SC-58236与顺铂联合调控人肺腺癌A549细胞增殖及肺癌移植瘤生长的作用

目的：观察高选择性COX-2抑制剂SC-58236和顺铂联合对人肺腺癌A549细胞增殖及移植瘤生长的影响。方法：采用MTT法观察A549细胞增殖,同时用PTENsiRNA转染A549细胞,并将其接种裸鼠,观察SC-58236和／或顺铂对A549细胞增殖及移植瘤生长的影响。结果：SC-58236可增强顺铂对A549细胞增殖及其对移植瘤生长的抑制作用,并协同促进细胞及瘤组织内PTEN蛋白表达（P〈0．01）。PTENsiRNA转染可减弱顺铂与SC-58236对A549细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用（P〈0．01）。结论：SC-58236可增强顺铂对A549细胞的细胞毒性,该作用与增加PTEN蛋白表达有关。     

葡萄籽原花青素联合顺铂对喉癌细胞Hep-2生物学作用及机制研究

目的利用葡萄籽原花青素及其联合顺铂在体外作用于喉癌细胞Hep-2,观察其对喉癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨抗肿瘤作用的可能机制。方法 MTT法检测各组药物对喉癌细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;TUNEL法检测各组药物对喉癌细胞凋亡率的影响;采用流式细胞仪分析凋亡细胞比例,Western blot法检测各组药物对喉癌细胞Bax/Bcl-2表达情况的影响。结果 MTT和TUNEL结果显示,GSPE+顺铂组的喉癌细胞抑制增殖作用明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞周期结果显示,GSPE+顺铂组处于S+G2M期的细胞数明显低于单纯GSPE和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示,GSPE+顺铂组的Bax/Bcl-2的表达明显高于单纯GSPE组和单纯顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论葡萄籽原花青素可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡;与单纯应用葡萄籽原花青素或顺铂比较,葡萄籽原花青素联合顺铂可以起到更好的增殖抑制并诱导喉癌细胞凋亡,两者具有协同作用。     

S100 A4对子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性影响分析

目的分析靶向沉默S100A4基因对子宫内膜癌细胞顺铂化疗敏感性的影响。方法病毒转染子宫内膜癌KLE细胞株并获得稳定细胞株;聚合酶链反应检测转染后子宫内膜癌细胞中S100A4 mRNA的表达;Western blot印迹法检测转染后子宫内膜癌细胞中S100A4蛋白的表达水平;CCK8法检测转染后子宫内膜癌细胞的增殖变化。结果阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组3组之间光密度值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组的S100A4相对表达水平两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、shRNA干扰实验组的S100A4蛋白表达水平明显低于阴性对照组,过表达实验组的S100A4蛋白表达水平明显高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。空白对照组、阴性对照组、shRNA干扰实验组、过表达实验组的IC50值两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论靶向沉默S100A4基因可抑制肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡,增强子宫内膜癌细胞对顺铂的敏感性。     

壳寡糖对胰腺癌细胞系PACN-1生长影响研究

目的探讨壳寡糖对胰腺癌细胞系PACN-1生长的影响作用。方法将培养至对数期生长的PACN-1细胞根据加入壳寡糖的浓度将其分为壳寡糖1.0 mg/ml组、壳寡糖2.0 mg/ml组及空白组。通过细胞集落实验观察并记录各组细胞集落形成的特点。通过四唑盐比色法(MTT)实验,比较各组细胞的增殖情况。结果细胞集落实验发现,培养48 h、96 h后,随壳寡糖浓度的升高,细胞集落的细胞数减少,细胞集落的的细胞延展性变差,细胞间的连接程度变好。MTT实验发现,培养48 h后,壳寡糖对PACN-1生长有较显著的抑制作用,且随壳寡糖浓度的升高及时间的延长,其对胰腺癌细胞生长的抑制作用增强。结论壳寡糖在体外研究中有抑制PACN-1细胞生长的作用,可能为胰腺癌治疗提供了一种新的途径。     

索拉非尼联合顺铂抑制肝癌HepG2细胞生长的体外研究

目的探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其可能的分子机制。方法实验细胞分为4组:空白对照组、索拉非尼单药组、顺铂单药组、索拉非尼联合顺铂组。索拉非尼和顺铂单独或联合作用于细胞,以MTT法检测24、48、72、96h时间点药物对HepG2细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测24、48h时间点的细胞周期与凋亡率。在药物作用后24h,用荧光染料罗丹明123(Rh123)染色细胞,流式细胞仪测定线粒体跨膜电位(ΔΨm),分光光度法检测caspase-3活性。结果索拉非尼及顺铂单独应用对HepG2生长均有抑制作用,且低剂量联合具有协同作用。联合用药可以使细胞周期阻滞于G0/G1期和G2期,且凋亡率明显高于单药组(P<0.05)。单独应用顺铂和索拉非尼均能使线粒体跨膜电位降低,而联合组作用强于单药组(P<0.05)。药物作用后caspase-3活性增高,联合组高于单药组(P<0.05)。结论索拉非尼联合顺铂能更好地抑制肝癌HepG2细胞增殖,并促进其凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞、线粒体跨膜电位降低及caspase-3活性增加有关。     

