ROS/JNK/FoxO3a信号通路在钩吻素子抑制结肠癌细胞增殖和诱导凋亡中的作用

目的 以人结肠癌细胞HCT-116细胞为研究对象,通过在培养液中加入不同浓度的钩吻素子（Kou,0,100,200,400 μmol·L^-1）,进一步探讨Kou对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子作用机制。方法 Kou体外干预HCT-116细胞24 h后,用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测其对细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡及活性氧（ROS）的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测叉头蛋白O3a（FoxO3a）mRNA表达情况,采用小干扰核糖核酸（siRNA）进行细胞转染,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测FoxO3a靶基因蛋白的表达情况。结果 与空白组比较,Kou处理明显降低了HCT-116细胞的增殖率（P<0.05,P<0.01）,呈剂量依赖性。与空白组比较,Kou处理引起细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导HCT-116细胞的凋亡（P<0.05,P<0.01）,其作用与Kou的浓度呈正相关;FoxO3a siRNA干扰显著降低了FoxO3a及其下游相关细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A（p21）,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1B（p27）和细胞死亡调解子（Bim）蛋白的表达（P<0.01）。与空白组比较,Kou处理诱导了HCT116细胞中氨基末端激酶（JNK）的活化（P<0.01）,JNK特异性抑制剂（SP600125）处理抑制了Kou诱导的FoxO3a活化及其下游相关蛋白的表达（P<0.01）;乙酰半胱氨酸（NAC）处理显著降低了Kou诱导的ROS水平和JNK信号的活化（P<0.01）。结论 Kou能有效抑制结肠癌细胞HCT-116的增殖,促进HCT-116细胞的凋亡,其机制可能与其作用于ROS/JNK/FoxO3a途径有关。     

电针、中药促进大鼠坐骨神经损伤的神经再生研究

目的：寻找促进周围神经损伤后神经再生的方法。方法：采用手术造成大鼠坐骨神经损伤模型，用电针、中药治疗，进行电生理指标和HRP追踪观察。结果：电针组、中药组的神经传导速度和诱发动作电位振幅恢复率以及脊髓前角和脊神经节标记细胞数，与西药组、空白组比较差异有显著性意义，其中电针组优于中药组。结论：电针、中药均能较好地促进神经损伤早期的功能恢复，是一种促进周围神经损伤后神经再生的有效手段。     

电针对面神经损伤兔面神经核中GDNF、CHAT表达的影响

目的观察电针对面神经损伤兔面神经核中胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、胆碱乙酰转移酶(CHAT)表达及神经元细胞形态的影响,探讨电针对面神经损伤再生修复的作用机制。方法将76只健康家兔随机分为假手术组、模型组、电针组、西药组,其中假手术组4只,其余每组24只。除假手术组外,其余组均制备面神经损伤模型。术后假手术组、模型组不给予干预;西药组造模后第1天开始给予维生素B110 mg、维生素B_1250μg加地塞米松2 mg肌肉注射,1次/d,地塞米松每7 d减半,连续4周;电针组造模后第1天开始进行电针治疗,每天连续治疗30 min,治疗5 d后休息2 d,疗程4周。术后4周镜下观察面神经损伤后面神经核中神经元细胞形态,并分别于术后1,2,3,4周免疫组化法检测各组兔面神经核中GDNF、CHAT表达情况。结果与模型组比较,电针组、西药组神经细胞轮廓结构清晰完整,肿胀、空泡数目减少,细胞数目增多。术后2,3,4周,电针组、西药组GDNF阳性表达数均明显高于模型组(P均0.05),且电针组明显高于西药组(P均0.05)。术后1,2,3,4周,模型组CHAT阳性表达数均明显低于假手术组(P均0.05),且呈先下降后上升的趋势;电针组、西药组CHAT阳性表达数随时间增加而增高,相邻两治疗阶段比较差异有统计学意义(P0.05),且电针组各时间段CHAT阳性表达数均明显高于模型组和西药组(P均0.05)。结论电针刺激有促进面神经损伤修复的作用,其机制可能与增加面神经核中GDNF、CHAT的表达有关。     

