过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响

背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体激动剂具有抗炎和抑制神经凋亡保护作用,能在一定程度上保护脊髓神经元,对脊髓损伤后细胞自噬应激调控等产生影响。目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响。方法:将60只SD大鼠分为3组,正常对照组仅做椎板切除,不损伤脊髓,腹腔注射生理盐水;其余大鼠以改良Allen法制作大鼠脊髓损伤模型,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组腹腔注射罗格列酮;脊髓损伤组不做处理。损伤后1,3,7,14d为时间点并取材,对脊髓损伤区分别进行免疫组织化学法检测,并以WesternBlot法检测Beclin1/Bcl-2的表达变化,同时采用BBB评分方法观察神经功能恢复情况。结果与结论:大鼠脊髓损伤后第3～14天,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组BBB评分显著高于脊髓损伤组(P<0.05)。脊髓损伤组和过氧化物酶体增殖物激活受体γ组均见自噬相关阳性细胞表达,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组细胞自噬程度相对降低,Beclin1表达较脊髓损伤组降低(P<0.05),Bcl-2表达较脊髓损伤组明显增加(P<0.05),神经功能增强(P<0.05)。提示过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂在一定程度上降低大鼠脊髓损伤后细胞自噬,对细胞凋亡产生拮抗作用,并在一定程度上可促进神经功能的恢复。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对脊髓损伤后大鼠自噬相关蛋白表达的抑制作用。 方法将60只大鼠分为假手术组、模型组、激动剂组及抑制剂组，每组各15只。通过椎板切除术暴露脊髓，用无菌动脉夹在T6-T7节段硬膜外压迫脊髓造成脊髓损伤模型。假手术组大鼠只接受椎板切除术，激动剂组及抑制剂组大鼠分别在脊髓损伤后腹腔注射PPARγ激动剂罗格列酮和PPARγ抑制剂GW9662（2 mg/kg，每2小时1次）。假手术组和模型组大鼠给予腹腔注射等剂量的等渗NaCl溶液。使用Tarlov’s评分法评估各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d后肢运动功能。采用Western-blotting检测脊髓损伤区组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1及组织蛋白酶D蛋白的表达水平。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测脊髓损伤区PPARγ mRNA的表达水平。 结果4组大鼠在各时间点运动功能评分比较，差异具有统计学意义（F = 25.674，P < 0.001）。与假手术组相比，其余各组大鼠脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均显著降低（P均< 0.05）。激动剂组大鼠在脊髓损伤后3、5、7、14、21、28 d运动功能评分均高于模型组及抑制剂组大鼠（P均< 0.05）。4组大鼠脊髓损伤后3 d自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平比较，差异均有统计学意义（F = 238.213、28.268、172.563、32.492，P均< 0.001）。与假手术组比较，模型组、激动剂组及抑制剂组大鼠自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、beclin-1、组织蛋白酶D的蛋白及PPARγ mRNA表达水平均显著升高（P均< 0.05）。且与激动剂组比较，模型组及抑制剂组大鼠LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值及PPARγ mRNA均显著降低，而beclin-1及组织蛋白酶D的蛋白表达均显著升高（P均< 0.05）。 结论大鼠脊髓损伤后，PPARγ激动剂可以通过下调自噬相关蛋白的表达，促进神经功能的恢复。     

氙气后处理对脊髓缺血再灌注损伤的效果：Akt信号通路和自噬机制

目的 探讨氙气后处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)后自噬的影响及其与苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的关系。方法 30只健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓缺血再灌注组(I/R组)和氙气后处理组(Xe组),每组10只。后两组通过夹闭腹主动脉85 min,再灌注4 h建立大鼠SCIRI模型。于再灌注1 h时,Xe组经呼吸机吸入50%氙气+50%氧气混合气1 h。其余两组吸入50%氮气+50%氧气混合气1 h。再灌注4 h时,对大鼠行BBB评分和斜板试验后,收集L_3-5脊髓,Nissl染色计数正常神经元数量,Western blotting检测脊髓组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、自噬蛋白[p62、Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3 (LC3)Ⅰ和LC3Ⅱ]的表达,逆转录实时定量聚合酶链反应检测脊髓组织中p62、Beclin 1和LC3Ⅱ mRNA的表达。结果 与Sham组相比,I/R组后肢BBB评分明显降低(P <0.01),斜板试验最大倾斜度明显减小(P <0.01),正常神经元数量明显减少(...     

