miR-335-5p通过靶向Oct4调控胃癌细胞的增殖

目的：研究微小（miR）-335-5p对胃癌细胞增殖的影响及其机制。方法：采用荧光定量PCR检测miR-335-5p在胃癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MKN-28、MKN-45和人正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平,利用miR-335-5p过表达慢病毒及封闭慢病毒分别感染SGC-7901和BGC-823细胞株,实验分为SGC-7901细胞中miR-335-5p组（转染过表达miR-335-5p组）和阴性对照组（空病毒组,NC）,BGC-823细胞中antago-miR-335-5p组（转染封闭miR-335-5p慢病毒）和阴性对照组（空病毒组,NC）。通过CCK-8实验、平板克隆实验、EdU实验检测miR-335-5p对细胞增殖的影响,用生物信息学软件预测miR-335-5p可能的靶基因,通过Western blot验证miR-335-5p对靶基因的调控作用并检测AKT及pAKT的表达。结果：miR-335-5p在胃癌细胞系中表达明显下降。CCK-8实验、平板克隆实验及EdU实验中过表达miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均低于其阴性对照组,而封闭miR-335-5p组光密度值、克隆形成率、EdU阳性细胞率均高于其阴性对照组。同时用生物信息学软件预测了Oct4作为miR-335-5p的靶基因,Western blot表明过表达miR-335-5p组Oct4的表达量（0.469±0.054）明显低于阴性对照组（0.670±0.045）（P=0.008）,封闭miR-335-5p组Oct4的表达（0.804±0.046）高于阴性对照组（0.600±0.073）（P=0.015）,同时双荧光素酶报告实验证明miR-335-5p能够靶向Oct4;过表达miR-335-5p组中pAKT的表达量（0.525±0.046）较阴性对照组（0.847±0.053）有所下降（P=0.001）,封闭miR-335-5p组（0.841±0.069）中pAKT的表达量较阴性对照组（0.563±0.063）有所升高（P=0.007）。结论：miR-335-5p可以通过靶向Oct4抑制AKT通路从而抑制胃癌细胞的增殖。     

MicroRNA-431-5p在胃癌组织中低表达：基于线粒体和Bax/Bcl-2/caspase3信号通路

目的 探究microRNA-431-5p(miR-431-5p)在胃癌细胞的表达特点及其对胃癌细胞凋亡及线粒体功能的影响。方法 荧光定量PCR检测miR-431-5p在50例胃癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其与患者临床病理特征的关系。采用脂质体转染技术构建miR-431-5p过表达组细胞（miRNA mimics）及对照组细胞（NC mimics）,分别采用CCK-8、流式细胞术、荧光探针标记以及ATP检测试剂盒评估miR-431-5p对MKN-45细胞线粒体数量、膜电位完整性、通透性转换孔开放程度、活性氧生成水平以及ATP含量的影响,Western blot检测MKN-45细胞内凋亡蛋白表达水平的变化。结果 miR-431-5p在胃癌组织中的表达水平较癌旁组织明显下调（P<0.001）,其表达水平与患者的肿瘤分化程度（P=0.0227）、T分期（P=0.0184）、N分期（P=0.0005）、TNM分期（P=0.0414）和血管侵犯（P=0.0107）密切相关。细胞功能实验显示：过表达miR-431-5p抑制MKN-45细胞增殖能力并诱导细胞凋亡,miR-431-5p过表达后...     