咖啡因在骨肉瘤细胞株顺铂化疗中增效作用的实验研究

目的探讨咖啡因在骨肉瘤细胞株(OS-U2)顺铂化疗中的增效作用。方法骨肉瘤细胞株经不同浓度(0.2、2、5、10、20μg/L)顺铂单药作用及分别添加0.2、2.0mmol/L咖啡因作用24、48、72h,通过MTT法检测各组细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡水平,荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态并记录其阳性率。结果在添加0.2、2.0mmol/L咖啡因的各浓度顺铂组中,骨肉瘤细胞增殖明显受抑,凋亡水平明显升高。咖啡因对顺铂杀伤骨肉瘤细胞株的增效作用存在量效及时效关系。结论咖啡因对骨肉瘤细胞株顺铂化疗具有显著增效作用,其机制可能是咖啡因能加强诱导骨肉瘤细胞凋亡,从而增强顺铂对骨肉瘤细胞株的杀伤作用。     

紫杉醇、顺铂及丝裂霉素对3种人卵巢癌细胞株体外作用的研究

 目的 观察临床常用抗肿瘤药紫杉醇、顺铂和丝裂霉素对3种人卵巢癌细胞株体外生长的影响.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,测定紫杉醇、顺铂和丝裂霉素对人卵巢癌细胞株3AO、SKOV3和OVCAR3生长的抑制作用,并与空白组进行对比.结果 药物浓度达到10及100 μmol/L时,紫杉醇、顺铂及丝裂霉素对3种卵巢癌细胞均具有较好的抑制作用;顺铂和丝裂霉素的抑制作用较紫杉醇强(P<0.05).结论 在治疗卵巢癌时可采用不同种类的抗肿瘤药物的联合治疗方法.     

吴茱萸碱对子宫内膜癌细胞放射敏感性的影响

目的 探讨吴茱萸碱对子宫内膜癌细胞放射敏感性及增殖、凋亡的影响。方法 用不同浓度的吴茱萸碱作用于人子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、AN3CA,四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖情况,计算半数抑制浓度,筛选出受到增殖抑制作用最大的癌细胞。分别用半数抑制浓度的吴茱萸碱、8 Gy照射处理细胞,同时用吴茱萸碱联合射线照射细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、p38、磷酸化的p38（p-p38）水平,试剂盒检测细胞中活性氧（ROS）水平,细胞克隆实验检测细胞放射敏感性。结果 1、2、4、8 μmol/L的吴茱萸碱能够抑制人子宫内膜癌细胞Ishikawa、HEC-1A、AN3CA增殖,半数抑制浓度IC₅₀分别为（8.32±0.95）、（3.98±0.84）、（4.78±0.64）μmol/L,吴茱萸碱对人子宫内膜癌细胞HEC-1A抑制作用最强,后续研究中选用4 μmol/L的吴茱萸碱作用于人子宫内膜癌细胞HEC-1A。吴茱萸碱联合放疗处理后HEC-1A细胞凋亡率由（45.54±4.25）%升高到（65.87±2.93）%（t=11.010,P<0.05）。细胞存活率由（41.84±4.18）%下降到（33.27±3.52）%（t=7.484,P<0.05）。计算吴茱萸碱作用后的HEC-1A细胞放疗增敏比为1.628。吴茱萸碱联合放疗处理后较单纯放疗处理后细胞中ROS水平及Cleaved Caspase-3、p-p38水平升高。结论 吴茱萸碱能够抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进子宫内膜癌细胞凋亡。吴茱萸碱能够增强子宫内膜癌细胞放射敏感性,作用机制可能与细胞内ROS水平及细胞中p38信号通路有关。     

节律基因mClock在肿瘤实验化疗中的作用

目的 研究节律基因mClock在顺铂诱导小鼠Lewis肺癌细胞(LLC)凋亡中的作用.方法 体外采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐(PMA)诱导LLC细胞近日节律,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测细胞mClock基因的节律性表达.于诱导后不同时间点,顺铂(CDDP)处理细胞,24 h后四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法和流式细胞术检测(FCM)其对细胞的增殖与凋亡的影响.采用脂质体介导方法将mClock基因转染至LLC细胞,顺铂处理细胞,24 h后MTT法和流式细胞术检测其对细胞的增殖与凋亡的影响.结果 PMA作用LLC后,mClock基因呈现节律性表达.PMA诱导LLC节律表达的不同时间点,细胞对顺铂的敏感性不同.mClock过表达使顺铂作用后LLC凋亡率下降,细胞增殖明显.结论 mClock能够抑制顺铂诱导LLC的凋亡.     