推拿对骨骼肌急性钝挫伤模型大鼠炎症、氧化应激及细胞自噬相关因子的影响

目的 观察推拿对大鼠骨骼肌急性钝挫伤修复过程中炎症、氧化应激、细胞自噬相关因子的影响,探讨推拿治疗骨骼肌损伤可能的作用机制。 方法 采用随机数字表法将42只成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠分为正常组（n=6）、模型组（n=18）、治疗组（n=18）,模型组和治疗组再根据取材的时间点随机分为1d、7d、14d三个亚组（n=6）。模型组和治疗组用自备打击器建立腓肠肌急性钝挫伤模型,治疗组于造模48h后开始推拿治疗,每日1次,每次15min。各组分别于各自的取材时间点心脏采血后取损伤侧腓肠肌,苏木精-伊红染色(HE）观察损伤部位腓肠肌形态学变化;酶联免疫法（ELISA）检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、C反应蛋白（CRP）、前列腺素E2（PGE2）表达水平;紫外-可见分光光度法检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）含量;Western blotting检测各组大鼠腓肠肌自噬微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Bcl-2同源结构域蛋白Beclin1、泛素结合蛋白P62表达水平。 结果 骨骼肌损伤修复过程中,HE染色显示,各时间点模型组较正常组细胞形态崩塌,肿胀明显,7d和14d亚组有成肌细胞核出现。各时间点治疗组较模型组恢复更好,新生肌细胞较多,形态更趋正常。ELISA结果显示,模型组各取材时间点较正常组同取材时间点血清促炎因子明显升高,但治疗组1d和7d组较模型组同取材时间点显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。紫外-可见分光光度法结果显示,模型组血清SOD和MDA含量较正常组明显升高,治疗组SOD较模型组同取材时间点显著升高,差异有统计学意义（P<0.05）,MDA较模型组同取材时间点显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting结果显示,模型组各取材时间点较正常组腓肠肌LC3（II/I）、Beclin1明显降低,P62明显升高,而治疗组较模型组同取材时间点LC3（II/I）、Beclin1显著升高,P62显著降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 骨骼肌损伤后,其炎症及氧化应激水平明显升高,细胞自噬活性明显降低,通过推拿治疗能有效减轻机体炎症反应,降低其氧化应激损害,提高组织细胞自噬活性,从而加速受损组织的修复,这可能是推拿促进骨骼肌损伤修复的机制之一。     

脊髓损伤后大鼠Cdh1 mRNA表达的变化

目的: 探讨大鼠脊髓损伤(SCI)后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达变化。方法: 32只雄性SD大鼠随机分成对照组（C组）、SCI组（M组）,每组16只。M组采用改良Allen打击法建立SCI模型;C组行假手术,仅暴露脊髓。术后第l、3、5、7天对大鼠后肢运动功能采用Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分进行评估;取损伤节段脊髓,提取组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达。结果:术后各时点M组BBB评分均低于C组(P<0.05)。术后各时点C组Cdh1 mRNA表达比较, 差异无显著性意义,M组Cdh1 mRNA 表达逐渐降低(P<0.05) 。与C组相比,M组术后第1天Cdh1 mRNA的表达增加 (P<0.05), 术后第5 、7 天Cdh1 mRNA的表达减少。结论:大鼠SCI后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA表达降低,提示APC-Cdh1可能参与SCI后的病理生理过程。     