hsa-miR-214-5p通过下调PAK4对子宫颈癌HeLa细胞活力和凋亡的调控作用

目的：探究微小RNA-214-5p（micro RNA-214-5p、miR-214-5p）对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的作用及机制。方法：将细胞分为HeLa组、mimic-scramble组、miR-214 mimic组和miR-214 inhibitor组,用miR-214 mimic和miR-214 inhi－bitor转染细胞,qRT-PCR检测miR-214和p21活化激酶4（P21-activated kinases 4, PAK4）的表达;生物信息学方法预测miR-214-5p与PAK4的关系,荧光素酶报告实验验证miR-214-5p与PAK4的关系;用pcDNA-PAK4（pc-PAK4）、miR-214 mimic和miR-214 inhibitor转染细胞,Western blot检测PAK4的表达;CCK-8检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。结果：miR-214 mimic组miR-214-5p mRNA的表达水平（46.02±5.23）较HeLa组（1.00±0.01）明显升高（LSD-t=31.423,P=0.000）,miR-214 mimic组PAK4蛋白的表达水平（0.08±0.04）较HeLa组（0.26±0.05）明显降低（LSD-t=4.296,P=0.002）;miR-214 inhibitor组miR-214-5p mRNA的表达水平（0.41±0.05）较HeLa组（1.00±0.01）明显降低（LSD-t=18.726,P=0.000）,miR-214 inhibitor组PAK4蛋白的表达水平（0.58±0.05）较HeLa组（0.26±0.05）明显升高（LSD-t=5.061,P=0.001）;miR-214-5p与PAK4可靶向结合。miR-214 mimic组细胞生长速度（3.50±0.45）较HeLa组（5.02±0.35）明显降低（tD=8.644,P=0.000）,miR-214 mimic组细胞凋亡率[（11.42±0.71）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显升高（LSD-t=4.032,P=0.003）;miR-214 inhibitor组细胞生长速度（5.89±0.32）较HeLa组（5.02±0.35）明显升高（LSD-t=7.863,P=0.000）,miR-214 inhibitor组细胞凋亡率[（0.53±0.42）%]较HeLa组[（2.61±0.63）% ]明显降低 （LSD-t=4.221,P=0.002）;共转染pc-PAK4能逆转miR-214 mimic对细胞活力和细胞凋亡的调控作用。结论：miR-214-5p能通过靶向下调PAK4抑制宫颈癌HeLa细胞活力并诱导细胞凋亡。     

miR-149-5p通过靶向AEBP1调控胃癌细胞的迁移侵袭

目的：探讨miR-149-5p对胃癌细胞迁移侵袭能力的影响及分子机制。方法：qRT-PCR检测胃癌细胞株和组织标本中miR-149-5p的表达,分析其表达水平与胃癌患者临床病理特征参数及预后的相关性,建立过表达和干扰miR-149-5p的胃癌细胞株,Transwell实验检测miR-149-5p表达水平对胃癌癌细胞迁移侵袭能力的影响;生物信息学网站预测miR-149-5p的靶基因,采用荧光素酶报告基因实验加以验证。结果：miR-149-5p在胃癌组织和细胞株中均低表达（均P<0.05）。miR-149-5p的表达水平与胃癌患者的浸润深度（P=0.016）、淋巴结转移（P=0.001）和TNM分期（P=0.023）相关。miR-149-5p低表达是胃癌患者总生存期的独立危险因素。与对照组相比,miR-149-5p mimics明显抑制胃癌细胞的迁移侵袭能力（均P<0.01）,而转染miR-149-5p inhibitors后得到了相反的结果（均P<0.05）。miR-149-5p靶向调控脂肪细胞增强结合蛋白1(Adipocyte enhancer binding pro...     

circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制研究

目的探讨circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法选取2015年6月至2018年12月嘉兴市第二医院肿瘤外科经手术切除的30例患者的胃癌组织和配对的癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中circ_0003159、miR-32-5p和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）的表达水平;以及胃癌细胞株（BGC823、AGS、MKN45）和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中circ_0003159的表达水平。选取circ_0003159表达水平最低的胃癌BGC823细胞系,建立circ_0003159超表达模型,设立circ_0003159超表达组（转染circ_0003159模拟物）和阴性对照组（转染空载体阴性对照物）。采用CCK-8法和Transwell小室实验检测circ_0003159超表达对BGC823细胞增殖、侵袭和迁移的影响;生物信息学方法对circ_0003159或miR-32-5p进行靶基因预测,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-32-5p与circ_0003159或PTEN的靶向关系;采用Westernblot法检测过表达miR-32-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果胃癌组织中circ_0003159和PTEN的相对表达水平均明显低于癌旁组织（均P＜0.05）,但胃癌组织中miR-32-5p的相对表达水平明显高于癌旁组织（P＜0.05）。胃癌细胞系BGC823、AGS、MKN45中circ_0003159的相对表达水平均明显低于正常胃黏膜上皮细胞GES-1（均P＜0.05）,且BGC823细胞中circ_0003159的相对表达水平最低。相比于阴性对照组,circ_0003159超表达组在48、72h时OD450表达水平均明显下调（均P＜0.05）。与阴性对照组比较,circ_0003159超表达组中细胞侵袭数和迁移数均明显减少（均P＜0.05）。预测结果可知miR-32-5p为circ_0003159潜在的靶基因,PTEN是miR-32-5p潜在的靶基因。荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组比较,过表达miR-32-5p组中circ_0003159-MUT和PTEN-MUT相对活力值比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）,而circ_0003159-WT和PTEN-WT相对活力值比较均明显下调（均P＜0.05）。与对照组相比,过表达miR-32-5p组中PTEN蛋白相对表达水平明显下降（P＜0.05）。结论circ_0003159超表达显著抑制了胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过靶向下调miR-32-5p对PTEN的抑制作用。     

