PHF8基因对食管鳞状细胞癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的 利用慢病毒(lentivirus)介导的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)建立人食管鳞状细胞癌(esophageal squamous-cell carcinoma,ESCC,以下简称食管鳞癌)裸鼠移植瘤模型,观察锌指蛋白8(plant homeodomain finger protein 8,PHF8)对移植瘤生长的影响。方法 分别将未感染慢病毒(空白对照组)、感染Nonsilencing-shRNA慢病毒(阴性对照shRNA组)和PHF8 shRNA慢病毒(PHF8 shRNA组)的人食管鳞癌细胞系TE-1接种于裸鼠背部皮下,建立食管鳞癌裸鼠移植瘤模型。定期测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。4周后处死裸鼠,定量PCR及Western blotting法检测肿瘤组织中PHF8的表达。结果 PHF8 shRNA组较阴性对照shRNA组、空白对照组的裸鼠致瘤能力明显减弱,PHF8 mRNA和蛋白的表达水平显著降低。结论 慢病毒介导的shRNA干扰能有效减少食管鳞癌裸鼠移植瘤中PHF8的表达,而降低PHF8的表达能抑制食管鳞癌移植瘤的生长。     

长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1对幽门螺旋杆菌感染胃上皮细胞系引起的炎症反应和细胞迁移的影响

目的 研究长链非编码RNA浆细胞瘤多样异位基因1 (PVT1)在幽门螺旋杆菌(HP)感染相关胃癌中的作用。方法 在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞(GES-1)中,用实时定量PCR(qRT-PCR)检测PVT1的表达;通过瞬时转染小干扰RNA,在胃癌细胞系SGC-7901中敲低PVT1,然后与HP共培养,用qRT-PCR检测炎症相关细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、IL-6及IL-8的表达情况;在敲低PVT1后,通过细胞划痕实验,检测PVT1对胃癌细胞增殖及迁移能力的影响。RNA下拉联合质谱分析技术检测能够与PVT1相互结合的蛋白,并用RNA下拉实验联合Western blot验证质谱分析结果的准确性。结果 在HP感染的胃黏膜正常上皮细胞GES-1中,PVT1明显上调(t=7.160,P=0.019)。在胃癌细胞中敲低PVT1,再用HP感染,发现炎症因子TNF-α(t=3.899,P=0.011)、IL-1β(t=14.610,P=0.000)、IL-8(t=6.557,P=0.001)的表达受到明显抑制。PVT1敲低后,对胃癌细胞的增殖能力无影响,但抑制细胞的迁移能力。PVT1可能与RPS8蛋白相互作用。结论 PVT1可能作为促炎因子促进胃癌细胞迁移,在HP感染相关的胃癌中发挥调节作用。     

HT22细胞系铁死亡敏感性研究

目的 检测HT22细胞系可否作为研究神经元铁死亡的良好细胞模型,在细胞水平上为研究神经元铁死亡的机制提供基础。方法 用经典铁死亡诱导剂Erastin和RSL3处理HT22细胞系,显微镜下观察细胞存活情况;使用CCK-8法检测细胞存活率;使用丙二醛法或菲罗嗪法分别检测细胞内脂质活性氧（reactive oxygen species,ROS）、Fe²⁺浓度;实时定量聚合酶链反应（quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR）法检测细胞铁死亡关键基因SLC7A11（solute carrier family 7 member 11）、PTGS2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2）的mRNA水平。结果 Erastin或RSL3处理HT22后,显微镜下发现细胞发生明显死亡,加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1后,细胞死亡显著减少。Erastin或RSL3诱导后HT22细胞内的Fe²⁺浓度无明显变化（P>0.05）,脂质过氧化水平明显增加（P<0.05）;Erastin或RSL3导致细胞SLC7A11、PTGS2的mRNA表达水平增加（P<0.05）,进一步验证了处理后细胞发生铁死亡。结论 HT22细胞系是一种铁死亡敏感细胞系,Erastin或RSL3诱导HT22铁死亡,HT22细胞系可用于研究神经元中铁死亡的发生及胞内脂质过氧化物蓄积机制。     

