抗呆Ⅰ号对体外模拟脑缺血星形胶质细胞BDNF及bFGF动态变化影响的实验研究

目的 :本文用免疫组化的方法研究了体外缺氧缺糖模拟脑缺血再灌星形胶质细胞表达脑源形神经生长因子 (BDNF)及神经生长因子 (bFGF)的动态变化及抗呆Ⅰ号的干预作用。方法 :实验用出生 2～ 3d的大鼠的大脑皮层胶质细胞进行分离培养 ,建立缺氧缺糖星形胶质细胞损伤模型 ,实验分为正常对照组、模型组 (即缺氧缺糖组 )及抗呆Ⅰ号组。结果 :bFGF在各组均有表达 ,尤以缺血再灌组表达最强 ;BDNF在各组均仅有轻度表达。结论 :体外模拟脑缺血再灌后星形胶质细胞反应性胶质化 ,不同程度地表达BDNF和bFGF ,两者可降低星形胶质细胞本身的损伤 ,进而可能促进神经元的修复。     

抑制MMP-9表达与大鼠氧糖剥夺后星形胶质细胞AQP4的表达变化

目的探讨抑制星形胶质细胞基质金属蛋白酶(MMP)-9表达与氧糖剥夺后水通道蛋白(AQP)4的表达变化。方法体外培养原代星形胶质细胞,建立氧糖剥夺缺血细胞模型,随机分为正常组、阴性对照组和MMP-9抑制组。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞存活率,利用慢病毒转染抑制MMP-9的表达,实时荧光定量RT-PCR验证MMP-9的表达,通过实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹分别检测星形胶质细胞AQP4的表达变化。结果细胞经氧糖剥夺处理后,细胞存活率显著下降(P0.05);MMP-9抑制组星形胶质细胞与阴性对照组相比,MMP-9 mRNA表达显著下调(P0.05),AQP4 mRNA和蛋白表达均显著下降(P0.05)。结论氧糖剥夺使星形胶质细胞活性下降,抑制MMP-9的表达可介导AQP4表达下调,提示MMP-9和AQP4可能共同参与缺血性脑水肿的形成。     

天麻素对缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤的影响

目的探讨天麻素对缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤的影响。方法分离培养乳鼠星形胶质细胞,建立缺氧缺糖星形胶质细胞模型,同时在缺氧缺糖处理前给予天麻素预处理,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测LDH的漏出率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹检测细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved Caspase)-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平,JC-1法检测线粒体膜电位,Western印迹检测胞质中细胞色素(Cyt)C蛋白水平。结果缺氧缺糖处理后的星形胶质细胞中LDH漏出率显著升高,细胞增殖活性显著降低,细胞凋亡显著增多,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著升高,细胞线粒体膜电位显著降低,胞质中CytC蛋白水平显著升高(均P0.05)。天麻素预处理后的缺氧缺糖星形胶质细胞增殖活性升高,细胞LDH漏出率显著降低,细胞凋亡显著减少,细胞中Bax、Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著下降,细胞线粒体膜电位显著升高,CytC蛋白水平显著降低,与未经天麻素处理的星形胶质细胞比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论天麻素能降低缺氧缺糖星形胶质细胞氧化损伤,减少细胞凋亡。     

U0126及地塞米松对氨培养SD乳鼠脑星形胶质细胞AQP4表达的影响

目的观察氨培养的脑星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达,地塞米松及丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路抑制剂U0126对其表达的影响。方法分离、培养SD大鼠脑星形胶质细胞,分为氨培养组、氨培养+U0126组、氨培养+地塞米松组和正常对照组,采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链式反应检测AQP4在蛋白和基因水平的表达和变化。结果氨可致培养的星形胶质细胞AQP4蛋白和AQP4 mRNA的表达增加。U0126和地塞米松均可使氨培养星形胶质细胞AQP4 mRNA和AQP4蛋白的表达减少。结论氨可致AQP4表达增加,U0126和地塞米松有细胞保护作用,可有效保护脑星形胶质细胞。     