电针对慢性期脊髓损伤大鼠功能恢复及神经营养因子表达的影响

摘要 目的:研究督脉电针对慢性期脊髓损伤大鼠功能康复及神经营养因子的表达的影响,探讨督脉经上不同穴位电针的作用是否存在差异。 方法:将32只雄性SD大鼠随机分为4组：假模组、模型对照组、头部督脉电针组（“百会、风府”）、背部督脉电针组(“大椎、命门”),每组8只。建立大鼠脊髓损伤模型,各治疗组于术后1周开始6周的电针治疗。采用BBB运动功能评分法评定大鼠后肢运动功能的恢复情况。术后7周处死大鼠,采用实时荧光定量PCR及Western-blot方法检测受损脊髓脑源性神经营养因子（BDNF）、神经营养素-3（NT-3）mRNA和蛋白的表达。 结果:电针干预组BBB评分高于模型组（P<0.05),且背部督脉电针组评分明显高于头部督脉电针组(P<0.05)。电针治疗后大鼠脊髓BDNF及NT-3 mRNA和蛋白的表达与模型对照组比较均明显上调（均P<0.05）,且背部督脉电针组高于头部督脉电针组（P<0.05）。 结论:电针治疗能增强受损伤脊髓神经营养因子的表达和促进大鼠后肢运动功能的恢复,背部督脉电针组作用强于头部督脉电针组。     

抑制自噬减少大鼠脊髓损伤后髓鞘碱性蛋白的丢失

目的:观察自噬抑制剂对脊髓损伤后髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的影响。方法:将99只大鼠随机分成假手术组、损伤组和干预组各33只,各组再分成损伤后3、7、14 d 3个时间点,应用打击器制备T10脊髓损伤模型。干预组造模前注射1μL 3-甲基腺嘌呤(3-MA)。假手术组不造成打击。提取脊髓样本进行Western blot和实时定量荧光PCR检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和MBP的蛋白、m RNA水平。用BBB行为学评分分别于伤后1、7、14 d评估大鼠。结果:伤后14 d时干预组的BBB评分明显高于损伤组(P=0.001)。损伤组各时间点大鼠脊髓损伤区域的LC3-Ⅱ蛋白含量较假手术组明显增加(P0.05),干预组损伤区域的LC3-Ⅱm RNA和蛋白水平在伤后3、7、14 d均比损伤组减少(P0.05)。干预组大鼠损伤区域的MBP m RNA和蛋白水平在伤后3、7、14 d均比损伤组增加(P0.05)。结论:大鼠脊髓损伤后存在自噬的过度激活,自噬抑制剂可通过减少脊髓损伤后MBP的丢失发挥神经保护作用。     

成对关联刺激对脑梗死大鼠神经元自噬的影响

目的 观察成对关联刺激（PAS）对脑梗死大鼠神经功能损伤恢复的影响,并从神经元自噬的角度探讨其作用机制。 方法 健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠60只,随机选取20只纳入假手术组（n=20）,另40只大鼠采用经典线栓法制作右侧大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,并按随机数字表法分为模型组和治疗组（各20只）。治疗组自术后1 d起进行为期14 d的PAS治疗,模型组和假手术组不给予任何干预。分别于术后第1、7和14天,对各组大鼠进行改良神经功能缺损程度量表（mNSS）评分和提尾试验（EBST）评分;于术后第7天和第14天的治疗结束后行脑组织取材, 以Western blot法检测缺血半暗带区LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、Beclin 1和Cathepsin B蛋白含量;免疫荧光双重染色法观察缺血半暗带区LC3与NeuN的共表达情况。 结果 ①术后第7天和第14天,模型组和治疗组的mNSS和EBST评分均高于假手术组（P<0.05）,而治疗组mNSS和EBST评分均低于同时间点模型组（P<0.05）,且治疗组术后第14天的mNSS评分低于术后第7天（P<0.05）;②术后第7天和第14天,治疗组和模型组的LC3Ⅱ/Ⅰ比值均较假手术组高（P<0.01）,且治疗组的LC3Ⅱ/Ⅰ比值较同时间点模型组低（P<0.05）;模型组和治疗组的Beclin 1蛋白含量较假手术组高（P<0.01）,而治疗组Beclin 1蛋白含量在术后第7天和14天均较同时间点模型组低（P=0.229,P<0.01）;模型组 Cathepsin B含量较假手术组高（P<0.05）,治疗组Cathepsin B含量亦较假手术组高（第7天时P<0.05,第14天时P=0.059）;术后第14天治疗组的Cathepsin B含量较同时间点模型组低（P<0.01）;③模型组和治疗组缺血半暗带区的LC3阳性细胞数均较同时间点假手术组显著增加（P<0.01）,且治疗组较同时间点模型组减少（P<0.05）;模型组和治疗组LC3阳性表达的神经元数量与神经元总数量的比值均较同时间点假手术组显著增加（P<0.01）,且治疗组较同时间点模型组减少（P<0.05）。 结论 PAS治疗可抑制脑梗死大鼠缺血半暗带区神经元的自噬活性,促进大鼠脑梗死后神经功能损伤的恢复。     