miR-34a-5p在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及其靶基因信号通路富集分析

目的研究胃癌细胞和胃癌组织中miR-34a-5p的表达,分析其临床意义,并采用生物信息学方法进行miR-34a-5p靶基因预测和信号通路富集分析。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a-5p在不同分化程度的胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中的表达以及在胃癌组织和癌旁组织中的表达,比较并分析其临床意义;采用miRWalk网站的生物信息学软件预测miR-34a-5p的靶基因,采用DAVID6.7软件对靶基因进行信号通路富集聚类分析。结果与正常胃黏膜上皮细胞比较,miR-34a-5p在胃癌细胞HGC-27、SGC-7901中的相对表达量未明显上调,差异均无统计学意义(P0.05),在胃癌细胞MKN-45、MKN-28、MGC-803、BGC-823、AGS中的相对表达量均明显上调,差异有统计学意义(P0.05或P 0.01);与癌旁组织比较,miR-34a-5p在胃癌组织中有32例表达上调[2.79(1.91,5.78)],18例表达下调[0.37(0.14,0.45)],差异有统计学意义(Z=5.821,P=0.000),提示miR-34a-5p在胃癌组织中以高表达为主;在胃癌组织中,miR-34a-5p的高表达与胃癌分化程度、淋巴结转移具有相关性(P0.05);生物信息学分析结果提示,miR-34a-5p的靶基因富集在与肿瘤相关的28个信号通路中。结论 miR-34a-5p是胃癌的高表达分子标志物,是潜在的具有临床相关性的癌基因。     

miR-27在胃癌中的表达及其作用研究

目的:探讨胃癌组织中miR-27的表达情况及miR-27对胃癌细胞系MKN-45转移侵袭能力的影响,预测并验证miR-27的靶向基因。方法:选取16例胃癌组织及其对应癌旁正常胃黏膜组织,通过RT-PCR检测miR-27在胃癌中的表达情况,并分亚组比较有淋巴结转移组和无淋巴结转移组miR-27表达水平的差异;转染miR-27类似物(miR-27mimics)或miR-27拮抗剂(miR-27inhibits)及其NC对照后,用Transwell assay检测胃癌细胞系MKN-45转移侵袭能力的变化;用生物信息学软件预测miR-27的靶基因,并用RT-PCR及Western-blot验证miR-27对其靶基因表达和翻译的调节作用。结果:miR-27在胃癌组织中表达上调,有淋巴结转移组比无淋巴结转移组miR-27表达水平更高;转染miR-27 mimics后,胃癌细胞系MKN-45的转移侵袭能力增强,转染miR-27inhibits后,胃癌细胞系MKN-45的转移侵袭能力减弱;PicTar、Targetscan和miRbase三个生物信息学软件同时预测出ZBTB10为miR-27的靶基因,RT-PCR检测显示:miR-27的表达对胃癌细胞中ZBTB10 mRNA的含量无影响,Western-blot检测显示:miR-27抑制胃癌细胞中ZBTB10蛋白的含量。结论:miR-27在胃癌中表达上调,促进胃癌细胞的转移侵袭,其机制可能与其抑制ZBTB10蛋白的翻译有关。     

