BioOcularTM角膜上皮模型EIT法作为眼用制剂包装材料眼刺激性检测方法的研究

目的：建立BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法评价眼用制剂包装材料眼刺激性的方法。方法：采用BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法,通过对不同暴露时间,不同浸提条件,不同浸提浓度和不同浸提介质的比较分析,确定使用该方法进行眼用制剂包装材料眼刺激性的检测方法。结果：取样品内表面积120cm2,剪碎,加入氯化钠注射液20mL,密封后,置高压蒸汽灭菌器内,在110℃保持30min。按BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法进行检测,组织活性平均值应不低于80%。 结论：该方法可以用于检测眼用制剂包装材料的眼刺激性。     

基于BioOcularTM角膜上皮模型EIT法对眼用制剂包装材料眼刺激性的再研究

目的：探讨用BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法评价眼用制剂包装材料眼刺激性的可行性。方法：在眼用制剂包装材料的浸提液中加入不同浓度的阳性物质,同时进行BioOcularTM 角膜上皮模型EIT试验和Draize试验,比较两种方法所得结果的一致性。 结果：与Draize法比较,BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法对含不同浓度阳性物质浸提液的眼刺激性分级与体内试验的一致程度为100%。 结论：BioOcularTM 角膜上皮模型EIT法有潜力作为眼用制剂包装材料眼刺激性试验的替代方法。     

三维重组眼角膜上皮模型法与兔眼刺激法对洗发水眼刺激性的比较与评价

目的 本文同时采用三维人重组角膜模型BioOcular?和现行的兔眼刺激Daize法,对市面常见的不同配方洗发水的眼刺激性进行评价与比较。方法 参考体外眼刺激实验(OECD指导原则492),采用人重组眼角膜上皮模型和兔眼刺激法对8种不同品牌洗发水的眼刺激性进行评价研究。结果 研究表明,与传统兔眼实验比较,采用皮肤模型的眼刺激法对8种洗发水有无刺激性的区分结果与兔眼刺激法基本一致。其中两种方法相关系数r达到0.955,具有很好的相关性。结论 与兔眼刺激法相比,人重组眼角膜上皮模型刺激实验所需的周期短、试验步骤相对简便、检测结果相对更加客观,人源重组组织与人眼刺激更为接近,是一种值得推荐的眼刺激替代检测方法。     

BioOcularTM角膜上皮模型ET50法在化妆品体外眼刺激评价中的应用

目的 采用国内生产的BioOcular?三维人源重组角膜上皮模型,对市面常见的几种洗发水和面霜的眼刺激性进行比较,通过该方法评价不同配方的化妆品在眼刺激性上的强弱。方法 采用三维人源重组角膜上皮模型BioOcular?模型 ET50法对不同品牌洗发水和面霜的眼刺激性进行比较研究,区分不同配方产品的眼刺激性强弱等级。结果 在同样实验条件下,洗发水和面霜表现出对三维人源重组角膜不同的刺激程度,不同配方品牌的洗发水的刺激程度也有很大差别。该方法可对化妆品的眼刺激性强弱程度进行很好的区分。结论 采用三维人源重组角膜上皮模型的ET50法是一种评价不同配方化妆品以及原料的眼刺激性的差异的快速替代检测方案。     

应用BioOcullarTM重建人角膜上皮模型评估化学物和化妆品产品眼刺激性

目的采用BioOcullar^TM重建人角膜上皮模型检测化学物和化妆品产品的眼刺激性,以评价基于该模型的测试方法对化学物和化妆品眼刺激性评估能力。方法检测化学物时,选用58种化学物,暴露于角膜上皮模型后,用噻唑蓝(MTT)法测定角膜组织活性,计算组织相对活性值,当组织相对活性≤60%时,判定受试物为刺激性阳性,当组织相对活性>60%时,判定为刺激性阴性。检测化妆品产品时,选用61种不同类型化妆品,采用时间毒性效应二步法,根据测试结果划定刺激性分级标准。分析测试方法对化学物和化妆品眼刺激性检测的灵敏度、特异度和符合率。结果对58种化学物的眼刺激性检测,其中25种化学物3轮重复测试刺激性分类均为一致,且与欧洲化学品管理局分类、标签和包装数据库(Classification,Labelling&Packaging,CLP)或全球化学物统一分类和标签系统(Globally Harmonized System of Classification and Labelling of Chemicals,GHS)分类一致;扩大对33种化学物检测,有32种结果与CLP或GHS分类结果一致,对58种化学物眼刺激性检测的灵敏度为100%,特异度为95.00%,符合率为98.28%。对61种化妆品1 h筛检结果,有26份化妆品划分为无刺激性或微刺激性,符合率为100%;对余下的35份疑似刺激性化妆品检测,参照动物试验结果划定刺激性分级标准为:ET50>36.5 min为无刺激或微刺激性,5 min     