黄芪甲苷减少脓毒症大鼠胰腺腺泡细胞自噬的实验研究

目的探讨黄芪甲苷对脓毒症大鼠胰腺Beclin1、p62和LC3自噬相关基因和蛋白以及胰腺自噬情况的影响。方法清洁级雄性Wistar大鼠50只,采用随机数字表法分为5组(每组10只):空白对照组(Blank,未加任何干预,直接处死)、生理盐水尾静脉注射组(NS组)、黄芪甲苷低剂量(1 mg/kg)组、黄芪甲苷中剂量(2.5 mg/kg)组、黄芪甲苷高剂量(5 mg/kg)组。采用盲肠结扎穿孔法制造脓毒症模型。利用RT-PCR技术检测各组小鼠胰腺中Beclin1、p62和LC3的mRNA检测水平,Western blotting技术检测各组小鼠胰腺中Beclin1、p62和LC3的蛋白表达水平。采用透射电子显微镜观察胰腺超微结构及腺泡细胞内自噬小体的形成情况。结果与空白对照组相比,NS组大鼠胰腺中的Beclin1、p62和LC3自噬相关基因及蛋白表达明显升高,黄芪甲苷干预后使其表达明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。电镜显示脓毒症造模24 h,NS组较Blank组胰腺自噬小体明显增多,而黄芪甲苷给药组胰腺自噬小体的形成较NS组明显减少。结论黄芪甲苷能够减少脓毒症大鼠胰腺中Beclin1、p62和LC3基因及蛋白的表达,减少胰腺局部自噬小体的形成。     

P2X3受体在神经源性膀胱大鼠背根神经节及逼尿肌中的表达

目的探讨P2X3受体在不同平面脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠L6～S1背根神经节（DRG）和膀胱逼尿肌中的表达变化及临床意义。 方法共选取健康雌性SD大鼠80只，将其随机分为骶上脊髓（胸腰段）损伤组、骶髓损伤组及对照组。采用脊髓横断法制备大鼠不同平面脊髓损伤后神经源性膀胱模型，于模型制作20 d后采用Western blotting技术检测各组大鼠背根神经节和膀胱逼尿肌中P2X3受体表达情况，并进行组间比较。 结果骶上脊髓损伤组大鼠背根神经节、膀胱逼尿肌中P2X3受体表达水平较对照组、骶髓损伤组明显增高（P<0.01）；骶髓损伤组背根神经节、膀胱逼尿肌中P2X3受体表达水平较对照组明显降低（P<0.05）。 结论结合本课题前期研究的尿流动力学检查结果，推测P2X3受体表达水平与膀胱尿道功能障碍程度密切相关，有望通过影响P2X3受体表达水平为临床治疗脊髓损伤后神经源性膀胱提供新途径。     

脊髓活性氧激活自噬参与调节2型糖尿病神经病理性疼痛

目的:探讨脊髓中活性氧(reactive oxygen species, ROS)是否通过激活自噬参与大鼠2型糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain, DNP)的形成和发展。方法:清洁级雄性SD大鼠高脂高糖喂养8周,后链脲佐菌素(streptozocin, STZ)单次小剂量(35 mg/kg)腹腔注射,注射后3 d血糖≥16.7 mmol/L为成功诱导2型糖尿病发生;注射后14 d行为学测定痛阈下降至基础值的85%以下,即为成功制备出大鼠2型DNP模型,否则为2型糖尿病不痛组(PL组)。将造模成功的2型DNP大鼠随机分为3组,每组10只:DNP组、DNP+ROS清除剂组(DNP+PBN组)和溶剂对照组(SC组)。另取10只正常SD大鼠为对照组(C组),普通饲料喂养,给予PBN后3 d、7 d、14 d时测定所有组别大鼠的机械缩足反应阈值(mechanical withdrawal threshold, MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency, TWL),随后处死大鼠,取脊髓腰膨大L4-L6,用免疫印迹法测定脊髓中Beclin 1、LC3II/LC3I和p62的表达水平;用流式细胞仪测定脊髓组织中活性氧(ROS)的含量。结果:与C组和PL组比较,DNP组和SC组于模型制备成功后3 d、7 d和14 d时MWT下降,TWL缩短,脊髓ROS、Beclin 1和LC3II/LC3I表达上调(P <0.05),而p62表达下降(P <0.05);与DNP组比较,DNP+PBN组在3 d、7 d和14 d时MWT升高、TWL延长,脊髓Beclin 1和LC3II/LC3I表达下降(P <0.05),而p62表达上调(P <0.05);DNP组与SC组各指标比较差异均无统计学意义。结论:脊髓ROS通过激活自噬参与调节2型糖尿病神经病理性疼痛的产生和维持。     