miR-328-5p靶向SPON2介导FAK/Src信号调控胃癌细胞迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-328-5p对胃癌细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法将30只小鼠按照随机数字表法分为胃癌组和正常组,每组15只,采用N-甲基-N-亚硝基脲（MNU）化学诱导法构建小鼠胃癌模型,采用RT-PCR法检测两组小鼠胃组织中miR-328-5p、脊椎蛋白2（SPON2）相对表达量;Westernblot法检测两组小鼠胃组织中酪氨酸蛋白激酶（Src）、磷酸化Src（p-Src）、局部黏着斑激酶（FAK）、磷酸化FAK（p-FAK）蛋白表达水平。将胃癌细胞系SGC7901分为miR-328-5p组、miR-con组、NC组共3组,采用RT-PCR法检测3组细胞miR-328-5p、波形蛋白（Vimentin）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）相对表达量;采用Transwell小室实验检测3组细胞迁移和侵袭数。采用荧光素酶报告基因实验检测胃癌细胞miR-328-5p、miR-con+SPON2基因野生型（WT）和突变型（MUT）的荧光素酶相对活力值。结果与正常组比较,胃癌组胃组织中miR-328-5p相对表达量明显降低,SPON2相对表达量明显升高（均P＜0.05）;与正常组比较,胃癌组胃组织中p-FAK、p-Src蛋白表达水平均明显升高（均P＜0.05）。与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组miR-328-5p相对表达量明显升高,同时Vimentin、MMP-9相对表达量均明显降低（均P＜0.05）;与NC、miR-con组比较,miR-328-5p组细胞迁移数和侵袭数均明显降低（均P＜0.05）。与miR-328-5p+SPON2WT组比较,miR-con+SPON2WT组、miR-con+SPON2MUT组、miR-328-5p+SPON2MUT组荧光素酶相对活力值均明显为高（均P＜0.05）。结论miR-328-5p在胃癌组织中呈低表达,过表达miR-328-5p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭能力;miR-328-5p直接靶向SPON2基因3''UTR序列,调控其转录表达,并抑制其下游FAK/Src信号活化及其下游Vimentin、MMP-9的表达。     

LncRNA OIP5-AS1通过海绵吸附miR-143-3p调控COL1A1促进胃癌发展

摘要 目的 探究长链非编码RNA（LncRNA）Opa相互作用蛋白5反义RNA 1 （OIP5-AS1）对胃癌发展的调控机制。方法 qRT-PCR检测LncRNA OIP5-AS1 在正常胃细胞系（GES-1）和两种胃癌细胞系（AGS和SGC7901）中的表达水平;构建OIP5-AS1敲低载体、miR-143-3p 抑制剂（miR-143-3p inhibitor）以及Ⅰ型胶原α1（COL1A1）敲低载体并转染胃癌细胞系,运用CCK-8实验、伤口愈合实验、Transwell 实验检测 LncRNA OIP5-AS1、miR-143-3p、COL1A1在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭中的作用;采用双荧光素酶报告基因、qRT-PCR、Western blot实验检测LncRNA OIP5-AS1以及miR-143-3p、COL1A1之间的靶向调控作用。结果 OIP5-AS1在胃癌细胞AGS、SGC7901中表达水平分别是GES-1细胞的6.10和5.53倍,差异有统计学意义(P<0.01)。同时,敲低 OIP5-AS1会抑制胃癌细胞增殖[AGS：（0.71±0.07）比（1.20±0.11）;SGC7901：（1.02±0.10）比（1.80±0.10）,P均<0.05]、迁移[AGS：（29.01±3.68）%比(72.04±6.82)%;SGC7901：（23.97±2.24）%比(62.02±3.73)%,P均<0.01]和侵袭[AGS：（35.68±6.96）比(278.33±11.85);SGC7901： （62.74±12.77）比(248.65±12.03),P均<0.01]。双荧光素酶报告基因证实OIP5-AS1靶向作用 miR-143-3p 并下调其表达水平,miR-143-3p 可负调控 COL1A1 的表达(P<0.01)。进一步研究发现,敲降 OIP5-AS1通过靶向上调miR-143-3p对COL1A1的抑制作用,抑制胃癌细胞增殖[AGS：(0.56±0.06)比(1.29±0.08);SGC7901：(0.85±0.05) 比(1.94±0.10),P均<0.01]、迁移[AGS：(26.33±4.19) %比 (69.67±2.87) %;SGC7901：(23.00±2.94) %比(63.33±3.30) % ,P均<0.01]和侵袭[AGS：(34.00±7.48)比(272.33±14.88) ;SGC7901： (55.33±9.53)比(274.67±8.96),P均<0.01]。结论 lncRNA OIP5-AS1通过海绵吸附miR-143-3p进而上调COL1A1促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭,为胃癌临床诊断与治疗提供了潜在的标靶。     