高糖条件下腺苷酸活化蛋白激酶对大鼠胃平滑肌细胞能量代谢调控机制的研究

目的探讨高糖条件下腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对大鼠胃平滑肌细胞能量代谢调控机制的影响。方法制备并确定糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠模型,实验分为正常对照(NC)组和DGP组,抗体芯片观察AMPK磷酸化通路的变化,确定能量代谢相关功能蛋白;SeahorseXFe细胞能量代谢分析系统观察2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)与化合物C(Compound C)对高糖条件下大鼠胃平滑肌细胞耗氧率(OCR)与细胞外酸化率(ECAR)的影响;沉默AMPK后,观察高糖条件下大鼠胃平滑肌细胞能量代谢相关功能蛋白变化。结果高糖条件下AMPK抑制大鼠胃平滑肌细胞OCR的基础呼吸、最大呼吸值、三磷酸腺苷产量(P<0.05),促进大鼠胃平滑肌细胞ECAR的糖酵解水平和能力(P<0.01)。抗体蛋白芯片发现18个磷酸化差异抗体,涉及与能量代谢相关蛋白包括:p53、Ca²⁺/CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、Ca²⁺/CaM依赖性蛋白激酶Ⅳ(CaMKⅣ)、磷脂酰肌醇特异性磷酯酶C-β3(PLC-β3)、蛋白激酶A(PKA)、乙酰CoA羧化酶1(ACC1)、真核延伸因子2(eEF2)、真核延伸因子激酶2(eEF2K)。与HG(24 h)组比较,HG(48 h)组p53、ACC1、eEF2表达升高(P<0.05或P<0.01),PLC-β3表达降低(P<0.01)。与HG(48 h)组比较,HG(48 h)+siRNA组p53、ACC1表达降低(P<0.01)。与HG(24 h)组比较,HG(48 h)组p-CaMKⅡThr³⁰⁵/CaMKⅡ与p-CaMKⅣThr^196/200/CaMKⅣ比值升高(P<0.01)。与HG(48 h)组比较,HG(48 h)+siRNA组p-CaMKⅡThr³⁰⁵/CaMKⅡ比值降低(P<0.01)。HG(48 h)组PKA活性高于HG(24 h)组(P<0.01)。结论高糖条件下AMPK通过调控p53、ACC1、eEF2、CaMKⅡ、CaMKⅣ、PLC-β3及PKA生物学作用,抑制大鼠胃平滑肌细胞线粒体代谢途径及促进糖酵解途径。     

慢病毒转染基质金属蛋白酶9对星形胶质细胞水通道蛋白4表达的研究

目的观察慢病毒转染基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase 9,MMP-9)后,星形胶质细胞水通道蛋白4(aquaporin,AQP4)表达变化,探讨慢病毒转染星形胶质细胞的可行性。方法取出生2d的SD乳鼠大脑皮质进行星形胶质细胞纯化培养,利用携带绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的慢病毒转染细胞,通过倒置荧光显微镜观察细胞内GFP显影效果。将细胞分为正常组、阴性对照组[转染小干扰RNA(siRNA)]和MMP-9慢病毒组(转染MMP-9siRNA),用RT-PCR检测MMP-9 mRNA和AQP4 mRNA表达变化。结果 MMP-9慢病毒组细胞增殖较快,第3天细胞内GFP在倒置荧光显微镜显影90%,到达80%左右转染率的最佳感染条件为复感染指数=30～50。正常组MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达为0.982±0.169和1.095±0.035,阴性对照组分别为1.104±0.271,1.112±0.026,MMP-9慢病毒组表达分别为0.552±0.197和0.652±0.042。正常组与阴性对照组MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达比较,差异无统计学意义(P0.05);与阴性对照组和正常组比较,MMP-9慢病毒组细胞MMP-9mRNA和AQP4mRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论慢病毒转染星形胶质细胞MMP-9可介导AQP4表达下调,为进一步利用星形胶质细胞进行缺血性脑水肿基因调节的研究提供实验依据。     

