斑蝥酸钠对肝癌细胞HepG_2增殖抑制作用的研究

目的研究斑蝥酸钠（cantharidin,CTD）对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用和机制。方法采用免疫组化染色法（I mmunohistochemistry,I H）和33528染色法观察斑蝥酸钠对HepG2细胞增殖的抑制作用,并观察肝癌细胞凋亡的形态学变化及不同剂量斑蝥酸钠对HepG2细胞凋亡率的影响。结果 1.0 mg/L以上斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用（P〈0.01）,最高凋亡率（47.24%）出现于高剂量组（5.0 mg/L）。结论斑蝥酸钠对人肝癌细胞HepG2的增殖有显著抑制作用,是治疗肝癌较理想的药物之一。     

肿节风复方对肝癌细胞HepG2作用效果观察

目的探讨肿节风复方对人肝癌细胞HepG2细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法以不同浓度肿节风复方处理肝癌HepG2细胞48 h,观察细胞形态学改变;采用MTT法评价不同浓度肿节风复方对HepG2细胞增殖的影响并计算半抑制浓度(IC50);应用ELISA法检测肿节风复方、紫杉醇对HepG2细胞端粒酶活性的影响。结果肿节风复方处理HepG2细胞48 h后,细胞脱落明显,增殖活力显著降低(P<0.05),呈现剂量依赖趋势;肿节风复方对HepG2细胞IC50为292.2 mg/ml。肿节风复方和紫杉醇对HepG2细胞端粒酶活性均有抑制作用(P<0.05),并且抑制作用相当(P>0.05)。结论肿节风复方能抑制HepG2细胞增殖及端粒酶活性。     

雷公藤红素对肝癌细胞株HepG2的影响及作用机制

目的：研究雷公藤红素（Celastrol）对肝癌细胞株HepG2增殖活力的影响。方法将人正常肝细胞LO2及人肝癌细胞株HepG2接种在DEME培养基中,传代后取对数生长期细胞进行实验,用MTT法测定不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞LO2及肝癌细胞株HepG2增殖的量效关系（1、2、4、8、16、32μmol／L）和在0.5μg／mL浓度的雷公藤红素作用下的时效关系（1、2、4、8、12、24 h）,Hoechst 荧光染色观察凋亡细胞形态变化以及Western blot检测肝癌细胞株HepG2中半胱氨酸蛋白酶（ caspase ）－3、caspase －8、caspase －9与胞内磷脂酰肌醇3激酶（p－PI3K）、t－胞内磷脂酰肌醇3激酶（t－PI3K）、磷酸化蛋白激酶（p－AKT）、t－AKT、细胞外信号调节激酶（p－ERK）、t－ERK的表达情况。结果经MTT法检测,不同浓度雷公藤红素对正常肝细胞的增殖没有明显抑制作用,而对肝癌细胞HepG2的抑制率依次为6.83％、15.11％、18.32％、21.77％、23.77％、25.51％,作用强度随着浓度的升高而增强;在浓度为0.5μg／mL雷公藤红素作用下,不同时间抑制率分别为6.66％、10.63％、13.31％、15.50％、20.54％、32.34％,呈时间依赖性;Hoechst 荧光染色在显微镜下均显现凋亡细胞。 Western blot结果显示, caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK显影,caspase－3、caspase－8、caspase－9表达量增加,而p－PI3K、p－AKT、p－ERK表达量降低。结论雷公藤红素通过诱导HepG2凋亡及细胞自噬作用,发挥增殖活力抑制作用,可能与调控caspase－3、caspase－8、caspase－9、p－PI3K、p－AKT、p－ERK等相关因子的表达情况有关。     

NU7026对人肝癌细胞HepG2生物学行为的影响

目的探讨NU7026对HepG2细胞的影响,为治疗肝癌提供理论基础。方法用NU7026作用HepG2细胞,将实验分为空白组、对照组和NU7026组。 CCK8实验检测NU7026对肝癌HepG2细胞存活率的影响。生长曲线实验和克隆实验检测HepG2细胞增殖能力,划痕实验检测HepG2细胞迁移能力,流式细胞术检测HepG2细胞凋亡和周期。结果与0 μmol/L组和DMSO组比较,15 μmol/L和20 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞,细胞存活率明显下降(P＜0.05);与DMSO组相比,10 μmol/L NU7026作用于HepG2细胞24、48、72 h后,细胞存活率下降(P＜0.05);10 μmol/L NU7026作用HepG2细胞,细胞增殖能力和迁移能力下降(P＜0.05),细胞凋亡率增加(P＜0.05),细胞周期无明显改变。结论NU7026能抑制HepG2细胞增殖能力和迁移能力可能与促进细胞凋亡有关。     

