高脂饲料联合结扎冠状动脉左前降支探讨冠心病痰瘀互结证大鼠模型的建立与评价

[目的]本实验采用高脂饲料喂养联合结扎冠状动脉左前降支的方法模拟冠心病痰瘀互结证病机的发生发展,以期探讨大鼠冠心病痰瘀互结证模型的建立方法和评价标准。[方法]健康SPF级Wistar雄性大鼠,随机分为空白组、假手术组、痰浊组、血瘀组、痰瘀互结组5组。空白组、假手术组、血瘀组采用普通饲料喂养,痰浊组和痰瘀互结组采用高脂饲料喂养。在8周末,对血瘀组和痰瘀互结组行冠状动脉左前降支结扎术,假手术组行只穿线不结扎术。采集超声心动图,检测大鼠血清中血脂指标、心肌酶指标、血流变指标、血小板聚集指标,并评价冠心病痰瘀互结证大鼠模型。[结果]超声变化：与假手术组比较,冠心病痰瘀互结证组左心室射血分数（EF）、左心室短轴缩短率（FS）、舒张期室间隔厚度（IVSd）、收缩期室间隔厚度（IVSs）、收缩末期左心室后壁厚度（LVPWs）、左心室质量（LV M）显著降低,收缩末期左心室内径（LVIDs）、收缩末期左心室容积（LV Vols）显著升高（P<0.05,P<0.01）;血脂变化：与假手术组比较,痰瘀互结证组总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）显著升高,高密度脂蛋白（HDL）显著降低（P<0.01）;心肌酶变化：与假手术组比较,痰瘀互结证组肌酸激酶（CK）、肌酸激酶-MB型同工酶（CM-MB）和乳酸脱氢酶（LDH）显著升高（P<0.01）;血流变变化：与假手术组比较,痰瘀互结证组BV1/s、BV5/s、BV30/s、BV200/s和PV显著增高（P<0.05,P<0.01）;血小板聚集变化：与假手术组比较,痰瘀互结证组血小板聚集率（PAR）、最大血小板聚集率（MPAR）显著升高（P<0.01）;心脏组织苏木精-伊红（HE）染色、2,3,5-氯化三苯基四氯唑（TTC）染色：痰瘀互结组大鼠心肌纤维断裂,心肌纤维排列不规则,结构紊乱,肌纤维空隙较宽,间质水肿,大量炎性浸润、坏死,可见明显白色梗死区域。[结论]高脂饲料喂养联合冠状动脉左前降支结扎的方法可以成功建立大鼠冠心病痰瘀互结证病证模型。     

芍药苷ApoE-/-对小鼠血脂及主动脉斑块的影响

[目的]观察芍药苷对ApoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块形成的影响。[方法]6周龄ApoE^-/-雄性小鼠经普通饲料饲养4周,髙脂饲料饲养12周后,随机分为ApoE^-/-模型组及芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg剂量组,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠作为空白对照组。药物干预12周后,检测血脂的变化,并测量主动脉弓部、胸段、腹段斑块面积。[结果]ApoE^-/-模型组甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）显着高于C57BL/6J组（P<0.01）,芍药苷60 mg/kg、30 mg/kg组的血脂水平显着低于ApoE^-/-模型组（P>0.05,P<0.01）,并且不同程度减小主动脉各段斑块的面积。[结论]芍药苷具有降脂和抑制主动脉斑块形成的作用,表明芍药苷具有抗动脉粥样硬化作用。     