腺苷预处理星形胶质细胞氧糖剥夺复氧糖后CX3CL1、GLT-1表达的变化

目的探讨在缺氧复氧情况下腺苷预处理诱导星形胶质细胞谷氨酸转运体蛋白(GLT-1)和趋化因子(CX3CL1)的表达变化。方法原代培养的大鼠星形胶质细胞分为正常组、模型组和腺苷预处理组。模型组:细胞接受5 h氧糖剥夺/复氧糖24 h处理;腺苷预处理组:细胞在氧糖剥夺前24 h加入100μmol/L腺苷后接受5 h氧糖剥夺/复氧糖24 h。在5 h氧糖剥夺/复氧糖24 h后观察各组的细胞形态、MTT法检测各组细胞活力,ELISA检测各组CX3CL1的相对表达情况,免疫荧光法及Western印迹法检测各组GLT-1的相对表达情况。结果①正常组、模型组和腺苷预处理组在氧糖剥夺5 h复氧糖24 h后细胞活力(OD值)分别是(0.763±0.065),(0.217±0.052)和(0.404±0.013),腺苷可以减少缺氧复氧引起的损伤(P<0.05)。②与正常组相比,星形胶质细胞在缺氧复氧后,其释放的趋化因子CX3CL1明显升高(P<0.05),GLT-1的表达明显降低(P<0.05)。与模型组相比,腺苷预处理组可明显降低缺氧复氧组CX3CL1的释放(P<0.05),以及增加缺氧复氧GLT-1的表达水平(P<0.05)。结论腺苷预处理可使氧糖剥夺/复氧糖后CX3CL1的释放减少,GLT-1表达量升高,从而增强脑对缺血再灌注损伤的耐受。     

二甲双胍调节糖尿病大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型蛋白表达的信号通路

目的探讨蛋白激酶A(PKA)/钙调蛋白Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路在二甲双胍(Met)调节2型糖尿病(T2DM)大鼠心房小电导钙激活钾通道亚型KCa2.2和KCa2.3蛋白表达中的作用。方法健康雄性Wistar大鼠40只,随机选8只喂普通饲料为对照组(Con组),另32只喂高脂高糖饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型后,再随机分为DM组、Met组、H-89组(腹腔注射PKA抑制剂H-89)和KN-93组(腹腔注射CaMKⅡ抑制剂KN-93),每组8只。用ELISA检测大鼠心房组织PKA活性,qRT-PCR检测CaMKⅡmRNA表达,Western blot和免疫组织化学检测KCa2.2、KCa2.3和磷酸化CaMKⅡ(p-CaMKⅡ)蛋白表达。结果 Con组、DM组、Met组和H-89组PKA活性分别为0.74±0.04、0.50±0.05、0.69±0.03和0.48±0.03。与DM组比较,Met组PKA活性明显提升(P<0.01);与Met组比较,H-89组显著抑制PKA活性(P<0.01)。Con组、DM组及Met组CaMKⅡmRNA分别为1.00±0.07、0.61±0.03和0.92±0.09。与Con组比较,DM组CaMKⅡmRNA表达明显降低(P<0.01);与DM组比较,Met组CaMKⅡmRNA表达明显增加(P<0.01)。与Con组比较,DM组心房组织p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达均明显降低,KCa2.3蛋白表达明显升高(P<0.01)。与DM组比较,Met组明显提升p-CaMKⅡ和KCa2.2蛋白表达,明显抑制KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。与Met组比较,KN-93组和H-89组分别显著抑制p-CaMKⅡ蛋白表达和PKA活性,均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.01)。免疫组织化学染色显示,与Met组比较,KN-93组和H-89组均显著下调KCa2.2蛋白表达,上调KCa2.3蛋白表达(P<0.05,P<0.01),与Western blot检测结果一致。结论 Met通过激活PKA/CaMKⅡ信号通路部分修复T2DM大鼠心房KCa2.2蛋白下调和KCa2.3蛋白上调。     