减重步行训练结合针刺治疗对脊髓损伤大鼠运动功能及Cdh1 mRNA表达的影响

摘要 目的：探讨减重步行训练结合针刺治疗对脊髓损伤（SCI）大鼠运动功能及Cdh1 mRNA表达的影响。 方法：将150只雄性SD大鼠随机分为针刺组（A）、步行训练组(B)、针步组（C）、对照组（D）,每组30只,及假手术组（E）、空白组（F）,每组15只。A、B、C、D组采用切割型脊髓损伤模型法制备SCI模型;E组仅暴露脊髓。并于术后3d开始A、B、C组相应治疗,D、E不予治疗,F组不做任何处理。术后3、5、7、14、21d对大鼠后肢运动功能进行BBB评分;及提取脊髓损伤节段组织总RNA,用实时荧光定量测定PCR检测损伤区Cdh1 mRNA的表达。 结果：21d后治疗组BBB评分明显高于D组,其中C组最高,B组次之,A组最少,各组差异有显著性（P<0.01）;Cdh1 mRNA的表达C组最高,与其他各组有显著差异（P<0.01）;A、B组与D组相比差异有显著性（P<0.01）,A、B组差异无显著性（P>0.05）。 结论：减重步行训练或针刺治疗都对SCI大鼠运动功能及损伤部Cdh1 mRNA的表达具有良性作用,二者结合疗效更为显著。     

脊髓损伤后大鼠Cdh1 mRNA表达的变化

目的：探讨大鼠脊髓损伤（SCI）后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达变化。方法：32只雄性SD大鼠随机分成对照组（C组）、SCI组（M组）,每组16只。M组采用改良Allen打击法建立SCI模型;C组行假手术,仅暴露脊髓。术后第1、3、5、7天对大鼠后肢运动功能采刖Basso—Beattie—Bresnahan（BBB）评分进行评估;取损伤节段脊髓,提取组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA的表达。结果：术后各时点M组BBB评分均低于C组（P〈0．05）。术后各时点C组Cdh1 mRNA表达比较．差异无显著性意义,M组Cdh1 mRNA表达逐渐降低（P〈0．05）。与C组相比,M组术后第1天Cdh1 mRNA的表达增加（P〈0．05）,术后第5、7天Cdh1 mRNA的表达减少。结论：大鼠SCI后损伤区脊髓组织Cdh1 mRNA表达降低,提示APC—Cdh1可能参与SCI后的病理生理过程。     

乙酰左旋肉碱对急性脊髓损伤大鼠细胞自噬、凋亡及运动功能的影响

目的旨在检测乙酰左旋肉碱(ALC)对大鼠急性脊髓损伤(SCI)后微管相关蛋白1轻链3(LC3)-Ⅱ、细胞凋亡及运动功能的影响。方法成年雌性Sprague-Dawley大鼠36只随机分为假手术组(Sham组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)、ALC治疗组,每组12只。Allen法建立大鼠T10脊髓损伤模型。损伤后3 d行BBB运动评分;取脊髓组织,Western blotting和免疫荧光标记技术检测LC3-Ⅱ表达,TUNEL法观察细胞凋亡。结果与Sham组相比,SCI组LC3-Ⅱ明显升高(P0.01),细胞凋亡显著增加(P0.001),BBB评分显著降低(P0.001);与SCI组相比,ALC组LC3-Ⅱ显著升高(P0.001),细胞凋亡显著降低(P0.001),BBB评分明显提高(P0.01)。结论 ALC可能通过增强大鼠脊髓损伤后细胞自噬,减少细胞凋亡,促进大鼠运动功能恢复。     