IQ结构域GTP酶激活蛋白3表达对宫颈癌细胞增殖和转移的影响

目的 探讨宫颈癌组织及细胞系中IQ结构域GTP酶激活蛋白3(IQGAP3)的表达及其对宫颈癌细胞增殖、凋亡和转移的影响。 方法 应用免疫组化和定量PCR检测IQGAP3在宫颈癌组织及癌旁组织中的表达,利用siRNA敲低IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa中的表达,通过MTT法和流式细胞术分别检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响,通过Transwell检测IQGAP3表达对宫颈癌细胞迁移的影响,从而探讨IQGAP3在宫颈癌细胞的增殖、凋亡及迁移过程中的作用。 结果 IQGAP3在宫颈癌组织及细胞中高表达,高表达IQGAP3的患者预后较差(χ2=6.15, P=0.01);敲降IQGAP3在宫颈癌细胞CaSki和HeLa的表达后,宫颈癌细胞的增殖受到抑制,凋亡增加,细胞迁移减少,E-cadherin表达增加,N-cadherin表达下调(P均<0.001)。 结论 IQGAP3在宫颈癌组织中表达上调,在宫颈癌细胞增殖和转移过程中发挥重要作用;IQGAP3通过诱导上皮细胞-间充质转变(EMT),促进宫颈癌细胞的转移。     

HES1在小梁网细胞中作用的初步研究

目的 : 利用慢病毒包装系统使人眼小梁网细胞（HTMCs）稳定表达HES1 shRNA并初步探索HES1在HTMCs的作用。 方法: 体外培养HTMCs和HEK293FT细胞并进行传代,同时应用pLKO.1-puro shRNA慢病毒载体构建HES1 shRNA质粒。Lipofectamine 2000慢病毒包装法感染原代HTMCs,使其稳定表达HES1shRNA/Scramble质粒。采用q-PCR 和western blot方法检测HES1shRNA的敲低效果及促纤维化细胞外基质蛋白（ECM）的表达变化;HTMCs增殖和迁移能力分别通过CCK-8细胞活性分析和transwell计数实验进行分析。 结果: 原代细胞经过培养后贴壁生长,呈长梭形,生长状态良好,形态符合HTMCs形态学特征。HES1 shRNA有效下调HES1 的mRNA和蛋白水平表达,P<0.05。同时,HES1 shRNA组促纤维化ECM（FN; COL1; α-SMA）的mRNA和蛋白表达水平较Scramble组显著降低,P<0.05。而Transwell计数实验显示HES1 shRNA组HTMCs的迁移数量较Scramble组增加,P<0.05;CCK-8细胞活性分析实验表明抑制HES1表达对HTMCs的增殖活性影响不大,差异不具有统计学意义,P>0.05。 结论: 成功建立了稳定表达HES1 shRNA的HTMCs细胞株。HES1可以影响HTMCs中促纤维ECM的生成,及HTMCs的增殖和迁移能力。     

维生素D受体对低氧下结肠细胞屏障蛋白的作用

目的 探究低氧环境对结肠细胞DLD-1屏障蛋白影响及补偿机制。方法 将DLD-1分别给予低氧(l% O₂)、维生素D(100 nmol/L)及低氧联合维生素D处理48 h。Western blot法检测各组细胞中紧密连接蛋白封闭小带-1(ZO-1)、闭锁蛋白、Claudin-1和上皮细胞钙黏蛋白及维生素D受体(VDR)的表达情况。采用慢病毒包装的方法建立DLD-1的VDR稳转敲降细胞系及对照,给予低氧处理后,检测上述蛋白的表达情况。结果 与对照组相比,DLD-1低氧处理48 h后紧密连接结构蛋白闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达均增加(P均<0.001),低氧+维生素D联合处理组较单独维生素D处理组除闭锁蛋白、Claudin-1及VDR表达增加外,ZO-1及上皮细胞钙黏蛋白表达也明显增加(P均<0.001)。VDR敲降细胞系低氧处理后,ZO-1(P<0.001)、闭锁蛋白(P<0.05)、Claudin-1(P<0.01)及上皮细胞钙黏蛋白(P<0.001)表达均显著降低。结论 VDR对于低氧状态下结肠细胞系DLD-1肠上皮屏障蛋白表达有调节作用,提示VDR通路可能为低氧环境下保护肠黏膜屏障的另一重要机制。     

