YM-155协同顺铂杀伤非小细胞肺癌细胞的机制研究

目的 探讨survivin小分子抑制剂YM-155对非小细胞肺癌顺铂化疗的协同治疗作用并研究其机制。方法 MTT法检测YM-155和顺铂对非小细胞肺癌细胞系A549的杀伤活性。Western blot试验检测A549细胞中survivin、细胞色素C、凋亡诱导因子、caspase-9和caspase-3的表达水平。流式细胞术检测A549细胞的线粒体膜电位和凋亡率。结果 YM-155能增强顺铂的抗肺癌活性,显著降低顺铂对A549细胞的半抑制浓度（IC₅₀）。YM-155处理能显著抑制A549细胞中survivin的表达。顺铂+YM-155组A549细胞的线粒体膜电位明显低于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155组A549细胞的凋亡率,细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显高于顺铂单治疗组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的相对细胞活力和线粒体膜电位明显高于顺铂+YM-155组。顺铂+YM-155+survivin质粒组A549细胞的凋亡率、细胞色素C、凋亡诱导因子释放水平以及caspase-9、caspase-3活化水平均明显低于顺铂+YM-155组。结论 YM-155通过抑制survivin的表达能够增强顺铂对非小细胞肺癌细胞线粒体途径凋亡的诱导活性。     

二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性

目的 探讨二氢杨梅素对卡铂耐药恶性黑素瘤细胞的增敏作用并研究其机制。方法 MTT法检测卡铂耐药A375细胞（A375-R）在卡铂和二氢杨梅素处理下的细胞活力。Western blot法检测卡铂和二氢杨梅素对A375-R细胞SIRT1表达水平,caspase-9、caspase-3活化水平及JNK蛋白磷酸化水平的影响。流式细胞术检测A375-R细胞在卡铂和二氢杨梅素联合处理下的细胞凋亡率。结果 MTT实验结果显示,卡铂对A375-R细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）显著高于A375细胞,二氢杨梅素辅助治疗能明显降低卡铂对A375-R的IC₅₀。Western blot实验结果显示A375-R中SIRT1的表达水平显著高于A375细胞,二氢杨梅素处理能显著抑制A375-R细胞SIRT1的表达。二氢杨梅素能明显促进卡铂对A375-R细胞JNK的磷酸化,转染SIRT1质粒或用JNK特异性抑制剂（SP600125）处理后,二氢杨梅素联合卡铂对A375-R细胞的杀伤活性、凋亡诱导活性和JNK、caspase-9及caspase-3的活化均受到明显抑制。结论 二氢杨梅素通过SIRT1/JNK途径提高耐药恶性黑素瘤细胞对卡铂的敏感性。     

槲皮素通过Bim-Bak/Bax途径提高顺铂耐药膀胱癌细胞对顺铂敏感性的研究

目的 探讨槲皮素能否逆转膀胱癌细胞对顺铂的耐药性并研究其机制。方法 MTT法检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下的细胞活力。流式细胞实验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下的细胞凋亡。Western blot试验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下Bim、活化caspase-9、活化caspase-3的表达水平以及细胞色素c、Smac/DIABLO的释放。免疫共沉淀实验检测顺铂耐药T24膀胱癌细胞在顺铂和槲皮素处理下Bim蛋白与Bak、Bax蛋白的相互作用。结果 相比于常规T24细胞,顺铂耐药T24细胞对顺铂的敏感性显著下降。MTT和流式细胞实验结果表明槲皮素能显著促进顺铂对耐药T24细胞的杀伤活性和凋亡诱导活性。免疫共沉淀和Western blot试验结果表明槲皮素能显著上调顺铂耐药T24细胞中Bim蛋白的表达,从而通过与Bak、Bax蛋白的相互作用促进顺铂对肿瘤细胞线粒体膜孔道的开放,诱导细胞色素c和Smac/DIABLO从线粒体中释放到细胞质中,最终引起caspase-9和caspase-3的活化。结论 槲皮素通过Bim-Bak/Bax途径提高顺铂耐药膀胱癌细胞对顺铂的敏感性。     

灯盏花乙素对非小细胞肺癌细胞JAK/STAT信号通路的影响

目的 研究灯盏花乙素对非小细胞肺癌细胞JAK/STAT信号通路及其凋亡机制的影响。方法 培养非小细胞肺癌A549细胞,经不同浓度灯盏花乙素处理24 h后收集细胞。采用MTT法观察细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡;RT-qPCR法检测JAK2,STAT3,Pim1和Bcl-2的mRNA表达情况;Western blot检测JAK2和STAT3蛋白表达水平。结果 MTT法和流式细胞术结果显示,灯盏花乙素能降低A549细胞的存活率,促进其凋亡,并呈剂量依赖效应;RT-qPCR和Western blot结果显示,与对照组比较,灯盏花乙素各组JAK2,STAT3,Pim1和Bcl-2的mRNA表达降低,JAK2和STAT3蛋白水平下降,且与加入的灯盏花乙素浓度成反比。结论 灯盏花乙素可以促进非小细胞肺癌A549细胞凋亡,其机制可能是通过抑制JAK/STAT信号转导通路的激活,减少JAK2和STAT3蛋白的表达。     

