重症肌无力患者外周血Th17和调节性T细胞分析

目的 观察重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者Th17细胞和调节性T细胞的水平,并研究甲强龙冲击治疗对其影响.方法 应用四色流式细胞仪检测66例MG患者及35名健康对照者外周血Th17细胞和CD4+CD25highT细胞百分率;分析其中18例患者外周血Th17细胞与美国MG协会(MGFA)评分相关性;观察8例MG患者甲强龙冲击治疗2周后上述细胞的变化.结果 MG患者与健康对照者外周血Th17细胞百分率分别为2.61%±0.28%与0.94%±0.12%(Z=4.059,P=0.0001);甲强龙治疗前后8例MG患者Th17细胞百分率分别为4.72%±1.21%与1.81%±0.69%,差异有统计学意义(Z=1.995,P=0.0460);患者外周血Th17细胞水平与MGFA评分呈正相关(r=0.5359,P=0.0219).结论 MG患者外周血中Th17细胞升高,甲强龙冲击治疗可降低其水平,这可能是改善MG患者病情的有效机制.     

Th22细胞及相关因子在重症肌无力患者外周血中的表达

目的研究重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者外周血辅助性T细胞22(T helper 22cells,Th22)和白细胞介素-22(interleukin-22,IL-22)的表达以及两者间的相关性。方法收集25例MG患者和24例健康对照者,其中眼肌型重症肌无力(ocular myasthenia gravis,OMG)患者14例,全身型重症肌无力(general myasthenia gravis,GMG)患者11例。采用流式细胞仪检测MG患者和健康对照者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Th22细胞的比例,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血浆IL-22的表达。比较各组间Th22细胞比例和IL-22表达水平差异,以及Th22细胞比例和IL-22表达间的相关性。结果 MG患者PBMC中Th22细胞比例、血浆IL-22表达水平均显著低于健康对照组[(0.60±0.07)%比(0.92±0.09)%,P0.01;(18.65±1.38)pg/mL比(24.54±1.85)pg/mL,P0.05];OMG与GMG患者间Th22细胞比例、IL-22表达水平均无统计学差异(均P0.05);MG患者PBMC中Th22细胞比例与IL-22表达水平间呈中度正相关(r=0.59,P0.01)。结论 MG患者体内Th22细胞比例及血浆IL-22表达水平减低可能导致免疫功能紊乱进而影响MG的发病。     

重症肌无力患者血清Th1/Th2/Th17细胞因子的变化及意义

目的：分析重症肌无力（MG）患者血清CD4^＋ T细胞主要细胞因子的水平,探讨不同亚型CD4^＋ T细胞分泌的细胞因子在MG发病机制中的作用。方法：用ELISA测定93例MG患者和34名健康对照者血清中各项细胞因子（IL-2、IL-12、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13和IL-17）的水平,分组行统计学分析。结果：与健康对照组相比,MG患者Th1细胞相关各细胞因子（IL-2、IL-12、IFN-γ及TNF-α）均明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;Th2细胞相关的细胞因子IL-4、IL-10差异无统计学意义（P〉0.05）,仅IL-13水平升高;Th17细胞的细胞因子IL-17水平差异无统计学意义（P〉0.05）。MG眼肌型与全身型患者血清中各细胞因子水平的差异无统计学意义（P〉0.05）,在不同病程的MG患者中差异也无统计学意义（P〉0.05）。结论：Th1细胞因子在MG发病机制中发挥重要作用,而Th2细胞及其细胞因子在MG机制中的角色各异。     

重症肌无力患者胸腺细胞及外周血淋巴细胞Fas表达研究

目的 探讨重症肌无力(MG)的发病机制。方法 采用流式细胞术(FCM)分别检测MG患者胸腺细胞、外周血淋巴细胞(PBL)及地塞米松培养胸腺细胞的Fas表达。结果 MG患者PBL CD4、CD8细胞Fas表达率(分别为49％，34％；39％，34％)与对照组(分别为58％，25％；49％,24％)相比差异无显著性；MG患者胸腺细胞Fas表达率(11．20％，6．13％)较对照组(6．15％，1．84％)明显增高；地塞米松培养组Fas表达率MG组、正常人组分别为11．54％、8．62％和7．08％、3．13％，与空白对照组(MG组、正常人组分别为11．36％、6．87％和7．22％、2．86％)相比差异无显著性。结论 MG患者PBI，CD4、CD8细胞Fas表达率无明显增高，可能与自身反应淋巴细胞Fas和PBL FasL结合，发生程序化死亡有关。MG患者胸腺细胞Fas表达增高，可能参与MG发病初制。     