敲低造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白对胰腺癌细胞增殖、周期和凋亡的影响

目的 探讨造血前B细胞白血病转录因子相互作用蛋白(HPIP)对胰腺癌细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法 采用免疫组织化学染色方法检测胰腺癌组织及对应癌旁组织中HPIP的表达水平,小干扰RNA瞬时转染的方法敲低胰腺癌细胞中HPIP的表达水平,细胞计数试剂盒-8实验、克隆形成实验、流式细胞术检测敲低HPIP对细胞增殖、周期及凋亡的影响,免疫印迹法检测敲低HPIP对于cyclin D1、caspase 7和cleaved caspase 7表达水平的影响。结果 胰腺癌组织中HPIP的表达明显高于癌旁组织(Z=-2.060,P=0.039)。敲低HPIP表达水平后,在24 h起MIA PaCa-2和BxPC-3细胞的生长受到抑制(P均<0.05);MIA PaCa-2(t=4.706,P=0.009)和BxPC-3细胞(t=9.514,P=0.000)形成的阳性克隆数明显减少;MIA PaCa-2(t=7.642,P=0.001)及BxPC-3细胞(t=2.714,P=0.051)中S期细胞比例明显降低,G₀/G₁ 期细胞比例明显增加(t=3.244,P=0.031;t=6.095,P=0.003);MIA PaCa-2(t=24.58,P=0.000;t=29.43,P=0.000)和BxPC-3细胞(t=36.45,P=0.000;t=43.52,P=0.000)中的晚期凋亡率和总凋亡率均明显上升;MIA PaCa-2(t=6.705,P=0.002)和BxPC-3细胞(t=6.238,P=0.003)的cyclin D1表达水平明显下降,caspase 7表达水平变化无统计学意义(t=0.711,P=0.516;t=0.027,P=0.979),cleaved caspase 7表达水平明显上升(t=3.991,P=0.016;t=6.536,P=0.002)。结论 与癌旁组织相比,HPIP在胰腺癌中表达水平较高。敲低HPIP可导致胰腺癌细胞生长受到抑制,细胞周期由G₀/G₁期向S期转化受阻,并促进胰腺癌细胞凋亡。HPIP可能在胰腺癌中发挥癌基因作用。     

磷酸腺苷激活的蛋白激酶参与调节细胞外信号调节激酶1/2活化发挥对血管平滑肌细胞胰岛素样生长因子-1信号的抑制作用

目的 进一步证实在猪主动脉平滑肌细胞中磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）抑制胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）刺激引起的细胞增生,以及探讨其可能的机制。方法 使用AMPK活化剂二甲双胍增强细胞内AMPK的活化（表现为AMPK第172位苏氨酸磷酸化增高）;采用定点突变获得组成性激活型AMPK突变体,设计短发卡RNA（short hairpin,shRNA）序列构建AMPK干扰载体,并分别包装产生组成性激活型AMPK和AMPK敲低慢病毒。分别采用AMPK活化剂二甲双胍处理、组成性激活型AMPK慢病毒感染和AMPK敲低慢病毒感染猪主动脉平滑肌细胞,观察AMPK活性对猪主动脉平滑肌细胞中IGF-1刺激引起的细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2）活性（表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化）及其下游细胞增生的影响。结果 二甲双胍明显增强AMPK的活性（表现为172位苏氨酸磷酸化增高）,并明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化（表现为202位苏氨酸和204位酪氨酸的磷酸化受到抑制）;组成性激活型AMPK表达能明显抑制IGF-1刺激引起的ERK1/2活化以及下游的细胞增生;在AMPK敲低细胞中,IGF-1能引起更强的ERK1/2活化。结论 AMPK能通过抑制ERK1/2活化抑制血管平滑肌细胞IGF-1信号,并能抑制IGF-1刺激引起的血管平滑肌细胞增生。     