津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关酶的影响

目的 探究津力达对高脂诱导的胰岛素抵抗ApoE^-/-小鼠骨骼肌甘油三酯相关基因的影响。方法 将8只雄性C57BL/6J小鼠设为正常组(A组);40只雄性ApoE^-/-小鼠喂养16周后分为模型组(B组)、罗格列酮组(C组)、 津力达低剂量组(D组)、津力达中剂量组(E组)、津力达高剂量组(F组),开始灌胃给药,连续8周。采用酶法、BCA蛋白浓度法测定骨骼肌TG含量;OGTT评价小鼠的胰岛素抵抗程度; RT-PCR和Western blot测定小鼠骨骼肌HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结果 津力达能够不同程度降低小鼠的FBG、TC、TG和LDL-C,升高HDL-C;下调FIns水平,提高ISI,明显改善小鼠糖耐量异常;津力达能够不同程度的上调小鼠HSL、ATGL、PPARγ mRNA和蛋白表达。结论 津力达能够通过调节骨骼肌甘油三酯相关酶的表达,改善高脂诱导的ApoE^-/-小鼠的胰岛素抵抗。     

冠心病痰瘀互结证文献系统评价

[目的]采用文献系统评价方法评价冠心病痰瘀互结证辨证依据的规律。[方法]制定合格检索策略,全面收集冠心病痰瘀互结证相关文献,从中西医病名、病因病机、证候名称、临床症状、舌象、脉象进行归类分析,运用聚类分析和因子分析降维处理,提练冠心病痰瘀互结证的核心辨证依据。[结果]共检索文献1 540篇,相关专著136本,最后共有合格研究文献89篇,专著67本。综合文献系统评价、聚类分析和因子分析结果,得出冠心病痰瘀互结证辨证依据：胸闷胸痛,倦怠乏力,心悸,气短,脘痞满,恶心欲呕,面色晦暗,唇甲青紫,口黏,肢体困重,有痰,舌质暗,舌有瘀斑、斑点,苔腻,白腻苔,脉弦,脉滑。[结论]本研究结果中冠心病痰瘀互结证舌象、脉象与相关文献一致,临床症状覆盖了文献相关诊断标准的内容,提示冠心病痰瘀互结证候较复杂,兼证较多,可兼气滞、气虚、阳虚、气阴两虚,也可寒化和热化,但这一结果还需临床实践的进一步证实。     

基于德尔菲法对冠心病痰瘀互结证辨证依据的研究

[目的]基于德尔菲法专家咨询明确冠心病中医痰瘀互结证的辨证依据。[方法]在课题前期循证医学文献系统评价基础上,经过多次讨论修正,初步拟定《冠心病痰瘀互结证德尔菲法专家咨询问卷》,在全国范围内,先后开展了两轮德尔菲法专家咨询,共计88位专家参与。第1轮与第2轮咨询问卷的回收率及每位专家对各个问题的应答率,均为100%。[结果]冠心病痰瘀互结证德尔菲法专家咨询问卷的总信度为0.589 0,效度为71.724%,提示所拟定的专家咨询问卷稳定性及有效性尚可。对两轮咨询问卷条目的重要性、集中度、变异度及其排序进行分析,结果表明冠心病痰瘀互结证辨证依据的关键条目为胸闷、胸痛,苔腻,舌质暗（黯）紫,重要条目为舌有瘀斑、瘀点,肢体困重,唇青紫,备选条为脉弦涩,面色晦暗,体胖。[结论]该研究冠心病痰瘀互结证辨证依据的结果可作为临床辨证时的参考。     

基于层次分析法对冠心病痰瘀互结证辨证依据重要性评估探讨

[目的]基于层次分析法对冠心病痰瘀互结证的各大症状进行重要程度评价。[方法]在全国范围内，开展3轮层次分析法专家咨询，计算冠心病痰瘀互结证各诊断要素的权重系数。[结果]3轮咨询共回收有效问卷81份，第一轮回收3份问卷，第二轮回收19份问卷，第三轮回收59份问卷，回收率为100%。经统计，一级指标的权重由高到低依次为临床症状、舌象、脉象。二级指标权重由高到低依次为胸闷胸痛、舌质紫暗、苔腻、舌有瘀斑瘀点、脉弦滑、舌下络脉青紫、脉弦涩、体胖、唇青紫、面色晦暗、口黏、肢体困重。[结论]以冠心病痰瘀互结证为范例，探索基于层次分析法研究证候辨证依据的权重，为进一步研究冠心病痰瘀互结证宏观诊断标准提供依据，具有一定的临床意义。     

丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的临床生化基础研究

[目的]通过多中心、精细化的临床研究,旨在通过对比丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证患者和健康人的临床生化指标,探究其临床生化基础。[方法]从全国7家临床研究中心共入组受试者82例,脱失4例,最终入组冠心病痰瘀互结证患者38例,在西医常规治疗的基础上加服中药丹蒌片治疗,健康人40例不予干预。分别检测内皮细胞损伤、脂质代谢、黏附分子、炎症介质、金属蛋白酶、同型半胱氨酸和凝血功能共7类28项指标,冠心病患者分别检测0、8、12周水平,健康人检测第0周水平。[结果]冠心病痰瘀互结证与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、活化部分凝血活酶时间（APTT）相关性较大,通过丹蒌方的治疗可降低患者炎症因子水平,改善血管内皮损伤情况。[结论]丹蒌方干预冠心病稳定性心绞痛痰瘀互结证的机制与调节内皮损伤、脂质代谢、炎症因子、凝血功能、金属蛋白酶有关,可为下一步研究提供参考依据。     

调肝导浊方对apoE-/-小鼠血脂及主动脉斑块面积的影响

[目的] 观察调肝导浊方对apoE^-/-小鼠血脂及主动脉斑块的影响。[方法] 将apoE^-/-小鼠随机分成模型组和调肝导浊组并予以高脂饮食12周,C57BL/6L小鼠作为对照组给予普通饮食,12周后,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)的水平;油红O染色评估主动脉斑块的范围;小动物超声仪检测主动脉的斑块面积及狭窄程度。[结果] 模型组与对照组相比,TC、TG、HDL-C、LDL-C均升高(P<0.05或P<0.01);调肝导浊组与模型组相比,LDL-C水平降低(P<0.05),TC、TG、HDL-C无明显差异。油红O染色显示模型组的斑块范围最大,其次是调肝导浊组,最后是对照组。B超结果显示与对照组相比,模型组主动脉的斑块面积及狭窄程度明显增大(P<0.01);调肝导浊方干预后,斑块面积减小(P<0.05),狭窄程度明显减轻(P<0.01)。[结论] 调肝导浊方可以降低apoE^-/-小鼠的血清LDL-C水平,减少主动脉的斑块面积,并改善血管的狭窄程度。     

养阴活血方对高脂饮食诱导的ApoE-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化的影响

探讨养阴活血方(YHF)对高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17失衡及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响。小鼠给予高脂饮食诱导AS,YHF低剂量(18 g/kg,以生药计)、YHF高剂量(36 g/kg,以生药计)灌胃给药20周进行干预。油红O脂肪染色法观测主动脉斑块面积变化;生化分析血脂水平;流式细胞术检测外周血Treg、Th17比例;荧光实时定量PCR(qRT-PCR)、免疫组化(IHC)及Western blot检测主动脉Foxp3、RORγt mRNA及蛋白表达。分离小鼠脾脏CD4⁺T细胞并用anti-CD3/CD28活化,再经LPS刺激和YHF干预后,qRT-PCR与免疫荧光(IF)检测CD4⁺T细胞Foxp3、RORγt表达。结果显示,YHF显著减小主动脉斑块面积,降低血脂水平,增加Treg/Th17比值;上调主动脉Foxp3表达而下调RORγt表达;且在体外上调CD4⁺T细胞Foxp3表达而下调RORγt表达。本研究表明,YHF可以调节高脂饮食诱导的ApoE^-/-小鼠Treg/Th17比例失衡,减弱LPS对CD4⁺T细胞的炎性刺激影响,从而改善AS。     