电针对帕金森病模型大鼠中脑黑质p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路介导的炎性反应在电针防治帕金森病(Parkinson disease,PD)模型大鼠中的作用.方法:健康雄性SD大鼠32只,随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组,每组8只.模型组与电针组大鼠采用颈背部皮下注射鱼藤酮(2 mg/kg,溶解于葵花油,浓度2 mg/mL)制备PD模型;假手术组,在与模型组大鼠相同部位注射等量的不含鱼藤酮的葵花油乳化液;正常组不作处理.电针组取“风府”“太冲”行电针治疗(连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min),1次/d,连续14d.其他组不予干预治疗.采用免疫组化法检测各组大鼠中脑黑质酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达变化.结果:模型组大鼠出现典型的PD行为学改变,中脑黑质区TH阳性神经元计数较正常组、假手术组显著降低,p-p38 MAPK、COX-2阳性神经元计数较正常组、假手术组显著升高,经统计学分析,差异均具有统计学意义(均P＜0.01);电针组TH阳性神经元计数较模型组明显升高,p-p38 MAPK、COX-2则较模型组表达下降,经统计学分析,差异均具有统计学意义(均P-＜0.01).结论:电针治疗可明显降低PD大鼠炎性介质COX-2的表达,抑制p38 MAPK磷酸化,减轻PD大鼠多巴胺能神经元的损伤,这一作用可能与其影响p38 MAPK信号通路有关.     

食管鳞状细胞癌组织Raf激酶抑制蛋白和NF-κBp65表达及临床意义

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中Raf激酶抑制蛋白(RKIP)和核因子κBp65(NF-κBp65)的表达,及其与食管鳞状细胞癌各临床病理因素之间的关系。方法用免疫组织化学法检测77例食管鳞状细胞癌和77例癌旁组织的RKIP和NF-κBp65表达,并分析其与食管鳞状细胞癌临床病理学特征关系。结果食管鳞状细胞癌组织中RKIP的表达低于正常癌旁组织,而NF-κBp65的表达则高于癌旁组织,二者比较有显著性差异(P<0.01);RKIP在食管鳞状细胞癌组织中的表达与有无淋巴结转移有关(P<0.05)。NF-κBp65在食管鳞状细胞癌组织中的表达与临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关(P<0.05或0.01)。食管鳞状细胞癌组织中RKIP与NF-κBp65的表达呈负相关(P<0.05)。结论RKIP表达减少或缺失与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,RKIP表达减少或缺失可能通过上调NF-κBp65的表达促进食管鳞状细胞癌的侵袭和转移。     

食管鳞状细胞癌组织Raf激酶抑制蛋白和NF—KBp65表达及临床意义

目的探讨食管鳞状细胞癌组织中Raf激酶抑制蛋白（RKIP）和核因子KBp65（NF—KBp65）的表达,及其与食管鳞状细胞癌各临床病理因素之间的关系。方法用免疫组织化学法检测77例食管鳞状细胞癌和77例癌旁组织的RKIP和NF—KBp65表达,并分析其与食管鳞状细胞癌临床病理学特征关系。结果食管鳞状细胞癌组织中RKIP的表达低于正常癌旁组织,而NF—KBp65的表达则高于癌旁组织,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;RKIP在食管鳞状细胞癌组织中的表达与有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。NF—KBp65在食管鳞状细胞癌组织中的表达与临床分期、有无淋巴结转移及肿瘤分化程度有关（P〈0．05或0．01）。食管鳞状细胞癌组织中RKIP与NF—KBp65的表达呈负相关（P〈0．05）。结论RKIP表达减少或缺失与食管鳞状细胞癌的发生、发展密切相关,RKIP表达减少或缺失可能通过上调NF—KBp65的表达促进食管鳞状细胞癌的侵袭和转移。     