POU4F3表达对118例肺腺癌患者预后评估及对肺腺癌细胞株迁移的影响

目的 揭示POU结构域第4类转录因子3(POU4F3)在肺腺癌组织的表达及其与肺腺癌患者预后的关系,并探索POU4F3对肺腺癌细胞迁移的作用。 方法 免疫组织化学染色检测人肺腺癌及其癌旁组织(样本量均为118)中POU4F3的表达水平。利用Log-rank(Mantel-Cox)检验POU4F3表达水平与总生存期的关联性。以肺腺癌株为实验对象,构建稳定过表达(Lv-POU4F3)及其对照(Lv-control)或敲低POU4F3(shPOU4F3)及其对照(control shRNA)的慢病毒载体并分别转染至SPCA1和A549细胞系,Western blotting验证POU4F3过表达或敲低转染效率。运用划痕实验、Transwell迁移实验和鬼笔环肽荧光实验检测细胞迁移能力。 结果 免疫组化分析显示,118例肺腺癌组织中POU4F3的表达评分低于118例癌旁组织评分(1.5 vs 4.0),差异有统计学意义(P<0.001)。与POU4F3低表达肺腺癌患者相比,POU4F3高表达患者的总生存期延长(HR=2.04,95%CI:1.158~3.607,P=0.028)。细胞实验结果显示,有效构建了过表达或敲低POU4F3的稳定转染肺腺癌细胞株。过表达POU4F3后,划痕实验表明,Lv-POU4F3组细胞划痕愈合率低于Lv-control组,差异有统计学意义(F_SPCA1处理=69.86,P_SPCA1=0.001;F_A549处理=492.10,P_A549<0.001);Transwell迁移实验表明,SPCA1-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于SPCA1-Lv-control组(599.0±11.36 vs 806.3±18.72,t=16.40,P<0.001),A549-Lv-POU4F3组穿膜细胞数少于A549-Lv-control组(181.0±18.68 vs 314.7±23.46,t=7.72,P=0.002);鬼笔环肽荧光实验表明,过表达POU4F3后,SPCA1细胞微丝变细、伪足较少,Lv-POU4F3组的平均荧光强度低于Lv-control组(23.30±1.34 vs 33.45±1.85),差异有统计学意义(t=7.67,P=0.002)。敲低POU4F3后,划痕实验表明,shPOU4F3组细胞划痕愈合率高于control shRNA组,差异有统计学意义(F_SPCA1处理=114.60,P_SPCA1<0.001;F_A549处理=1 710.00,P_A549<0.001)。Transwell迁移实验表明,SPCA1-shPOU4F3组穿膜细胞数多于SPCA1-control shRNA组(970.00±14.53 vs 585.00±25.53,t=22.70,P<0.001),A549-shPOU4F3组穿膜细胞数多于A549-control shRNA组(528.00±29.14 vs 185.30±9.50,t=19.37,P<0.001);鬼笔环肽荧光实验表明,敲低POU4F3后,SPCA1细胞微丝变粗、伪足增多,shPOU4F3组的平均荧光强度高于control shRNA组(48.53±3.30 vs 31.07±2.32),差异有统计学意义(t=7.50,P=0.002)。 结论 POU4F3在人肺腺癌患者癌组织中表达低于癌旁组织,POU4F3高表达者预后较佳,且POU4F3能够抑制肺腺癌细胞迁移。POU4F3可能是LUAD的抑癌基因并有望成为诊断和治疗LUAD的新靶标。     

核转运蛋白α2在胶质瘤中的表达及对其生物学行为的影响

目的 探讨核转运蛋白α2(KPNA2)在胶质瘤中的表达与临床意义以及KPNA2对胶质瘤细胞生物学活性的影响。 方法 收集脑星形胶质细胞瘤Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级各30例,癌周相对正常脑组织15例,qRT-PCR及免疫组化分析KPNA2的表达;制备KPNA2干扰质粒,并以慢病毒为载体转染进入胶质瘤细胞系U87、U251,CCK8、EdU法检测KPNA2敲除后对细胞增殖的影响,Transwell小室法检测KPNA2对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响。 结果 KPAN2在胶质瘤中表达升高,表达量与胶质瘤WHO分级呈正相关(r_s=0.559, P<0.001),与患者预后呈负相关(总生存率: χ2=21.39, P<0.001;无进展生存率: χ2=8.057, P=0.004)。KPNA2敲除后胶质瘤细胞系的增殖、迁移和侵袭能力均明显减弱。 结论 KPNA2在胶质瘤的发生发展中具有重要作用,可能成为新的临床诊治的标记物和治疗靶点。     