小RAN干扰Trx1促进大鼠缺血再灌注损伤的星形胶质细胞凋亡、抑制其增殖及作用机制

目的研究硫氧还蛋白(Trx)1在氧糖剥夺(OGD)损伤后对星形胶质细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养原代星形胶质细胞分为对照组、OGD模型组、小干扰(si)RNA-NC组、siRNA-Trx1组,采用携带Trx1的siRNA星形胶质细胞抑制Trx1表达后进行OGD/复氧(R)干预,氧糖剥夺6 h,复氧24 h,对照组为正常培养的星形胶质细胞。实时荧光定量PCR(qPCR)检测干扰效果。噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹试验检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、活化的(Cleaved)Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果与对照组相比,OGD模型组、siRNA-NC组、siRNA-Trx1组Trx1 mRNA表达水平显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白显著下降(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05);与OGD模型组相比,siRNA-NC组星形胶质细胞的增殖、凋亡及凋亡蛋白水平无显著变化(P0.05),siRNA-Trx1组细胞的增殖显著降低(P0.05),凋亡显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P0.05),Cleaved Caspase-3、Bax蛋白水平显著增加(P0.05)。结论 Trx1可促进氧糖剥夺损伤的星形胶质细胞增殖、抑制其凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2/Bax/Cleaved Caspase-3信号通路有关。     

窖蛋白1对大鼠星形胶质细胞糖氧剥夺损伤的影响

目的探讨糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)对体外培养的大鼠星形胶质细胞窖蛋白1(caveolin-1,Cav-1)的影响。方法原代培养出生24h内SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞,分为对照组和OGD组(给予星形胶质细胞6h的OGD和24h的再灌注损伤,建立OGD损伤模型)。用多重免疫荧光的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达,实时荧光定量PCR和Western blot的方法检测星形胶质细胞Cav-1表达的变化。根据小干扰RNA(siRNA)的原理,将Cav-1siRNA转染星形胶质细胞,采用CCK-8的方法检测星形胶质细胞活力。结果大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1普遍表达。与对照组比较,OGD组星形胶质细胞Cav-1mRNA和蛋白表达量下降(P<0.05)。siRNA转染后,与对照组比较,OGD组星形胶质细胞活力下降(P<0.05)。结论 SD大鼠大脑皮质星形胶质细胞Cav-1表达的下调,导致OGD后细胞损伤加重,提示Cav-1对星形胶质细胞具有保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对高糖合并缺血缺氧小胶质细胞中Toll样受体4通路的作用研究

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对高糖合并缺血缺氧小胶质细胞中Toll样受体4(TLR4)通路的作用。方法体外培养小胶质细胞,分为7组:正常组、对照组、高糖组、模型组、NAC组、NAC高糖组和NAC模型组(后3组加NAC 1mmol/L干预),分别在不同的培养液、正常培养箱或缺氧培养箱培养12h建立体外细胞模型。采用TUNEL染色观察小胶质细胞凋亡的病理变化,采用RT-PCR检测各组细胞TLR4通路中TLR4、髓样分化因子88(MyD88)、NF-κB、白细胞介素1β(IL-1β)mRNA表达水平。结果对照组、高糖组和模型组较正常组小胶质细胞凋亡率显著升高(0.36±0.03、0.33±0.02、0.37±0.02 vs 0.15±0.02,P0.05),NAC组、NAC高糖组和NAC模型组较对照组、高糖组和模型组小胶质细胞凋亡率显著下降(0.20±0.02 vs 0.36±0.03,0.21±0.02 vs 0.33±0.02,0.22±0.02 vs 0.37±0.02,P0.05),仅高糖组与NAC高糖组MyD88无明显差异(P0.05),NAC组、NAC高糖组和NAC模型组TLR4,MyD88,NF-κB,IL-1βmRNA表达较对照组、高糖组和模型组明显降低(P0.05)。结论NAC可以减轻高糖及缺血缺氧对小胶质细胞的损伤,其机制可能与抑制TLR4炎症相关通路有关。     

