NLS-RARα通过与importin α1/β1(KPNA2/KPNB1)结合入核并抑制U937细胞分化

目的探究核定位信号-维甲酸受体α(NLS-RARα)异常的核定位对细胞分化的抑制作用以及其核转运机制。方法过表达带有血凝素(HA)标签的NLS-RARα慢病毒和空载体慢病毒转染HEK293T细胞和U937细胞,设为NLS-RARα过表达组(NR组)和阴性对照组(NC组)。提取HEK293T细胞与U937细胞NC组和NR组细胞核和细胞质蛋白,Western blot法检测NLS-RARα的定位。同时采用免疫荧光细胞化学染色检测NLS-RARα的定位情况。1α,25-二羟维生素D3(1,25D3)诱导U937细胞分化,实时定量PCR,Western blot法检测细胞CD11b、 CCAAT/增强子结合蛋白β(CEBPβ)在mRNA和蛋白水平,采用质谱和免疫共沉淀技术(CoIP)筛选与NLS-RARα相作用的转运蛋白,并且通过小干扰RNA(siRNA)转染验证其对NLS-RARα的核定位作用。结果 NLS-RARα主要位于细胞核中。与对照组相比,过表达NLS-RARα组CD11b和CEBPβ的增加减少,说明NLS-RARα对1,25D3诱导的细胞分化有抑制作用。质谱和CoIP结果发现核转运蛋白α2/输入蛋白α1(KPNA2/importinα1)和核转运蛋白β1/输入蛋白β1(KPNB1/importinβ1)与NLS-RARα有相互作用,敲低KPNA2/KPNB1则抑制NLS-RARα入核。结论 NLS-RARα通过结合KPNA2/KPNB1入核,抑制U937细胞分化。     

NLS-RARα通过激活AKT调节白血病NB4细胞的增殖

目的构建携带NLS-RARα的重组慢病毒,感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响。方法以质粒p CMV-HA-NLS-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中,经DNA测序鉴定重组载体,用4质粒系统共转染293T细胞,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组慢病毒的滴度;重组慢病毒感染NB4细胞,经过嘌呤霉素筛选获得稳定转染NLS-RARα的NB4细胞株;CCK-8法检测NLSRARα对NB4细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和感染效率;Western blot分别检测NLS-RARα、t-AKT和p-AKT的表达。结果 NLS-RARα克隆入LV5的多克隆位点,慢病毒浓缩后滴度为2×108Tu/m L;感染效率为86.54%;NLS-RARα能够明显促进细胞增殖,S期细胞增多,G1和G2期细胞减少;NLS-RARα基因在NB4细胞中稳定的表达,同时p-AKT明显增高,用PI3K抑制剂LY294002处理后p-AKT明显降低。结论 NLS-RARα通过激活AKT促进白血病NB4细胞的增殖。     

氧化砷和维甲酸对PLZF-RARa阳性U937细胞的作用

目的：研究氧化砷（As2O3）和全反式维甲酸（AT—RA）对PLZF-RARα阳性细胞的作用。方法：稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞（U937／PLZF）经As2O2、ATRA处理后，Wright—Giemsa染色观察细胞形态，MTr法检测细胞生长增殖状态，流式细胞术（FCM）检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b、CD64、CD14等的表达变化，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，细胞化学染色和硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验观察细胞功能分化情况。结果：U937／PLZF细胞在去除四环素条件培养后，PLZF—RARα表达明显增加。As2O3（0．51μmol／L）联合ATRA（1μmol／L）使U937／PLZF细胞核质比缩小，核仁减少但未消失；生长增殖受抑；S期细胞减少；CD11b表达增高；PLZF—RARα蛋白表达减弱，分布以胞核弥漫细小颗粒为主。细胞化学染色和NBT反应变化不明显。结论：0．5μmol／L As2O3联合1μmol／LATRA可使PLZF—RARα阳性U937细胞产生轻微的形态学分化趋势，尚不足以引起其发生功能分化。     