Hsa_circ_USP42竞争性结合miR-182-5p抑制三阴性乳腺癌转移的机制研究

目的探索hsa_circ_USP42作为miR-182-5p海绵在TNBC中的生物学功能及调控机制。方法RT-PCR技术检测hsa_circ_USP42在TNBC癌组织及癌旁组织中表达;通过双荧光素酶报告基因分析等技术研究hsa_circ_USP42和miR-182-5p的相互作用;过表达hsa_circ_USP42,qPCR技术及Western印迹法检测靶miRNA miR-182-5p及靶基因MTSS1的表达水平;Transwell及CCK8实验检测hsa_circ_USP42对细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果Hsa_circ_USP42在TNBC中表达明显下调（P=0.000）,淋巴结阳性组表达低于淋巴结阴性组（P=0.003）。双荧光素酶实验证实hsa_circ_USP42与靶miR-182-5P可有效结合;细胞功能实验表明,过表达hsa_circ_USP42可抑制TNBC细胞迁移、侵袭和增殖。体外实验表明,过表达hsa_circ_USP42后,靶miRNA miR-182-5p上调,而靶基因MTSS1在转录水平及蛋白水平均降低。结论Hsa_circ_USP42在TNBC中低表达,与miR-182-5p有效结合,可发挥miRNA海绵上调MTSS1表达,抑制TNBC侵袭及转移,是参与TNBC生物学行为机制之一。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

妊娠晚期重度妊高征的监测

重度妊高征表现为高血压、蛋白尿、浮肿等症状 ,严重可以导致母婴死亡。对妊娠足月的重度妊高征 ,可以根据其临产与否及宫颈条件 ,立即决定其为阴道分娩或是剖宫产术。对于妊娠晚期的重度妊高征 ,因其胎龄不足月 ,胎儿生长发育及胎肺成熟度情况需通过一定时间的治疗 ,根据其病情变化来决定其治疗方案或终止妊娠的时机[1,2 ] 。这就需要我们对这一阶段的治疗进行监测 ,防止母儿并发症的发生。现将 2 0 0 0年至今我院收治妊娠晚期重度妊高征 30例的监测结果回顾分析如下。1　资料和方法1.1　研究对象　选择孕 31～ 36周重度妊高征 30例 ,其中 …     

80例局限性银屑病误诊原因分析

本文报告80例局限于小腿或手或足的银屑病。均经皮肤组织病理检查确诊。因部位比较特殊。受多种理化因素影响,使皮疹形态发生轻重程度不同的变化,常看不到典型损害,因而误诊为神经性皮炎,湿疹,慢性皮炎及癣等。作者对误诊原因进行了分析后,提出了鉴别诊断方法。     

腰椎间盘突出症再次手术的原因分析

目的解决腰椎间盘突出症手术中神经压迫。方法对1980～1998年再手术资料进行统计分析,讨论分析再手术原因,再次手术前影像学检查,观察病理变化以确定再手术方法。结果对11例随访6个月～1年,优7例(68．4％),良3例(36．8％),差1例(2．8％)。结论初次手术前详细查体和分析X线片,术中用导尿管和神经剥离探查,尽量避免髓核遗留,手术范围不宜太大,尽量减少对软组织和脊柱结构的破坏,避免形成硬膜囊与神经根粘连而致单纯形疤痕。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值

目的 探讨降钙素原变化率的测定对细菌性肺炎的评估价值.方法 选取住院治疗的细菌性肺炎患者72例,根据治疗效果分为治疗有效组(有效组)47例和治疗无效组(无效组)25例,对治疗有效组和无效组中的降钙素酶原变化及影响肺炎治疗效果的危险因素进行分析.结果 有效组治疗后3天及治疗后7天的降钙素酶原显著低于无效组的患者(P＜0.05);年龄＞65岁、心功能≥3级、COPD、糖尿病、肺部双侧受累(X线示)、菌血症、感染性休克和3天内降钙素酶原变化率＜30％是影响细菌性肺炎治疗效果的危险因素;感染性休克、肺部双侧受累、3天内降钙素酶原变化率＜30％及心功能≥3级是影响细菌性肺炎治疗效果的独立危险因素.结论 测定降钙素原变化率对细菌性肺炎的疗效评估具有重要临床意义,可在临床推广应用.     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。