眼用制剂刺激性体内评价方法研究进展

眼用新剂型在提高眼部生物利用度同时,也引入了大量以表面活性剂、高分子聚合物、阳离子材料等具有刺激性的物质。因此,在保证眼部制剂有效性的同时,其安全性也越来越受到关注。由于体外实验缺乏相关的酶系和组织结构的整体反应,其结果外推至动物实验的合理性和关联性也有待于进一步研究证明。本文综述了常用的体内(眨眼、组织病理切片、Draize评分、共聚焦显微镜法等)眼部刺激性实验方法,并对这些方法进行了评估和分析。     

眼刺激性评价体外替代方法研究进展

眼用药物及可能接触眼睛的受试物均应考虑进行眼刺激试验。Draize试验一直是公认的测定急性眼刺激性的国际标准,但随着"3R"原则的实施,体外替代方法逐渐成为眼刺激性评价研究的发展方向。目前已有多种体外替代方法得到了欧洲化学品局(European Chemical Agency, ECHA)、美国国家环境保护局(US Environmental Protection Agency, US EPA)及经济合作与发展组织(The Organization for Economic Co-operation and Development, OECD)的认可,其中有5种替代试验得到了OECD的认可,分别是牛角膜不透明度和渗透性试验,离体鸡眼试验、短时暴露试验、重组人角膜上皮模型试验试验以及荧光素渗漏试验。在使用体外替代方法时,由于单一的方法不能蕴含所有的观察终点,所以应根据每种替代方法的特点及应用范围进行组合以覆盖整个分层测试策略。相信随着体外替代试验研究的不断深入,有希望在未来能够完全替代体内试验。本文就眼刺激评价的体外替代方法和评价标准进行了综述。     

牛角膜混浊和渗透性试验方法与家兔法评价染发类化妆品眼刺激性的比较研究

目的 探讨在染发类化妆品备案审查中,用牛角膜混浊和渗透性试验(BCOP)代替家兔法(Draize 试验)进行眼刺激性评价的可能性。方法 分别用BCOP与Draize 试验对14种市售染发剂进行眼刺激性评价,并对评价结果进行比较。结果 对14种染发剂眼刺激性检测的结果表明,Draize 试验所得的刺激反应等级为微刺激性―轻刺激性,按现行评审标准,通过率为100%(14/14);BCOP所得的刺激反应等级为轻微刺激性―严重刺激性,与Draize法分类一致性达到78.6%(11/14),以体外刺激评分值(IVIS)≤25为限值,通过率为78.6%(11/14);以IVIS≤55为限值,通过率为85.7%(12/14)。结论 用BCOP代替Draize 试验对染发类化妆品进行眼刺激性评价可行。     

重组人表皮生长因子治疗外伤性角膜上皮缺损

目的探讨重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)滴眼液治疗外伤性角膜上皮缺损的临床效果。方法观察100例外伤性角膜上皮缺损病例,随机分成治疗组50例和对照组50例,治疗组采用重组人表皮生长因子滴眼液滴入结膜囊,每日4次,每次1～2滴;对照组采用0.3%妥布霉素滴眼液滴入结膜囊,每日4次,每次1～2滴。滴眼后3d、6d观察角膜上皮缺损修复情况。结果滴眼3d和6d,rhEGF治疗组外伤性角膜上皮缺损的治疗率均高于对照组,经χ2检验,治疗组与对照组在滴眼后3d、6d差别有高度显著性(P<0.01)。结论重组人表皮生长因子(rhEGF)能够特异性地和角膜上皮细胞及内皮细胞受体相结合,很好地促进角膜上皮细胞的再生和修复,缩短病程,是一种治疗外伤性角膜上皮缺损的有效方法。     