活络效灵丹通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路降低青光眼兔视神经损伤的研究

目的探讨活络效灵丹通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路降低青光眼兔视神经损伤的作用机制。方法将36只新西兰长耳兔按照随机数字表法分为6组,即空白组、模型组、对照组及活络效灵丹低、中、高剂量组,各6只。除空白组外,其余各组兔右眼前房注射3%复合卡波姆溶液诱导兔青光眼模型。造模成功后持续用药4周。空白组、模型组予0.9%氯化钠注射液5 m L/(kg·d)灌胃;对照组予注射用鼠神经生长因子1.635μg/kg肌肉注射,每日1次;活络效灵丹低、中、高剂量组分别予活络效灵丹1.0、3.0、9.0 g/(kg·d)灌胃。给药1、2、4周检测兔右眼眼压,给药结束后取视网膜做苏木素—伊红(HE)染色、原位末端标记(TUNEL)染色,观察视网膜神经节细胞数量、凋亡率,检测视网膜神经节细胞凋亡相关蛋白活性半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)、活性半胱天冬酶9(cleaved-caspase-9)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤因子2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2相关XL蛋白(Bcl-xl)及PI3K/Akt信号通路蛋白的表达水平。结果①给药1、2、4周,模型组兔右眼眼压均高于空白组(P0.05)。给药1周,对照组、活络效灵丹高剂量组兔右眼眼压高于模型组(P0.05);给药2、4周,对照组及活络效灵丹低、中、高剂量组兔右眼眼压均低于模型组(P0.05)。给药1周,活络效灵丹低、中剂量组兔眼压低于对照组(P0.05);给药2、4周,活络效灵丹低、中剂量组兔眼压高于对照组(P0.05)。给药1、2、4周,对照组与活络效灵丹高剂量组兔右眼眼压比较差异均无统计学意义(P0.05)。给药1周,活络效灵丹低、中、高剂量组兔右眼眼压比较差异均无统计学意义(P0.05);给药2、4周,活络效灵丹低、中、高剂量组兔右眼眼压组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。②模型组兔视网膜神经节细胞数量低于空白组(P0.05)。对照组及活络效灵丹中、高剂量组兔视网膜神经节细胞数量高于模型组(P0.05)。活络效灵丹低剂量组兔视网膜神经节细胞数量低于对照组(P0.05)。对照组与活络效灵丹中、高剂量组兔视网膜神经节细胞数量比较差异均无统计学意义(P0.05)。活络效灵丹中、高剂量组兔视网膜神经节细胞数量均高于活络效灵丹低剂量组(P0.05);活络效灵丹中剂量组与活络效灵丹高剂量组兔视网膜神经节细胞数量比较差异无统计学意义(P0.05)。③模型组兔视网膜神经节细胞凋亡率高于空白组(P0.05);对照组及活络效灵丹中、高剂量组兔视网膜神经节细胞凋亡率均低于模型组(P0.05);活络效灵丹低、中、高剂量组兔视网膜神经节细胞凋亡率均高于对照组(P0.05);活络效灵丹低、中、高剂量组兔视网膜神经节细胞凋亡率与活络效灵丹剂量成反比,组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。④抗凋亡因子Bcl-2和Bcl-xl的表达在空白组中最高,在模型组中表达急剧下降,促凋亡因子Bax、cleaved-caspase-3和cleaved-caspase-9则正好相反。在活络效灵丹低、中、高剂量组中Bcl-2、Bcl-xl的表达较模型组上升(P0.05),cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9及Bax的表达较模型组下降(P0.05),且在高剂量组中效果最佳。⑤对照组、活络效灵丹高剂量组PI3K、Akt蛋白表达水平均高于模型组(P0.05)。结论活络效灵丹能降低青光眼兔眼压,降低视网膜神经节细胞凋亡率,可能通过激活PI3K/Akt信号通路降低青光眼兔视神经损伤。     

Different effects and peripheral mechanism between manual-acupuncture and electroacupuncture on mast cell function and acupuncture analgesia by nerve block in acupionts

目的：探讨阻滞穴位神经后针刺对于佐剂型关节炎（AA）大鼠镇痛效应和穴区肥大细胞脱颗粒的影响及进一步了解手针和电针镇痛效应的外周机制差异。方法：以佐剂型关节炎大鼠为炎症痛模型，以足三里为治疗穴位，采用利多卡因预处理（穴位注射2％盐酸利多卡因），将80只大鼠随机分为正常组（Control）、模型组（Model）、利多卡因预处理组（normal＋Lido）、电针组（Electroacupuncture，EA）、利多卡因预处理电针组（Lido＋EA）、犊鼻穴注射利多卡因足三里电针组（DLido＋ZEA）、下巨虚穴注射利多卡因足三里电针组（Xlido＋ZEA）、手针组（Manual Acupuncture，MA）、利多卡因预处理手针组（Lido＋MA）及犊鼻穴注射利多卡因足三里手针组（Dlido＋ZMA），每组8只。以大鼠缩爪反射潜伏期及肥大细胞脱颗粒率为观察指标。结果：EA及MA组痛阈都高于M组（P〈0．05或P〈0．01），两组肥大细胞脱颗粒率都明显高于M组（P〈0．01）。说明阻滞针刺穴位或同神经干近心端穴位神经对针刺的镇痛效应有明显的抑制作用，同样的操作在远心端穴位则无影响，神经阻滞对针刺（电针或手针）引起的穴区肥大细胞脱颗粒无明显影响。结论：在手针情况下，针刺镇痛有效神经传导信号在穴位的启动和针感的产生是在肥大细胞脱颗粒之后，它是产生神经信号的直接原因；而对电针情况，电信号是直接刺激神经感受器产生信号启动，肥大细胞脱颗粒成为伴随或反馈效应。     