乌苯美司下调c-myc表达与其增强全反式维甲酸诱导NB4细胞

目的： 了解氨肽酶抑制剂乌苯美司（bestatin）能否增强全反式维甲酸（ATRA）对NB4细胞的诱导分化作用，及此过程中NB4细胞c-myc mRNA表达水平的改变。 方法： MTT法检测药物抑制细胞生长的作用。流式细胞仪测细胞表面分化抗原CD11b及四氮唑蓝（NBT）还原实验检测NB4细胞的分化。RT-PCR检测细胞c-myc mRNA表达水平。 结果： 50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理72 h，均能明显增强NB4细胞的NBT还原能力，与10 nmoL/L ATRA组差异显著（P<0.05，P<0.01）。从48 h到96 h，100 mg/L乌苯美司时间依赖性地增强10 nmoL/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力，与相应时点10 nmoL/L ATRA组差异明显（P<0.01）。100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合应用72 h，NB4细胞CD11b表达率明显高于10 nmoL/L ATRA组（P<0.01）。50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L乌苯美司与10 nmoL/L ATRA联合处理4 h，NB4细胞c-myc mRNA表达水平明显低于单用ATRA组（P<0.05，P<0.01）；药物联合应用各组NB4细胞的c-myc mRNA表达水平与NBT还原能力之间呈负相关（r=-0.917,P<0.05）。 结论： 乌苯美司可能通过下调NB4细胞c-myc mRNA的表达，从而增强ATRA诱导NB4细胞分化的作用。     

干扰TGF-βⅡ型受体表达对NB4细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的:研究干扰TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)表达对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞生长、分化及凋亡的影响。方法:应用慢病毒介导RNA干扰技术,下调NB4细胞TβRⅡ基因的表达,获得TβRⅡ-shRNA NB4细胞,CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞术检测CD11b表达,并用瑞氏-吉姆萨染色法检测全反式维甲酸对细胞分化的影响; Annexin V-FITC/PI双荧光标记法及AO/EB染色观察三氧化二砷对细胞凋亡的影响。结果:TβRⅡ-shRNA NB4细胞的活力高于NB4细胞。采用不同浓度(0. 01、0. 02、0. 04、0. 08和0. 1μmol/L)的全反式维甲酸进行96 h的孵育后,2组细胞均出现分化现象(CD11b表达增加),并呈剂量依赖性,但TβRⅡ-shRNA NB4细胞的分化率低于NB4细胞。不同浓度(2、4和8μmol/L)的三氧化二砷孵育24 h后,2组细胞均出现凋亡现象(AO/EB染色),呈剂量依赖性,但TβRⅡ-shRNA NB4细胞凋亡率显著低于NB4细胞,其中用8μmol/L三氧化二砷孵育TβRⅡ-shRNA NB4细胞和NB4细胞24 h,凋亡率分别是(49. 15±2. 05)%和(66. 85±2. 41)%(P 0. 01)。结论:下调TβRII可以促进NB4细胞的生长,部分拮抗全反式维甲酸诱导的细胞分化及三氧化二砷诱导的细胞凋亡。     

替米沙坦抑制U937细胞增殖及诱导凋亡

目的:探讨替米沙坦对U937细胞株的生长抑制及凋亡诱导作用。方法:分别以不同浓度的替米沙坦处理人类急性髓系白血病细胞U937;以CCK-8法检测不同浓度替米沙坦对U937细胞的生长抑制作用;以集落形成实验观察不同浓度替米沙坦对U937细胞集落形成能力的影响;以Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342染色法检测不同浓度替米沙坦作用前后U937细胞凋亡程度的变化;以流式细胞术检测U937细胞表面抗原CD11b的阳性表达率,瑞氏染色后倒置显微镜进行细胞形态学观察,了解U937细胞的分化情况;以Western blot法检测不同浓度替米沙坦作用U937细胞后凋亡相关蛋白表达量的改变。结果:CCK-8实验结果证实替米沙坦呈时间和剂量依赖性抑制U937细胞的生长;集落形成实验显示低剂量替米沙坦可以完全抑制U937细胞的集落形成能力;Annexin V-PI双染法及Hoechst 33342法结果证实替米沙坦可以诱导U937细胞凋亡;细胞表面抗原流式检测术及瑞氏染色结果证实替米沙坦可以促进部分U937细胞分化;Western blot实验结果证实替米沙坦作用于U937细胞72 h后,促凋亡相关蛋白cleaved PARP及cleaved caspase-3蛋白的水平明显增高。结论:替米沙坦可以抑制细胞增殖以及诱导U937细胞部分分化,并通过caspase依赖的凋亡途径触发U937细胞凋亡。     