正丁基苯酞对痴呆小鼠海马钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα表达的影响

目的 探讨正丁基苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)小鼠空间学习记忆及海马细胞内游离钙([Ca2+]i)浓度、钙钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱα(CaMKⅡα)蛋白表达的影响. 方法采用双侧颈总动脉线结法制备小鼠VD模型,服用NBP(120 mg·kg-1·d-1)组为治疗组;并设假手术组作为对照.运用跳台和水迷宫装置观测各组小鼠行为学变化,流式细胞仪检测海马细胞内[Ca2+]i浓度变化,Western Blot印迹方法测定CaMKⅡα蛋白的表达. 结果 VD模型组小鼠学习记忆成绩下降,海马细胞内[Ca2+]i浓度增高,CaMKⅡα蛋白表达水平降低,与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);NBP治疗组小鼠学习记忆成绩改善,海马[Ca2+]i浓度降低,CaMKⅡα蛋白表达水平增高,与模型组比较差异有统计学意义(P＜0.05),与假手术组比较,差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 NBP可降低VD小鼠海马神经细胞内游离[Ca2+]i,提高CaMKⅡα的表达,改善其学习记忆能力.     

大鼠皮层星形胶质细胞原代培养、鉴定及氧糖剥夺模型的建立

目的 原代培养和鉴定大鼠皮层星形胶质细胞,并建立大鼠皮层星形胶质细胞氧糖剥夺(OGD)模型.方法 大鼠星形胶质细胞原代培养后,作胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色鉴定,应用缺氧D-Hank液及缺氧培养罐行OGD后用台盼蓝染色及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率检测细胞损伤程度.结果 星形胶质细胞培养至第9天, GFAP染色阳性细胞为98.54%±2.01%;星形胶质细胞经不同时间OGD处理后,台盼蓝染色呈现不同形态;OGD60 min时,星形胶质细胞LDH漏出率较对照组明显增加(P<0.05),并随时间递增.结论 成功完成大鼠皮层星形胶质细胞原代培养,星形胶质细胞在培养第9天可用于模型制备,成功建立星形胶质细胞OGD模型.     

干扰或过表达PDIA3对过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的影响

目的探讨干扰或过表达蛋白质二硫键异构酶(PDI)A3对过氧化氢诱导的星形胶质细胞损伤的影响及其作用机制。方法体外培养星形胶质细胞,构建PDIA3干扰及过表达载体稳定株系,采用过氧化氢(H 2O 2)诱导建立星形胶质细胞损伤模型。实验将星形胶质细胞分为对照组(NC组)、H 2O 2组、H 2O 2+si-con组、H 2O 2+si-PDIA3组、H 2O 2+pcDNA组、H 2O 2+pcDNA-PDIA3组。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PDIA3 mRNA表达;Western印迹检测PDIA3及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路蛋白表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡。收集各组星形胶质培养基上清液检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率及肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平。结果与NC组相比,H 2O 2组星形胶质细胞中PDIA3 mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);H 2O 2组细胞LDH释放量、TNF-α、IL-6水平、细胞凋亡率及p-p38蛋白表达均显著升高(P<0.05),干扰PDIA3表达后明显升高(P<0.05),PDIA3过表达后明显降低(P<0.05);H 2O 2组细胞存活率显著降低(P<0.05),干扰PDIA3表达后明显降低(P<0.05),PDIA3过表达后明显升高(P<0.05)。结论PDIA3过表达可改善H 2O 2诱导的星形胶质细胞氧化应激及炎症损伤,其可能通过抑制p38MAPK信号通路激活而发挥作用。     