27-羟基胆固醇与胆固醇对裸鼠食管鳞癌和人食管癌细胞增殖的影响

目的 旨在探讨胆固醇和27-羟基胆固醇对食管鳞癌增殖、侵袭和迁移能力的生物学行为及对细胞因子MCP-1分泌的影响。 方法 动物体内实验:通过建立裸鼠食管鳞癌动物模型,给予高胆固醇饮食(高胆固醇饮食组,n=4)和正常饮食(对照组,n=4),观察胆固醇在体内对食管鳞癌肿瘤生长的影响,第5周实验终止时,对两组瘤体体积进行测量并计算抑瘤率。细胞实验:观察胆固醇(浓度分别为0、0.123、0.148、0.185、0.269、0.370 mg/mL)和27-羟基胆固醇(浓度分别为0、1、5、10、20 μmol/mL)对正常食管鳞癌细胞(ECA109)和基因cyp27a1、cyp7b1敲除后的ECA109细胞增殖能力的影响,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同药物浓度干预下细胞的增殖活性。采用划痕实验和侵袭实验(胆固醇0.185 mg/mL,27-羟基胆固醇1 μmol/mL)检测肿瘤细胞的侵袭效应。利用慢病毒转染敲除27-羟基胆固醇的上游基因cyp27a1和下游基因cyp7b1,重复上述实验,探讨27-羟基胆固醇合成或代谢基因敲除对ECA109细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响,并通过ELISA实验检测基因敲除后对肿瘤细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)分泌的影响。两组不同时间瘤体体积和CCK-8吸光度值采用两因素方差分析,交互作用有统计学意义时进一步行简单效应分析。多组间数据均值差异比较采用单因素方差分析,两两多重比较采用LSD法。 结果 动物实验结果表明:裸鼠异种移植肿瘤体积在高胆固醇饮食组与对照组分别为(5.055±0.774)cm³和(1.866±0.618)cm³,抑瘤率为-170.79%,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞实验结果表明:(1)胆固醇可以促进ECA109细胞和上游基因cyp27a1敲除后的ECA109细胞增殖,胆固醇低浓度下促进上游基因cyp27a1敲除后的ECA109细胞增殖(P均<0.05);27-羟基胆固醇可以抑制ECA109细胞增殖,但促进下游基因cyp7b1敲除后的ECA109细胞增殖(P均<0.05);(2)胆固醇和27-羟基胆固醇对于ECA109细胞迁移能力无影响(F=2.418,P=0.170),27-羟基胆固醇的上游基因cyp27a1和下游基因cyp7b1敲除对ECA109细胞迁移能力无影响(F=0.602,P=0.578);(3)基因敲除后细胞与对照组相比,细胞侵袭能力发生改变(F=3.992,P=0.047),其中下游基因cyp7b1敲除后,侵袭能力受到抑制(P<0.05);上游基因cyp27a1敲除对ECA109细胞侵袭能力无影响(P>0.05);(4)与正常ECA109细胞相比(151.883±2.948),基因敲除可以使肿瘤细胞MCP-1因子的分泌发生改变(F=553.538,P<0.001)。上游基因cyp27a1敲除后,细胞的MCP-1因子分泌增多(213.823±4.572),下游基因cyp7b1敲除后,细胞的MCP-1因子分泌减少(107.240±4.121)(P均<0.001)。 结论 胆固醇在体内外均可刺激ECA109细胞的增殖;27-羟基胆固醇抑制ECA109细胞增殖,胆固醇促进ECA109细胞的增殖,并且具有浓度依赖性;上游基因cyp27a1敲除可以增强胆固醇在低浓度下对细胞增殖能力的影响,但对细胞侵袭能力无影响;下游基因cyp7b1敲除可以改变27-羟基胆固醇对细胞增殖活性的影响,并抑制细胞的侵袭能力;27-羟基胆固醇上游基因cyp27a1敲除可促进细胞MCP-1因子的分泌,下游基因cyp7b1敲除抑制MCP-1因子的分泌。     