顺铂对肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的实验研究

目的探讨顺铂对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法将肝癌细胞株传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的顺铂,并设空白对照组,用MTT比色法观察顺铂对体外培养的肝癌细胞生长的抑制作用,在光学显微镜下观察细胞形态学变化。结果 MTT比色法测定显示,顺铂作用于肝癌HepG2细胞后可以抑制其增殖且呈剂量依赖性。结论顺铂能抑制体外培养的肝癌Hepg2细胞的增殖。     

GPI-PLD过表达对肝癌细胞株HepG2生物学特征的影响

目的:研究GPI-PLD基因转染并过度表达对HepG2细胞的影响.方法:用脂质体转染法将本室已经构建的GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1( )/GPI-PLD转入HepG2细胞,以未转染的HepG2细胞及转染空载体pcDNA3.1( )的细胞为对照,G418筛选出阳性细胞克隆.用自制具完整GPI结构的胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLD mRNA表达水平.细胞计数绘制生长曲线,荧光染色观察HepG2细胞形态学改变,流式细胞术检测凋亡,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒(CDC)杀伤率,ELISA检测癌胚抗原(CEA)的表达情况.结果:阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约2倍,GPI-PLD mRNA表达水平约增加5倍;GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强,细胞呈现典型的凋亡形态特征,流式细胞术检测到凋亡峰,细胞凋亡率明显增加.结论:成功将GPI-PLD基因转染入HepG2细胞,并在细胞中稳定表达.GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性.     

臭氧溶液对HBV体外感染的HepG2细胞的抗病毒作用

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人肝癌HepG2细胞的实验模型,并研究臭氧溶液对感染了HBV后的HepG2细胞的抗病毒作用。方法:乙肝阳性血清与HepG2细胞共孵育建立体外感染模型,采用倒置相差显微镜检测细胞形态,MTT法检测细胞成活率,ELISA法检测HBsAg和HBeAg表达水平,HBV荧光定量PCR检测HBV DNA表达量。结果:体外感染了HBV DNA的HepG2细胞能持续稳定分泌HBsAg和HBeAg,并能产生HBV DNA,通过低浓度臭氧溶液作用后,细胞形态无明显差异,细胞成活率无明显影响(P>0.05),HBsAg和HBeAg均转阴(P<0.01),HBV DNA拷贝量亦明显降低(P<0.01)。结论:较低浓度臭氧溶液对感染了HBV的HepG2细胞有明显的抗病毒作用,对细胞并无损伤。     

肝细胞生长因子体外对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对肝癌细胞 HepG2 增殖和凋亡的影响. 方法: 人肝癌细胞株 HepG2加入不同浓度HGF(0, 1, 10, 50 μg/L) 培养2, 4, 6 d,应用MTT 法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡百分率的变化,免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达. 结果: HGF 抑制 HepG2 细胞增殖呈剂量及时间依赖性,并诱导其凋亡[50 μg/L HGF,培养时间为4, 6 d,其抑制率: (30.7±10.2)%, (49.8±11.1)% vs 1 μg/L HGF: (10.7±11.2)%, (4.2±9.4)%; P《0.05, P《0.01]. 随着HGF浓度增大S期细胞明显减少[试验组10, 50 μg/L HGF: (7.5±4.4)%, (7.8±1.6)% vs对照组0 μg/L HGF: (16.6±2.8)%; P《0.05, P《0.01],同时可见G0/G1 期细胞累积现象[试验组10, 50 μg/L HGF: (80.5±3.2)%, (73.1±3.9)% vs对照组0 μg/L HGF:(59.6±6.2)%; P《0.05, P《0.01]. 试验组 G1 峰前出现明显的凋亡峰,凋亡率亦较对照组显著增加(P《0.05). 且试验组细胞 PCNA 表达明显高于对照组. 结论: HGF 对肝癌细胞 HepG2 有抑制增殖和诱导其凋亡的作用,诱导细胞 G0/G1 期阻滞为可能机制之一.     