虫草素对人胃癌细胞系HGC-27的影响及分子机制

目的 探讨虫草素对HGC-27细胞增殖、运动性和凋亡的影响及相关机制。方法 用不同浓度虫草素处理人胃癌细胞系HGC-27、AGS和MGC-803,利用CCK-8法检测细胞活力,集落形成试验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,体外划痕试验检测细胞运动性。Western blot检测Bcl-2、Bax、ERK、磷酸化ERK（p-ERK）和糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白表达水平。结果 与对照组相比,虫草素处理组明显抑制细胞增殖、集落形成率、细胞运动性并诱导细胞凋亡,下调Bcl-2、GSK-3β和p-ERK蛋白表达水平,且呈浓度和时间依赖性,但对Bax蛋白表达水平没有影响。结论 虫草素通过调节ERK/GSK-3β信号通路起到抗肿瘤作用,有望成为临床干预和治疗胃癌的潜在药物。     

EGCG通过调控DNA结合蛋白Ku70促进肺癌细胞凋亡

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯[（-）-epigallocatechin-3-gallate,EGCG]对人肺腺癌细胞株的凋亡诱导作用,探讨Ku70在EGCG促肺癌细胞凋亡中的作用机制。方法 构建pSliencer 4.1-CMV-shKu70质粒干扰Ku70的表达,建立细胞系;MTT法和Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞的增殖及凋亡;Western blot法检测Bax、caspase-3（17 kDa）、Ku70蛋白的表达;免疫共沉淀法检测Ku70和Bax之间的相互作用。结果 EGCG可明显抑制A549的增殖（P<0.01）,并诱导其凋亡（P<0.05）,上调Bax、caspase-3表达,下调Ku70表达。抑制Ku70的表达后,EGCG对A549细胞的抑制增殖和促进凋亡作用更加明显,进一步显著上调caspase-3的表达（P<0.05）,但是Bax的表达无明显变化;同时EGCG可以减弱Ku70-Bax之间的相互作用（P<0.05）。结论 EGCG可抑制人肺腺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与抑制Ku70的表达,抑制Ku70-Bax之间的相互作用,激活Bax,启动caspase级联反应有关。     

顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响

目的 研究顺铂联合8-硝基白杨素对人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长的影响。方法 建立人卵巢癌COC1细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成4组,每组5只：生理盐水组、8-硝基白杨素组、顺铂组、8-硝基白杨素+顺铂组。观察各组裸鼠移植瘤体积、重量及裸鼠体质量的变化;裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数的变化;FCM测定瘤组织细胞凋亡率;Western blot分析瘤组织细胞凋亡的可能分子生物学机制。结果 与顺铂组和8-硝基白杨素组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合作用COC1细胞裸鼠移植瘤后,移植瘤的体积、移植瘤的重量均明显降低(P<0.05);与顺铂组相比,顺铂联合8-硝基白杨素联合组裸鼠体质量无明显差异(P>0.05),裸鼠血清乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、肌酐值和外周血白细胞计数无明显差异(P>0.05);顺铂和8-硝基白杨素联合作用COC1细胞16 d后,COC1细胞发生凋亡,同时bcl-2蛋白表达降低,caspase-3蛋白表达增高。结论 顺铂联合8-硝基白杨素通过降低bcl-2蛋白表达,活化caspase-3蛋白表达来抑制人卵巢癌COC1细胞裸鼠移植瘤生长。     

山楂酸与顺铂合用对肺癌A549细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨山楂酸与顺铂合用对肺癌细胞A549增殖及凋亡产生的影响。方法将人的肺癌细胞系A549经过药物干预(山楂酸、顺铂),并将干预后的肺癌细胞通过MTT实验,分析细胞增殖能力变化,通过流式细胞技术,分析细胞的凋亡水平变化。通过Western blot分析细胞中XIAP、Survivin的表达水平变化。结果山楂酸和顺铂合用后,A549细胞的增殖率显著降低,凋亡水平显著提高;荧光电子显微镜下观察到凋亡细胞明显增加,核碎裂明显,细胞大片脱落;Western blot结果显示,山楂酸和顺铂合用,显著下调XIAP、Survivin的蛋白表达量。结论山楂酸和顺铂合用抑制肺癌细胞的增殖,促进肺癌细胞的凋亡,并下调细胞中凋亡抑制相关指标XIAP、Survivin的表达水平。     

基于caspase-3/bcl-2/bax信号通路的槐定碱诱导胰腺癌细胞株capan-1凋亡机制研究

目的 探讨槐定碱对人胰腺癌细胞株capan-1作用及机制。方法 MTT法检测细胞增殖;Hoechst33342染色法观察细胞凋亡;流式检测细胞凋亡和细胞周期百分率;Western blot法检测caspase-3/bcl-2/bax表达。结果 槐定碱可以成浓度依赖性诱导capan-1细胞增殖抑制和凋亡,增加S/G2期细胞比例,下调bcl-2和pro-caspase-3表达水平,上调bax蛋白的表达。结论 槐定碱能通过调节caspase-3/bcl-2/bax信号通路而诱导细胞凋亡。     