新抑癌基因GPD1在结肠癌细胞HCT-8中的作用及其预后潜力研究

目的 探究新抑癌基因甘油-3-磷酸脱氢酶1（glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1,GPD1）在结肠癌发生、发展中的作用及其与临床预后的关系。方法 应用HCT-8结肠癌细胞系,以siRNA干扰GPD1表达后进行细胞功能实验,分别以MTS实验与集落形成实验检测细胞增生活力与集落形成能力,以划痕试验、Transwell实验探究GPD1对HCT-8细胞系迁移能力的影响。对TCGA数据库进行生物信息学分析,探究GPD1表达水平与结直肠癌患者临床预后的关系,并明确GPD1低表达与其编码基因甲基化之间的关系。结果 干扰GPD1基因表达后,HCT-8细胞增生活力明显增强,重复实验差异具有统计学意义（P<0.01）;集落形成实验结果显示,GPD1干扰后的HCT-8细胞集落数目增多且集落直径增大,差异具有统计学意义（P<0.01）。划痕实验与Transwell实验结果显示,敲低GPD1表达的HCT-8细胞迁移能力无显著变化,表明GPD1对结肠癌细胞迁移能力无影响。生物信息学分析结果显示,GPD1低表达的结直肠癌患者总存活率（χ²=4.1,P=0.040）及无病存活率（χ²=13.2,P<0.000 1）均明显低于GPD1高表达患者,且GPD1低表达水平是结直肠癌预后不良的独立风险因素（P<0.05）。甲基化分析结果显示,结直肠癌组织中GPD1低表达与其编码基因高甲基化呈负相关（P<0.05）。结论 GPD1在结肠癌中发挥抑制细胞增生与集落形成的作用,且GPD1低表达是结直肠癌患者不良预后的独立预测因素。     

乌苯美司对卵巢癌A2780细胞的生物学影响

目的 研究乌苯美司对卵巢癌A2780细胞增殖、细胞周期、凋亡和自噬以及迁移和侵袭能力的影响,探讨可能的作用机制。 方法 CCK-8实验检测乌苯美司对A2780细胞增殖的影响;Transwell实验检测乌苯美司对A2780细胞迁移及侵袭能力的影响;流式细胞术检测乌苯美司对A2780细胞凋亡和细胞周期的影响;Western blotting检测APN、AKT、p-AKT、LC3B、p62表达水平的变化。 结果 (1)乌苯美司能够抑制A2780细胞的增殖(F浓度=812.56,P<0.001;F时间=8.58,P=0.010;F交互=4.00,P=0.027)、迁移(t=56.9,P<0.001)和侵袭(t=11.8,P<0.001)、导致G₂/M期细胞比例增高(t=7.9,P=0.016),G₁期细胞比例减少(t=14.8,P=0.005),发生G₂/M细胞周期阻滞。(2)乌苯美司能够诱导A2780细胞凋亡(P=0.002),且联合应用AKT抑制剂后诱导细胞凋亡的作用增强(P=0.007)。(3)乌苯美司可以导致APN表达降低,p-AKT、LC3-B和p62表达增加。 结论 乌苯美司可能是卵巢癌的一种治疗方法或者辅助治疗方法,与AKT抑制剂联用能够增强其治疗效果。     

CtBP2异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应影响的研究

目的:探讨CtBP2在前列腺癌中的表达情况,并明确其异常表达对前列腺癌PC3细胞增殖效应的影响。方法:采用免疫组化、qPCR及Western blot检测CtBP2的表达情况,采用细胞计数法、单克隆集落形成实验及MTT法检测细胞的增殖能力。结果:在前列腺癌组织中CtBP2 蛋白高表达率为97.5%（156/160）,表达水平较良性前列腺增生组织显著升高（P＜0.05）,细胞计数及MTT实验结果表明CtBP2 Silencer组较Vector control组及Parent control组,其增殖能力降低分别为70%及75%（P＜0.05）,单克隆集落形成实验结果显示Blank Control 组、Vector control组和Silencer组PC3细胞培养12 d后可见克隆数分别为（136±11）、（128±12）和（56±9）（P＜0.05）,克隆面积为（342±22）mm²、（322±23）mm²和（122±16）mm²（P＜0.05）。结论:CtBP2在前列腺癌中高表达,而减低其表达水平可显著抑制前列腺癌细胞增殖能力。     