解毒消瘕饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消瘕饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制。方法采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消瘢饮含药血清干预24h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变。结果解毒消瘕饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论解毒消瘢饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡。     

解毒消癥饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消癥饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制. 方法 采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消癥饮含药血清干预24 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变. 结果 解毒消癥饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 解毒消癥饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡.     

电离辐射对HepG2细胞系细胞周期的影响

目的:探讨放疗对人肝癌细胞系HepG2细胞细胞周期的影响.方法:以人肝癌细胞系HepG2细胞为研究对象:分别以2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后培养24h;以4Gy吸收剂量的6MV-X线照射HepG2细胞,照射后分别培养6h、12h、24h和48h;以未予射线照射的同步培养细胞为对照.采用流式细胞技术检测不同照射剂量及照射后不同时间点HepG2细胞细胞周期的变化.结果:2Gy、4Gy、6Gy、8Gy和10Gy剂量6MV-X线照射后培养24h,HepG2细胞表现为随着照射剂量的增加,G1期细胞百分率下降;6Gy、8Gy和10Gy剂量组HepG2细胞表现为G2/M期阻滞.4GyX线照射后培养6h,即可观察到G2/M期阻滞,阻滞峰值为正常的56倍;然后细胞被释放,再度进入细胞周期或死亡.结论:不同剂量X线照射人肝癌细胞系HepG2细胞,大分割剂量组主要诱导G2/M期阻滞;4Gy剂量射线照射后,S期细胞阻滞明显,并与G2/M期阻滞同步解除,阻滞解除后启动增殖或进入凋亡.     

大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用不同浓度的大蒜素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测大蒜素对HepG2细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化,流式细胞术检测大蒜素对HepG2细胞周期和凋亡率的影响。结果大蒜素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且具有明显剂量和时间依赖性,24h、48h和72h大蒜素抑制HepG2细胞的IC50分别为(48.26±1.66)μg/mL、(31.89±1.51)μg/mL和(23.79±1.32)μg/mL。32μg/mL大蒜素作用HepG2细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征。流式细胞术检测表明大蒜素作用HepG2细胞后,可将细胞阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。     

三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2凋亡的影响及机制

目的:研究三叶青乙酸乙酯提取物对肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,并探究其作用机制。方法:HepG2细胞体外培养,在不同浓度三叶青提取物的作用下,采用CCK8法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,运用Western Blot法检测蛋白表达情况。结果:三叶青乙酸乙酯提取物能显著抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡(P<0.05);上调Caspase-3和Bax表达量,下调Bcl-2表达,但细胞周期结果不显著。结论:三叶青乙酸乙酯提取物对HepG2细胞有抑制增殖作用,其机制可能与调控细胞信号通路诱导凋亡有关。     

小剂量氟尿嘧啶对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响与~（18）F-FDG摄取关系的研究

目的研究小剂量氟尿嘧啶处理肝癌细胞HepG2后部分生物学行为与其摄取氟代脱氧葡萄糖（18F-FDG）变化的关系。方法使用低浓度的5-Fu（1μg/ml）培养肝癌细胞系HepG2,持续培养4周期后（第4周期后细胞简称HepG2/4P）,观察细胞形态,绘制生长曲线,计算倍增时间;用Western blot检测Ki67的表达;于体外进行18F-FDG细胞放射性核素摄取实验。结果HepG2与HepG2/4P组的倍增时间分别为16.2h、25.2h;Ki67相对表达量分别为0.367±0.005、0.270±0.019,两组差异有统计学意义（P〈0.05）;HepG2/4P对18F-FDG摄取率较化疗前HepG2摄取降低,但无统计学意义（P=0.093）。结论HepG2/4P细胞与HepG2相比倍增时间延长,Ki67的表达降低,对18F-FDG摄取降低,提示肝癌细胞增殖的差异可能会引起肿瘤糖代谢相应的差异,可能用于监测化疗疗效和预测细胞生物学行为的改变。     

维拉帕米对肝癌细胞株HepG2细胞增殖及迁移的影响

目的 探讨钙离子通道阻滞剂维拉帕米(VR)对人肝痛细胞株HepG2细胞增殖、DNA合成及细胞迁移的影响.方法 在HepG2细胞培养液中加入不同浓度的VR(0、1、5、10、1 5、20 μg/mL),采用甲基四唑蓝(MTT)法测定VR对HepG2细胞增殖的影响;5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'...     