EZH2蛋白在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及其机制研究

目的探讨Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)蛋白在非小细胞肺癌对顺铂耐药中的作用及其调控机制。方法采用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,qRT-PCR）检测人肺腺癌细胞株A549及其顺铂耐药株A549/DDP中EZH2、P21、Puma和Bad的mRNA表达差异。采用RNA干扰技术抑制细胞中的EZH2蛋白表达。通过细胞毒性实验检测细胞耐药性的改变。qRT-PCR检测抑制EZH2蛋白表达后A549/DDP细胞中P21、Puma和Bad的表达变化。流式细胞仪检测细胞周期的分布和变化。结果EZH2在A549/DDP中呈高表达。抑制EZH2蛋白表达后,顺铂对A549/DDP的IC50由（34.57±3.70）μmol/L降低至（18.91±2.07）μmol/L（P<0.05）;抑制EZH2蛋白表达后,A549/DDP中P21、Puma和Bad的mRNA表达均上调;抑制A549/DDP细胞EZH2蛋白表达后,G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞增多(P<0.05),细胞发生G2/M期阻滞。结论EZH2蛋白参与介导了A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过调控与细胞凋亡相关基因相关的凋亡通路诱导A549/DDP对顺铂的耐药;EZH2蛋白可能通过抑制P21表达、促进细胞周期进展及肿瘤增殖能力,诱导非小细胞肺癌对顺铂产生耐药。     

LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用

目的 研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响.方法 构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源水生化细胞系LO2.采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响.结果 在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显著抑制前述细胞的增殖(P＜0.05),其抑制率分别为63％、51％、40％、43％.结论 抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑.     

HT29细胞黏着斑激酶表达与其对5-氟尿嘧啶敏感性的关系研究

目的构建人结肠癌细胞株HT29的RNA干扰(RNAi)表达载体以抑制黏着斑激酶(FAK),检测FAK沉默后细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的变化。方法利用针对FAK基因的特异性寡核苷酸序列及对照序列构建重组体,酶切并测序鉴定,用脂质体2000转染细胞,G418筛选。采用RT-PCR和免疫组化检测干扰前后细胞内FAK的表达变化,MTT法检测细胞对5-FU敏感性的变化。结果酶切鉴定和测序证实插入序列完全正确。靶向FAK干扰后,免疫组化显示FAK蛋白表达显著降低,RT-PCR显示FAKmRNA的表达下调了76.94%,MTT显示HT29细胞对5-FU敏感性较其他组显著提高,IC50值明显下降(P<0.05)。结论成功构建靶向FAK的RNAi载体并有效抑制了FAK的表达,后者显著提高了HT29细胞对5-FU的敏感性,为寻求新的基因治疗方法提供了可能。     

槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖及HIF-1α、VEGF的影响

 目的 探讨槲皮素对缺氧人肝癌细胞HepG2增殖能力、HIF-1α以及VEGF表达的影响及其可能机制。方法 实验的细胞分为正常对照组、缺氧组、槲皮素+缺氧组,采用CoCl₂法诱导缺氧环境。采用MTT 法检测各组细胞增殖能力,实时定量PCR 及Western blot检测各组细胞缺氧诱导因子HIF-1α 和VEGF mRNA及蛋白表达。结果 与正常对照组比较,缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力降低(P<0.05),与缺氧组比较,槲皮素+缺氧组细胞在24、48、72 h增殖能力显著降低(P<0.05),正常组在24、48、72 h的光密度值分别为0.640±0.016、1.287±0.025、1.738±0.027,缺氧组的光密度值分别为0.551±0.021、0.851±0.028、1.268±0.018,槲皮素+缺氧组的光密度值分别为0.435±0.023、0.717±0.013、0.984±0.037。与正常对照组比较,缺氧组细胞HIF-1α、VEGF的mRNA及蛋白表达上调(P<0.05),而槲皮素可下调缺氧细胞中VEGF mRNA及蛋白表达,对HIF-1α mRNA及蛋白表达无影响(P>0.05):正常对照组HIF-1α、VEGF的mRNA表达均为1.000±0.000,蛋白表达分别为0.616±0.016、0.831±0.034,缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达分别为2.298±0.031、2.065±0.090,蛋白表达分别为1.385±0.047、2.022±0.076,槲皮素+缺氧组HIF-1α、VEGF的mRNA表达2.326±0.027、0.990±0.077,蛋白表达分别为1.406±0.029、1.137±0.054。结论 槲皮素可抑制缺氧肝癌细胞HepG2 增殖能力,这可能与槲皮素下调细胞中VEGF表达有关。     

99Tc m标记lncRNA HOTAIR反义寡核苷酸探针的制备及其对人脑胶质瘤U87细胞活性的影响

目的:制备新型的靶向长链非编码RNA （lncRNA）同源异型盒基因转录的反义基因间RNA (HOTAIR）的反义寡核苷酸（ASON）探针 99Tc m-HYNIC-ASON (HYNIC为联肼尼克酰胺）,探讨其对人脑胶质瘤U87细胞增殖和迁移能力的影响。 方法:设计并通过化学修饰合成...     

腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达对逆转卵巢癌顺铂耐药的效果

 目的 探讨腺病毒介导的RNA干扰ERCC1基因表达逆转卵巢癌顺铂耐药的效果。方法 采用直接感染法、台盼蓝活细胞计数、MTT、Hoechst染色法及流式细胞仪检测等方法,绘制顺铂耐药卵巢癌细胞株SKOV3/DDP细胞生长曲线及倍增时间,检测SKOV3/DDP细胞感染重组病毒前后其顺铂的IC₅₀值、细胞凋亡形态及细胞各周期的分布。结果 (1)顺铂浓度与SKOV3/DDP细胞抑制率呈线性正相关,相关系数r=0.9862(P<0.05),顺铂IC₅₀为(13.93±0.37)μg/ml,耐药指数为1.79。(2)重组腺病毒感染后干扰ERCC1基因表达,SKOV3/DDP细胞对顺铂的敏感性分别增加了11.1%、16.7%、26.4%、33.5%,呈剂量依懒性(r=0.9716,P<0.05),耐药指数降至1.19。(3)重组腺病毒联合顺铂作用后,SKOV3/DDP细胞株G₁期细胞比例增大,S期细胞比例增大,细胞凋亡率增高(P<0.05)。结论 干扰ERCC1基因表达可以通过诱导耐药肿瘤细胞SKOV3/DDP凋亡、调节细胞周期分布等途径逆转卵巢癌细胞的顺铂耐药。     

伊曲康唑对皮肤鳞状细胞癌A431细胞抑制作用的初步研究

目的研究伊曲康唑(itraconazole,ITZ)对皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma,CSCC)A431细胞的生物学效应,探讨其对皮肤鳞状细胞癌的抑制机制。方法取对数生长期A431细胞随机分为2、5、10、15、20、25及30μg/mL浓度组与对照组,依据分组分别采用等体积2、5、10、15、20、25及30μg/mL浓度ITZ溶液及DMEM培养基对细胞进行处理,并分别采用MTT法、流式细胞仪检测法、RT-PCR法和Western blotting法检测各组A431细胞的增殖情况、细胞周期和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA及蛋白的表达水平。结果随着ITZ浓度的增加及作用时间的增长,ITZ对A431细胞的抑制作用逐渐增强,且除培养24 h时2μg/mL组细胞生长抑制率与对照组无明显差异(P>0.05)外,培养24 h时5、10、15、20、25、30μg/mL组细胞生长抑制率及培养48、72 h时2、5、10、15、20、25、30μg/mL组细胞生长抑制率分别与对照组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;与对照组相比,经浓度分别为2、5、10、15、20、25及30μg/mL的ITZ处理后,A431细胞的G0/G1期均出现延长,且除15μg/mL组与对照组无明显差异(P>0.05)外,其余各组与对照组对比,P均<0.05,差异具有统计学意义;与对照组相比,除ITZ浓度为10μg/mL时,VEGF mRNA及蛋白的表达水平明显降低(P均<0.05)外,ITZ浓度为2、5、15、20、25及30μg/mL时,VEGF mRNA及蛋白的表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论ITZ能够抑制CSCC A431细胞的增殖并延长细胞周期,然而其对VEGF的影响却没有规律性,故其抑制细胞增殖的具体机制仍需进一步深入研究。     

槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的实验研究

目的 探讨槐耳清膏体外抑制肝癌细胞生长的机制. 材料与方法取对数生长期的肝癌Hep-G2细胞,分别与DMEM和含槐耳清膏不同浓度(1 mg/ml,2 mg/ml,4 mg/ml,8 mg/ml)的DMEM培养液作用24、48、72 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测肝癌细胞的增殖情况,用流式细胞仪检测肝癌细胞的凋亡情况. 结果 MTT比色法检测结果 显示槐耳清膏作用Hep-G2细胞后,随着槐耳清膏药物浓度的增加,肝癌细胞生长抑制率增加,呈量效关系.流式细胞仪检测结果 显示槐耳清膏诱导Hep-G2细胞的凋亡率随着槐耳清膏药物浓度的增加,作用时间的延长,其诱导Hep-G2细胞的凋亡率逐步增加. 结论 槐耳清膏体外能抑制Hep-G2细胞增殖,诱导Hep-G2细胞凋亡.槐耳清膏对肝癌有治疗作用.