磷酸化缺陷型RARα1受体对人多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响

目的: 研究磷酸化缺陷型维甲酸受体RARα1(RARαS77A)对人多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响。方法: (1)RT-PCR检测U266 细胞RARα受体亚型mRNA的表达;(2)RARαS77A过表达慢病毒载体的构建,慢病毒包装,滴度测定及MM细胞转染;(3)CCK-8检测全反式维甲酸(ATRA,0~100 μmol/L)处理或RARαS77A过表达慢病毒转染后U266 细胞的增殖;(4)Western blotting检测RARαS77A过表达慢病毒转染或ATRA处理后U266 细胞增殖相关蛋白Rb和P53的表达。结果: (1)U266为RARα1(+)、RARα2(-)细胞;(2)ATRA明显抑制U266 细胞增殖,其作用呈时间和剂量依赖性;RARαS77A过表达慢病毒转染48 h 后U266细胞增殖明显被抑制,抑制率为15.16%±3.84%;(3)RARαS77A过表达慢病毒转染及ATRA处理均可上调U266细胞Rb蛋白表达及下调其P53蛋白表达。结论: 磷酸化缺陷型维甲酸受体RARα1与ATRA均可通过上调Rb及下调P53表达抑制RARα1(+)、RARα2(-)的U266细胞增殖,提示降低维甲酸受体RARα1的磷酸化是ATRA抑制MM细胞增殖的一个重要作用途径。     

抑制mel18表达增强桂皮醛诱导的HL60细胞分化

目的:研究下调mel18基因表达对桂皮醛(CA)诱导HL60细胞分化的影响。方法:用低浓度CA和反式维甲酸(ATRA)处理HL60细胞。用shRNAmel18质粒及对照质粒shRNALuc包装慢病毒,用病毒感染HL60细胞。低浓度CA和ATRA作用于病毒感染的HL60细胞,流式细胞术检测细胞周期和细胞表面分化抗原表达,Western blot法检测MEL18蛋白、cyclin D1、p27的表达和Akt的磷酸化水平。结果:低浓度CA和ATRA增加HL60细胞的粒细胞分化抗原CD11b表达,MEL18蛋白表达下降。shmel18病毒感染的HL60细胞(shmel18-HL60细胞)MEL18蛋白表达下降,而对照病毒感染的HL60细胞(sh Luc-HL60细胞)MEL18蛋白表达无明显变化。shmel18-HL60细胞的CD11b表达率明显增高,细胞阻滞于G1期;经低浓度CA处理后,shmel18-HL60细胞的CD11b表达率进一步增高。shmel18-HL60细胞Akt的磷酸化水平及cyclin D1表达明显下降,而p27表达则显著升高。结论:抑制mel18基因表达导致HL60细胞向成熟粒细胞方向分化,mel18基因可能通过PI3K/Akt信号途径调控cyclin D1和p27的表达,影响HL60细胞分化。而CA可能通过抑制mel18基因表达从而通过PI3K/Akt途径促进HL60细胞分化。     

CD36/Src/ERK通路参与单核细胞向巨噬细胞的分化

目的:探讨脂肪酸转位酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)在单核细胞向巨噬细胞分化中的作用。方法:采用不同浓度(0、100和200μg/L)佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人源单核细胞THP-1向巨噬细胞分化;用CD36小片段干扰RNA(CD36 small interfering RNA,siCD36)干扰THP-1细胞CD36的表达;又用CD36 cDNA的重组慢病毒转染THP-1细胞,构建CD36过表达细胞系。显微镜下观察细胞形态;结晶紫染色法检测细胞黏附能力;流式细胞术和Western blot检测细胞分化过程中CD36的蛋白表达,real-time PCR检测CD36、CD11b和CD80的mRNA水平。Western blot检测THP-1细胞向巨噬细胞分化过程中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和Src酪氨酸激酶的表达。结果:THP-1细胞向巨噬细胞分化的过程中,CD36表达增加(P<0. 01)。与正常细胞相比,s...     

丙戊酸钠对AML1-ETO转染细胞中CEBPA基因表达及表观遗传修饰的影响

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对AML1-ETO转染细胞中CCAAT/增强子结合蛋白α(CEBPA)基因表达的影响及诱导沉默基因重新表达的机制。方法:不同浓度VPA处理AML1-ETO转染的急性髓系白血病细胞U937后,CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞表面抗原,RT-qPCR检测CEBPA mRNA的表达,ChIP-qPCR检测组蛋白H3和H4的乙酰化状态。结果:VPA对U937及AML1-ETO转染细胞有明显的生长抑制作用,呈现浓度依赖性和时间依赖性,VPA诱导U937及AML1-ETO转染细胞CD11b和CD14表达升高,VPA明显上调CEBPA mRNA的表达水平,VPA处理组CEBPA基因启动子区核染色质的组蛋白H3和H4乙酰化水平升高(P0.05)。结论:VPA对U937及其AML1-ETO转染细胞均有生长抑制和促分化的作用。VPA可能通过特异性调节CEBPA基因组蛋白乙酰化水平,改变其表观遗传修饰特征,从而诱导CEBPA基因重新表达。     