树突状细胞及相关细胞因子在重症肌无力患者胸腺中的变化

目的探讨胸腺树突状细胞及相关细胞因子在重症肌无力(MG)发病中的作用。方法采用免疫荧光双标法对11例胸腺瘤伴MG患者、6例单纯胸腺瘤、5例正常胸腺组织中S100(+)、HLADR(+)的树突状细胞进行检测,同时用组织匀浆、ELISA法检测胸腺组织中IL2、IL12含量。结果(1)树突状细胞主要分布在胸腺皮质、皮髓交界处,在胸腺瘤伴MG患者胸腺髓质也有一定分布。(2)S100(+)、HLADR(+)树突状细胞数量在胸腺瘤伴MG患者与单纯胸腺瘤患者间、单纯胸腺瘤患者与正常胸腺之间差异有显著性(P<005)。(3)IL2、IL12含量在胸腺瘤伴MG患者与正常胸腺之间差异有显著性(P<005);IL12含量在胸腺瘤伴MG患者与单纯胸腺瘤患者间亦有显著性差异(P<005)。结论胸腺树突状细胞以多种形式参与MG发病。     

重症肌无力患者外周血单个核细胞CD40配体的表达

ＣＤ4 0配体 (ＣＤ4 0Ｌ)与ＣＤ4 0交联结合是Ｔ细胞激活必需的共刺激信号 ,为探讨ＣＤ4 0Ｌ ＣＤ4 0共刺激信号通路在ＭＧ发病中的作用 ,我们分析ＭＧ患者外周血ＣＤ4 0Ｌ的表达。研究对象 :ＭＧ组 :18例 ,9例作血清ＡＣｈＲａｂ测定 ,阳性5例 ,阴性 4例 ;6例正用免疫抑制剂 ,1例施行了胸腺切除术(胸腺增生 )。对照组 :健康志愿者和献血员 16名。方法 :(1)取ＭＧ患者和对照者外周血 ,用Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度法分离ＰＢＭＣ ,并调制成 1× 10 6/ｍｌ的细胞悬液 ;每毫升细胞悬液加入 5ｎｇ/ｍｌＰＭＡ +5 0 0ｎｇ/ｍｌｉｏｎｏｍｙｃｉｎ共同…     

microRNA-181c在重症肌无力患者外周血单个核细胞中的表达及其意义

目的探讨microRNA-181c(miR-181c)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)患者中的表达水平及其临床意义。方法收集2015年6月-2017年6月收治的22例MG患者和20例健康人的外周静脉血样,提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中总RNA,采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)技术检测PBMC中miR-181c的相对表达水平,并分析miR-181c表达水平与患者的MG定量评分体系(quantitative myasthenia gravis score,QMG)的相关性。结果 MG患者PBMC中miR-181c的相对表达水平(0.303±0.150)较对照组(1.000±0.262)显著降低(P0.01),其中全身型患者(0.182±0.056)低于眼肌型患者(0.404±0.126)(P0.05),同时miR-181c表达水平与QMG呈负相关(R2=-0.359,P0.05)。结论 MG患者PBMC中miR-181c表达水平的降低可能与病情严重程度有关。     

重症肌无力患者外周血microRNA-146a、炎症细胞因子的表达水平变化及其相关性分析

目的 探讨重症肌无力患者外周血microRNA-146a、炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平变化及相关性分析。 方法 选取2015年7月-2018年11月本院收治的重症肌无力患者58例作为试验组（MG组）,另选取同期体检健康者30例作为对照组;采集空腹外周静脉血,分离单个核细胞并提取总RNA;采用RT-PCR技术检测2组外周血单个核细胞总microRNA-146a的相对表达水平;采用ELISA技术检测2组外周炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平;比较2组microRNA-146a、炎症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）的表达水平,分析重症肌无力患者microRNA-146a、症细胞因子（IL-6、CRP、TNF-α）表达水平与重症肌无力定量评分（QMGS）的相关性以及microRNA-146与三种炎症细胞因子表达水平的相关性。 结果 MG患者外周血microRNA-146a、IL-6、CRP、TNF-α高表达(P<0.05);MG患者外周血microRNA-146a、IL-6、CRP、TNF-α表达水平与QMGS评分呈正相关(r=0.795,0.642,0.365,0.743,P均<0.05);MG患者microRNA-146a表达水平与IL-6、TNF-α表达水平呈正相关(r=0.700,0.870,P<0.05),与CRP表达水平无相关性(r=0.235,P>0.05)。 结论 MG患者外周血存在microRNA-146a的高表达,且可能通过调控IL-6、TNF-α的表达来参与MG发病。     