机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究

目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。 方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞,经白介素-1β（IL-1β）干预构建软骨细胞炎症模型,设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力+IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力+IL-1β）,IL-1β浓度为5ng/ml,以1Hz应力干预2h。采用Real-time PCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（Col-2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及m-TOR表达,同时检测MEG3表达,采用免疫荧光染色检测自噬小体形成;si-RNA沉默MEG3后,采用Real-time PCR检测LC3及Beclin-1表达。 结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beclin-1基因及Beclin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P<0.05）;2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P<0.05）;5000μstrain组m-TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P<0.05）;应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P<0.05）;免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加,5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P<0.05）;si-RNA沉默MEG3后,发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P<0.05）。 结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA-MEG3表达,从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。     

2-甲氧基雌二醇对脊髓损伤大鼠运动功能及神经细胞凋亡的影响

摘要 目的：探讨2-甲氧基雌二醇(2ME2)对脊髓损伤(SCI)大鼠运动功能及细胞凋亡的影响。 方法：将成年雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(n=24)、脊髓损伤组(n=24)、2ME2治疗组(n=24)。采用改良的 Allen法制作脊髓损伤模型,造模成功后1、3、7、14、21、28d应用BBB运动评分系统对各组大鼠运动功能进行评估,造模成功后连续7天对2ME2治疗组大鼠腹腔注射2ME2(24mg/kg),第7天应用免疫荧光技术检测各组大鼠caspase-3表达,应用TUNEL染色进行凋亡细胞计数。 结果：脊髓损伤组及2ME2治疗组损伤后随时间延长BBB评分升高,其中2ME2治疗组损伤后第14、21、28天BBB评分显著高于脊髓损伤组,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（4.583±2.234）比较,脊髓损伤组（33.417±4.274）及2ME2治疗组（22.250±4.048）免疫荧光染色caspase-3蛋白表达阳性细胞数显著增加,2ME2治疗组caspase-3蛋白表达阳性细胞数较脊髓损伤组显著减少,差异具有显著性意义（P<0.05）。与假手术组（12.25±2.67）相比,脊髓损伤组（49.17±4.75）及2ME2治疗组（38.67±4.44）凋亡细胞数显著增多, 2ME2治疗组凋亡细胞数较脊髓损伤组显著减低,差异具有显著性意义（P<0.05）。 结论：2ME2改善脊髓损伤大鼠模型脊髓损后的运动功能,具有神经保护作用;2ME2降低脊髓损伤大鼠模型脊髓损后caspase-3蛋白表达,抑制神经细胞凋亡。     

组织型激肽释放酶通过诱导自噬对缺血性脑卒中发挥保护作用

目的：通过在体实验研究组织型激肽释放酶（TK）对缺血性卒中的神经保护作用是否与诱导保护性自噬有关。方法：成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、生理盐水（NS）组、TK组、3-MA组和3-MA+TK组，每组11只。假手术组和NS组分别于侧脑室注射NS,TK组和3-MA组分别于侧脑室注射TK和自噬抑制剂3-MA,3-MA+TK组先注射3-MA,30 min后再注射TK。各组完成侧脑室给药后，采用线栓法建立永久性大脑中动脉缺血模型（p MCAO）。在缺血后12 h，采用Longa评分法评估各组大鼠的神经功能。完成神经损伤评分后，TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积，免疫印迹实验检测各组自噬相关蛋白LC3和p62的表达水平。结果：NS组大鼠缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ较假手术组表达升高，p62水平降低（均P<0.01）。与NS组相比，TK组缺血侧脑皮质LC3-Ⅱ表达增高，p62水平降低（均P<0.01），大鼠神经功能损伤较轻、脑梗死体积明显缩小（均P<0.01）；与TK组比较，3-MA组缺血脑皮质LC3-Ⅱ的表达降低和p62的水平水平较高，大鼠神经功能损伤较重、脑梗死体积较大（均P<...     