蛇床子素对TRAIL抗乳腺癌活性的影响及其作用机制

目的 探讨中药活性成分蛇床子素对抗肿瘤药物TRAIL抗乳腺癌活性的影响并研究其机制。方法 用蛇床子素联合TRAIL体外治疗乳腺癌细胞系BT-20,MTT法检测肿瘤细胞的细胞活力,Annexin V/PI染色检测肿瘤细胞的凋亡,免疫共沉淀法检测RIP1-FADD-caspase-8复合物的形成。western blot法检测BT-20细胞caspase-8的活化及蛇床子素对BT-20细胞cIAP2蛋白表达的影响。结果 联用蛇床子素显著提高TRAIL对BT-20细胞活力的抑制率和凋亡诱导活性。免疫共沉淀及western blot结果发现联合蛇床子素后,TRAIL治疗的BT-20细胞内的RIP1-FADD-caspase-8复合物水平及caspase-8的活化程度显著提高。Western blot结果发现蛇床子素对BT-20细胞内的cIAP2蛋白表达有抑制作用。在BT-20细胞中转染cIAP2表达质粒后,蛇床子素对TRAIL抗肿瘤活性的促进作用受到抑制。结论 蛇床子素通过促进死亡受体复合物的形成增强TRAIL对乳腺癌细胞的凋亡诱导效应。     

白藜芦醇通过抑制膀胱癌细胞的糖代谢增强顺铂的抗肿瘤活性

目的 研究白藜芦醇增强顺铂对膀胱癌细胞的杀伤活性及机制。方法 MTT法和流式细胞术分别检测顺铂单独治疗及联合白藜芦醇治疗对膀胱癌细胞系T24的杀伤活性和凋亡诱导效应。将T24细胞用白藜芦醇和顺铂处理后,检测T24细胞对葡萄糖的摄取能力和乳酸及ATP的生成能力。将T24细胞用白藜芦醇和顺铂处理后,用Western blot方法检测T24细胞PKM2的表达水平。构建PKM2真核表达载体,检测PKM2表达载体对白藜芦醇联合顺铂杀伤T24细胞疗效的影响。结果 白藜芦醇单独治疗在体外对T24细胞的杀伤活性较低,但能显著增强顺铂对T24细胞的杀伤活性。白藜芦醇能显著减弱T24细胞对葡萄糖的摄取和乳酸及ATP的生成并下调T24细胞的PKM2表达水平。转染PKM2表达载体后,白藜芦醇对顺铂的协同抗肿瘤作用受到抑制。结论 白藜芦醇通过下调PKM2的表达抑制肿瘤细胞的糖代谢增强顺铂对膀胱癌细胞的杀伤活性。     

MiR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多柔比星敏感性关系的研究

目的 探讨miR-19反义核酸与CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR方法检测miR-19在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19反义核酸和多柔比星对HT29细胞系的CD133⁺细胞亚群种群比例的影响。MTT法检测miR-19反义核酸对多柔比星杀伤CD133⁺HT29细胞亚群能力的影响。利用生物信息学及Western blot法验证miR-19是否调节CD133⁺HT29细胞亚群中PTEN的表达。运用Western blot、免疫共沉淀、流式细胞术研究miR-19反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19表达水平显著高于正常结直肠上皮细胞系,并且CD133⁺细胞中的miR-19表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提高HT29细胞系中CD133⁺细胞亚群的比例,然而联用miR-19反义核酸后CD133⁺HT29细胞亚群的种群比例显著下降。MTT结果表明miR-19反义核酸可显著增强多柔比星对CD133⁺HT29细胞亚群的杀伤活性。Western blot实验表明miR-19的靶基因可能为PTEN。MiR-19反义核酸可显著抑制CD133⁺HT29细胞亚群PI3K、AKT和Bad的磷酸化,增强Bad与Bcl-2和Bcl-xl的结合,从而提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性,促进caspase-9和caspase-3的活化。结论 MiR-19反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad途径提高CD133⁺HT29细胞亚群对多柔比星的敏感性。     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

MiR-182对乳腺癌细胞顺铂耐药的相关性研究

目的 探讨miR-182与乳腺癌细胞顺铂耐药性的关系。方法 MTT法检测miR-182对顺铂杀伤乳腺癌细胞能力的影响。利用生物信息学、定量PCR及western blot法验证miR-182是否能调节乳腺癌细胞BNIP3的表达。运用JC-1染色、Annexin V染色及western blot法研究miR-182影响顺铂疗效的信号通路。结果 miR-182模拟物可减弱顺铂对MCF-7细胞的杀伤活性,而miR-182抑制剂则增强顺铂对MCF-7细胞的杀伤活性。定量PCR及western blot实验表明miR-182的靶基因可能为BNIP3。miR-182抑制剂联合顺铂可引起MCF-7细胞线粒体膜电位显著下降并诱导caspase-3的活化和凋亡的发生,转染BNIP3 siRNA后miR-182抑制剂联合顺铂对MCF-7细胞的凋亡诱导效应显著降低。结论 MiR-182在乳腺癌中通过下调BNIP3的表达影响顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性。