帕金森病患者外周血Th17/Treg平衡及相关细胞因子水平测定及意义

目的探讨帕金森病(PD)患者外周血Th17/Treg平衡及相关细胞因子含量变化的意义。方法收集50例PD患者(PD组)及50例健康体检者(Control组),采集所有研究对象外周血。采用流式细胞仪检测外周血中Th17细胞及Treg细胞含量;采用ELISA检测血浆中细胞因子TGF-β、IL-6和IL-17水平。结果流式细胞计数结果显示,PD组的外周血Treg细胞和Th17细胞水平较Control组均显著增加(P均0.01),Treg细胞的增长程度明显大于大于Th17细胞,同时PD组Treg/Th17细胞比较Control组也明显增加(P均0.01)。ELISA检测结果显示,与Control组相比,PD组的血浆TGF-β1、IL-6及IL-17含量均有显著增加(P均0.01)。结论 PD患者的外周血Treg/Th17平衡存在失衡,提示PD病理过程可能与其外周血Treg/Th17失衡有关。     

重症肌无力患者外周血淋巴细胞中差异表达的基因研究

目的 探讨重症肌无力(MG)患者外周血淋巴细胞中差异表达的基因.方法 应用基因芯片技术,提取30例MG患者和30名健康对照者外周血淋巴细胞总RNA,采用BIOSTAR Human-6-V3型人类全长基因cDNA表达谱芯片进行检测,使用生物统计学及生物信息学方法分析两组之间差异表达基因.结果 与正常对照组比较,MG组检测出显著差异表达基因104个,其中表达显著上调的基因44个(比值＞5.0),表达显著下凋的基因60个(比值＜0.2),涉及基因包括免疫、细胞信号传递、代谢、细胞周期、细胞凋亡、原癌与抑癌基因、细胞骨架与蛋白合成等相关基因.结论 MG发病机制涉及众多基因表达的改变,基因芯片技术可快速筛选出与MG发病相关基因.     

辅助性T细胞及其细胞因子在重症肌无力中的作用

目的探讨辅助性T细胞及其相关细胞因子在全身型MG患者急性期发病中的作用。方法采用流式细胞术检测33例全身型MG患者和34例健康对照组外周血中Tfh细胞亚群CXCR5~+CD4~+T、CD45RO~+CXCR5~+CD4~+T、CD45RA~+CXCR5~+CD4~+T、ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞占CD4~+T细胞的比例。采用流式液相多重蛋白定量(cell based assay,CBA)技术检测MG组及对照组血清中IL-17A、IFN-γ、IL-4、IL-21的含量。应用ELISA技术检测MG组及对照组血清中IL-22的含量。根据QMGs(the quantitative myasthenia gravis score,QMGs)对纳入研究的MG患者进行评分,QMGs反映了MG患者的病情严重程度。结果 MG组外周血中的循环Tfh细胞(ICOS~+CXCR5~+CD4~+T和PD-1~+CXCR5~+CD4~+T)较对照组增高(P=0.016,P0.001),且PD-1~+CXCR5~+CD4~+T细胞与MG患者病情严重程度正相关(r=0.405,P=0.019)。MG组血清IL-21、IL-17A、IFN-γ的含量较对照组升高,有统计学意义(P=0.007,P=0.016,P=0.007);MG组血清IL-4的含量较对照组略有增多,IL-22含量较对照组略有减少,但均无统计学意义。MG组IL-4含量QMGs呈负相关,差异具有显著性(r=-0.393,P=0.024)。结论 MG急性期ICOS~+和PD-1~+的循环Tfh细胞可能促进MG发病;IL-21、IFN-γ、IL-17A同样可能促进MG发病;IL-4可能对MG有保护作用。     

重症肌无力患者末梢血Th1和Th2细胞内细胞因子的变化及意义

目的研究重症肌无力(MG)患者末梢血细胞因子及抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)水平,探讨细胞因子在MG发病中的作用。方法研究对象为17例MG患者,分为急性期组10例,非急性期组7例,设健康对照组15例。应用流式细胞术(FCM)测定末梢血产生各型细胞因子(CK)的CD4+T细胞%,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中抗乙酰胆碱受体抗体(AchRab)。结果⑴MG患者急性期组和非急性期组IFN-γ+IL-4-CD4+T细胞%及AchRab的含量比健康对照组显著增多(P<0.05和P<0.001);⑵急性期组和非急性期组IFN-γ-IL-4+和IL-13+CD4+T细胞%比健康对照组显著减少(P<0.05);⑶IL-10+CD4+T细胞%各组之间无显著性差异;⑷各组IFN-γ+IL-4-CD4+T细胞%与AchRab均呈正相关。结论MG患者Th1和Th2细胞因子的平衡紊乱,Th1细胞因子IFN-γ对MG患者自身抗体的产生有促进作用。     