跑台训练对脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的影响

摘要 目的：探讨跑台运动训练对脊髓损伤（SCI）后大鼠小脑细胞脑浦肯野细胞的影响及其机制研究。 方法：选取108只雌性SD大鼠,随机分成3组,包括假手术组、SCI组、SCI运动组。SCI运动组大鼠于术后开始跑台运动训练,BBB评分评定大鼠脊髓损伤后后肢运动功能。分别在术后第3天、第7天、第14天取小脑组织,通过HE染色、尼氏染色检测大鼠小脑浦肯野细胞数量和形态变化;免疫组化检测小脑中浦肯野细胞caspase-9、mGluR1表达情况;免疫荧光检测小脑中浦肯野细胞caspase-3、mGluR1表达情况;Western Blot检测小脑组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cyt-C、caspase-9、caspase-3蛋白表达水平变化。 结果：与假手术组比较,SCI组、SCI+TT组BBB评分均显著下降（P<0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量减少,体积缩小、失去正常形态;小脑中凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9、活化caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2表达显著降低;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达增加,mGluR1表达降低（P<0.05）。与SCI组相较,SCI+TT组评分BBB评分结果比较无显著性差异（P>0.05）;小脑组织中浦肯野细胞数量、正常形态占比增加;凋亡相关蛋白Bax、Cyt-C、活化caspase-9 、活化caspase-3蛋白表达水平下降（P<0.05）,Bcl-2表达升高;浦肯野细胞caspase-9和caspase-3表达下降,mGluR1表达水平显著升高（P<0.05）。 结论：跑台运动训练可通过线粒体凋亡途径抑制脊髓损伤后大鼠小脑浦肯野细胞的凋亡。     

积雪草苷对脊髓损伤大鼠神经元的保护作用的研究

目的探讨积雪草苷（asiaticoside,AS）对急性脊髓损伤（spinalcordinjury,SCI）大鼠神经元的保护作用及对诱导型一氧化氮合酶（induciblenitricoxidesynthase,iNOS）表达的影响。方法成年sD大鼠以Allen’s打击法制备脊髓损伤模型。分别给予不同剂量As治疗,术后24h、72h、7d、14d、28d采用BassoBeasttieandBresnahan（BBB）评分评价大鼠双后肢神经功能恢复情况,并通过HE和尼氏染色观察损伤脊髓组织病理变化,同步检测损伤部位脊髓的丙二醛（malondialdehyde,MDA）、超氧化物歧化酶（superoxidedismutase,SOD）值、iNOS蛋白表达及其活度值。结果与脊髓损伤模型组相比,低、中、高三剂量（15、30和45mg／kg）AS给药组在脊髓损伤后各时间点BBB评分分值明显提高（P〈0．05）,HE染色镜检脊髓组织病理损伤明显减轻,神经元尼氏体表达明显（P〈0．05）,MDA生成显著减少（P〈0．05）,SOD活性提高（P〈0．05）。各剂量AS均可下调SCI大鼠第7天受损脊髓组织iNOS蛋白表达和iNOS酶活度值。结论AS可减轻大鼠脊髓组织的损伤,保护脊髓神经元,此作用可能与抑制iNOS蛋白表达有关。     

脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道caspase-3和nNOS表达的改变

目的：观察SD大鼠脊髓损伤后脊髓及泌尿生殖道凋亡促进因子半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和一氧化氮合成酶（nNOS）表达的改变。方法： 成年雄性SD大鼠16只,随机分为对照组（n=8）和脊髓损伤组（n=8）;脊髓损伤组采用改良的重物坠落法（Allen法）制作大鼠T9-T10脊髓节段不完全损伤模型。分别行caspase-3免疫组化及nNOS免疫组化染色,用半定量方法评价正常及脊髓损伤大鼠脊髓、膀胱壁及阴茎组织表达caspase-3和nNOS的改变情况。结果：脊髓损伤后大鼠脊髓内nNOS和caspase-3均表达增强（P<0.001）,而膀胱壁及阴茎组织内caspase-3表达增强（P<0.001）,nNOS表达减弱（P<0.001）。结论：脊髓损伤大鼠脊髓及泌尿生殖道表达caspase-3和nNOS发生了改变,但并非同步,机制各有不同。