野生型p53基因导入对U937细胞分化、凋亡和CD36受体表达的影响

目的： 研究野生型p53基因重组腺病毒载体（AdCMV-p53）导入对U937细胞分化、凋亡和清道夫受体CD36表达的影响。 方法： AdCMV-p53导入U937细胞后，用细胞计数、细胞周期分析、台盼蓝染色排除法计数细胞悬液中的活细胞数目和NBT还原反应观察其对U937细胞生长、分化的影响；RT-PCR、免疫荧光和流式细胞分析检测AdCMV-p53导入对CD36表达的影响。 结果： AdCMV-p53可以高效导入U937细胞，野生型p53基因导入促进U937细胞向巨噬细胞分化，台盼蓝染色发现实验组阳性细胞数（64.6±9.2）%较对照组（14.2±5.5）%明显增多，吞噬能力增强；NBT还原反应实验组（49.7±12.6）%较对照组（6.3±1.8）%升高。RT-PCR和流式细胞分析检测，野生型p53基因导入使得CD36 mRNA转录增强，CD36蛋白表达增加。 结论： 野生型p53基因能影响细胞分化和凋亡，并上调清道夫受体CD36的表达，对于动脉粥样硬化的预防和基因治疗具有潜在意义。     

融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影响

背景：已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞。 目的：观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。 方法：应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14 的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPα mRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况。 结果与结论：AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b 和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列。结果提示C/EBPα是AML1-ETO 的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达。     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。     

丁酸钠部分依赖CREB上调急性白血病细胞CD86分子

目的：观察丁酸钠（SB）对急性白血病细胞CD86分子表达的影响，并探讨其作用机制。方法：流式细胞术检测NB4、HL-60、U937细胞经SB处理前后的CD86分子表达变化，半定量RT-PCR检测SB对各组细胞CD86 mRNA表达变化，AUT凝胶电泳检测核心组蛋白乙酰化程度，pCREB试剂盒检测细胞核内pCREB含量变化。结果：SB处理各组细胞CD86分子表达与对照组比较均出现显著升高；CD86 mRNA水平表达也明显增高；AUT电泳显示经SB作用后，各组细胞组蛋白乙酰化程度明显增加；SB处理后细胞核内pCREB含量增多。结论：SB使NB4、HL-60、U937细胞核心组蛋白乙酰化程度增加，染色质重塑，有利于CREB等转录因子的活化并与DNA结合，促进CD86转录增强，表达增多。     

ATRA诱导SP100蛋白表达及其对白血病NB4细胞增殖的影响

目的探讨SP100蛋白在全反式维甲酸(ATRA)作用NB4细胞过程中的表达及其对NB4细胞增殖和周期的影响。方法实时定量PCR检测SP100 mRNA的表达;Western blot检测SP100蛋白的表达;免疫荧光检测SP100的定位;CCK-8检测NB4细胞的增殖;流式细胞术检测NB4细胞的周期。结果 ATRA能明显促进NB4细胞中SP100mRNA水平和蛋白水平,并将SP100由弥散的小点状转变为较大的斑块状;感染SP100-shRNA的NB4细胞增殖活力明显高于未感染组和病毒空载组(P0.05),并使G2/M期的细胞增多。结论 ATRA促进NB4细胞中SP100蛋白的表达,SP100蛋白可能参与NB4细胞增殖活力的调节。     

IFN-α协同全反式视黄酸诱导HL-60细胞增殖分化及其机制的研究

目的:研究全反式视黄酸(ATRA)与IFN-α联合诱导HL-60细胞增殖分化的作用及其机制。方法:用5×10-7mol/L的ATRA以及2×106U/L的IFN-α单独和联合处理HL-60细胞后,采用POD-原位细胞凋亡检测试剂盒检测HL-60细胞的凋亡,通过计算细胞增殖的抑制率检测HL-60细胞增殖的抑制及诱导分化;用高效液相色谱(HPLC)检测细胞悬液中ATRA的含量;用原位杂交法检测细胞色素CYP26的表达。结果:ATRA和IFN-α均能诱导HL-60细胞分化、抑制其增殖并促进其凋亡,且二者具有明显的协同作用。IFN-α ATRA联合处理组的细胞悬液中,ATRA的水平明显高于单纯ATRA处理组(P<0.05)。ATRA处理组CYP26表达的水平明显高于IFN-α单独处理组(P<0.05)。结论:ATRA IFN-α诱导HL-60细胞的分化具有协同作用。其作用可能是由于IFN-α抑制了HL-60细胞内CYP26的表达,导致ATRA代谢速率减慢,使之保持了有效作用浓度所致。     