重症肌无力患者外周血TGF-β的研究

目的 探讨转化生长因子β（ＴＧＦ－β）在重症肌无力（ＭＧ）免病理机理中的作用。方法 应用体外细胞培养和ＥＬＩＳＡ方法检测ＭＧ患者外周血单个核细胞乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ）刺激后产生ＴＧＦ－β的水平。结果 ＭＧ患者外周血单个核细胞ＴＧＦ－闹于正常对照组,且ＴＧＦ－β水平与病程有关。结论 ＭＧ患者自身免疫功能异常,ＴＧＦ－β参与了ＭＧ的免疫患者自身免疫功能异常,ＴＧＦ－β参与了ＭＧ的免疫病理过程。     

重症肌无力患者外周血TGF-β的研究

目的 探讨转化生长因子β（ＴＧＦ－β）在重症肌无力（ＭＧ）免疫病理机制中的作用。方法 利用体外细胞培养方法和ＥＬＩＳＡ检测技术对ＭＧ患者外周血单个核细胞经乙酰胆碱受体（ＡｃｈＲ）刺激后产生ＴＧＦ－β的水平进行研究。结果 ＭＧ患者外周血单个细胞ＴＧＦ－β水平高于正常对照组,且ＴＧＦ－β水平与病程有关。结论 ＭＧ患者自身免疫功能异常,ＴＧＦ－β参与了ＭＧ的免疫病理过程。     

重症肌无力患者胸腺细胞Bcl-2表达的研究

目的 探讨重症肌无力(myasthenia gravis,MG)的发病机制,为临床治疗提供一定的实验理论依据.方法 用机械分离法、淋巴细胞分离液获取19例MG患者和11例正常对照组胸腺细胞悬液,接种于培养板中,分别加入雌、孕激素作为特异性刺激组,未加内分泌激素作为空白对照组,培养72h后收获细胞.采用流式细胞术分别检测MG患者和正常对照组胸腺细胞及雌、孕激素培养前后胸腺细胞的Bcl-2表达.结果 MG患者胸腺细胞Bcl-2袁达率比正常对照组显著增高,2者相比有统计学意义(P＜0.01);雌、孕激素培养组MG患者胸腺细胞Bcl-2的表达率比空白对照组显著降低,分别比较差异有统计学意义(P＜0.05),雌激素培养组与孕激素培养组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MG患者胸腺细胞Bcl-2表达升高,可能参与调控胸腺细胞凋亡,其表达异常可能是MG发病的一个重要因素;雌、孕激素抑制MG患者胸腺细胞Bcl-2的表达,提示体内雌激素、孕激素水平变化与MG患者病情变化有一定联系.     

重症肌无力与细胞因子

重症肌无力(MG)是一种自身免疫性疾病。研究表明细胞因子在MG发病过程中起重要作用。本文就近年来与MG发病及发展相关的细胞因子(干扰素、肿瘤坏死因子、转化生长因子、白细胞介素)作一综述。     

重症肌无力与细胞因子

重症肌无力(MG)是一种以体液免疫介导为主、细胞免疫依赖和补体参与的神经肌肉接头的自身免疫性疾病。研究表明,细胞因子间的平衡紊乱与MG的发病有着重要的关系。因此,深入了解不同细胞因子在MG中的作用可以更加明确MG的发病机制以及对治疗提出新的研究方向。     

重症肌无力患者外周血AIRE、Tfh细胞和Tfr细胞与病情严重性相关分析

目的探讨自身免疫性调节因子(AIRE)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞与重症肌无力(MG)患者病情严重程度的相关性。方法收集2015-12—2016-4第四军医大学唐都医院收治的MG患者22例,根据临床表现分为全身型MG(GMG)和眼肌型MG(OMG);同期选取健康体检中心查体者10名作为健康对照。收集MG患者详细临床资料,包括美国MG协会(MGFA)分型及定量MG(QMG)评分。通过流式细胞术分析AIRE阳性细胞比例及Tfh/Tfr比值。结果 (1)AIRE表达在各组间比较差异具有统计学意义(P0.01)。GMG组和OMG组AIRE表达均较对照组降低(P0.01,P0.05),而GMG组与OMG组间比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)Tfh/Tfr比值在各组间比较差异具有统计学意义(P0.01)。GMG组和OMG组Tfh/Tfr比值均高于对照组(P0.01,P0.05),且GMG组高于OMG组(P0.05)。(3)MG患者AIRE表达与MGFA分型及QMG评分呈负相关(r=-0.517,P0.05;r=-0.616,P0.01),Tfh/Tfr比值与MGFA分型和QMG评分呈正相关(r=0.761,r=0.581,均P0.01)。结论 AIRE、Tfh/Tfr比值与MG的病情严重程度有一定的相关性,并可能参与了MG的发病。