三七总皂苷对缺血再灌注大鼠脑组织CaMKⅡβ mRNA及蛋白的影响

目的 研究三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马及皮层钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱβ mRNA及蛋白表达的影响.方法 实验大鼠随机分为实验对照组、伪手术组、模型组、PNS治疗组,采用尼龙线插线法建立局灶性脑缺血再灌注模型.治疗组于术后2、14、26、38 h分别于腹腔给予50 mg/kg PNS,各组大鼠于48 h处死,急性分离海马及皮层组织,分别采用RT-PCR及Western印迹技术检测CaMK Ⅱβ mRNA及蛋白表达.结果 海马组织与皮层的CaMK Ⅱβ mRNA表达变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ mRNA表达没有显著性差异(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMK Ⅱβ mRNA表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).采用Western印迹从蛋白质水平检测CaMK Ⅱβ表达,结果显示:海马组织与皮层的变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ蛋白表达没有明显变化(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA蛋白表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMKⅡβ 蛋白表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).蛋白变化趋势与基因表达结果一致.结论 PNS可能通过降低缺血再灌注大鼠海马及皮层CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达对脑神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用.     

阿司匹林对缺氧/缺糖大鼠皮质神经元细胞线粒体膜电位的影响

目的观察大鼠皮质神经元细胞在缺氧/缺糖(OGD)时线粒体膜电位(MMP)的变化及阿司匹林的保护作用。方法取体外培养7d的Wistar大鼠皮质神经元细胞,随机分为正常对照组、缺氧/缺糖模型组、缺氧/缺糖加阿司匹林组。缺氧/缺糖2h后在常氧下继续培养24h。流式细胞术检测不同时间段神经元细胞线粒体膜电位。结果缺氧/缺糖损伤2h,缺氧/缺糖组线粒体膜电位水平较正常对照组显著降低(P<0.01)。缺氧/缺糖加阿司匹林组皮质神经元细胞在缺氧2h及再复氧24h后细胞线粒体膜电位明显高于缺氧/缺糖模型组(P<0.01)。结论阿司匹林可抑制缺氧/缺糖损伤所致的线粒体膜电位的降低,从而具有稳定线粒体膜电位的作用,抑制神经细胞凋亡的发生。     

人参皂苷对脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞增殖的影响及机制

目的探究人参皂苷对脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞增殖、活性氧(ROS)的影响及作用机制。方法以大鼠大脑皮层中分离出的星形胶质细胞为实验对象,采用氧糖剥夺/再灌注模型模拟脑缺血再灌注损伤,以5、10、20、40、80μg/ml人参皂苷作用于星形胶质细胞,分为对照组(未做处理的细胞)、模型组(脑缺血再灌注损伤的细胞)、给药组(不同浓度的人参皂苷作用于脑缺血再灌注损伤的细胞)。噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度人参皂苷作用的细胞增殖情况,流式细胞术检测对照组、模型组、给药组(20μg/ml)细胞的凋亡率、ROS含量,Western印迹检测3组细胞中B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组细胞增殖率显著降低,给药组(20μg/ml)显著升高(P0.05)。模型组、给药组(20μg/ml)细胞凋亡率和ROS水平显著高于对照组(P0.05);与模型组相比,给药组(20μg/ml)细胞凋亡率和ROS水平显著降低(P0.05)。与对照组相比,模型组和给药组(20μg/ml)Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达量显著降低,Bax蛋白表达量显著升高(P0.05);与模型组相比,给药组(20μg/ml)Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达量显著升高,Bax蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论人参皂苷对脑缺血再灌注损伤的星形胶质细胞有一定的保护作用,能够促进细胞增殖,抑制其凋亡和降低细胞内ROS水平,可能是通过影响凋亡相关蛋白的表达量来发挥作用。     