重组人表皮生长因子促进外伤性角膜上皮缺损修复的临床观察

目的探讨金因舒(重组人表皮生长因子rhEGF)滴眼液治疗外伤性角膜上皮缺损的临床效果。方法观察200例外伤性角膜上皮缺损病例,随机分成治疗组100例和对照组100例,治疗组采用金因舒滴眼液滴入结膜,4次/d,1～2滴/次;对照组采用0.3%妥布霉素滴眼液滴入结膜,1～2滴/次。滴眼后3d、6d观察角膜上皮缺损修复情况。结果滴眼3d和6d,金因舒滴眼液治疗组外伤性角膜上皮缺损的治愈率明显高于对照组,经χ2检验,治疗组与对照组在滴眼后3d、6d差异均有显著意义(P<0.01)。结论金因舒滴眼液的主要成分是重组人表皮生长因子,它能够特异性和角膜上皮细胞及内皮细胞受体结合提高损伤的角膜上皮创伤愈合的时间和增大愈合速度,是一种治疗外伤性角膜上皮缺损的有效方法。     

BCOP法评价染发类化妆品眼刺激性的研究

目的 尝试采用牛角膜混浊和渗透性试验 (bovine corneal opacity and permeability,BCOP)对染发类化妆品进行眼刺激性的评价。方法 通过对染发剂与牛角膜的接触时间、染发剂各组成成分、染发剂配制后存放时间等检测条件的摸索,尝试建立一套标准的BCOP法评价染发类化妆品眼刺激性的方法,并用该法对市售样品进行评价性检测。结果 染发剂与牛角膜接触时间与刺激性大小成正比;染发剂各组成成分的刺激性不同,其中作为氧化剂的组分(通常为B剂或2剂)均为无刺激性,染发剂中的A剂或1剂的刺激性各品种存在较大的差异;染发剂配制后存放一定时间,刺激性会下降。以配制后即刻给样,接触牛眼时间为10 min,对市场销售的13种染发类化妆品进行评价性检测,结果体外刺激得分为3.5~78.2,分类为轻微刺激性的有10种,中度刺激性的有1种,严重刺激性的有2种。结论 用BCOP法可以对染发类化妆品的眼刺激性进行评价。     

渗透促进剂在眼用制剂中的应用

眼组织具有复杂的保护机制,导致进入眼组织的药物浓度低。角膜上皮细胞层是药物透过角膜进入眼组织发挥疗效的主要屏障,应用渗透促进剂能够改善角膜的透过性,增加药物的跨膜吸收。现对渗透促进剂的种类及研究进展进行综述,其中包括钙离子螯合剂、表面活性剂、抑菌剂、皂苷和环糊精等。     

兔角膜上皮细胞短期暴露实验替代兔眼刺激实验的可行性研究

目的：探讨用兔角膜上皮细胞（SIRC）模型对眼用制剂包装材料的浸提液进行短时暴露（STE）实验,以替代动物眼刺激实验的可行性。方法：在眼用制剂包装材料的浸提液中加入不同浓度的阳性物质,同时进行STE实验和兔眼刺激实验,比较两种实验分级的一致程度。结果：两种方法对不同浓度的阳性浸提液进行实验分级的一致程度为78．6％,统计学分析证明两种方法具有相当的一致性。以动物实验的分级为标准,STE实验的灵敏度和特异性分别为100％和80％,假阳性率为20％,假阴性率为0％。结论：SIRC的STE眼刺激实验有潜力作为眼用制剂包装材料眼刺激性实验的替代方法。     