mTORC1抑制剂影响谷氨酰胺代谢抑制人胰腺神经内分泌肿瘤细胞增殖

目的：体外研究雷帕霉素靶蛋白复合物1（mTORC1）抑制剂对人胰腺神经内分泌肿瘤（pNET）细胞株 BON 增殖的影响,探讨谷氨酰胺（Gln）代谢在 mTORC1抑制剂影响 BON 细胞增殖中的作用。方法体外培养人胰腺神经内分泌肿瘤细胞BON,分别用1、5、10、25、50、100 nM 的雷帕霉素处理后,应用 CCK-8检测 BON 的生长抑制率。用100 nM 雷帕霉素处理 BON细胞12 h 后,检测其对 Gln 的吸收水平。在无葡萄糖（Glc）和（或）无谷氨酰胺（Gln）的情况下,应用 CCK-8检测 BON 的增殖情况以及流式细胞术检测细胞周期情况。结果雷帕霉素可明显抑制 BON 细胞的增殖,抑制率呈时间-浓度依赖性（P ＜0．05）。同时雷帕霉素影响 BON 对 Gln 的吸收,而 BON 明显依赖于 Gln 生长,Glc－／Gln＋组、Glc－／Gln－组、Glc＋／Gln－组生长速率较 Glc＋／Gln＋组差异有统计学意义（P ＜0．05）。结论 mTORC1抑制剂可能通过影响 Gln 代谢抑制 BON 细胞的增殖。     

双模态对比剂Fe3O4-Cy5.5-NGR在卵巢癌的体外靶向效能研究

目的 合成并验证磁共振-荧光双模态对比剂Fe₃O₄-Cy5.5-NGR对卵巢癌ES-2细胞的体外靶向效能情况。方法 化学方法合成Fe₃O₄-Cy5.5-NGR颗粒作为实验组对比剂,Fe₃O₄-Cy5.5颗粒作为对照组对比剂,在透射电镜（transmission electron microscopy,TEM）、红外光谱仪（far infrared spectrometer,FITR）和紫外分光光度仪（ultraviolet spectrophotometer-2600,UV-2600）等设备下检测对比剂的普通物理化学性质是否满足成像需要;选取ES-2人卵巢癌透明细胞株传代培养,细胞生长稳定后进行CD13免疫组织化学染色,观察细胞膜表面CD13表达量;两种对比剂与ES-2细胞共同孵育后检测粒子的细胞毒性,并用流式细胞仪验证细胞与粒子的体外特异性结合情况。在7.0TMR下验证磁性纳米颗粒Fe₃O₄-Cy5.5-NGR和Fe₃O₄-Cy5.5作为MR对比剂的磁敏感性。结果 TEM观察两种对比剂形态规则,水溶液中分散性良好,通过连接NGR短肽,实验组对比剂的平均直径达（8.930±0.773）nm,对照组对比剂直径约（7.480±0.695）nm;Fe₃O₄-Cy5.5-NGR和Fe₃O₄-Cy5.5激发波为628.0 nm,发射波为675.2 nm;FITR中Fe₃O₄-Cy5.5-NGR和Fe₃O₄-Cy5.5在2 882 cm^-1、1 632 cm^-1处出现特征性波峰,实验组对比剂在841 cm^-1处另外出现了波峰。细胞毒性实验（CCK-8）中对比剂与细胞共孵育后,细胞活性保持在90%左右。细胞免疫组织化学染色,荧光显微镜观察细胞呈侵袭性生长,细胞膜位置CD13高表达,细胞核及周围间质表达量很低。Fe₃O₄-Cy5.5-NGR和Fe₃O₄-Cy5.5对比剂r2值分别为155.49 mmol·L^-1·s^-1,180.74 mmol·L^-1·s^-1。流式细胞仪下观察到Fe₃O₄-Cy5.5-NGR较Fe₃O₄-Cy5.5对比剂的荧光强度高,在不同浓度（40、80和160μmol）分别为后者的3.1、1.65和1.26倍。结论 Fe₃O₄-Cy5.5-NGR作为磁共振-荧光双模态对比剂在ES-2细胞的体外靶向性能良好,可以满足体外成像需求,为进一步的裸鼠卵巢癌在体实验提供了实验基础。     