影响ApoE-/-小鼠动脉病理变化因素的探讨

目的 探讨不同脂肪和胆固醇含量饲料喂养对于早期ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化进展变化的影响。方法 8只6周龄ApoE^-/-小鼠随机分成2组,高脂高胆固醇饮食组（H组）4只,给予含21%脂肪、1.25%胆固醇的饲料喂养14周,中等脂肪饮食组（M组）4只,给予含10%脂肪的饲料喂养14周,观察比较不同脂肪和胆固醇含量饲料喂养后的血生化、Lee''s指数、体脂比、肝体比和动脉病理切片的变化。结果 M组和H组的血清生化、Lee''s指数、体脂比、肝体比无明显差异,常规HE染色切片、油红O冰冻切片显示20周的M组和H组主动脉都处于动脉粥样硬化脂质条纹期,斑块中表达大量的巨噬细胞源性泡沫细胞,存在大量坏死核和胆固醇结晶体,H组的主动脉窦上形成动脉瘤,M组腹主动脉形成动脉瘤,H组主动脉窦斑块中的胆固醇结晶体含量多于M组。结论 2组不同脂肪和胆固醇含量饲料对于早期ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化进程存在一定影响,但总体上变化不大。     

推拿疗法对骨骼肌纤维化大鼠MMP-1和TIMP-1表达的影响

[目的]观察推拿疗法对大鼠急性腓肠肌钝挫伤后纤维修复的影响,探讨其可能的作用机制。[方法]将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、推拿治疗组(n=10),运用自制砸伤装置复制经典骨骼肌钝挫伤模型。治疗组进行推拿治疗,每次干预10 min,每日1次,连续实施25 d。通过苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠腓肠肌纤维化程度;qPCR和蛋白印迹检测大鼠腓肠肌基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)蛋白的表达情况。[结果]HE染色镜下发现对照组大鼠骨骼肌纤维排列整齐,形态结构完整;模型组大鼠骨骼肌纤维排列紊乱,甚至断裂,肌成纤维细胞增多,细胞外基质ECM)增多且胶原纤维明显沉积;治疗组大鼠骨骼肌纤维排列较整齐、间距小,且大小均一,胶原纤维生成减少,仅有少量ECM生成,损伤基本恢复。qPCR和蛋白印迹结果显示模型组大鼠损伤腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白表达量及MMP-1/TIMP-1比值明显降低(P<0.01),而TIMP-1的mRNA和蛋白表达水平明显升高;给予推拿治疗后可明显提高损伤大鼠腓肠肌MMP-1的mRNA和蛋白水平及MMP-1/TIMP-1的比值(P<0.01,P<0.05),且降低TIMP-1的转录水平(P<0.01,P<0.05)。[结论]推拿治疗可有效减轻骨骼肌钝挫伤后纤维化程度,其作用可能与上调MMP-1/TIMP-1比值有关。     

通络降浊法治疗冠心病合并高脂血症疗效观察

[目的]观察用中医通络降浊法在治疗冠心病合并高脂血症方面的疗效。[方法]选取68例冠心病合并高脂血症患者纳入研究,随机分为观察组36例、对照组32例采用通络降浊法进行治疗。[结果]两组疗效比较,治疗组疗效明显高于对照组(P<0.05)治疗期间无明显不良反应。[结论]在常规治疗基础上,通络降浊法可明显降低甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇,改善冠心病临床症状。     

丹酚酸B干预骨髓间充质干细胞移植对AMI大鼠心梗区血管新生的*

[目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)干预骨髓间充质干细胞(MSCs)心肌移植及其对大鼠心梗区毛细血管新生的影响.[方法]选用成年近交系Wistar大鼠建立心肌缺血模型.将造模成功的75只大鼠随机分为5组.冠脉结扎术后,联合组给于大鼠SalB并移植MSCs(SalB B组),细胞移植组(B组)移植等量的MSC,中药组给予等量的SalB(SalB组),对照组注射等容积的MSCs完全培养液(S组),模型组(C组).手术后2周,通过心肌组织CD34免疫组化染色,观察丹酚酸B干预MSCs心肌移植对血管新生的影响.[结果]CD34染色示联合组动物心肌梗死区毛细血管密度高于B组和SalB组,且有少数细胞形成血管样结构.[结论]在急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌移植MSCs,通过参与血管形成,改善梗死区的血液供应,是SalB起效的重要物质基础之一,具有良好的开发和应用前景.     