PIG7与丙戊酸促进人白血病细胞SKNO-1的分化和凋亡

 目的：研究p53诱导基因 7（PIG7）对人白血病细胞SKNO-1的作用及组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸(VPA)的协同效应。方法：SKNO-1细胞经不同浓度的VPA（1~10 mmol/L）分别作用后,用MTT法检测VPA对SKNO-1细胞增殖的影响。通过病毒包装及感染系统分别将带有PIG7开放读码框和反义寡核苷酸片段的慢病毒载体导入SKNO-1细胞,用RT-PCR及Western blotting检测SKNO-1细胞中PIG7 的mRNA及蛋白表达情况;用流式细胞术检测VPA作用于病毒感染后SKNO-1细胞的凋亡率和分化抗原CD11b的表达; DNA ladder实验分析细胞的凋亡。结果：VPA可明显抑制SKNO-1细胞增殖,且具有时间、剂量依赖性。过表达PIG7促进SKNO-1细胞的凋亡和分化, 联合VPA作用后细胞分化抗原CD11b的表达水平和细胞凋亡率明显高于空载体组（P<0.05）,并出现典型的DNA梯状条带。结论：VPA具有抑制SKNO-1细胞增殖和诱导其分化及凋亡的作用。过表达PIG7可促进SKNO-1细胞的凋亡和分化,并增加SKNO-1细胞对VPA的敏感性。过表达PIG7联合VPA有望成为白血病治疗的新策略。     

内源性β干扰素维持M1型巨噬细胞极化状态抑制肝癌细胞增殖和侵袭

目的研究内源性β干扰素(IFN-β)对M1型巨噬细胞极化状态及M1型巨噬细胞介导抗肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法体外建立单核系肿瘤细胞U937来源的M1巨噬细胞U937-M1模型,用实时定量PCR、ELISA及流式细胞术鉴定其表型。通过干扰IFN-β1基因或用抗体中和IFN-β,检测M1/M2巨噬细胞表型标志物表达的变化;用实时定量PCR和Western blot法检测干扰素调节因子1(IRF1)及IRF5的表达。收集不同处理组的U937-M1细胞培养上清为条件培养基(CM),分别培养Hep G2细胞及SMMC-7721细胞,用CCK-8法和TranswellTM侵袭实验分别检测CM对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。结果与未激活型U937-M0细胞相比,U937-M1细胞白细胞介素12p35(IL-12p35)、IL-12p40、IL-12p70、IL-23p19、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CD86表达显著增强;而两组均低表达CD206。阻断內源IFN-β作用后,与U937-M1细胞相比,上述M1型巨噬细胞相关表型标志物表达明显减弱;反之,M2型巨噬细胞表型标志物IL-10和CD206表达增强;且IRF1及IRF5表达均减弱;阻断IFN-β作用后,M1型巨噬细胞对肝癌细胞增殖及侵袭的作用从抑制转变为促进。结论阻断內源IFN-β后,M1型巨噬细胞极化状态以及U937-M1介导抗肝癌效应受到抑制;IFN-β可能参与调节IRF1和IRF5的表达,维持M1型巨噬细胞极化状态和功能。     

丹参酮ⅡA通过诱导C/EBPβ表达促进人源NB4和MR2细胞系分化

目的探索在丹参酮ⅡA(TanⅡA)诱导NB4和MR2细胞分化过程中C/EBPβ(CAAT/enhancer-bindingproteinβ)的表达。方法用TanⅡA干预NB4和MR2细胞120 h,通过形态学和膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA对NB4和MR2细胞的分化效应;0,0.1,1和10 mg/L TanⅡA干预NB4和MR2细胞,通过RT-PCR及Western blot测定C/EBPβRNA和蛋白水平表达的变化确定C/EBPβ与TanⅡA浓度的关系;通过膜表面标志检测NB4和MR2细胞的分化情况明确TanⅡA浓度与NB4和MR2细胞分化间的关系。结果 TanⅡA能诱导NB4和MR2细胞分化(P<0.05);TanⅡA能从RNA和蛋白水平诱导C/EBPβ表达升高并与浓度成正相关(P<0.05);TanⅡA能通过非剂量依赖的模式诱导NB4和MR2细胞分化,其引起最大分化效果的浓度为1 mg/L。结论 TanⅡA能有效促进NB4和MR2细胞分化;TanⅡA通过上调C/EBPβ的表达发挥分化效应;TanⅡA最强作用浓度为1 mg/L。     

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制.方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-кB以及细胞因子IFN-γ的表达变化.结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86 mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-кB表达明显上调;并且IFN-γ mRNA在T细胞活化72 h可检测到.结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-кB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用.