富血小板纤维蛋白(PRF)对成骨细胞增殖与分化的影响

目的 观察富血小板纤维蛋白(PRF)对成骨细胞增殖与分化的影响。方法 在PRF环境下培养MC3T3-E1成骨细胞,设立空白对照组与之对照。通过扫描电镜观察细胞附着;培养1、4、7 d通过CCK-8细胞增殖检测观察细胞增殖情况以及碱性磷酸酶活性;成骨相关基因OPG的表达。结果 CCK-8细胞增殖检测显示,培育4、7 d,实验组与对照组相比,细胞增殖促进作用明显,其差异具有统计学意义,ALP活性检测显示,培育4、7 d后,实验组与对照组相比促进作用明显,其差异具有统计学意义。 PRF可促进OPG mRNA表达。结论 PRF能促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化以及相关成骨基因OPG mRNA的表达水平。     

花生红衣原花青素通过Wnt/β-catenin信号通路下调survivin表达诱导胰腺癌细胞凋亡

目的 探讨花生红衣原花青素(PSP)通过下调survivin表达诱导胰腺癌细胞凋亡的分子机制。方法 体外常规培养胰腺癌细胞株,配制100、200、300、400、500、600 μg/mL不同质量浓度的PSP,CCK-8法检测并计算不同质量浓度PSP在72 h内对胰腺癌细胞的抑制率,选取IC50=450 μg/mL作为PSP处理组剂量,并设对照组。Western blotting法检测胰腺癌细胞GSK-3β和β-catenin磷酸化程度、survivin、caspase-3和caspase-7蛋白表达水平,RT-PCR法检测胰腺癌细胞survivin mRNA表达水平,Annexin V-FITC/PI法检测24、48、72 h时PSP对胰腺癌细胞凋亡率的影响。 结论 与对照组相比,PSP处理组胰腺癌细胞GSK-3β和β-catenin磷酸化程度于12 h达到最高(P＜0.01)。PSP处理组胰腺癌细胞survivin mRNA的表达量与对照组比较明显降低(P＜0.01)。与对照组比较,在PSP的作用下,胰腺癌细胞中survivin蛋白表达量在72 h时最低(P＜0.01),caspase-3和caspase-7表达量在72 h时最高(P＜0.01),胰腺癌细胞凋亡率随着时间延长越来越高,在72 h时达到51.59%(P＜0.01)。结论 PSP可通过Wnt/β-catenin信号通路下调survivin蛋白表达诱导胰腺癌细胞凋亡。     

下调乙酰辅酶A合成酶2通过诱导自噬抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的：探讨乙酰辅酶A合成酶2（ACSS2）在非小细胞肺癌（NSCLC）细胞中的表达及其对细胞增殖、侵袭的调控机制。方法：采用蛋白质印迹（Western blot）实验检测并分析NSCLC细胞系A549和H1299与人成纤维细胞HFF-1中ACSS2表达的差异。利用慢病毒在NSCLC细胞系中构建ACSS2敲低（ACSS2 KD组）和对照细胞系（NC组）。采用MTT实验及细胞克隆形成实验分析ACSS2 对NSCLC细胞增殖的影响。采用划痕实验和Transwell实验分析ACSS2对NSCLC细胞的迁移和侵袭能力的影响。Western blot及免疫荧光实验分析敲低ACSS2 对细胞自噬的影响。结果：与人成纤维细胞HFF-1相比,NSCLC细胞中ACSS2 的蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）。与NC组相比,ACSS2 KD组细胞增殖能力和细胞活力显著降低,ACSS2 KD组细胞的迁移和侵袭能力均明显降低（均P ＜0.01）。Western blot和免疫荧光实验显示,敲低ACSS2 细胞自噬活性明显增加,自噬小体增多（P ＜0.01）。但是,敲低ACSS2几乎不影响caspase3和caspase8的蛋白表达水平（P ＞0.05）。ACSS2 shRNA+Beclin1/Atg7-shRNA共转染A549细胞（ACSS2+Beclin1/Atg7 KD组）,结果显示与ACSS2KD组比,ACSS2 KD+Beclin1/Atg7 KD组细胞增殖能力有所增强,克隆形成数目明显增多（P ＜0.05）。结论：ACSS2在NSCLC细胞中高表达,促进细胞的增殖、侵袭。下调ACSS2可诱导NSCLC细胞发生自噬性细胞死亡,抑制细胞增殖。