apoE-/-小鼠颈总动脉斑块Fractalkine与TLR4的表达

目的 探讨apoE^-/-小鼠动脉粥样硬化斑块不规则趋化因子fractalkine与Toll样受体4(TLR4)的表达及其关系。方法 24只apoE^-/-小鼠平均分为三组:普通饮食组、高脂饮食组、阿伐他汀干预组。12周后实验结束,检测动物血脂、颈总动脉斑块面积和血管狭窄率,评价AS病变严重程度。最后,应用免疫组织化学方法检测斑块内fractalkine和TLR4的表达情况。结果 高脂饮食组颈总动脉AS斑块面积和血管狭窄率分别是普通饮食组的近4倍和3倍多;而药物干预组二者均降低,但只有血管狭窄率减少有统计学差异[(35.27±3.84)vs.(27.02±2.69), P<0.05];斑块处fractalkine、TLR4的表达在高脂饮食组升高[(3.24±0.96)vs. (10.69±2.11)、(1.29±0.57) vs (9.32±1.02)],经阿伐他汀干预后表达均下降[(10.69±2.11) vs (5.73±1.30)、(9.32±1.02) vs (3.32±0.51),(P<0.05)] 结论 在apoE^-/-小鼠AS斑块内,fractalkine和TLR4呈协同性表达,两者之间可能存在某种分子机制,并在AS的发病过程中发挥重要作用。     

多囊卵巢综合征中医证候与中医体质关系研究

[目的]观察多囊卵巢综合征患者中医证候与中医体质的关系。[方法]选取黑龙江中医药大学附属第一医院妇科门诊收集的多囊卵巢综合征患者病例,对患者进行中医证候分型和中医体质判定,观察分析不同证候类型的多囊卵巢综合征患者中医体质分布是否存在差异。[结果]共收集263例符合纳入标准及排除标准的多囊卵巢综合征患者。中医证候分型以脾虚痰湿证居多,83例,占31.6%,其次为肾虚肝郁证77例,占29.3%;痰瘀互结证70例,占26.6%、肾虚血瘀证33例,占12.5%。中医体质以气虚质（74例,28.1%）、血瘀质（53例,20.2%）、痰湿质（51例,19.4%）3种体质占主要比例。4种中医证候的中医体质分布差异均有统计学意义,脾虚痰湿证以气虚质和痰湿质为主要体质;肾虚肝郁证的体质以气虚质及气郁质为多;痰瘀互结证中以血瘀质和痰湿质占主要比例;肾虚血瘀证中血瘀质和气虚质为主要体质。[结论]多囊卵巢综合征不同中医证候间中医体质分布存在差异,中医体质的特异性影响中医证候的类型。     

彩色多普勒超声测量大鼠心功能的可行性研究

【目的】通过与血流动力学检测比较确定彩色多普勒超声是否可用来评价正常和慢性心力衰竭大鼠左心室结构和功能变化。【方法】利用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠慢性心力衰竭模型，手术后5-7周采用无创彩色多普勒超声和有创血流动力学测定大鼠心功能，同时以正常大鼠进行平行对照。【结果】用彩色多普勒超声测定心脏功能正常大鼠（NOR组）和慢性充血性心力衰竭大鼠（CHF组）的射血分数（EF）和短轴缩短率（FS）值与用血流动力学方法测得的左室压力变化最大速率（LV＋dp／atmax）值呈良好的正相关（r=0．921和r=0．827，均P〈0．01）。【结论】无创性经胸壁二维引导彩色多普勒超声可用来代替有创血流动力学评价慢性心力衰竭大鼠心脏结构和功能改变。