电针对失神经大鼠腓肠肌中叉头蛋白转录因子3A/肌萎缩F-box蛋白及成肌分化抗原的影响

目的:观察电针干预对失神经肌萎缩大鼠腓肠肌中叉头蛋白转录因子3A(fork-head protein,FOXO3A)、肌萎缩F-box蛋白(muscle atrophy F-box,MAFbx)和成肌分化抗原(myogenic differentiation antigen,Myod1)蛋白及基因表达的影响,探讨电针延缓大鼠失神经肌萎缩的可能机制。方法:雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组及电针组,每组6只。采用钳夹坐骨神经法制备大鼠失神经腓肠肌萎缩模型。电针组选取大鼠术侧"足三里""环跳"穴进行治疗,每日1次,每次10min,连续干预14d后取材。计算各组大鼠腓肠肌湿重比,HE染色测定大鼠术侧腓肠肌纤维截面积和直径,Western blot检测大鼠术侧腓肠肌中FOXO3A、MAFbx、Myod1蛋白的相对表达量,实时荧光定量PCR检测大鼠术侧腓肠肌中FOXO3A、MAFbx及Myod1mRNA的相对表达量。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌湿重比、肌纤维截面积和直径均显著下降(P0.01),电针组高于模型组(P0.01)。与假手术组相比,模型组大鼠腓肠肌中FOXO3A、MAFbx、Myod1蛋白及mRNA表达量显著升高(P0.01);与模型组相比,电针干预后FOXO3A、MAFbx蛋白及mRNA表达量显著降低(P0.01),Myod1蛋白及mRNA表达量显著升高(P0.01)。结论:电针可能通过抑制FOXO3A、MAFbx的表达同时上调Myod1的表达,影响骨骼肌蛋白水解的速率和肌卫星细胞分化的水平,在延缓失神经肌萎缩的同时促进肌萎缩修复。     

电针对腰神经根受压兔肌肉状态及坐骨神经运动传导速度的影响

目的:观察电针对腰神经根受压的肌肉状态以及肌肉电生理的影响,探讨其作用机制.方法:将24只新西兰白兔随机分为正常组、模型组、药物组和电针组.模型组、药物组和电针组通过手术建立兔腰神经根受压模型;正常组不予造模及治疗.药物组口服洛索洛芬钠片,30 mg/d;电针组予以电针疗法,针刺L5、L6“夹脊”穴,均连续治疗14 d.测定造模前、造模后及治疗后双侧肌肉状态,并检测肌电图及神经传导速度.结果:造模后,电针组、药物组及模型组的肌电图出现自发电位,插入电位增多;右侧肌肉力量-位移激活和放松状态数值明显降低.治疗后,电针组、药物组及模型组运动神经传导速度及诱发电位波幅明显减低,但相较其他组,电针组更接近正常组;电针组、药物组右侧肌肉力量-位移激活和放松状态数值升高接近正常组,其中电针组放松状态数值更接近正常组.结论:电针能改善模兔受损神经根所支配肌肉的力量-位移状态,改善肌肉电生理状态,恢复受压神经根运动神经传导速度及诱发电位波幅.     

Clinical research on treating fracture of middle and lower 1/3 of tibiofibula by electroacupuncture

ObjectiveTo observe the differences in efficacy on treatment of fractures of the middle and lower 1/3 of the tibiofibula between cribriform splints plus electroacupuncture, warming needle and moxibustion only, and external fixation with traditional splints plus the administration of an herbal formula. Clinical efficacy and the effects on serum bone morphogenic protein ?7 (BMP-7) and endothelin ?1 (ET-1) were both measured.Method600 patients with fractures of the middle and lower 1/3 of the tibiofibula were randomly divided into three groups according to andome number table: splint with electroacupuncture (group A), warm needling moxibustion group (group B) and splint with traditional Chinese medicine herb (Group C). Cribriform splints with electroacupuncture were used in group A, warming needling therapy were adopted in group B, and traditional splints with external fixation were used along with oral administration of musk bone capsules (

) in group C. Clinical results for the three groups were compared, and ELISA method was used to detect the serum BMP-7 and ET-1 of patients in the three groups before and after treatment.ResultsGroup A was better than group B and group C in terms of clinical healing days and delayed healing status (P<0.05). After treatment, group A was also better than the other two groups in the improvement of BMP-7 and ET-1 (P<0.05).ConclusionElectroacupuncture treatment with cribriform splints for fractures of the middle and lower 1/3 of the tibiofibula resulted in significantly shorter clinical healing time, and lower incidence of delayed healing compared to warm needling or splints with a traditional Chinese herbal formula. Its mechanism may be associated with greater regulation of serum BMP-7 and ET-1 through electroacupuncture.