药浓度检测和药动学研究。