甲状腺刺激抗体对甲状腺细胞分泌功能影响的信号途径

目的探讨甲状腺刺激抗体(TSAb)对甲状腺细胞分泌功能影响的信号途径。方法选择福建医科大学附属协和医院2003-01~10的Graves病(GD)40例,作为观察组;以院内健康职工40人,作为对照组。应用以酶联免疫吸附法(ELISA)测定蛋白激酶A(PKA)和蛋白激酶C(PKC)活性;应用PKA、PKC激活和抑制剂激活和阻断信号通路;应用放免法检测T3。结果(1)TSAb呈时间剂量依赖性激活甲状腺细胞中的PKA和PKC(P<0.05)。(2)TSAb刺激甲状腺细胞T3分泌的效应与PKA激活剂相似,且可被PKA抑制剂抑制,PKC激活剂佛波酯(TPA)和抑制剂无此效应。TPA可部分抑制TSAb和PKA激活剂刺激的T3分泌。结论TSAb刺激甲状腺细胞T3分泌主要是通过环腺苷酸(cAMP)-PKA途径,PKC途径可影响cAMP-PKA途径而抑制TSAb刺激的T3分泌。     

血管性痴呆大鼠突触后致密物质变化机制的研究

目的观察血管性痴呆(VaD)大鼠N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)的2B亚基(NR2B)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的变化情况,探讨其在VaD发生、发展中的作用。方法将96只Wistar大鼠随机分为假手术组(32只)、VaD模型组(模型组,32只)和美金刚治疗组(治疗组,32只)。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VaD大鼠模型。用RT-PCR法检测术后4、8、12、16用犬鼠海马NR2B mRNA的表迭,用γ-~(32)P掺入法检测大鼠海马CaMKⅡ的活性。结果与假手术组比较,模型组海马NR2B mRNA水平术后4周时明显增高(P<0.05),术后8～16周显著降低(P<0.01),海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后12周、16周明显降低(P<0.01);治疗组术后4周时上述2项结果与假手术组差异无统计学意义,除治疗组8周时,在其他时间点,与假手术组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);但NR2BmRNA水平于术后8周、12周明显高于模型组(P<0.01,P<0.05);总CaMKⅡ活性与模型组差异无统计学意义。结论 CaMKⅡ活性变化主要是NMDAR介导的,美金刚通过调节NR2B表达改善VaD大鼠认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限。     

低氧对无糖逆境中星形胶质细胞增殖和凋亡的作用

目的探讨星形胶质细胞对低氧的耐受程度;葡萄糖对其凋亡和增殖的影响及无糖逆境中低氧微环境对胶质细胞的是否具有保护作用及可能分子机制。方法通过三气培养箱构建低氧微环境,将星形胶质细胞(HAC)设为常氧常糖组(21%O2-G+)和常氧无糖组(21%O2-G-),低氧常糖组(0.1%O2-G+)和低氧无糖组(0.1%O2-G-)。分别在不同培养条件下培养24、48、72 h后通过MTT法及Annexin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡情况,利用Western印迹法检测各组低氧诱导因子(HIF)-1α表达情况。结果在低氧常糖组星形胶质细胞各时间段无明显凋亡(P0.05),但可缓慢增殖。常氧无糖组及低氧无糖组48 h细胞开始发生明显凋亡,增殖被显著抑制(P0.05),48 h低氧无糖组细胞凋亡明显低于常氧无糖组(P0.05),至72 h凋亡率高于常氧无糖组(P0.05)。低氧可诱导HIF-1α表达水平增高,其中低氧常糖组HIF-1α表达水平最高,其次为低氧无糖组,常氧常糖及常氧无糖组表达量均较低。结论星形胶质细胞可耐受极度低氧;葡萄糖缺乏可诱导细胞发生明显的凋亡并抑制其增殖;低氧可在一定时限内部分对抗葡萄糖缺乏所诱导细胞凋亡。低氧可诱导HIF-1α的高表达,并且可能与低氧抗无糖逆境作用有关。