新目安眼用凝胶剂等四种眼用制剂离体角膜渗透特性比较研究

摘 要 目的：探索更昔洛韦替代阿昔洛韦组成的新目安眼用凝胶剂离体角膜渗透性能是否优于原目安眼用凝胶剂及市售制剂。方法: HPLC法测定更昔洛韦及阿昔洛韦含量并以此为指标,采用Franz扩散池法,进行离体角膜渗透性实验,建立数学模型,通过数学及统计学处理提取角膜渗透特性参数,比较新目安眼用凝胶剂与目安眼用凝胶剂渗透速度及渗透总量的差异。结果: 新目安眼用凝胶剂角膜渗透特性优于目安眼用凝胶剂（角膜渗透速度是后者的3.452倍,角膜渗透数量是后者的1.832倍）,亦优于市售0.15%更昔洛韦眼用凝胶剂（角膜渗透速度是后者的2.029倍）,市售0.15%更昔洛韦眼用凝胶剂角膜渗透特性优于市售3%阿昔洛韦眼膏（角膜渗透数量是后者的2.028倍）。结论: 新目安眼用凝胶剂离体角膜渗透性能符合眼用制剂需求,更昔洛韦替代阿昔洛韦组成的新目安眼用凝胶剂离体角膜渗透性能优于目安眼用凝胶剂,给药次数及间隔时间基本科学、合理、可行,并为下一步药效、毒理、临床研究提供依据。     

小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗LASEK术后角膜上皮愈合不良

目的观察小牛血去蛋白提取物眼用凝胶治疗准分子激光上皮瓣下角膜磨镶（LASEK）术后角膜上皮愈合不良的效果。方法将42例（60只眼）LASEK术后角膜上皮愈合不良患者随机分为两组,均给予常规治疗（左氧氟沙星滴眼液、玻璃酸钠滴眼液、氟米龙滴眼液滴眼,qid）,治疗组18例30只眼在常规治疗基础上加用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶滴眼,qid。随访观察两组视力、眼部刺激症状、角膜上皮愈合时间、Haze程度,评价临床效果。结果末次随访,治疗组与对照组裸眼视力均达到或超过术前最佳矫正视力。治疗组用药后第9,11天疼痛评分低于对照组,角膜上皮愈合时间［（11.23±2.08） d］短于对照组［（13.58±3.56） d］,均差异有统计学意义。结论对LASEK术后早期角膜上皮愈合不良患者加用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶,可有效减少眼部刺激症状,促进角膜上皮愈合。     

鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法用于评价化妆品眼刺激性的可行性研究

目的 研究鸡胚绒毛膜尿囊膜血管试验法（chorioallantoic membrane vascular assay,CAMVA）评价化妆品眼刺激性的可行性,并用改良后的方法对14种市售化妆品进行眼刺激性的评价。方法 通过控制样品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间,以及对评价体系的改良,尝试建立一套标准的CAMVA法评价化妆品眼刺激性的方法。结果 护肤类产品无刺激性,用后冲洗类、染发类产品的浓度、与鸡胚绒毛膜尿囊膜的接触时间均与刺激性大小成正比。在3%的浓度下,用后冲洗类产品的最佳接触时间为20 min,体内外试验结果一致性为90%（9/10）;染发类产品为5 min,体内外试验结果一致性为100%（2/2）。结合改良后的评价体系可做到刺激性分级,体内外试验结果一致性为用后冲洗类产品80%（8/10）,染发类产品50%（1/2）。结论 用CAMVA法可以对化妆品的眼刺激性进行评价,但实验条件和判定标准还需进一步优化。     

小牛血红细胞提取物眼用凝胶治疗兔角膜损伤的实验研究

目的研究小牛血红细胞提取物眼用凝胶对兔角膜损伤后创伤修复以及对角膜新生血管生成的影响。方法制作角膜板层切除模型,在兔右眼角膜中央,用直径8.5 mm环钻制作成直径8.5 mm、深度100μm的无菌性角膜损伤。新西兰大白兔40只随机分为4组(每组10只)。分别于角膜板层切除术后第1天起,各组分别用0.9%生理盐水(模型组)、重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶(阳性对照Ⅰ组)、50%小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(阳性对照Ⅱ组)及20%小牛血红细胞提取物眼用凝胶(试验组)点眼每日4次。分别于治疗后7,14,21和28天,进行角膜荧光素钠染色,并观察各组角膜上皮修复情况和角膜新生血管生长情况。结果在角膜板层切除后,观察期末,20%小牛血红细胞提取物眼用凝胶组,对角膜上皮修复速度,与其他阳性对照组比较无明显差异(P>0.05);角膜新生血管生长,较其他阳性对照组明显减少(P<0.05)。结论小牛血红细胞提取物眼用凝胶明显能促进兔角膜损伤的组织修复,减少角膜新生血管形成。