蛋白质组学技术对肝癌细胞株HepG2的G2/M期细胞的热激蛋白的鉴定

目的：采用蛋白质组学技术鉴定肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白。方法：提取肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞的蛋白质，采用双向电泳的方法分离蛋白质，应用图像扫描仪及质谱（MALDI—TOF—MS）分析鉴定HepG2的G2／M期细胞表达的蛋白质。结果：采用双向电泳技术分离，并用质谱成功鉴定出HepG2的G2／M期细胞的热激蛋白。结论：肝癌细胞株HepG2的G2／M期细胞内的热激蛋白的成功鉴定，为探讨HSP在细胞生长和增殖中的作用奠定了基础，并为临床上肿瘤的治疗提供参考依据。     

NK细胞体外培养及对HepG2细胞的杀伤活性研究

目的:研究NK细胞的体外培养及对HepG2的杀伤活性。方法:采集外周血,肝素抗凝,分离单个核细胞(PMBC),用NK细胞培养基(补加IL-2200U/ml)培养12d,用流式细胞仪检测其表面标志及细胞毒颗粒表达水平,并按效靶比5∶1、10∶1、20∶1加入HepG2细胞,比较其杀伤活性。结果:培养12d的NK细胞CD3~-CD56~+阳性率(73.6±11.3)%与培养前的阳性率(14.2±5.1)%相比有显著性差异(P<0.001),其穿孔素、颗粒酶B、CD107a的表达水平分别为(75.5±10.9)%、(62.2±8.9)%、(63.9±10.5)%。在5∶1～20∶1效靶比范围内,随着效靶比增加,NK对HEPG2细胞杀伤活性增强(P<0.05)。结论:NK细胞对肿瘤细胞具有杀伤活性,随着效靶比增加,杀伤活性增强。     

核转录因子-κB圈套策略对肝癌细胞HepG2凋亡的影响

目的:观察NF-κB圈套寡核苷酸(Decoy ODNs)对NF-κB活性的影响,进一步探讨其对人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制。方法:设计NF-κB圈套寡核苷酸,将FITC标记的NF-κB Decoy ODNs转染HepG2,共聚焦显微镜观察其核内定位,描记生长曲线;凝胶阻滞法(EMSA)检测转染前后NF-κB活性;再分别用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况。Western blot检测HepG2细胞中Bcl-2和Fas的含量。结果:NF-κB Decoy ODNs转染HepG2细胞后定位于胞核,NF-κB活性明显下降,其显著抑制细胞生长,促进HepG2细胞凋亡;低活性NF-κB可以下调Bcl-2、增加Fas的表达水平。结论:NF-κB圈套寡核苷酸促进肝癌细胞HepG2凋亡的机制可能与其下调NF-κB的活性,使促凋亡蛋白Fas表达增加和降低抑凋蛋白Bcl-2表达有关。     

琐琐葡萄提取物多糖、黄酮对肝癌细胞HepG2的增殖抑制作用

目的：研究琐琐葡萄提取物多糖（VTP）、黄酮（VTF）在体外对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用。方法：用不同VTP、VTF剂量组对体外培养的HepG2细胞分别干预24、48、72h后,用MTT法来观察其对HepG2细胞增殖的抑制作用。结果：（1）琐琐葡萄提取物VTP、VTF对HepG2细胞增殖在24h未表现出抑制作用;（2）与阴性对照组相比,除72hVTP剂量组（12500mg／L）外,48h和72h其余剂量组均表现出对HepG2细胞株的抑制作用,其作用差异有统计学意义（P〈0．05）;VTP和VTF所有剂量组48h均显出统计学意义（P〈0．001）;（3）重复测量设计资料的方差分析证明了琐琐葡萄提取物VTP、VTF对肝癌细胞株HepG2细胞的增殖有一定的抑制作用,测定时点与药物剂量分组存在交互作用;综合时间抑制曲线,琐琐葡萄提取物VTP和VTF在48h对肝癌细胞HepG2的抑制效果最佳。结论：通过体外对肝癌细胞株HepG2增殖的抑制初步证实,琐琐葡萄提取物多糖和黄酮具有一定抑制肝癌细胞增殖的作用。